磁分离是从生物样本中富集特定目标物的常用方法.传统特异性磁分离方法一般通过将抗体与磁珠偶联获得免疫磁珠的方式用于特定目标物的捕获,但由于抗体有成本高、捕获目标物后不易释放等缺点,免疫磁珠难以满足众多研究领域对同时满足目标物大批量、高特异性富集的需求.核酸适配体同抗体一样具备目标物高特异性捕获的能力,相较抗体具有制备成本低、结构简单和化学稳定性高等优点,更适合用来大批量、高特异性富集特定目标物,因此在本研究中,本文利用石墨烯对单链和双链核酸的吸附能力不同的特性,以CD63适配体为例设计了一套可以将适配体展示于石墨烯表面并用于捕获、富集和释放目标物的方法.该设计主要包括2个单元,一是可以贴附于石墨烯表面并将CD63适配体展示于石墨烯外的双链寡核苷酸支架,二是采用与支架足部序列互补的单链寡核苷酸,将所捕获的目标物从石墨烯表面解吸附.本研究首先以氧化石墨烯(GO)纸为石墨烯界面,通过对支架或CD63蛋白等进行荧光标记,并对比支架释放前后及CD63蛋白捕获前后GO纸表面荧光强度变化表示其支架释放效果与CD63蛋白捕释情况,随后应用氨基修饰的石墨烯壳铁氮磁珠搭载CD63适配体双链支架,用于捕获细胞裂解液中CD63蛋白.结果表明,该支架可以将适配体展示于石墨烯表面捕获CD63蛋白并可以可控释放,使用挑选的改性石墨烯磁珠搭载该适配体双链支架,可以用于细胞裂解液中CD63蛋白的捕获.该方法有望实现多种蛋白质的特异性富集或通过捕获外泌体膜蛋白而富集外泌体等多种用途.

目的 研究一种快速和有效富集污水中新型冠状病毒的方法,为城市污水新冠病毒监测工作和疫情防控提供支持.方法 利用液样微生物采集富集仪(LM Capturer-5)对加标液体样本进行富集,利用RT-qPCR检测富集前后新冠病毒核酸浓度,计算回收率,考察该方法对液体样本中新冠病毒的富集效果,比较该方法与聚乙二醇沉淀法对污水中新冠病毒富集后检测结果一致性.结果 洁净液体加标样本富集后新冠病毒核酸检测结果Ct值降低3～5,污水加标样本富集后Ct值降低1～4,该方法对污水中新冠病毒的富集回收率为13.50％～44.20％,聚乙二醇沉淀法回收率为8.83％～38.85％,无显著性差异(P＞0.05).应用液样微生物采集富集仪对60份污水样本中新冠病毒进行富集,富集后检测阳性率为63.33％,与标准方法一致,并且与标准方法进行一致性检验,Kappa系数为0.785,有中高度一致性.结论 本研究建立的液样微生物采集富集仪法对于污水中的新冠病毒具有较好的富集效果,且操作简便、可自动化,为我国污水中的新冠病毒监测工作提供了多一种技术储备,并且为液体样本中多种病原微生物的富集和检测研究工作提供帮助.

目的:探讨重组肿瘤抑素T42肽对人肝癌干细胞(LCSCs)恶性表型的影响及作用机制。方法:2018年6月至2019年6月，培养人肝癌细胞系SMMC-7721，利用免疫磁珠法富集CD133 ＋肝癌干细胞LCSCs。实验共分3组：正常组、T42肽(40 mmol/L)处理组和5-氟尿嘧啶(40 mmol/L)处理组。通过细胞计数试剂盒(CCK-8)检测处理后第1、2、3、4天的细胞活力；克隆形成实验检测3组细胞处理后第14天的克隆形成情况；流式细胞术检测3组LCSCs处理24 h后的细胞凋亡率；Transwell实验分别检测3组LCSCs处理48 h后的迁移和侵袭能力；蛋白质印迹法(Western blot)检测3个不同处理组细胞中凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)、剪切型含半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3(Cl-Caspase-3)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9等的表达。符合正态分布的组间比较采用 t检验，不符合正态分布的采用单因素方差分析。 结果:T42肽、5-氟尿嘧啶处理组LCSCs的克隆形成率[(41.67±8.26)%、(52.03±10.35)%]、细胞迁移数[(97.17±13.73)、(111.51±8.60)个]和细胞侵袭数[(79.02±7.87)、(86.03±6.54)个]显著低于对照组[(98.67±7.37)%、(185.67±12.88)个、(139.83±18.32)个]，凋亡率[(13.21±0.38)%、(9.02±0.35)%]显著高于对照组[(4.07±0.38)%]，差异均有统计学意义( t＝12.613、8.991；11.513、11.732；7.472、6.781；41.503、23.412， P值均<0.05)。Western blot结果显示T42肽、5-氟尿嘧啶通过增加bax和Cl-Caspase-3，抑制bcl-2的蛋白表达来诱导LCSCs凋亡，通过上调E-cadherin同时下调Vimentin、MMP-2和MMP-9的表达水平来调节LCSCs的迁移和侵袭。 结论:T42肽具有抑制LCSCs的增殖、迁移、侵袭，并促进其凋亡的作用。

目的:评估改良磁珠筛选法富集胎儿游离DNA（cell-free fetal DNA，cffDNA）在无创产前检测（non-invasive prenatal testing，NIPT）中的应用价值。方法:从2017年10月至2019年12月在北京市海淀区妇幼保健院接受常规NIPT的11 000例孕妇中，回顾性纳入cffDNA浓度偏低（<6.00%），或首次检测Z值灰区（3.00~4.00），或产前介入性产前诊断确定假阳性或生后确定假阴性病例共31例。取首次常规NIPT留存的血浆标本，使用改良磁珠筛选法富集cffDNA进行NIPT（改良富集法NIPT）。采用Wilcoxon秩和检验比较改良富集法NIPT与常规NIPT测得的男胎cffDNA浓度变化。结果:31例孕妇中13例常规NIPT cffDNA浓度偏低，11例常规NIPT 13/18/21-三体假阳性（3例13-三体，4例18-三体，4例21-三体，均经介入性产前诊断证实），6例首次常规NIPT Z值灰区（复测为低风险），1例常规NIPT 21-三体假阴性（生后染色体检查证实）。使用改良富集法后，<150 bp的游离DNA（cell-free DNA，cfDNA）片段得到有效富集，21例男胎的cffDNA浓度由常规NIPT的4.43%（2.45%~17.61%）提升至改良富集法NIPT的13.46%（7.75%~36.64%），差异有统计学意义（Z=-14.22， P<0.01）。13例常规NIPT cffDNA浓度偏低者经改良富集法NIPT，均成功检出为低风险；6例Z值灰区病例及11例假阳性病例中的6例经改良富集法NIPT确定为低风险，与常规NIPT复测结果一致；1例假阴性病例确定为高风险。 结论:与常规NIPT相比，改良富集法NIPT降低了因cffDNA浓度偏低导致的检测失败率，降低了假阳性率，并成功检测出假阴性病例，显示出更高的检测成功率和更低的假阳性率。

目的:探讨多发性骨髓瘤（MM）6种常见细胞遗传学异常和骨髓病理形态学之间的关系。方法:对2016年1月至2018年6月首都医科大学附属北京朝阳医院血液科151例初诊MM患者行骨髓穿刺活检，同时通过CD138免疫磁珠富集骨髓瘤细胞，采用间期荧光原位杂交（FISH）技术对1q+、13q-、17p-、t（4；14）、t（11；14）和t（14；16）等MM常见遗传学异常进行检测，比较不同遗传学异常与活检形态学之间的关系。结果:151例患者中，伴髓外浸润者15例（9.9%）。细胞遗传学异常检出率为76.2%（115/151），其中1q+检出率为49.7%（75/151），13q-为39.1%（59/151），17p-为8.6%（13/151），t（4；14）为21.2%（32/151），t（11；14）为19.2%（29/151），t（14；16）为2.0%（3/151）。骨髓活检显示骨髓瘤细胞的增殖模式以结节型（48.3%，73/151）和间质型（33.8%，51/151）为主，弥漫型（17.9%，27/151）最少；瘤细胞病理形态以成熟型为主（58.3%，88/151），其次依次为幼稚型（20.5%，31/151）、中间型（15.9%，24/151）及浆母细胞型（5.3%，8/151）。根据mSMART危险分层系统，高危组主要以幼稚型及浆母细胞型浆细胞弥漫型增殖为主；中危组以成熟型浆细胞结节型增殖为主；低危组以成熟型浆细胞浸润为主；阴性组以成熟型浆细胞间质型增殖为主；中间型浆细胞在各组的增殖方式无差异（ P>0.05）。 结论:骨髓活检组织中瘤细胞的增殖方式及形态，与细胞遗传学标志物相结合，可以使其在判断病变的严重度及预后方面更加完善。

目的:建立重组人甘露聚糖结合凝集素蛋白（M1蛋白）磁珠富集病原体结合重组酶辅助聚合酶链式反应（RAP）巢式核酸扩增技术检测血液中白色念珠菌和热带念珠菌的方法，以实现对白色念珠菌血症和热带念珠菌血症的早期诊断。方法:针对白色念珠菌和热带念珠菌的内转录间隔区的高度保守区域的设计引物探针，建立检测白色念珠菌和热带念珠菌的RAP检测方法；用梯度稀释的标准菌株核酸和临床常见的血流感染病原体核酸检验灵敏度、重复性、特异性；用模拟样本进行M1蛋白磁珠富集血浆白色念珠菌和热带念珠菌RAP和实时荧光PCR的检测，并对结果进行比较。结果:建立的双重RAP方法灵敏度为2.4~2.8拷贝/反应，重复性好，特异性高；M1蛋白磁珠富集病原体结合双重RAP方法可在4 h内完成对血浆中白色念珠菌和热带念珠菌的检测，<10 CFU/ml的病原体富集后进行RAP检测样本数较PCR检测样本数多。结论:本研究建立了检测血液中白色念珠菌和热带念珠菌的双重RAP方法，该检测方法具备准确、快速、减少污染物的优点，在念珠菌血症快速检测中具有较好的应用潜力。

目的:比较2种超顺磁性纯化磁珠筛选富集胎儿游离DNA(cffDNA)的技术在无创产前检测(NIPT)中的效能，探讨改良筛选富集游离DNA(cfDNA)技术的临床应用价值。方法:回顾性分析2017年12月至2022年9月在北京市海淀区妇幼保健院接受NIPT检测的26 252例孕妇的资料，根据磁珠筛选cffDNA的方法将其分为常规组(10 573例)和改良富集组(15 679例)。对NIPT提示高风险的孕妇进行介入性产前诊断。随访所有孕妇的妊娠结局。从文库片段大小、cffDNA浓度、重复检测率和临床检验方法学评价常用指标等方面比较两种方法的检测效能。结果:改良磁珠筛选富集法使游离DNA文库主峰的片段长度由常规法的294 bp减小至267 bp；cffDNA浓度由9.08%提升为21.86%( P<0.01)；重复检测率由2.02%降低至0.740% ( χ2＝83.90， P<0.01)；检测失败率由0.057%降至0.006%( P<0.05)。改良富集组在高风险及低风险人群中的复合PPV均略低于常规组(64.3%/76.1%和35.3%/45.5%)，但组间无差异。常规组检测的高风险人群中出现1例21三体假阴性，改良富集组未出现假阴性。 结论:改良磁珠筛选富集法可显著提高cffDNA的相对浓度，降低NIPT检测的失败率及复检率，从而减少cffDNA浓度低造成的假阴性，改善了NIPT检测的整体性能。

目的:设计表达一种全新的重组蛋白(重组Ficolin-2蛋白，F蛋白)并包被磁珠，实现多种抗凝血中EB病毒的富集效果。方法:通过体外基因合成重组F蛋白基因片段，该片段包括人IL-2信号肽、his标签、人IgG1 Fc、人Ficolin-2颈区及纤维蛋白原样区域(fibrinogen-like domain, FGD)；并整合进表达质粒pCDNA?3.1(+)载体中，通过转染HEK293F细胞，实现上清中的分泌表达；通过镍柱纯化蛋白后包被到蛋白A磁珠上构建F磁珠；最后，收集三种不同抗凝剂(分别为ETDA、肝素、柠檬酸钠)抗凝的临床EB病毒血样本，并且比较了F磁珠和课题组前期开发的重组甘露聚糖结合凝集素磁珠(M磁珠)对三种抗凝剂抗凝血液中EB病毒富集的效果。结果:M磁珠对肝素和柠檬酸钠抗凝血液中EB病毒富集效果均较好( P<0.01)，但是对EDTA抗凝血EB病毒没有富集作用；而F磁珠对三种抗凝血中EB病毒的富集效果均较好( P<0.01)。 结论:F磁珠可以实现多种抗凝血中EB病毒的富集作用。

目的:观察重组肿瘤抑素T42肽对人肝癌干细胞(liver cancer stem cells，LCSCs)体外血管生成及小鼠体内荷瘤能力的影响。方法:培养人肝癌细胞系SMMC-7721，免疫磁珠法提取富集CD133 + (Cluster of Differentiation 133)肝癌干细胞LCSCs；构建稳定表达的LCSCs-Luc细胞系；人工合成T42肽。将LCSCs分为对照组、T42肽处理组和5-氟尿嘧啶组。体外血管形成实验检测3组LCSCs处理24 h后的成血管能力；建立免疫缺陷小鼠(中国科学院动物研究所)移植瘤模型( n＝9)，小动物活体成像检测成瘤能力；将9只成瘤小鼠分为3组( n＝3)，隔日注射生理盐水、T42肽(40 mmol/L)和5-氟尿嘧啶(40 mmol/L)，共注射7次，14 d后小动物活体成像检测3组小鼠的治疗作用。并记录瘤体体积变化。两组间比较予以 t检验，不符合正态分布的予以单因素方差分析。 结果:与对照组比较，T42肽、5-氟尿嘧啶处理组LCSCs的体外血管生成数[(3.51±1.64)、(4.53±2.17)个]显著低于对照组[(11.50±2.07)个]，差异有统计学意义( t＝11.112、8.978， P<0.05)。T42肽、5-氟尿嘧啶处理4周后，小鼠LCSCs异位荷瘤的瘤体的光子通量[(1.53±0.35)×10 6光子/s/cm 2、(1.87±0.31)×10 6光子/s/cm 2]显著低于对照组[(4.23±0.15)×10 6光子/s/cm 2]，差异有统计学意义( t＝12.213、12.004， P<0.05)。 结论:T42肽对LCSCs的体外血管生成能力及动物体内成瘤能力均有较强的抑制作用。

目的:研究循环肿瘤细胞（CTC）与尿路上皮癌的病理浸润程度及复发转移等的关系，探讨CTC检测在膀胱癌诊疗中的临床应用价值。方法:采用病例对照研究，入选2016年7月至2018年1月在复旦大学附属华东医院就诊的142例尿路上皮癌患者作为病例组，按肿瘤浸润程度将膀胱癌组分为非肌层浸润组（49例）和肌层浸润组（93例）。另选取同期入院的52例泌尿系统良性病变患者设为良性组以及56例非泌尿系统疾病非肿瘤患者作为对照组。所有研究对象均抽取了静脉抗凝血3.2 ml，采用阴性富集法，即单抗CD45包裹的磁珠捕获去除白细胞而获得CTC，再用染色体8探针荧光原位杂交技术鉴定和计数CTC，CD45-/DAPI+/CEP8>2的细胞为CTC。应用SPSS 22.0统计软件进行统计分析。结果:以CTC≥2个/3.2 ml为阈值，膀胱癌组、良性组及对照组的CTC阳性率分别为70.42%（100/142）、28.85%（15/52）和8.93%（5/56），差异有统计学意义（χ 2=70.496， P<0.001）。非肌层浸润组和肌层浸润组CTC个数（2个/3.2 ml，4个/3.2 ml）差异有统计学意义（ U=2 863.5， P=0.011），在肌层浸润组中CTC≥5个/3.2 ml的比例为40.86%（38/93），明显高于非肌层浸润组的18.37%（9/49）（χ 2=7.330， P=0.007）。65例经尿道膀胱肿瘤电切患者膀胱镜随访，发现CTC≥5个/3.2 ml的患者复发转移率高达47.62%（10/21），显著高于CTC<5个/3.2 ml的患者的11.36%（5/44）（χ 2=10.530， P=0.001）。在59例膀胱根治术患者中，按CTC阴性、阳性或是CTC个数≥5个/3.2 ml分组，肿瘤直径>3 cm比率、切缘阳性率及淋巴结阳性率等差异均无统计学意义（ P>0.05），但CTC≥5个/3.2 ml的患者的复发转移率59.10%（13/22）明显高于CTC<5个/3.2 ml的患者[20.0%（6/30），χ 2=8.364， P=0.004]。 结论:随着肿瘤浸润程度的加深，CTC计数也增加；当CTC计数≥5个/3.2 ml时，肿瘤的复发转移明显增多。