目的:探究胃肠神经内分泌肿瘤（GI-NENs）原发灶与相应瘤旁组织及肝转移灶中的蛋白表达差异。方法:选取2015年7月至2019年4月于中国医学科学院肿瘤医院手术治疗的9例GI-NENs伴肝脏转移患者的原发灶、肝转移灶组织及相应瘤旁组织，采用数据非依赖性采集（DIA）技术检测其蛋白表达，以 P＜0.05且|log 2FC|＞0.5（FC为差异倍数）作为判定标准，明确原发灶与相应瘤旁组织、原发灶与肝转移灶、不同分化程度原发灶、不同分化程度肝转移灶的差异表达蛋白。对差异表达蛋白进行火山图分析、聚类分析、基因本体（GO）功能分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析。 结果:相对于瘤旁组织，胃NENs原发灶中有85种蛋白表达下调，42种蛋白表达上调，差异表达蛋白主要富集在三磷酸鸟苷酶活性调控和脱氧核糖核苷单磷酸盐分解代谢相关的生物过程、糖胺聚糖生物合成-硫酸软骨素/硫酸皮肤素和泛酸盐与CoA生物合成信号通路。肠NENs原发灶中有114种蛋白表达下调，155种蛋白表达上调，差异表达蛋白主要富集在谷胱甘肽代谢和硫化合物代谢相关的生物过程、收集导管酸分泌和牛磺酸、次牛磺酸代谢信号通路。相对于神经内分泌癌（NECs）原发灶，G1～2分化原发灶中有168种蛋白表达下调，278种蛋白上调，差异表达蛋白显著富集在DNA代谢和DNA复制的生物学过程，以及复制和错配修复等通路。相对于NECs转移灶，G1～2分化转移灶中有95种蛋白表达下调，97种蛋白表达上调，差异表达蛋白显著富集到转录共激活子的活性和催化活性功能、碱基切除修复和蛋白外排通路。相对于G1分化的原发灶，G1分化的转移灶中有530种蛋白表达下调，211种蛋白表达上调。相对于G2分化的原发灶，G2分化的转移灶中有53种蛋白表达下调，96种蛋白表达上调。相对于NECs原发灶，NECs转移灶中有109种蛋白表达下调，92种蛋白表达上调。G1和G2分化的GI-NENs原发灶与转移灶差异表达蛋白富集的信号通路中有多条相似，而GI-NECs原发灶与转移灶差异表达蛋白富集的信号通路中只有1条与GI-NENs原发灶与转移灶差异表达蛋白富集的信号通路相同，即药物代谢信号通路。G1分化的原发灶与转移灶差异表达蛋白主要表达于细胞质（20.26%）、线粒体（18.67%）和细胞核（15.48%）。G2分化的原发灶与转移灶差异表达蛋白主要表达于细胞质（20.24%）、细胞核（18.25%）和细胞膜（15.08%）。NECs原发灶与转移灶差异表达蛋白主要表达于细胞核（23.78%）、细胞质（22.7%）和细胞膜（11.35%）。结论:不同部位和分化程度的GI-NENs原发灶、瘤旁组织及转移灶中蛋白表达差异明显。

目的:基于深度血液4D-DIA蛋白质组学分析,寻找肺腺癌骨转移组与非骨转移组的差异蛋白,为肺腺癌骨转移诊断治疗提供新线索.方法:采用4D-DIA蛋白质组学技术,纳入6例肺腺癌非骨转移(lung adenocarcinoma non-bone metastases,LUADNBM)及 6 例肺腺癌骨转移(lung adenocarcinoma bone me-tastasis,LUADBM)患者进行血清蛋白质组学分析.以表达倍数(fold change,FC)＞1.5倍(上调大于1.5倍或下调小于0.67倍)且P值＜0.05(T-test或其他)为标准,得到比较组间的上调、下调蛋白质数目.对两组间的可定量蛋白进行基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA).应用String网站和R语言对差异蛋白进行主成分分析(principal component analysis,PCA)、基因本体论(gene ontology,GO)分析和KEGG(Kyoto encyclopedia of genes and genomes)通路数据库分析.结果:LUADNBM组与LUADBM组间比较发现2 585个可定量蛋白,其中18个差异蛋白.GSEA结果显示,可定量蛋白主要富集在真核翻译延伸阶段、SARS-CoV-2主要翻译机制通路(P＜0.05).PCA结果显示,差异蛋白可明显区分LUADNBM与LUADBM患者.GO分析结果表明,差异蛋白主要富集在高尔基管腔和细胞外基质,在皮肤硫酸盐蛋白聚糖的生物合成和代谢过程以及硫酸软骨素的分解代谢和生物合成中发挥重要作用;KEGG结果表明:上调蛋白主要富集在近端小管碳酸氢盐回收、胆汁分泌、N-聚糖生物合成、胰岛素分泌、醛固酮的合成和分泌等通路;下调蛋白主要富集在神经退行性疾病的途径,如阿尔茨海默病、亨廷顿病、帕金森病、脊髓小脑性共济失调等.结论:肺腺癌骨转移组与非骨转移组蛋白存在明显差异,通过发现新型蛋白标志物为早期筛查诊断骨转移提供新线索.

目的 探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中紧密连接蛋白 10(claudin 10,CLDN10)和硫酸软骨素蛋白聚糖 4(chondroitin sulfate proteoglycan 4,CSPG4)表达与临床病理特征和预后的关系.方法 随机选取 2017 年 1 月～2018 年 4 月于南京医科大学附属泰州市人民医院进行手术的 136 例NSCLC患者为研究对象,并根据随访结局(生存或死亡)分为生存组(n=63)和死亡组(n=69).收集 136 例患者于手术过程中切除的癌组织及癌旁组织标本;实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)检测癌组织及癌旁组织CLDN10 和CSPG4 表达水平,并分别以NSCLC患者癌组织中CLDN10 和CSPG4 表达水平的平均数为界限,分为CLDN10 高表达组(n=66),CLDN10 低表达组(n=70)和CSPG4 高表达组(n=71),CSPG4 低表达组(n=65);采用多因素COX回归分析确定NSCLC患者预后的影响因素;采用Kaplan-Meier生存曲线分析NSCLC患者CLDN10和CSPG4 表达水平与其预后的关系.结果 NSCLC组织中CLDN10 表达水平(0.96±0.25)低于癌旁组织(1.73±0.42),CSPG4 表达水平(1.80±0.46)高于癌旁组织(1.04±0.27),差异有统计学意义(t=18.372,16.617,均P＜0.05).与生存组比较,死亡组低未分化占比、淋巴结转移占比及癌组织中CSPG4 表达水平较高,CLDN10 表达水平较低,差异具有统计学意义(t/χ2=8.463,7.423,11.696,6.426,均P＜0.05).CLDN10高表达组五年存活率(58.46%)高于低表达组(37.31%),CSPG4 低表达组患者五年存活率(55.56%)高于高表达组(40.58%),差异有统计学意义(χ2=7.848,4.018,均P＜0.05).多因素COX分析结果显示,CLDN10 低表达、CSPG4 高表达、低分化程度、淋巴结转移是NSCLC患者预后的危险因素(HR=1.362,1.368,1.335,1.314,均P＜0.05).结论 NSCLC患者癌组织中CLDN10表达水平较低,CSPG4水平较高,且与NSCLC发展和预后密切相关.

目的 研究50 Hz磁场暴露对Neuro2a/APP(695)细胞基因转录的影响.方法 Neuro2a/APP(695)细胞简单随机分为假性辐照组和磁场暴露组(n=3).暴露条件为1.0 mT 50 Hz正旋波磁场,4 h/d,连续3 d;假性辐照组细胞除无磁场暴露外,余同磁场暴露组.暴露结束后按标准方法送样,进行转录组测序检测,包括样品RNA提取、数据质量评价和数据分析等.结果 50 Hz磁场暴露后Neuro2a/APP(695)细胞有141种定性的基因表达发生了明显的变化,其中有129种表达上调、12种表达下调.GO富集分析结果显示,Neuro2a/APP(695)细胞中62种上调差异表达基因涉及432类显著GO功能富集,其中涉及生物学过程337类、细胞组分16类、分子功能79类;3种下调差异表达基因共涉及275类显著GO功能富集,其中涉及生物学过程260类、细胞组分5类、分子功能10类.KEGG通路分析显示,这些差异基因可能参与了 20条KEGG通路,其中2个下调差异表达基因通路,18个上调差异表达基因通路.结论 50 Hz磁场暴露可能对Neuro2a/APP(695)细胞的黏附连接、Hippo信号通路、糖胺聚糖生物合成-硫酸软骨素/硫酸皮肤素、蛋白消化和吸收和甘露糖型O-聚糖生物合成等方面产生影响,以上通路可能是50 Hz磁场对Neuro2a/APP(695)细胞产生影响的主要途径.

目的 探讨上皮性卵巢癌(EOC)组织中微小RNA-515-5p(miR-515-5p)、硫酸软骨素蛋白聚糖4(CSPG4)的表达及临床意义.方法 选取84例EOC患者,采用RT-qPCR法检测癌组织与癌旁组织中miR-515-5p、CSPG4 mRNA表达.采用Pearson相关系数分析EOC组织中miR-515-5p与CSPG4 mRNA表达的相关性.根据EOC组织中miR-515-5p、CSPG4 mRNA表达均值分为高、低表达者,采用Kaplan-Meier法绘制不同miR-515-5p、CSPG4 mRNA表达EOC患者的生存曲线.结果 与癌旁组织相比,卵巢癌组织中miR-515-5p表达低,CSPG4 mRNA表达高(P均<0.05).经TargetScan数据库预测miR-515-5p与CSPG4的3'-非翻译区210～216处存在结合位点,Pearson相关系数分析显示,EOC组织中miR-515-5p与CSPG4 mRNA表达呈负相关(r=-0.710,P<0.05).不同分化程度、国际妇产科联盟(FIGO)分期、淋巴结转移EOC组织中miR-515-5p、CSPG4 mRNA表达比较,差异均有统计学意义(P均<0.05).随访3年,84例EOC患者3年累积生存率为57.14%(48/84).K-M生存曲线分析显示,miR-515-5p高表达者累积生存率高于低表达者,CSPG4 mRNA高表达者累积生存率低于低表达者(P均<0.05).结论 EOC组织中miR-515-5p低表达和CSPG4 mRNA高表达,二者表达与分化程度、FIGO分期、淋巴结转移和预后有关;检测二者表达有助于判断EOC患者病情和预后评估.

以黄独微型块茎为材料,进行了4℃低温离体保存,并对其进行了转录组分析.结果表明:原始数据进行质量预处理后,对照组(Con25)和处理组(Con4)的reads有效比分别为98.67％和98.69％;对拼接序列去重复后最终得到了219 792个长度大于200bp的transcripts(177 Mb)和161066个Unigenes (99 Mb);Unigenes的NR注释数目最多的10个物种分别为出芽短梗霉EXF-150、葡萄、可可、水稻粳稻组、无油樟、谷子、出芽短梗霉变种nami-biae CBS 147.97、麻疯树、短至生黑醋杆菌CBS 110374和无花果拟盘多毛孢w106-1;样本注释基因最多的5个KOG是一般的功能预测、信号转导机制、翻译后修饰和蛋白质周转以及伴侣、翻译和核糖体结构和生物合成、能源生产和转换;样本KEGG注释Unigenes最多的5个pathway分别为碳代谢、氨基酸生物合成、糖酵解途径、淀粉蔗糖代谢和丙酮酸代谢.注释到的Unigenes个数为26006,注释到的不同酶数为1 177,映射到的不同pathway数为327;样本基因的功能在Biological Process分类中主要聚集于cellular process和metabiolic process,在Cellular Component分类中主要聚集于cell和cell part,在Molecular Function分类中主要聚集于binding和catalytic activity;在黄独微型块茎低温离体保存中,共获得164 145个差异表达基因,其中有63 305个基因表达上调,有100 840个基因表达下调;差异表达基因部分极其显著的GO term有液泡继承、单链断裂修复、纺锤体伸长、麦芽糖分解代谢过程、甘露糖基转移酶的活性、甘露糖磷酸转移酶活性、细胞壁甘露糖蛋白的生物合成过程、G1期细胞有丝分裂周期早期细胞芽和有丝分裂纺锤体定位的建立;差异表达基因部分极其显著的pathway有原发性胆汁酸的生物合成、类固醇激素的合成、氯代环己烷和氯苯降解、双酚A降解、氟苯甲酸降解、糖胺聚糖合成硫酸软骨素、糖胺聚糖合成硫酸乙酰肝素、甲苯降解、萘的降解和核黄素代谢.本实验结果可为黄独微型块茎的种质保存和后续萌发提供理论依据.

目的 从平颏海蛇皮中提取分离糖胺聚糖(GAGs),并对其结构进行初步表征.方法 对海蛇皮进行脱脂处理后,采用木瓜蛋白酶和胰蛋白酶联合酶解提取粗多糖,采用氯代十六烷基吡啶(CPC)沉淀和Q-Sepharose Fast Flow离子交换树脂对粗多糖进行分离纯化.运用醋酸纤维素薄膜电泳分析其GAGs种类,采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生高效液相色谱(HPLC)法分析其单糖组成,利用硫酸软骨素酶降解结合质谱和强阴离子交换色谱(SAX-HPLC)法分析其二糖组成.结果 获得了2种GAGs纯化组分,并对其中1种含量较高的纯化组分(HSAP-2)进行了初步结构表征.HSAP-2中含有4种二糖,主要为单硫酸化二糖(4S和6S);单糖组成中含有艾杜糖醛酸(IdoA)、葡萄糖醛酸(GlcA)和乙酰氨基半乳糖(GalNAc);是1种高度杂合的新型硫酸皮肤素(DS).结论 从平颏海蛇皮中分离纯化获得了1种结构新颖的DS,为平颏海蛇多糖结构与生物活性的深入研究提供了基础.

目的 探讨小鼠供肾选择性缺失N-脱乙酰基酶-N-磺基转移酶(Ndst)1对肾移植术后受体小鼠急性排斥反应的影响及其机制.方法 建立小鼠肾移植模型.根据品系和处理方式不同,将小鼠分为3组:野生型(WT)组(n=10)、Ndst1-/-组(n=9)、黏液瘤病毒T7蛋白(M-T7)治疗组(n=7).术后第10日对各组小鼠实施安乐死,对各组小鼠移植肾分别进行病理学检查和糖胺聚糖(GAGs)中的双糖[硫酸乙酰肝素(HS)和硫酸软骨素(CS)]含量分析.分析病理学评分与双糖含量变化的相关性.结果 与WT组比较,Ndst1-/-组和M-T7治疗组小鼠移植肾组织的早期排斥反应的总体病理学评分显著降低(均为P<0.05).与WT组比较,Ndst1-/-组小鼠移植肾组织中HS的6-O硫酸化比例、D0S6含量显著增加(均为P<0.05),CS的D0A4和D2A4含量显著下降(均为P<0.05).与WT组比较,M-T7治疗组小鼠移植肾组织中HS的6-O硫酸化比例、CS的6-O硫酸化和2-O硫酸化比例、HS的D0S6和D2S6含量均显著增加(均为P<0.05),HS的D2A0含量、CS的D0A4和D2A4含量明显降低(均为P<0.05).小鼠移植肾组织中双糖含量变化与急性排斥反应相关病理学评分均具有相关性(均为P<0.05).结论 供肾选择性缺失Ndst1可减轻肾移植术后的急性排斥反应,其机制可能与移植肾组织中双糖HS的6-O硫酸化比例增加有关.

目的:从猪脑中提取分离糖胺聚糖(glycosaminoglycans,GAGs),并进行精细结构分析.方法:猪脑组织经脱脂、蛋白酶酶解后,经氯代十六烷基吡啶(CPC)富集,乙醇沉淀获得糖胺聚糖粗品.利用Q-Sepharose Fast Flow离子交换柱纯化,获得7个组分(P1 ～P7).所得分级样品分别经肝素裂解酶与硫酸软骨素裂解酶酶解,2-氨基吖啶酮(AMAC)荧光标记后,利用液质联用方法分析其精细结构.结果:猪脑GAGs粗品中主要获得硫酸乙酰肝素(heparan sulfate,HS)、硫酸软骨素(chondroitin sulfate,CS)和少量透明质酸(hyaluronic acid,HA),含量分别为307,293和18 mg·kg-1.P2 ～ P4组分GAGs含量较少;P5 ～ P7组分CS和HS含量相当,CS中以△UA-GalNAc4S为主;HS组成以△UA-GlcNAc为主,电荷密度略低,未获得肝素组分.结论:基于液质联用技术分析猪脑组织的精细结构,为动物来源糖胺聚糖的研究提供依据.

目的 通过改变不同因素条件优化人胎脑神经干细胞来源的少突胶质前体细胞(OPC)冻存方法,进一步提高复苏活率.方法 比较使用消化和机械吹打两种方法收集人OPC,采用人多能干细胞(hPSC)无血清冻存液、含930 mL/L胎牛血清(FBS)和70 mL/L二甲基亚砜(DMSO)的冻存液分别冻存细胞,比较两组冻存前后活率.择优后比较4种不同冻存液(含70 mL/L DMSO和930 mL/L FBS的冻存液,含70 mL/L DMSO、300 mL/L FBS的OPC完全培养基,含70 mL/L DMSO、300 mL/L FBS、0.2 mol/mL海藻糖的OPC完全培养基,含70 mL/L DMSO、100 mL/L FBS、300 mL/L羟乙基淀粉溶液的OPC完全培养基)、冻存速率(冻存盒慢速降温和液氮气相快速降温)及冷冻保存时间3个因素对复苏活率的影响.在优选后的冻存方案基础上,复苏后7d,使用免疫荧光细胞化学染色法比较OPC特异性标志物血小板源性生长因子受体α(PDGFRoα)、ST8α-N-乙酰神经酰胺α2,8-唾液酸转移酶1(ST8SIA1/A2B5)、硫酸软骨素蛋白聚糖4(CSPG4/NG2)、增殖相关KI-67抗原(ki67)表达.结果 消化组收集细胞,冻存前后活率明显高于机械组;快速降温4组复苏活率均低于30％且无法继续培养,慢速降温4组复苏活率均较高.使用消化法收集细胞,冻存细胞数为2×106/mL;使用含海藻糖的冻存液,慢速降温冻存,复苏活率最高;可达(75.73±6.66)％.与对照组相比,复苏后培养组增殖倍数、ki67表达无明显差异,两组均表达PDGFRα、A2B5、NG2.短期和长期储存组复苏活率无明显差别.结论 消化液收集OPC,使用含海藻糖的冻存液慢冻快融的方法,适用于人胎脑神经干细胞诱导OPC冷冻保存,复苏后不影响细胞增殖和标志物表达,储存时间对复苏活率无影响.