神经前体细胞表达发育下调蛋白-8（NEDD8）是类泛素家族的重要成员之一，通过与底物共价结合（又称neddylation修饰），在维持细胞稳态及调节细胞周期、信号转导、转录翻译、DNA修复、肿瘤生成等方面发挥重要的作用。近年研究发现NEDD8及相关酶的功能紊乱在肝脏疾病中普遍存在，广泛参与肝炎、肝纤维化以及肝癌细胞的增殖、侵袭、凋亡与自噬等生物学过程。现重点就NEDD8在肝脏疾病中的研究进展进行综述。

目的:探讨MLN4924抑制乳腺癌细胞增殖的作用及其机制。方法:以人乳腺癌细胞MCF-7为模型细胞，采用细胞毒性和细胞的克隆形成实验探讨MLN4924对MCF-7细胞增殖的抑制作用。细胞实验分组：对照组，MLN4924浓度分别为0.1、0.3和1.0 μmol/L的实验组。动物实验分组：对照组，给MLN4924药物2.5、5.0及10.0 mg/kg的实验组。通过蛋白质印迹法(Western blot)和免疫荧光考察MLN4924对neddylation修饰的抑制作用、细胞凋亡和DNA损伤。采用GraphPad Prism 8进行统计学分析，通过 t检验评价两组数据之间的差异。 结果:MLN4924显著抑制MCF-7细胞的增殖能力，实验组的细胞集落数量显著少于对照组，可有效抑制cullin-1蛋白的neddylation修饰，实验组NEDD8的表达显著低于对照组(相对灰度值0.42±0.16比1.13±0.22， t＝8.03， P<0.01)，差异有统计学意义，诱导细胞DNA损伤，实验组γ-H2AX的表达显著高于对照组(相对灰度值0.16±0.03比0.04±0.01， t＝9.15， P<0.01)，差异有统计学意义，显著上调cleaved Caspase-3的表达，诱导肿瘤细胞凋亡，在体内可有效抑制MCF-7裸鼠移植瘤的增殖，并表现出较低的不良反应。 结论:靶向neddylation能显著抑制乳腺癌细胞的增殖。

pevonedistat是一种新型神经前体细胞表达发育下调蛋白8(NEDD8)激活酶抑制剂,其可通过干扰NEDD8激活酶的生物活性破坏蛋白,从而导致肿瘤细胞死亡.pevonedistat对骨髓增生异常综合征及相关血液学肿瘤疾病的治疗效果已获得多个临床研究验证.本文对pevonedistat的基本信息、作用机制、药动学、临床疗效及安全性等进行综述,旨在为临床应用提供参考.

目的 观察选择性神经前体细胞发育相关受控表达分子(NEDD8)活化酶(NAE)抑制剂MLN4924对人宫颈癌Hela细胞株增殖和凋亡的影响.方法 使用不同浓度MLN4924(0.5、1.0、2.0 μmol·L-1)加入Hela细胞株处理24 h,以不加MLN49240为对照组.免疫印迹法(WB)检测泛素连接酶蛋白(Cullins-1)、S期激酶相关蛋白(Skp2)、磷酸化核因子κB抑制蛋白α(P-IκBα)及p50的表达水平;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的分泌水平.MTT比色法检测经MLN4924处理的Hela细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率.结果 MLN4924对宫颈癌Hela细胞增殖有显著的抑制作用,随着剂量的加大抑制作用更明显,且有剂量依赖性;Hela细胞Cullins-1、Skp2及p50表达下调,P-IKBα上调(P＜0.05);各处理组IL-6、TNF-α较对照组降低(P＜0.05),S期细胞百分率较对照组升高(P＜0.05),大量四倍体细胞形成,细胞生长周期受阻;细胞凋亡率也随MLN4924剂量增大而升高.结论 NAE抑制剂MLN4924对人宫颈癌Hela细胞的增殖有明显抑制作用,诱导Hela细胞周期阻滞和凋亡.

目的 探讨类泛素化蛋白酶 8(SENP8)在T细胞活化和分化过程中的作用.方法 C57BL/6背景的Senp8基因打靶小鼠(Senp8F/F小鼠,简称WT小鼠)与同背景的Cd4-Cre转基因小鼠交配,获得在T细胞中特异性缺失SENP8的小鼠(Senp8F/F;Cd4-Cre小鼠,简称KO小鼠),通过鼠尾基因组DNA PCR以及胸腺细胞免疫印迹实验进行基因型鉴定.流式细胞术分析SENP8缺失对稳态T细胞比例和数量的影响,并以李斯特菌尾静脉注射感染WT和KO小鼠,7d后流式细胞术分析CD8+T细胞活化、扩增、效应因子表达情况.结果 PCR鉴定结果揭示,KO小鼠有Cd4-Cre基因和纯合的Loxp片段;免疫印迹结果显示,KO小鼠胸腺细胞中的SENP8蛋白表达下降;证明成功构建了T细胞中特异性敲除SENP8的小鼠模型.流式细胞术检测结果表明,CD4+T细胞和CD8+T细胞在稳态WT和KO小鼠脾脏中的比例和数量并无显著差异.李斯特菌感染7d后,条件性缺失SENP8不影响CD4+T细胞、CD8+T细胞数量增加和活化标志分子CD44表达,也不影响CD4+T细胞、CD8+T细胞中干扰素γ(IFN-γ)和颗粒酶B(GzmB)的表达.结论 T细胞中缺失SENP8分子不影响T细胞的活化、扩增及李斯特菌感染过程中T细胞的细胞毒作用.

目的 索拉非尼是美国FDA于2007年批准的治疗肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的一线小分子抑制剂.然而,其在HCC患者中的反应率不高.本研究旨在进一步了解索拉非尼在HCC治疗中的作用机理,为HCC靶向治疗方法的优化提供理论基础.方法 使用蛋白印迹方法检测经索拉非尼治疗前后HCC细胞中与neddylation修饰相关蛋白的表达水平.通过CCK实验检测HCC细胞的增殖速率.结果 本研究发现索拉非尼能激活neddylation修饰相关的蛋白的表达.神经前体细胞表达的发育性下调蛋白8(neuronal precursor cell-expressed developmentally down-regulated protein 8,NEDD8)激活酶抑制剂MLN4924通过抑制neddylation修饰来抑制索拉非尼耐药细胞的增殖.结论 索拉非尼能引起neddylation通路的活化.泛素激活酶NAE抑制剂可以进一步抑制对索拉非尼耐药的HCC细胞的增殖.

目的 探讨神经前体细胞表达发育下调蛋白8(NEDD8)在胶质瘤组织中的表达情况及其与临床病理参数间的关系.方法 选取2012年3月至2015年3月于该院神经外科手术治疗的89例胶质瘤患者的胶质瘤组织及瘤周组织,通过免疫组织化学法、Western blot检测不同级别胶质瘤患者肿瘤组织和瘤周组织中NEDD8的表达与分布,分析NEDD8水平与临床病理参数之间的关系.结果 胶质瘤组织中NEDD8的表达明显高于瘤周组织(t=-9.801,P=0.001),WHO高级别胶质瘤组织中NEDD8的表达明显高于WHO低级别胶质瘤组织(t=-6.684,P=0.003).NEDD8的表达与肿瘤直径、WHO分级有关(x2=5.381、10.186,P＜0.05).结论 NEDD8在人脑胶质瘤组织中呈高表达,且与肿瘤WHO病理分级相关.

目的:检测神经前体细胞表达发育下调蛋白4(neural precursor cell expressed developmentally down-regulated protein 4,NEDD4)在食管鳞癌组织中的表达及其临床意义,并探讨其过表达对食管鳞癌细胞恶性表型的影响.方法:应用组织芯片-免疫组织化学染色技术,检测131例食管鳞癌及配对癌旁正常食管上皮组织中NEDD4蛋白的表达情况,并分析其表达水平与临床病理指标的相关性;同时,使用TCGA和GTEx数据库中的mRNA表达数据,分析食管鳞癌组织中NEDD4 mRNA的表达变化.然后,在NEDD4表达水平较高的食管鳞癌细胞系中用特异性siRNA敲降NEDD4的表达,采用CCK8法检测细胞增殖活力的变化.结果:免疫组化染色结果显示,NEDD4在40％(53/131)的食管鳞癌组织中高水平表达,而在癌旁正常食管上皮组织中不表达或低水平表达.NEDD4蛋白的表达水平与食管鳞癌的浸润深度、病理学分期呈正相关(均为P<0.05).同时,TCGA及GTEx数据库分析结果显示,NEDD4 mRNA表达水平在食管鳞癌组织中明显升高(P<0.01).细胞增殖活力检测结果显示,在KYSE30和KYSE150细胞中,转染NEDD4 siRNA的实验组细胞的增殖活力均显著低于对照组细胞(均为P<0.01).结论:NEDD4在食管鳞癌组织中表达上调,其高表达可增强食管鳞癌细胞的增殖活力,提示NEDD4过表达可能在食管鳞癌的发生发展过程中发挥促癌作用.

目的 探究神经前体细胞表达发育下调蛋白9(neural precursor cell expressed developmentally downregulated protein 9,NEDD9)通过Rac1/Cdc42通路促进鼻咽癌细胞增殖和转移的机制.方法 通过qPCR和Western blot检测人鼻咽上皮细胞NP69以及人鼻咽癌细胞系中NEDD9的表达水平.将CNE-1细胞分为NC组、NEDD9组和si-NEDD9组,分别转染空载质粒、NEDD9过表达和NEDD9沉默质粒.通过CCK-8法、细胞划痕实验和Transwell实验检测各组的细胞生长、迁移和侵袭能力.结果 与NP69比较,人鼻咽癌细胞系中NEDD9 mRNA和蛋白的水平均显著上调(P<0.05),其中CNE-1细胞中NEDD9 mRNA和蛋白水平最高.与NC组比较,NEDD9组NEDD9 mRNA和蛋白的水平显著升高(P<0.05),si-NEDD9组NEDD9 mRNA和蛋白的水平显著降低(P<0.05).NEDD9组细胞的增殖、迁移和侵袭能力以及Rac1/Cdc42通路水平显著高于NC组(P<0.05),si-NEDD9组的增殖、迁移和侵袭能力以及Rac1/Cdc42通路水平显著低于NC组(P<0.05).结论 NEDD9在鼻咽癌细胞中过表达,并且NEDD9可能通过促Rac1/Cdc42通路诱导NPC细胞增殖和转移.

目的 探讨神经前体细胞表达发育下调蛋白8(NEDD8)在胶质瘤组织中的表达及其与临床病理参数、患者预后的关系.方法 收集2012-03-12-2015-03-12郑州大学第五附属医院神经外科手术治疗89例胶质瘤患者的胶质瘤组织及癌旁组织.免疫组化法、蛋白质印迹法检测胶质瘤组织和癌旁组织中NEDD8的表达与分布,采用两独立样本t检验分析NEDD8的表达,采用单因素χ2检验分析NEDD8表达与临床病理参数关系,采用Kaplan-Meier法观察NEDD8的不同表达对患者预后影响,并建立Cox回归模型.结果 胶质瘤组织中NEDD8表达水平为0.43±0.06,高于癌旁组织的0.11±0.02,差异有统计学意义,t=-9.801,P=0.001.高级别胶质瘤组织中NEDD8表达水平为0.52±0.08,高于低级别胶质瘤组织的0.32±0.14,t=-6.684,P=0.003.NEDD8表达与胶质瘤直径(χ2=6.785,P=0.016)和肿瘤分级(χ2=10.186,P=0.001)有关联;Cox多因素分析显示,肿瘤分级(HR=2.765,95％CI:1.707～4.479,P<0.001)和NEDD8蛋白高表达(HR=2.763,95％CI:1.712～4.462,P<0.001)是影响胶质瘤患者预后的独立危险因素.低表达组(阴性与低表达合并)1年生存率为88.4％(38/43),3年生存率为44.2％(19/43);高表达组1年生存率为60.9％(28/46),3年生存率为10.9％(5/46).NEDD8表达对患者预后有影响,χ2=18.767,P<0.001.结论 NEDD8蛋白表达与胶质瘤肿瘤分级及患者预后密切相关,有望成为评价脑胶质瘤患者预后的独立因子.