目的:通过生物信息学分析探究儿童神经母细胞瘤中与MYCN(N-myc)基因相关的共表达基因。方法:下载TARGET数据库神经母细胞瘤表达数据共179例，WGCNA分析筛选MYCN扩增共表达基因模块；针对目标基因模块个基因行GO、KEGG富集分析筛选MYCN扩增相关基因可能参与生物过程及信号通路；以MYCN扩增状态将神经母细胞瘤表达数据分为扩增组65例、非扩增组114例，行差异表达基因分析；筛选的差异表达基因同MYCN扩增相关基因取交集后运用K-M法行生存分析(log-rank检验)，筛选预后相关基因，Logistics回归探究MYCN扩增状态同预后基因的关系。结果:WGCNA分析提示MEgreenyellow模块同MYCN基因扩增状态相关性最强( R＝0.46， P<0.05)，为共表达基因，包含基因1 216个，富集分析提示MYCN扩增共表达基因多参与RNA相关通路(RNA的转运、剪切、修饰，RNA相关酶的活性等过程)；差异表达基因分析显示，MYCN扩增组相较于非扩增组，基因表达上调47个，表达下调123个；WGCNA分析同差异表达基因取交集筛选出22个关键基因，行生存分析显示同预后相关的基因( P<0.05)有12个，其中DDX1与其他关键基因相关性相对较弱，或为神经母细胞瘤独立预后因素。 结论:LINC00839、ATP结合盒亚家族C4(ABCC4)、亚甲基四氢叶酸脱氢酶(NADP +依赖)2(MTHFD2)、磷酸甘油酸脱氢酶(PHGDH)、序列相似性家族13 A(FAM11A)、磷酸丝氨酸转氨酶1 (PSAT1)、假尿苷酸合酶7(PUS7)、DEAD-box解旋酶1(DDX1)、溶质载体有机阴离子转运蛋白家族5A1(SLCO5A1)、Junctophilin 1(JPH1)、溶质载体家族16 1(SLC16A1)、MYCN Opposite Strand(MYCNOS)为神经母细胞瘤中MYCN扩增的共表达基因，与较差的预后相关，是神经母细胞瘤潜在的治疗靶点及预后指标。

2型婴儿肝功能衰竭综合征(infantile liver failure syndrome-2，ILFS2)是一种罕见的由神经母细胞瘤扩增序列(neuroblastoma amplified sequence，NBAS)基因突变引起的常染色体隐性遗传性疾病，主要表现为反复发生与发热/感染相关的急性肝功能衰竭(acute liver failure，ALF)，首次发作多见于婴儿期或幼儿期(8月龄~3岁)。该病最大的特点是两次肝功能衰竭发作间歇期肝功能可完全恢复，基因检测有助于确诊。目前ILFS2的发病机制尚未完全了解，临床上主要以个体化的对症支持治疗为主，当疾病发展到终末期，肝移植是唯一的治疗方法。该文就ILFS2的发病机制及治疗现况进行综述。

目的:通过临床病例及文献复习，了解神经母细胞瘤扩增序列（ NBAS）基因突变相关的儿童急性肝衰竭临床特征，探讨该病的治疗措施和预后情况。 方法:对1例 NBAS基因突变致儿童复发性肝衰竭的临床病例进行整理报道；以“急性肝衰竭”“ NBAS”“婴儿肝衰竭综合征2型”为关键词，对中国期刊全文数据库、万方数据知识服务平台进行检索，以“acute liver failure”“ NBAS”为关键词，对Web of Science数据库、PubMed进行检索，对数据库建库至2023年1月收录的文献进行复习，总结该病发病机制、临床特征、治疗及预后。 结果:患儿，男，8月龄至1岁4月龄间发生急性肝衰竭3次，病初有呼吸道感染病史，后出现发热、呕吐、精神萎靡，入院辅助检查提示谷丙转氨酶、谷草转氨酶异常升高，凝血功能障碍。高通量测序发现患儿存在 NBAS基因c.1857G＞T（p.G619G）/c.3596G＞A（p.C1199Y）复合杂合变异。入院后予低脂低蛋白饮食、保肝降酶、白蛋白补充、人纤维蛋白原及凝血酶原复合物补充、维生素K1补充、抗感染等治疗，好转出院。现患儿生长发育如同龄儿，定期随访中。通过文献复习，共收集符合条件的中国儿童病例31例。婴幼儿期起病占83.9%(26/31)，起病急，进展快；主要为上呼吸道感染、发热后起病，严重者早期可出现肝性脑病，可合并有低血糖症、低蛋白血症、凝血障碍、T细胞免疫紊乱；最终通过全外显子二代测序确诊；治疗方案以对症治疗为主；疾病早期积极退热、护肝降酶，一般预后良好。 结论:NBAS双等位基因突变有明确致病性，急性肝衰竭为重要临床特征。对于反复出现发热后肝衰竭的婴儿，应考虑进行遗传检测。

儿童急性肝衰竭（acute liver failure, ALF）常常危及生命，且病因复杂，目前仍约一半的ALF原因未明。随着近几年精准医学的发展，国内外陆续报道了神经母细胞瘤扩增序列（Neuroblastoma amplified sequence, NBAS）基因突变导致的与发热相关的反复肝功能衰竭，被称为婴幼儿肝功能衰竭2型（infant liver failure syndrome 2, ILFS 2）。ILFS 2是一种罕见的疾病，其特征是发热引起的复发性急性肝功能衰竭或肝酶异常，对进展迅速的病例需早期血液净化，必要时肝移植挽救生命 [1]。本文将报道3例经全外显子测序确诊的NBAS突变所致ILFS 2型的病历资料及治疗转归，并通过文献汇总分析NBAS突变所致ILFS 2型的临床特点、治疗经验及预后。本研究获得医院伦理管理委员会同意，批件号：2021-IRB-077。

目的:构建跨膜蛋白(transmembrane protein，TMEM)240慢病毒载体，并在人神经母细胞瘤细胞中表达。方法:提取人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的RNA，逆转录成cDNA并作为模板，聚合酶链反应(polymerasechain reaction，PCR)扩增TMEM240的CDS序列，与pLVX-EGFP-N1载体连接，转化、验菌送公司测序，pLVX-TMEM240-EGFP-N1质粒与慢病毒包装质粒共转染293Ta细胞，收取上清，感染SH-SY5Y，嘌呤霉素筛选，获得表达TMEM240的SH-SY5Y细胞，将感染pLVX-EGFP-N1的SH-SY5Y细胞作为对照组，感染pLVX-TMEM240-EGFP-N1的SH-SY5Y细胞为实验组。通过共聚焦显微镜、实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitative PCR，Real-time PCR)和Western blot检测细胞中TMEM240表达。结果:测序结果显示pLVX-TMEM240-EGFP-N1质粒构建成功；共聚焦显微镜下，表达TMEM240的细胞内出现点状绿色荧光；Real-time PCR及Western blot结果表明细胞内TMEM240表达。结论:成功构建TMEM240慢病毒载体，慢病毒在基因和蛋白水平均引起TMEM240表达升高。

目的 构建带有Flag标签的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)棒状体蛋白16 (ROP16)的重组慢病毒表达质粒,并检测ROP16蛋白在神经细胞中的表达及其对小鼠脑神经细胞凋亡的影响. 方法 PCR扩增带Flag标签的ROP16基因,克隆至慢病毒载体,构建重组质粒pCDH-copGFP-ROP16-Flag,转化至大肠埃希菌(Escherichia coli)DH5α感受态细胞,采用PCR、双酶切及测序验证.将重组质粒转染至人胚胎肾上皮细胞(293T细胞)中进行慢病毒包装,以pCDH-CMV-copGFP空质粒对照组,荧光显微镜下观察绿色荧光表达情况,并计算慢病毒滴度.将包装后的慢病毒感染人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y),采用蛋白质印迹(Western blot-ting)检测ROP16蛋白的表达情况.应用立体定位注射技术将慢病毒浓缩液注射至小鼠前额叶皮层M1区.2周后取小鼠脑组织,制备冰冻切片,TUNEL染色后,荧光显微镜下观察小鼠脑神经细胞凋亡情况. 结果 重组慢病毒表达质粒pCDH-copGFP-ROP16-Flag经PCR和双酶切后均获得大小为2 200 bp的条带,与预期值相符;测序结果与刚地弓形虫RH株ROP16基因(GenBank登录号为GQ249093.1)序列比对完全一致.包装后的慢病毒在荧光显微镜下可见绿色荧光,滴度约为2E+8 TU/ml.Western blotting分析结果显示,在相对分子质量(Mr)120 000处有特异条带,重组慢病毒表达质粒能够在SH-SY5Y细胞内表达ROP16蛋白.感染慢病毒的小鼠脑组织冰冻切片经TUNEL染色后,荧光显微镜下可见实验组凋亡的细胞明显多于空质粒对照组. 结论 构建的慢病毒表达质粒pCDH-copGFP-ROP16-Flag可在神经细胞内表达ROP16蛋白,并可导致小鼠脑神经细胞凋亡.

目的 构建Sirt3基因过表达慢病毒载体,通过稳定感染人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,建立Sirt3基因过表达的SH-SY5Y细胞株,为研究Sirt3在帕金森病细胞模型中的作用提供新的方法 .方法 从GenBank中检索Sirt3基因序列,根据此序列设计并合成人Sirt3基因引物,扩增Sirt3基因的cDNA片段,将其克隆至慢病毒载体Ubi-MCS-3FLAG-SV40-puromycin中,构建慢病毒表达质粒.采用聚合酶链反应方法 对阳性克隆进行鉴定和测序分析.将重组过表达病毒质粒及其2种辅助包装原件载体质粒pHelper1.0、pHelper2.0共转染293T细胞,收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液,测定病毒滴度.取对数生长期SH-SY5 Y细胞,随机分为空白对照组、阴性对照组和Sirt3组,空白对照组SH-SY5 Y细胞仅加入普通培养基,阴性对照组SH-SY5 Y细胞转染阴性对照病毒,Sirt3组SH-SY5 Y细胞转染Sirt3过表达慢病毒.转染后加入嘌呤霉素筛选获得稳定转染的细胞.使用实时荧光定量聚合酶链式反应和Western blot检测各组细胞中Sirt3 mRNA和蛋白相对表达量.结果 成功扩增Sirt3基因片段,大小1242 bp;测序分析结果 显示,过表达慢病毒Sirt3与GenBank中Sirt3基因序列完全一致,病毒滴度为1.2×1012 TU·L-1.Sirt3组细胞中Sirt3 mRNA和蛋白相对表达量显著高于空白对照组和阴性对照组(P<0.01);空白对照组与阴性对照组细胞中Sirt3 mRNA和蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 Sirt3基因过表达慢病毒载体可成功构建,并获得稳定表达Sirt3基因的SH-SY5 Y细胞株.

神经母细胞瘤扩增序列基因(NBAS基因)缺陷可导致常染色体隐性遗传病,是一种罕见的基因缺陷.该基因缺陷可累及全身多个系统.临床主要表现有身材矮小、视神经萎缩、Pelger-Hu?t细胞畸形及与发热相关的肝功能衰竭.本文主要从NBAS基因缺陷可能的发病机制、基因缺陷与表型的关系、临床表现、治疗、诊断和预后作一综述.

人类乳腺癌扩增序列3位于染色体17q23,最初被鉴定为乳腺癌中过表达的基因,与小鼠Rudhira 98％相同.目前最新研究证实Rudhira通过与细胞骨架成分相互作用而促进内皮细胞迁移,进而促进血管形成.小鼠Rudhira基因缺失,通过影响胚胎血管形成,导致小鼠胚胎发育异常甚至是胚胎死亡.此外,还发现人类乳腺癌扩增序列3与肿瘤类疾病如乳腺癌、胶质母细胞瘤、脑血管外皮细胞瘤和小脑成神经管细胞瘤及部分非肿瘤疾病如痛风、原发型开角型青光眼、冠状动脉疾病等多种临床疾病相关.目前关于Rudhira/人类乳腺癌扩增序列3的研究国内少见,本文就Rudhira/人类乳腺癌扩增序列3影响血管形成的机制、对小鼠胚胎发育的影响及其与肿瘤及非肿瘤疾病的关系作一综述.