目的:研究神经前体细胞表达发育调控样基因4(neural precursor cell-expressed developmentally down-regulated gene 4-like， NEDD4 L)对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)复制的影响及其可能的分子机制。 方法:采用Lipofectamine2000分别将靶向 NEDD4 L的小干扰RNA、 NEDD4 L的过表达质粒(pcDNA3.1- NEDD4 L-HA)、HBV复制质粒(pGEM-HBV1.3)和poly(dAT：dAT)瞬时转染至HepG2细胞，并以可稳定表达HBV的HepG2.2.15细胞为对照。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测 NEDD4 L、α干扰素、β干扰素、干扰素刺激基因56(interferon-stimulated gene 56， ISG56)、黏液病毒抗性蛋白A(myxovirus resistance protein A, MxA)、寡腺苷酸合成酶(oligoadenylate synthetase， OAS)等的mRNA水平，以及HBV DNA和3.5 kb HBV RNA的表达水平；采用蛋白质印迹法验证NEDD4L沉默或过表达效果，并检测相关信号分子的蛋白质水平；采用酶联免疫吸附测定法检测细胞上清液中β干扰素产量。统计学方法采用 t检验。 结果:HepG2.2.15细胞中的NEDD4L mRNA和蛋白质水平分别为10.53±0.47和4.17±0.43，分别高于HepG2细胞中的1.00±0.05和1.26±0.25，差异均有统计学意义( t＝3.27， P＝0.008； t＝1.68， P＝0.030)。在敲减 NEDD4 L基因表达的细胞中，上清液HBV DNA表达水平为0.32±0.09，低于对照组的1.00±0.05，差异有统计学意义( t＝－0.93， P＝0.020)；3.5 kb HBV RNA表达水平为0.49±0.11，低于对照组的1.00±0.05，差异有统计学意义( t＝－0.68， P＝0.040)。与对照组相比， NEDD4 L敲减组的β干扰素、 ISG56、 MxA和 OAS的mRNA相对表达水平均上升，差异均有统计学意义( t＝4.66、9.38、7.29、7.01，均 P<0.01)。 NEDD4 L敲减组β干扰素含量在poly(dAT：dAT)处理和水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus，VSV)刺激时分别为(776.41±115.49) ng/L和(961.21±130.19) ng/L，分别高于对照组的(320.15±56.05) ng/L和(440.17±67.82) ng/L，差异均有统计学意义( t＝2.43， P＝0.020； t＝2.85， P＝0.030)； NEDD4 L过表达组β干扰素含量在poly(dAT：dAT)处理和VSV刺激时分别为(156.18±26.47) ng/L和(176.67±34.51) ng/L，分别低于对照组的(320.38±49.39) ng/L和(440.59±68.83) ng/L，差异均有统计学意义( t＝－2.03， P＝0.040； t＝－1.93， P＝0.030)。HBV复制下调了β干扰素上游黑色素瘤分化相关蛋白5(melanoma differentiation-associated protein 5，MDA5)的蛋白质水平，而该下调作用在敲减 NEDD4 L的细胞中并不明显。 结论:HBV复制能通过促进细胞NEDD4L的表达，下调MDA5而抑制β干扰素的产生，进而辅助HBV的固有免疫逃逸。

目的 探讨神经前体细胞表达发育下调蛋白 4-1(neural precursor cell expressed,developmentally down-regulated 4-1,NEDD4-1)在胰腺癌组织及细胞发生、发展过程中的作用及相关机制.方法 采用免疫组织化学法分析 NEDD4-1 在胰腺导管腺癌及癌旁组织中的表达差异;Western blot法检测 NEDD4-1 在胰腺癌细胞与正常胰腺导管上皮细胞内的表达改变;利用 siRNA沉默人胰腺癌 PANC-1 细胞中的 NEDD4-1 表达,检测细胞的生长增殖活力、凋亡率及迁移活性的改变,并探讨沉默前后细胞内 NEDD4-1、p-JAK2 及 p-STAT3 蛋白的表达变化.结果 胰腺导管腺癌组织中的 NEDD4-1 表达水平较癌旁组织显著上调(P<0.01);胰腺癌细胞株内的 NEDD4-1 蛋白表达水平较正常胰腺导管上皮细胞明显升高(P<0.01);转染 36h后,siNEDD4-1 组 NEDD4-1 蛋白表达水平仅为 siNC组的 41.71%±4.58%,组间比较差异有统计学意义(P<0.01);与 siNC组比较,siNEDD4-1 组 PANC-1 细胞生长增殖活性下降、凋亡率上升、迁移活力降低,且细胞内 NEDD4-1、p-JAK2 及 p-STAT3 蛋白表达水平明显下调(P<0.05).结论 NEDD4-1 在胰腺癌组织中及细胞中表达升高.沉默 NEDD4-1 可能通过调控 JAK2/STAT3 通路抑制胰腺癌细胞的增殖活性及迁移能力并诱导细胞凋亡.NEDD4-1 可能成为治疗胰腺癌的一个新靶点.

目的 探讨类泛素化蛋白酶 8(SENP8)在T细胞活化和分化过程中的作用.方法 C57BL/6背景的Senp8基因打靶小鼠(Senp8F/F小鼠,简称WT小鼠)与同背景的Cd4-Cre转基因小鼠交配,获得在T细胞中特异性缺失SENP8的小鼠(Senp8F/F;Cd4-Cre小鼠,简称KO小鼠),通过鼠尾基因组DNA PCR以及胸腺细胞免疫印迹实验进行基因型鉴定.流式细胞术分析SENP8缺失对稳态T细胞比例和数量的影响,并以李斯特菌尾静脉注射感染WT和KO小鼠,7d后流式细胞术分析CD8+T细胞活化、扩增、效应因子表达情况.结果 PCR鉴定结果揭示,KO小鼠有Cd4-Cre基因和纯合的Loxp片段;免疫印迹结果显示,KO小鼠胸腺细胞中的SENP8蛋白表达下降;证明成功构建了T细胞中特异性敲除SENP8的小鼠模型.流式细胞术检测结果表明,CD4+T细胞和CD8+T细胞在稳态WT和KO小鼠脾脏中的比例和数量并无显著差异.李斯特菌感染7d后,条件性缺失SENP8不影响CD4+T细胞、CD8+T细胞数量增加和活化标志分子CD44表达,也不影响CD4+T细胞、CD8+T细胞中干扰素γ(IFN-γ)和颗粒酶B(GzmB)的表达.结论 T细胞中缺失SENP8分子不影响T细胞的活化、扩增及李斯特菌感染过程中T细胞的细胞毒作用.

氢氯噻嗪是常用的高血压降压药物,疗效受到患者药物基因组学特征影响.现综述近年来的相关研究进展,蛋白激酶C-α基因的rs16960228、神经前体细胞表达的发育性下调4样蛋白基因的rs4149601、含有4的YEATS域基因的rs7297610、G-蛋白a亚单位-内皮素-3基因的rs2273359、缝隙连接蛋白α1基因的rs10499113和rs2104334,以及叉头样A1基因的rs177852的基因多态性可能影响氢氯噻嗪的降压效果,并阐述其表达蛋白的功能学研究.

目的 研究胃癌中神经前体细胞表达发育下调样基因4(NEDD4L)的表达及其临床意义.方法 分别采用实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹法检测25对胃癌组织及其对应癌旁正常胃组织中NEDD4L的mRNA和蛋白表达水平,采用免疫组化方法(IHC)检测NEDD4L在124例胃癌组织和25例癌旁正常胃组织中的表达情况,并统计分析其表达与胃癌患者临床病理参数及预后之间的关系.结果 NEDD4L在胃癌组织中的mRNA和蛋白表达水平均显著低于对应癌旁正常组织(P＜0.05).免疫组化结果显示NEDD4L在胃癌组织中的阳性表达率明显低于癌旁正常组织(P＜0.05).NEDD4L的表达与肿瘤组织分化程度(P ＜ 0.05)、浸润深度(P ＜ 0.05)和临床TNM 分期(P ＜ 0.05)显著相关,且NEDD4L 高表达的胃癌患者其预后较好(P ＜ 0.001).结论NEDD4L 在胃癌组织中低表达,可能与胃癌的发生发展密切相关,且可能作为判断胃癌预后的潜在指标.

目的:检测神经前体细胞表达发育下调蛋白4(neural precursor cell expressed developmentally down-regulated protein 4,NEDD4)在食管鳞癌组织中的表达及其临床意义,并探讨其过表达对食管鳞癌细胞恶性表型的影响.方法:应用组织芯片-免疫组织化学染色技术,检测131例食管鳞癌及配对癌旁正常食管上皮组织中NEDD4蛋白的表达情况,并分析其表达水平与临床病理指标的相关性;同时,使用TCGA和GTEx数据库中的mRNA表达数据,分析食管鳞癌组织中NEDD4 mRNA的表达变化.然后,在NEDD4表达水平较高的食管鳞癌细胞系中用特异性siRNA敲降NEDD4的表达,采用CCK8法检测细胞增殖活力的变化.结果:免疫组化染色结果显示,NEDD4在40％(53/131)的食管鳞癌组织中高水平表达,而在癌旁正常食管上皮组织中不表达或低水平表达.NEDD4蛋白的表达水平与食管鳞癌的浸润深度、病理学分期呈正相关(均为P<0.05).同时,TCGA及GTEx数据库分析结果显示,NEDD4 mRNA表达水平在食管鳞癌组织中明显升高(P<0.01).细胞增殖活力检测结果显示,在KYSE30和KYSE150细胞中,转染NEDD4 siRNA的实验组细胞的增殖活力均显著低于对照组细胞(均为P<0.01).结论:NEDD4在食管鳞癌组织中表达上调,其高表达可增强食管鳞癌细胞的增殖活力,提示NEDD4过表达可能在食管鳞癌的发生发展过程中发挥促癌作用.

目的 探讨泛素化E3连接酶神经前体细胞表达发育下调蛋白4-1(NEDD4-1)在胰腺癌组织中的表达及临床意义.方法 选取2017年1月—2019年12月于徐州市中心医院行手术治疗的病理学检查确诊为胰腺导管腺癌患者58例.采用免疫组化法检测胰腺癌组织标本中NEDD4-1的表达情况,分析NEDD4-1的表达与胰腺癌临床病理特征的相关性.使用Western Blot检测正常胰腺导管上皮HPDE6-C7细胞及胰腺癌SW1990、BxPC-3、PANC-1细胞中NEDD4-1的表达水平.计量资料两组间比较采用t检验.计数资料两组间比较采用χ2检验.采用Kaplan-Meier检验绘制生存曲线,log-rank检验进行生存分析.采用Cox回归分析预后相关因素.结果 NEDD4-1在胰腺癌组织里的表达水平较癌旁组织中明显升高(79.31％vs 19.05％,χ2=35.614,P=0.001),且NEDD4-1在胰腺癌细胞株中的蛋白表达水平较正常胰腺导管上皮细胞明显上调(P值均<0.01).NEDD4-1的表达分别与胰腺癌患者的远处转移、肿瘤分化程度和肿瘤TNM分期相关(χ2值分别为5.089、9.071、8.882,P值分别为0.04、0.003、0.003).NEDD4-1阳性表达患者的平均存活时间明显短于阴性表达患者[(13.61±0.95)个月vs(22.22±2.20)个月,P=0.001].Cox回归分析结果显示,NEDD4-1表达(HR=2.312,95％CI:1.010～5.295,P=0.047)、淋巴结转移(HR=2.981,95％CI:1.556～5.712,P=0.001)及肿瘤分化程度(HR=2.144,95％CI:1.155～3.979,P=0.016)为胰腺癌患者预后的独立危险因素.结论 NEDD4-1在胰腺癌组织及细胞内的阳性表达明显升高,且NEDD4-1阳性表达与预后不良相关,或可作为胰腺癌预后的一个预测因子和潜在治疗靶点.

神经前体细胞表达发育性下调蛋白4(neural precursor cell expressed,developmentally down-regulated protein 4,NEDD4-1,部分文章也称NEDD4)是近年来才备受关注的肿瘤相关基因,属于E3 HECT(homologous to E6 associated protein C terminus,E6蛋白 c 端同源基因)泛素连接酶 NEDD4样家族成员.泛素连接酶,能够参与多种蛋白质的泛素化、溶酶体及蛋白酶体的降解、胞核-胞质转位等,间接影响不同恶性肿瘤的多种信号通路.随着大量NEDD4-1与肿瘤相关实验的不断深入,目前已发现其可通过调控细胞周期、癌细胞侵袭转移、拮抗耐药性等许多途径影响肿瘤的生物学行为.在消化系统肿瘤中,NEDD4-1主要通过PTEN/PI3K/AKT、TGF-β、Hippo、LDLRAD4等多条通路促进肝细胞癌的增殖、侵袭和迁移能力;在胰腺癌中发现,NEDD4-1在PI3K/AKT信号通路中发挥癌基因作用,但在与Myc-SIRT2所形成的信号环路中,却发挥抑癌基因的作用;在胃癌和结直肠癌中,NEDD4-1所参与的信号通路与其他消化系统肿瘤均不相同,NEDD4-1能独立于PTEN/PI3K/AKT通路而发挥促进胃癌恶化、转移(EGFR信号通路)和抑制结直肠癌肿瘤生长(WNT信号通路)的作用.NEDD4-1已经成为人们治愈肿瘤的热门研究方向.本文通过系统总结NEDD4-1在不同消化系统肿瘤中的功能、信号通路和潜在抑制剂等,进行探讨NEDD4-1与不同信号通路的关系,旨为临床在癌症治疗领域提供重要的参考数据.

目的 神经前体细胞表达发育下调的4样蛋白(NEDD4L)通过调节上皮钠通道蛋白在血压调节及钠稳态中发挥重要作用,本研究旨在探讨人群NEDD4L基因多态性与血压钠钾反应性的关系.方法 2004年在陕西眉县招募的来自124个家系的514名受试者建立"盐敏感性高血压研究队列",对受试者依次进行3 d基线调查、7 d低盐饮食、7 d高盐饮食、7 d高盐补钾饮食干预,测量不同干预期的受试者血压并采集外周血标本.采用MassARRAY检测平台对NEDD4L基因14个多态性位点分型检测并进行相关性分析.结果 低盐期受试者的血压低于基线期血压,高盐期受试者血压显著高于低盐期,而补钾后血压较高盐期明显降低.NEDD4L基因的多态性位点SNPs rs74408486与低盐期收缩压、舒张压和平均动脉压反应性显著相关;而SNPs rs292449、rs2288775与高盐期脉压反应性显著相关;此外,rs563283、rs292449与高盐补钾期舒张压、平均动脉压及脉压反应性显著相关.结论 NEDD4L基因多态性与血压的钠钾反应性密切相关,提示NEDD4L基因可能参与血压盐敏感性及钾反应性的发生发展.

目的 研究姜黄素对黑素瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制.方法 将两种人黑素瘤细胞系(A375和A875)分别用不同浓度的姜黄素处理,应用MTT、划痕、Transwell实验观察姜黄素对黑素瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响,利用蛋白印迹技术测定细胞周期蛋白A2(CyclinA2)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、叉头框蛋白M1(forkhead box protein M1,FoxM1)、神经前体细胞表达发育下调蛋白4(neural precursor cell expressed developmentally down-regulated protein 4,NEDD4)、β-连环蛋白(β-cate-nin)的表达情况.结果 MTT与集落形成实验结果显示,姜黄素处理后细胞相对活力下降,细胞增殖能力显著下降,且具有剂量依赖性(P＜0.001).划痕和侵袭实验结果显示,姜黄素处理后黑素瘤细胞迁移相对距离明显增加,侵袭的相对细胞数明显减少,差异具有统计学意义(P＜0.001;P＜0.05).West-ern blot结果显示,姜黄素处理后Cyclin D1和Cyclin A2、FoxM1表达水平降低(P＜0.001;P＜0.05);过表达FoxM1促进NEDD4表达,敲减FoxM1则抑制NEDD4表达(P＜0.001).与对照组比较,姜黄素处理后细胞核中β-catenin水平明显降低,而细胞质中β-catenin水平明显升高(P＜0.001).结论 姜黄素可通过下调FoxM1/NEDD4和β-catenin抑制黑素瘤细胞的增殖、迁移和侵袭.