目的:探讨去氧鬼臼毒素（DPPT）是否通过调控长链非编码RNA ZFPM2-AS1（LncRNA ZFPM2-AS1）/微小RNA-515-5p（miR-515-5p）分子轴而抑制结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭。方法:体外培养人结肠癌LoVo细胞，随机分为Control组、DPPT-L组、DPPT-M组、DPPT-H组。甲基噻唑基四唑（MTT）检测细胞增殖；Transwell小室实验检测迁移及侵袭；实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测ZFPM2-AS1、miR-515-5p的表达水平；LoVo细胞中转染pcDNA-ZFPM2-AS1，采用上述方法检测细胞增殖、迁移及侵袭；双荧光素酶报告实验验证ZFPM2-AS1、miR-515-5p的靶向关系；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞周期蛋白1（CyclinD1）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、P21的表达量。结果:与Control组比较，DPPT-L组、DPPT-M组、DPPT-H组细胞存活率降低（ P<0.05），迁移细胞数、侵袭细胞数减少（ P<0.05），CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平降低（ P<0.05），P21蛋白水平升高（ P<0.05），ZFPM2-AS1表达水平降低（ P<0.05），miR-515-5p表达水平升高（ P<0.05），且DPPT-L组、DPPT-M组、DPPT-H组上述指标比较，差异均有统计学意义（ P<0.05）；ZFPM2-AS1可靶向结合miR-515-5p；与DPPT-H+pcDNA组比较，DPPT-H+pcDNA-ZFPM2-AS1组细胞存活率升高（ P<0.05），迁移细胞数、侵袭细胞数增多（ P<0.05），CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平升高（ P<0.05），P21蛋白水平降低（ P<0.05）。 结论:DPPT可能通过下调ZFPM2-AS1的表达及上调miR-515-5p的表达从而抑制结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭。

目的:探讨微小RNA-515-5p（miR-515-5p）是否可靶向内凝集素2（lectin 2，ITLN2）影响子宫内膜异位症（endometriosis，EMT）子宫内膜基质细胞（endometrial stromal cells，ESCs）的增殖、迁移和侵袭。方法:收集2020年12月至2021年12月期间在济宁医学院附属医院生殖医学科就诊治疗的24例EMT患者的在位内膜和异位内膜组织及18例行腹腔镜手术的非EMT患者的正常内膜组织。RT-qPCR检测内膜组织miR-515-5p、 ITLN2 mRNA相对表达量；Western blotting法检测内膜组织中ITLN2蛋白表达量。原代分离、培养EMT患者的ESCs，利用Lipofectamine 2000试剂转染ESCs，并将其分为空白组、miR-515-5p抑制剂组、miR-515-5p抑制剂阴性对照（negative control，NC）组，CCK-8法检测细胞增殖情况；划痕愈合和Transwell实验分别评估细胞迁移、侵袭能力；双荧光素酶报告基因检测miR-515-5p和ITLN2的靶向关系；RT-qPCR技术检测各组细胞miR-515-5p、 ITLN2 mRNA相对表达量；Western blotting技术检测ITLN2、白细胞介素（interleukin，IL）-1β、IL-6及肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）蛋白相对表达量。 结果:EMT患者在位和异位子宫内膜组织miR-515-5p相对表达量显著高于正常子宫内膜组织（均 P<0.001）， ITLN2 mRNA相对表达量显著低于正常子宫内膜组织，异位子宫内膜组织 ITLN2 mRNA相对表达量显著低于在位子宫内膜组织（均 P<0.001），EMT患者异位子宫内膜组织ITLN2蛋白质水平显著低于EMT在位和正常子宫内膜组织（均 P<0.001），EMT患者在位子宫内膜组织ITLN2蛋白质水平显著低于正常子宫内膜组织（ P<0.001）。miR-515-5p抑制剂组细胞存活率［（54.71±2.78）%］、划痕愈合率［（38.31±3.78）%］及侵袭数［（286.67±25.15）个］、miR-515-5p相对表达量、IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白相对表达量均显著低于空白组［（100.00±0.00）%， P<0.001；（84.08±5.14）%， P<0.001；（515.67±22.19）个， P<0.001； P<0.001； P=0.012； P=0.010； P<0.001］， ITLN2 mRNA和蛋白相对表达量均显著高于空白组（ P<0.001； P<0.001）。经生物信息学分析和双荧光素酶报告基因检测， ITLN2为miR-515-5p的潜在靶基因。 结论:降低miR-515-5p水平可抑制EMT患者ESCs增殖、迁移和侵袭，这可能与靶向提高ITLN2表达进而降低炎症因子水平有关。

目的 探讨上皮性卵巢癌(EOC)组织中微小RNA-515-5p(miR-515-5p)、硫酸软骨素蛋白聚糖4(CSPG4)的表达及临床意义.方法 选取84例EOC患者,采用RT-qPCR法检测癌组织与癌旁组织中miR-515-5p、CSPG4 mRNA表达.采用Pearson相关系数分析EOC组织中miR-515-5p与CSPG4 mRNA表达的相关性.根据EOC组织中miR-515-5p、CSPG4 mRNA表达均值分为高、低表达者,采用Kaplan-Meier法绘制不同miR-515-5p、CSPG4 mRNA表达EOC患者的生存曲线.结果 与癌旁组织相比,卵巢癌组织中miR-515-5p表达低,CSPG4 mRNA表达高(P均<0.05).经TargetScan数据库预测miR-515-5p与CSPG4的3'-非翻译区210～216处存在结合位点,Pearson相关系数分析显示,EOC组织中miR-515-5p与CSPG4 mRNA表达呈负相关(r=-0.710,P<0.05).不同分化程度、国际妇产科联盟(FIGO)分期、淋巴结转移EOC组织中miR-515-5p、CSPG4 mRNA表达比较,差异均有统计学意义(P均<0.05).随访3年,84例EOC患者3年累积生存率为57.14%(48/84).K-M生存曲线分析显示,miR-515-5p高表达者累积生存率高于低表达者,CSPG4 mRNA高表达者累积生存率低于低表达者(P均<0.05).结论 EOC组织中miR-515-5p低表达和CSPG4 mRNA高表达,二者表达与分化程度、FIGO分期、淋巴结转移和预后有关;检测二者表达有助于判断EOC患者病情和预后评估.

目的 预测和印证调控蛋白激酶D1(PKD1)的微小RNA(miRNA),探讨其在蛙皮素诱导的大鼠急性胰腺炎(AP)中发挥的作用.方法 生物信息学软件预测PKD1的上游调控miRNA,并通过双荧光素酶报告基因和Western blot验证目标miRNA对PKD1表达的调控.采用蛙皮素(20μg/kg)腹腔注射(每隔1 h注射1次,连续6次)的方法构建AP模型.大鼠分为正常组(10只)、AP组(20只)和治疗组(20只),其中,正常组不做处理,AP组和治疗组分别在造模前腹腔注射对照miRNA和带CY5荧光基因的miRNA模拟体.AP组和治疗组各取10只在首次注射蛙皮素后6 h处死,其余在首次注射后24 h处死.所有动物下腔静脉采血检测血清淀粉酶、脂肪酶活力;采集胰腺组织包埋切片行免疫组织化学染色检测PKD1的表达,HE染色进行AP病理评分.结果 TargetSacn7.1软件预测miR-128-3p为PKD1潜在的调控miRNA,双荧光素酶报告基因和Western blot证实miR-128-3p与PRKD1 mRNA 3′UTR结合,抑制PKD1的蛋白表达.造模后6 h,AP组与治疗组血清淀粉酶和脂肪酶活力较正常组增高[13313.00(9424.00～15995.00)U/L、13552.00(10399.50～18408.25)U/L比1430.50(1214.25～1543.25)U/L;547.00(515.00～627.00)U/L、857.50(522.00～1222.25)U/L比34.00(32.50～34.75)U/L],差异均有统计学意义(χ2=8.715,P<0.05;χ2=9.115,P<0.05),提示造模成功.造模后24 h,治疗组PKD1免疫组织化学评分[0.50(0～2.75)分]较正常组[4.00(4.00～8.00)分]和AP组[4.00(3.75～8.00)分]均下降,差异有统计学意义(χ2=18.302,P<0.05).炎性细胞浸润和组织坏死明显好转,病理评分总分显著低于AP组(3.80±0.85比6.90±1.15,t=4.481,P<0.01).结论 miR-128-3p是PKD1的上游调控miRNA,可抑制PKD1介导的AP大鼠的组织坏死和炎性细胞浸润.

[目的]研究小檗碱单体是否通过靶向微小RNA-515-5p(miR-515-5p)来影响结直肠癌细胞的增殖与凋亡.[方法]小檗碱作用结直肠癌细胞Caco-2后,采用实时定量PCR(qRT PCR)检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)mRNA和miR-515-5p的表达,MTT法检测细胞增殖,Western Blot检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved-caspase-3)蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡.通过脂质体法转染miR-515-5p模拟物或抑制剂于细胞Caco-2,分别采用Western Blot、MTT、流式细胞仪检测高表达或低表达miR-515-5p后CyclinD1、Cleaved-caspase-3蛋白表达、细胞增殖和凋亡情况.在细胞中转染miR-515-5p抑制剂,并给予小檗碱处理,采用上述方法检测细胞Caco-2增殖和凋亡等的变化.[结果]20、40、80 μmol/L小檗碱显著减少了Caco-2细胞内CyclinDl mRNA表达量和细胞存活率(P＜0.05).40 μmol/L小檗碱明显增加Cleaved-caspase-3蛋白表达量、细胞凋亡率和miR-515-5p表达量.高表达miR-515-5p明显降低Caco-2细胞的细胞存活率、CyclinD1蛋白水平,并显著提高了Cleaved-caspase-3蛋白的表达量、细胞凋亡率.低表达miR-515-5p时的结果相反.低表达miR-515-5p后,小檗碱对Caco-2细胞增殖、CyclinD1蛋白表达的抑制作用和对细胞凋亡、Cleaved caspase 3蛋白表达的促进作用被逆转.[结论]小檗碱通过靶向miR-515-5p基因,抑制结直肠癌细胞的增殖,并诱导细胞凋亡.

目的:研究lncRNA HOXA11-反义RNA(HOXA11-AS)对膀胱尿路上皮癌J82细胞增殖、侵袭迁移的影响及与微小RNA-515-5p(miR-515-5p)之间的调控关系.方法:qRT-PCR检测膀胱尿路上皮癌组织、癌旁组织和J82细胞中HOXA11-AS和miR-515-5p的转录水平,MTT法和Transwell实验检测J82细胞的增殖、迁移和侵袭能力,Western blot检测细胞中Cyclin D1、p21、p27、MMP-2、MMP-9和MMP-14的表达,双荧光素酶报告系统验证HOXA11-AS和miR-515-5p的结合关系.结果:与正常癌旁组织相比,膀胱尿路上皮癌组织中HOXA11-AS含量显著升高(P<0.05),miR-515-5p的含量显著下降(P<0.05);干扰HOXA11-AS表达可以抑制膀胱尿路上皮癌J82细胞增殖、迁移和侵袭,使Cyclin D1、MMP-2、MMP-9和MMP-14表达下降,p21和p27表达升高;过表达miR-515-5p抑制J82细胞增殖、迁移和侵袭;HOXA11-AS靶向负调控miR-515-5p的表达;抑制miR-515-5p表达可逆转干扰HOXA11-AS表达对J82细胞增殖、迁移和侵袭的作用.结论:LncRNA HOXA11-AS通过靶向miR-515-5p抑制膀胱尿路上皮癌J82细胞增殖、迁移和侵袭.LncRNA HOXA11-AS是膀胱尿路上皮癌的潜在靶点.

为探讨环状RNA0015756(circ_0015756)对肺癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响和潜在机制,该研究采用实时定量PCR(RT-qPCR)分析肺癌组织和癌旁组织中circ_0015756和微小RNA(miR)-515-5p的表达水平.同时,将circ_0015756小干扰RNA(si-circ_0015756)、miR-515-5p模拟物、si-circ_0015756+miR-515-5p抑制物分别转染肺癌细胞A549,采用四甲基偶氮唑蓝实验、平板克隆实验检测A549细胞的增殖能力,采用流式细胞术分析A549细胞的凋亡率,采用划痕愈合实验和Transwell实验检测A549细胞的迁移能力.蛋白质印迹法测定高迁移率族蛋白3(HMGB3)的表达水平.双荧光素酶分析circ_0015756与miR-515-5p、miR-515-5p与HMGB3的靶向关系.结果显示,肺癌组织中circ_0015756的相对水平显著高于癌旁组织(P＜0.05),miR-515-5p的相对水平显著低于癌旁组织(P＜0.05).干扰circ_0015756表达后A549细胞增殖抑制率、凋亡率、miR-515-5p的相对水平显著升高(P＜0.05),集落形成数、迁移距离、迁移细胞数、HMGB3蛋白的相对水平显著降低(P＜0.05).过表达miR-515-5p后A549细胞增殖抑制率、凋亡率显著升高(P＜0.05),集落形成数、迁移距离、迁移细胞数、HMGB3蛋白的相对水平显著降低(P＜0.05).抑制miR-515-5p表达明显减弱干扰circ_0015756表达对A549细胞增殖、集落形成、迁移以及HMGB3蛋白表达的影响(P＜0.05).circ_0015756与miR-515-5p直接结合,miR-515-5p与HMGB3直接结合.总之,干扰circ_0015756通过靶向上调miR-515-5p/HMGB3轴抑制肺癌细胞增殖和迁移,诱导细胞凋亡.

目的 探讨猫白血病C亚类病毒受体1的反义RNA1 (feline leukemia virus subgroup C virus receptor 1 antisense RNA 1,FLVCR1-AS1)对鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制.方法 以人永生化鼻咽上皮细胞NP69(简称NP69细胞)为对照,实时荧光定量PCR(realtime fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)法检测鼻咽癌细胞系(5-8F、 C666-1、 6-10B)中FLVCR1-AS1和微小RNA (microRNA,miR)-515-5p表达.将C666-1细胞分为si-NC组、si-FLVCR1-AS1组、miR-NC组、miR-515-5p组、si-FLVCR1-AS1+anti-miR-NC组和si-FLVCR1-AS1+anti-miR-515-5p组,CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖,划痕实验和Transwell检测分别检测细胞迁移和侵袭.双荧光素酶报告基因实验验证FLVCR1-AS1和miR-515-5p调控关系.结果 鼻咽癌细胞系(5-8F、 C666-1、6-10B)中FLVCR1-AS1表达高于NP69细胞(2.26±0.11、4.19±0.24、 3.54±0.18 vs 1.00±0.00,P＜0.05),而miR-515-5p表达低于NP69细胞(0.86±0.09、 0.20±0.03、 0.47±0.05 vs 1.00±0.00,P＜0.05).与si-NC组比较,si-FLVCR1-AS1组C666-1细胞光密度(optica1 density,OD)值(0.59±0.03 vs 1.34±0.08)、克隆数[(55.67± 1.70)个vs (114.67±3.30)个]、迁移距离[(75.34±3.09) μm vs(186.29±9.29) μm]、侵袭数[(69.33±3.68)个vs (149.67±6.80)个]降低(P均＜0.05).与miR-NC组比较,miR-515-5p组C666-1细胞OD值(0.51±0.04 vs 1.36±0.07)、克隆数[(46.67±1.25)个vs(115.67± 4.11)个]、迁移距离[(65.89±1.96) μm vs(186.49±8.33) μm]、侵袭数[(58.33±2.05)个vs(150.00±6.98)个]降低(P均＜0.05).FLVCR1-AS1可靶向负调控miR-515-5po与si-FLVCR 1-AS 1+anti-miR-NC组比较,si-FLVCR1-AS1+anti-miR-515-5p组C666-1细胞OD值(1.16±0.06 vs 0.59±0.04)、克隆数[(106.00±3.56)个vs(55.33±2.49)个]、迁移距离[(164.06±7.40) μm vs(75.48±2.62) μm]、侵袭数[(134.67±5.31)个vs(69.00±2.94)个]升高(P均＜0.05).结论 FLVCR1-AS1可能靶向下调miR-515-5p促进鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭.

目的 探讨右美托咪定(Dex)通过调控长链非编码RNA HOXA11-AS(LncRNA HOXA11-AS)/微小RNA-515-5p(miR-515-5p)对膀胱癌细胞增殖、凋亡的影响及作用机制.方法 采用不同浓度(25、50、100、200 ng/ml)的Dex处理膀胱癌T24细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率;流式细胞术检测Dex对T24细胞凋亡率的影响;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测Dex对HOXA11-AS、miR-515-5p表达水平的影响.利用脂质体方法分别将si-HOXA11-AS及阴性对照(si-NC)、miR-515-5p模拟物(mimics)及阴性对照(miR-NC)转染至T24细胞,通过MTT、流式细胞术检测细胞增殖与凋亡能力变化.双荧光素酶报告实验确定HOXA11-AS与miR-515-5p的靶向关系.Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(C-caspase)-3表达量.结果 Dex可明显提高细胞凋亡率及C-caspase-3、miR-515-5p的表达水平(P<0.05),明显降低HOXA11-AS的表达水平(P<0.05);抑制HOXA11-AS表达与miR-515-5p过表达后,细胞存活率及CyclinD1的表达水平明显降低(P<0.05),细胞凋亡率及C-caspase-3的表达水平明显升高(P<0.05);双荧光素酶报告实验证明HOXA11-AS可靶向结合miR-515-5p;HOXA11-AS过表达可逆转Dex对T24细胞增殖和凋亡的影响;miR-515-5p过表达可逆转HOXA11-AS过表达对Dex处理的T24细胞增殖和凋亡的影响.结论 Dex通过下调HOXA11-AS及上调miR-515-5p抑制膀胱癌细胞增殖并诱导细胞凋亡.

目的 探讨环状RNA低密度脂蛋白受体相关蛋白6(circ-LRP6)对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制.方法 选取44例卵巢癌患者的癌组织及癌旁组织,培养正常人卵巢上皮细胞HUM-CELL-0088及卵巢癌细胞系SKOV3、OVCAR3、A2780,采用实时荧光定量PCR检测卵巢癌组织和细胞中circ-LRP6、微小RNA-515-5p(miR-515-5p)的表达水平;双荧光素酶报告实验检测miR-515-5p与circ-LRP6之间的靶向关系;将circ-LRP6干扰表达载体、miR-515-5p过表达载体、miR-515-5p抑制表达载体与circ-LRP6干扰表达载体转染至卵巢癌细胞SKOV3中,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9、白细胞介素6受体(IL-6R)蛋白的表达;CCK-8法检测SKOV3细胞活性;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭.结果 与癌旁组织及HUM-CELL-0088细胞相比,卵巢癌组织和SKOV3、OVCAR3、A2780细胞系中circ-LRP6表达水平显著升高,miR-515-5p表达水平显著降低(P<0.05).双荧光素酶报告实验证实circ-LRP6可靶向负调控miR-515-5p的表达.低表达circ-LRP6或过表达miR-515-5p均可抑制Cyclin D1、MMP2、MMP9、IL-6R的表达,降低细胞活性,抑制细胞迁移和侵袭(P<0.05).同时,抑制circ-LRP6和miR-515-5p表达可上调SKOV3细胞中Cyclin D1、MMP2、MMP9、IL-6R的表达,增强细胞活性,促进细胞迁移和侵袭(P<0.05).结论 抑制circ-LRP6表达可能通过上调miR-515-5p抑制IL-6,从而抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭.