目的 研究金振口服液(Jinzhen oral liquid,JZOL)对咳嗽高敏感性模型豚鼠气道神经性炎症和咳嗽的影响及其作用机制.方法 将48只豚鼠按随机数字表法分为模型组、空白对照组、JZOL高剂量组、JZOL中剂量组、JZOL低剂量组和阿莫西林组6组,每组各8只.制备咳嗽高敏感性模型,给药后观察各组咳嗽敏感性;酶联免疫吸附测定法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清免疫球蛋白 E(Immunoglobulin E,IgE)、白细胞介素-5(Interleukin-5,IL-5)含量;实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qPCR)技术测定气管组织瞬时受体电位锚蛋白 1(Transient receptor potential ankyrin 1,TRPA1)、P 物质(Substance P,SP)、神经激肽 A(Neurokinin A,NKA)和嗜酸性粒细胞趋化蛋白(Eotaxin,EOT)mRNA 水平;苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色法观察肺组织病理变化.结果 与模型组比较,JZOL可以降低咳嗽敏感性;血清IgE和IL-5含量虽未见显著差异,但JZOL具有明显下调趋势,作用强度较阿莫西林明显;JZOL可抑制气管组织中EOT、SP、NKA和TRPA1 mRNA表达;JZOL对肺组织病理变化有改善作用,病变程度由高至低依次为JZOL中剂量组、阿莫西林组、JZOL低剂量组和JZOL高剂量组.结论 JZOL可能通过TRPA1通道,下调SP、NKA和EOT基因表达,降低血清炎症因子和免疫球蛋白水平,改善气道神经性炎症.

目的:评价肥胖因素对小鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及瞬时受体电位锚蛋白1(TRPA1)表达在其中的作用。方法:SPF级健康雄性C57BL/6J小鼠24只，6～7周龄，体质量18～21 g。采用随机数字表法分为2组( n＝12)：普通饲料组(CD组)和高脂饲料组(HFD组)。CD组喂养普通饲料，HFD组喂养60%脂肪供能的高脂饲料，持续12周并每周记录小鼠体质量。随后将CD组小鼠随机分为2组( n＝6)：CD＋溶剂组(CD＋C组)和CD＋AITC组(CD＋A组)；HFD组小鼠随机分为2组( n＝6)：HFD＋溶剂组(HFD＋C组)和HFD＋TRPA1激动剂组(HFD＋A组)。第13周，CD＋A组和HFD＋A组在原先饲料喂养基础上使用TRPA1激动剂异硫氰酸烯丙酯25 mg·kg －1·d －1进行灌胃，CD＋C组和HFD＋C组给予等量溶剂。第14周小鼠心肌缺血30 min再灌注120 min，记录小鼠体质量、附睾脂肪、肠系膜脂肪和肾周脂肪的质量，检测血清LDH、甘油三酯和胆固醇水平，计算心肌梗死体积百分比，采用Western blot法检测心肌组织TRPA1、Bax和Bcl-2的表达，计算Bax/Bcl-2比值。 结果:与CD＋C组比较，CD＋A组小鼠心肌组织TRPA1表达上调( P<0.05)，其余各指标差异无统计学意义( P>0.05)，HFD＋C组小鼠血清甘油三酯、胆固醇浓度、体质量、附睾脂肪、肠系膜脂肪、肾周脂肪质量和心肌梗死体积百分比增加，心肌组织TRPA1表达下调，LDH浓度和Bax/Bcl-2比值升高( P<0.05)；与HFD＋C组相比，HFD＋A组小鼠血清甘油三酯和胆固醇浓度降低，体质量、附睾脂肪、肠系膜脂肪、肾周脂肪质量和心肌梗死体积百分比减少，心肌组织TRPA1表达上调，LDH浓度和Bax/Bcl-2比值降低( P<0.05)。 结论:肥胖因素可加重小鼠心肌缺血再灌注损伤，TRPA1表达下调参与了这一过程。

骨关节炎(osteoarthritis,OA)是一种常见的退行性关节疾病,其发病原因和病理机制尚不明确.目前,在临床上仍然缺乏有效的治疗方法,当务之急是寻找潜在的治疗靶点.瞬时受体电位锚蛋白1(transient receptor potential ankyrin-1,TRPA1)和瞬时受体电位香草素受体 4(transient receptor potential vanilloid-4,TRPV4)属于瞬时受体电位阳离子通道(transient receptor potential cation channel,TRP)家族的成员,在初级感觉神经元以及各种细胞中广泛表达,参与热、机械和化学物质等刺激的信号转导.越来越多的研究表明,TRPA1和TRPV4在OA的软骨退化、炎症反应和疼痛中起着重要作用.本文综述了TRPA1和TRPV4通道的生理功能,并概述了它们在OA发展和疼痛中最新的研究进展.同时,总结了TRPA1和TRPV4通道药物在治疗OA中的作用以及讨论未来的研究方向,为OA的治疗提供新思路.

当前,疼痛发病率在世界范围内呈上升趋势,严重影响患者的生活质量.临床上镇痛药种类较多,常用的有阿片类、大麻素类、非甾体抗炎药、局麻药、抗癫痫药、抗抑郁药以及N-甲基-D-天冬氨酸受体阻滞剂等,但单一用药往往不能达到令人满意的效果,如最常用的阿片类只在30％患者中有效[1].镇痛药的副作用也较常见,如阿片类成瘾性和非甾体抗炎药肝肾毒性等.所以,对于复杂的慢性炎症性疼痛和神经病理性疼痛,具有不同作用机制的镇痛药联合应用逐渐成为临床医师的共识[2].因此寻找具有新颖药理机制且副作用小的镇痛药物有望完善疼痛的药物治疗方案,是众多学者和制药企业的研究热点.瞬时受体电位通道锚蛋白1(transient receptor potential ankyrin 1,TRPA1)是瞬时受体电位(transient receptor potential,TRP)通道家族的一员,在初级感觉神经元末梢高表达,疼痛信号最上游介导伤害感受,临床前和临床研究中发现,阻断TRPA1能够有效缓解或终止慢性炎症性疼痛和神经病理性疼痛,且耐受性良好[3-4].近年TRPA1小分子抑制剂开发非常迅速,TRPA1阻滞剂有望成为从起点处阻断疼痛信号的新型镇痛药.

蛋白激酶Cε(PKCε)是细胞内重要的信号转导物质之一.本文对PKCε在急性痛向慢性痛转化中的实验研究进展进行了综述.前列腺素E2(PGE2)/EP1受体-Gq-PKCε是外周背根神经节(DRG)中调节慢性疼痛的重要信号通路,并且在急性痛向慢性痛转化的后期也发挥作用.DRG神经元中的PKCε分别通过过表达瞬时受体电位(TRP)香草酸亚型1(TRPV1)和锚蛋白1(TRPA1)诱导机械和热超敏反应,介导急性痛向慢性痛的转化.PGE2诱发的EP1-Gq-PKCε信号传导可能是调节下游TRPA1和TRPV1启动疼痛转化过程的关键环节.近几十年来,电针(E A)已经被用于治疗各类急慢性疼痛,疗效肯定,并能明显抑制DRG神经元中PKCε及其上下游物质的表达.因此推断,EA可能通过干预DRG中的PKCε通路在急慢性痛转化中起作用.本文从痛转化概念、DRG中PKCε信号通路在痛转化中的作用及其在EA干预中的作用机制等方面进行综述,为慢性疼痛的治疗提供新思路.

目的 探讨瞬时受体电位锚蛋白-1(transient receptor potential ankyrin-1,TRPA1)对浸水束缚应激(water immersion restraint stress,WIRS)诱导的大鼠回肠黏膜损伤的影响.方法 雄性Wistar大鼠24只,随机分为正常对照组(NC组)、WIRS回肠黏膜损伤模型组(WC组)、HC1组和HC2组.后3组大鼠放入鼠笼内,置(19±1)℃水中,水面平剑突.HC1组和HC2组WIRS前1 h腹腔注射TRPA1特异性拮抗剂HC-030031,剂量分别为100和200 mg/kg,WIRS 6 h后取背根神经节(DRG)和回肠组织.HE染色观察回肠黏膜病理损伤情况.RT-PCR、蛋白印迹法、免疫组织化学法检测NC组和WC组大鼠DRG和回肠组织中TRPA1的表达.结果 与NC组比较,WC组回肠黏膜损伤严重,评分明显增高,DRG和回肠组织中TRPA1表达明显上调(P<0.001);与WC组比较,HC1组和HC2组回肠黏膜损伤情况明显好转,评分明显降低(P<0.01),且HC2组比HC1组损伤评分更低(P<0.01).结论 应激诱导大鼠回肠黏膜损伤与TRPA1表达上调密切相关.HC-030031有效减轻应激诱导的回肠黏膜损伤,并具有剂量依赖性.

目的:探讨吴茱萸汤对芥子油内脏痛模型小鼠止痛作用机制.方法:45只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组,模型组,吴茱萸汤低、中、高剂量组,每组9只.吴茱萸汤低、中、高剂量组分别灌以吴茱萸汤水煎液3.12、6.24、12.48g·kg-1·d-1,共7d,第7天,吴茱萸汤各剂量组灌胃后2h,0.75％芥子油(50μL/只)灌肠诱导小鼠内脏痛模型,观察吴茱萸汤干预后的疼痛行为变化,对小鼠结肠组织进行免疫组化染色及HE染色,Western Blot检测吴茱萸汤干预后的小鼠结肠组织中瞬时感受器电位锚蛋白-1(TRPA1)和瞬时感受器电位香草素受体1(TRPV1)的表达变化.结果:HE染色可见,吴茱萸汤各剂量预处理7d后对结肠黏膜具有不同程度的保护作用.行为学实验中,不同浓度吴茱萸汤预处理后,小鼠疼痛行为频次和疼痛行为出现时间呈现不同程度降低和延迟(P＜0.01).免疫组化和Western Blot结果显示,吴茱萸汤干预后小鼠结肠中的TRPA1、TRPV1表达均显著下调(P＜0.01).结论:热敏通道TRPA1、TRPV1是吴茱萸汤发挥止痛作用,尤其是缓解芥子油内脏痛的关键靶点.

目的:探究纳布啡对分娩大鼠PKCε/TRPV1信号通路及镇痛效果的影响.方法:将30只孕鼠随机分为对照组、H-7组、纳布啡组,每组10只.制备硬膜外镇痛模型,分娩开始后分别给予生理盐水、H-7稀释液和纳布啡注射液泵注治疗.通过热水甩尾法、脊髓线粒体功能和还原型谷胱甘肽(GSH)水平观察镇痛效果;ELISA检测血清5-HT水平;免疫组织化学(IHC)检测脊髓κ受体(KOR)表达;WB检测蛋白激酶C(Protein Kinase C,PKC)、瞬时受体电位香草酸亚型1(transicent receptor potential vanilloid 1,TRPV1)、TRP锚蛋白1(transicent receptor potential ankyrin 1,TRPA1)相对表达水平.结果:分娩镇痛后H-7组、纳布啡组大鼠痛阈值较对照组显著升高,血清5-HT水平降低(均P＜0.01);干预后两组大鼠线粒体呼吸功能较对照组增强,线粒体内GSH水平显著升高(P＜0.05,P＜0.01);与对照组和H-7组比较,纳布啡组KOR表达量最高(均P＜0.05);与对照组比较,H-7组、纳布啡组大鼠脊髓内PKCε、TRPV1、TRPA1蛋白表达受到显著抑制(均P＜0.001).结论:纳布啡对分娩大鼠具有有效镇痛效果,其镇痛机制可能与κ受体激活、脊髓线粒体呼吸调节及PKC/TRPV1信号通路抑制有关.

瞬时受体电位锚蛋白1(TRPA1)离子通道是温度感受器,在人体内低于17℃可被激活,但其激活阈值与物种相关.异硫氰酸烯丙酯、肉桂醛、香烟浓集物等激动剂可以通过调节TRPA1离子通道进而引发咳嗽,并且G蛋白偶联受体在其激活过程中起着重要作用.辛温类中药方剂应用于冷过敏咳嗽疗效确切,推测其治疗机制可能是通过抑制TRPA1通道开放实现的.目前针对咳嗽的TRPA1拮抗剂主要是HC-030031和GRC-17536,辛温类中药作为止咳药的开发或可一定程度弥补西医治疗的不足,但仍需深入研究.

目的 探讨慢性咳嗽寒饮伏肺病证结合动物模型的构建方法 ,并进行可靠性评价.方法 将48只雄性SPF健康豚鼠随机分为正常对照组、咳嗽模型组、形寒饮冷组、病证模型组,每组12只.采用卵蛋白致敏,建立咳嗽敏感性增高动物模型,结合形寒饮冷刺激,建立寒饮伏肺中医证候模型,通过两者结合建立慢性咳嗽寒饮伏肺病证结合模型.观察豚鼠一般状态与行为,咳嗽次数,气道阻力,肺组织病理,肺组织瞬时受体电位锚蛋白1(TRPA1)、P物质(SP)、降钙素基因相关肽(CGRP)mRNA表达及肺组织TRPA1、P物质受体(NK-1R)、CGRP蛋白表达.结果 与正常对照组、咳嗽模型组比较,形寒饮冷组、病证模型组豚鼠的一般状态与行为均出现寒饮伏肺证的症状表现,其中病证模型组更明显.与正常对照组比较,咳嗽模型组、病证模型组咳嗽次数均增加,气道阻力均升高,肺组织TRPA1,SP,CGRP mRNA表达均升高,肺组织TRPA1,NK-1R,CGRP蛋白表达均升高(P<0.01),形寒饮冷组肺组织TRPA1蛋白表达升高(P<0.01).与咳嗽模型组比较,形寒饮冷组咳嗽次数减少,气道阻力均降低,肺组织TRPA1,SP,CGRP mRNA表达均降低,肺组织TRPA1,NK-1R,CGRP蛋白表达均降低(P<0.01);病证模型组咳嗽次数增加,气道阻力均升高,肺组织TRPA1,SP,CGRP mRNA表达均升高,肺组织TRPA1,NK-1R,CGRP蛋白表达均升高(P<0.01或P<0.05).与形寒饮冷组比较,病证模型组咳嗽次数增加,气道阻力均升高,肺组织TRPA1,SP,CGRP mRNA表达均升高,肺组织TRPA1,NK-1R,CGRP蛋白表达均升高(P<0.05或P<0.01).与正常对照组比较,其余3组肺组织病理均可见肺组织结构破坏及炎症反应,病变程度由低到高依次为形寒饮冷组、咳嗽模型组、病证模型组.结论 采用中西医复合病因干预方法 可成功建立慢性咳嗽寒饮伏肺病证模型.该模型既符合西医发病机制,又体现中医证候特征,可为慢性咳嗽的机制探讨及中药药效机理研究提供较为可靠的模型依据.