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一种简易的改良大鼠离体肾灌流技术研究
编辑人员丨5天前
目的:探讨一种简易的改良大鼠离体肾灌流技术的效果,为收集到更多的肾脏灌流血、尿标本提供帮助。方法:选取12只SD雄性大鼠作为研究对象,将其随机分为常规灌注组和改良灌注组,每组6只。以腹主动脉为灌注液的流入通道,以大鼠的肾静脉和输尿管作为灌注液的流出通道。实验过程中根据情况处理灌流并发症。通过计算不同灌流方式的大鼠肾动脉灌注成功率、灌注时的漏出液量以及收集的血尿标本量,综合评价不同灌注方式的灌注效果。结果:改良灌流组的腹腔漏出液低于常规灌流组,差异有统计学意义( P<0.05);改良灌流组的尿量高于常规灌流组,差异有统计学意义( P<0.05);改良灌流组的静脉液体量低于常规灌流组,差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:改良后的灌注方式能够使灌流液更加有效流经肾脏,并且灌流液漏入腹腔的量较少,更易于收集血、尿标本,因此为更符合简便有效的实验操作。
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编辑人员丨5天前
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antagomiR-21上调SIRT1激活PI3K/Akt/eNOS信号通路改善T2DM大鼠冠状动脉内皮依赖性舒张
编辑人员丨2023/12/9
[目的]探讨miR-21 抑制剂antagomiR-21 调控沉默信息调节因子1(SIRT1)对2 型糖尿病(T2DM)大鼠冠状动脉内皮依赖性舒张的影响及其机制.[方法]以腹腔注射链脲佐菌素加高脂饲料喂养的方法建立T2DM 大鼠模型,将28 只成模大鼠随机分为模型组、antagomiR-NC组、antagomiR-21 组、antagomiR-21+SIRT1 抑制剂EX527 组,每组7 只;另将7 只普通饲料喂养的正常大鼠作为对照组.观察大鼠冠状动脉血流变化,采用离体血管环灌流技术观察大鼠冠状动脉的舒张功能.将体外培养的人冠状动脉内皮细胞(HCAEC)分为甘露醇组、高糖组、高糖+antagomiR-NC组、高糖+antagomiR-21 组、高糖+antagomiR-21+EX527 组,采用qRT-PCR检测miR-21、SIRT1 的mRNA表达,Western blot检测SIRT1、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)及其磷酸化蛋白的表达.[结果]与对照组相比,T2DM模型大鼠冠状动脉中miR-21 水平升高96.88%,而SIRT1蛋白和mRNA 水平、冠状动脉流量分别降低40.85%、64.29%、22.15%(P<0.05);与甘露醇组比较,体外高糖处理的HCAEC 中miR-21 表达升高285.71%,SIRT1 蛋白和mRNA表达水平分别降低44.78%、74.51%(P<0.05);an-tagomiR-21 干预后体内外miR-21 水平分别降低77.42%、58.66%,SIRT1 蛋白水平分别升高55.56%、91.43%,SIRT1 mRNA 水平分别升高88.57%、97.30%(P<0.05);与模型组相比,antagomiR-21 干预后大鼠冠状动脉流量升高19.23%,10-8 mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L及10-5mol/L 乙酰胆碱(Ach)诱导的大鼠冠状动脉舒张率分别升高111.89%、41.88%、41.98%、30.01%(P<0.05),10-8 mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L 及10-5mol/L 去氧肾上腺素(Phe)诱导的大鼠冠状动脉收缩率分别降低36.71%、47.90%、49.19%、45.27%(P<0.05);antagomiR-21 干预后HCAEC 中PI3K、Akt、eNOS的磷酸化水平较高糖组分别升高48.48%、81.40%、134.29%(P<0.05);EX527 处理可明显逆转体内外antagomiR-21 引起的上述变化(P<0.05).[结论]antagomiR-21 可通过上调SIRT1 表达激活PI3K/Akt/eNOS信号通路,从而改善T2DM 大鼠冠状动脉内皮依赖性舒张.
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编辑人员丨2023/12/9
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右美托咪定对大鼠心室肌细胞动作电位时程的影响及α2受体在其中的作用
编辑人员丨2023/8/6
目的 评价右美托咪定对大鼠心室肌细胞动作电位时程(APD)的影响及α2受体在其中的作用.方法 酶解法急性分离SD大鼠心室肌细胞18个,采用随机数字表法分为3组(n=6):右美托咪定组(D组)、育亨宾组(Y组)和右美托咪定+育亨宾组(DY组).先给予单独台式液灌流2 min,采用全细胞膜片钳技术记录 APD90,随后 D 组、Y 组和 DY 组分别采用含有右美托咪定10-9 mol∕L、育亨宾10-6mol∕L和右美托咪定10-9mol∕L+育亨宾10-6mol∕L的台式液灌流2 min,记录APD90,计算APD90变化百分比.结果 与单独灌流比较,D组心室肌细胞APD90延长(P<0.01),Y组和DY组心室肌细胞APD90差异无统计学意义(P>005);与D组比较,Y组和DY组心室肌细胞APD90变化百分比降低(P<005).结论 右美托咪定可延长大鼠心室肌细胞 APD,其机制与激动 α2受体有关.
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编辑人员丨2023/8/6
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枸杞多糖在保护力竭运动大鼠胸主动脉血管内皮细胞损伤中的作用研究
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharide,LBP)在力竭运动致大鼠胸主动脉血管内皮细胞损伤中的保护作用.方法 雄性SD大鼠40只,按体重随机分为空白对照组,有氧运动组,力竭运动组,力竭运动+LBP组,进行5周游泳训练,建立力竭运动模型.采用离体血管环灌流技术测定大鼠胸主动脉血管环对去甲肾上腺素(NE)诱导的血管反应性;高倍镜下观察HE染色的大鼠胸主动脉血管组织形态的变化;流式细胞术检测外周循环血液中的内皮细胞数;激光共聚焦显微镜检测各组氧化应激(H2O2)后细胞内[Ca2+]i浓度变化.结果 灌服LBP可以抑制NE诱发的血管收缩反应(P<0.01),减少内皮细胞脱落,降低细胞内Ca2+浓度.结论 力竭运动会导致大鼠胸主动脉血管内皮细胞损伤脱落;LBP对大鼠胸主动脉内皮细胞损伤有一定的保护作用.
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编辑人员丨2023/8/6
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顺气化痰活血方对慢性间歇性低氧大鼠主动脉内皮功能的干预作用
编辑人员丨2023/8/6
目的 研究顺气化痰活血方对慢性间歇性低氧(CIH)大鼠主动脉内皮损伤的保护作用.方法 采用间歇性低氧舱复制CIH大鼠模型,将60只大鼠随机分为对照组、模型组和中药组.离体血管灌流技术,观察乙酰胆碱(ACh)、硝普钠(SNP)对苯肾上腺素(PE)预收缩产生的舒张效应;HE染色观察主动脉内皮细胞的形态变化;Western印迹测定主动脉组织内皮素(ET)-1蛋白表达的变化;酶转化法测定主动脉组织中一氧化氮(N0)的含量.结果 与对照组比较,CIH后大鼠主动脉内皮细胞受损,主动脉组织NO含量明显降低,ET-1蛋白表达明显增加,对ACh内皮依赖性舒张反应明显降低(P<0.01);经中药干预后,主动脉内皮细胞受损显著减轻,NO含量显著升高,ET-1蛋白表达显著减少,对ACh内皮依赖性舒张反应显著增强(P<0.01或P<0.05).结论 顺气化痰活血方可促进CIH大鼠主动脉NO分泌并抑制ET-1表达,恢复NO/ET-1平衡,有效保护内皮细胞形杰及功能.
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编辑人员丨2023/8/6
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参蛤散对大鼠离体胸主动脉舒张作用及其机制研究
编辑人员丨2023/8/6
目的:观察参蛤散对离体大鼠胸主动脉的舒张作用,并探讨其可能的作用机制.方法:运用离体组织灌流技术,记录参蛤散对苯肾上腺素(phenylephrine,Phe)预收缩的离体大鼠胸主动脉环的作用,并观察、分析左旋硝精氨酸甲酯(NG-nitro-L-arginine methyl ester,L-NAME)、环氧化酶抑制剂吲哚美辛(Indomethacin,Indo)、鸟苷酸环化酶剂{1H-[1,2,4]-oxadiazolo-[4,3-α]-quinoxalin-1-one,ODQ}、去血管内皮等不同干预条件对参蛤散舒张血管作用的影响.结果:参蛤散(10~200 g·L-1)对Phe(1 μmol·L-1)预收缩的离体大鼠胸主动脉环有浓度依赖性的舒张作用.L-NAME(100 μmol·L-1)、Indo(1μmol·L-1)、ODQ(1μmol·L-1)均可显著抑制参蛤散对血管的舒张作用.在去内皮血管与经L-NAME+ Indo预处理的血管环中相比,参蛤散对离体大鼠胸主动脉环的舒张作用无明显差异.结论:参蛤散对Phe预收缩的大鼠胸主动脉具有显著的舒张作用,并呈量效关系,其舒张血管作用呈现内皮依赖性,可能与内皮舒张因子一氧化氮和前列环素有关.
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编辑人员丨2023/8/6
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急性重症毒蕈中毒患者17例血液净化治疗的护理体会
编辑人员丨2023/8/6
毒蕈中毒屡见不鲜,民众因缺乏对毒蕈的认识,易误食毒蕈而引起中毒.一旦中毒会导致人体急、慢性多器官功能损害,且无特效药治疗,故内科保守治疗的病死率高[1-2].而对于此类患者,尽快消除体内有毒物质是治疗的重中之重.血液净化治疗能迅速消除患者体内的有毒物质,改善氧合情况,有效提高自愈率.血液灌流是血液净化的一种治疗方式,可通过含树脂的灌流器吸附血液中的毒素;治疗性血浆置换(therapeutic plasma exchange,TPE)是血液净化中的一个重要部分,可以分离患者血细胞和血浆,去除含有有毒物质的血浆,并补充等量置换液[3].连续性肾脏替代治疗(continuous renal replacement therapy,CRRT)是一种通过体外循环血液净化技术连续、缓慢清除水分和溶质的治疗方式,能有效清除各种毒性介质,维持危重症患者内稳态平衡[4].对于病情危急的毒蕈中毒患者,临床早期介入血液净化治疗是非常必要的[5-6].因此浙江大学医学院附属第一医院在采取常规内科治疗的基础上,对急性重症毒蕈中毒患者第一时间给予多种血液净化治疗,以降低患者的病死率,取得了理想的效果.
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编辑人员丨2023/8/6
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去甲肾上腺素对SNI大鼠背根神经节神经元及其传入纤维兴奋性的影响
编辑人员丨2023/8/5
目的:研究去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)对保留性坐骨神经损伤(spared nerve injury,SNI)模型Sprague-Dawley大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元及其传入纤维兴奋性的影响.方法:(1)将40只雄性大鼠随机平均分为8组,每组5只.NE干预(SNI+NE)组、手术对照(SNI+Vehicle)组、去甲肾上腺素干预假手术(Sham+NE)组、假手术对照(Sham+Vehi-cle)组,每组再随机均分为C纤维记录组与A纤维记录组.SNI手术造模后7天内up-down法监测下肢痛阈变化,确认造模成功.术后第14天,采用在体脊髓诱发电位(spinal evoked field potential,SEFP)记录技术,研究外源性100μM NE干预L4、L5 DRG对刺激C纤维、A纤维诱发的脊髓背角SEFP的作用.(2)按前述将30只雄性大鼠随机平均分组.采用全细胞膜片钳技术研究100μM NE灌流对离体打散的手术侧L4、L5 DRG大、中、小直径神经元诱发动作电位基强度(current threshold,CT)和两倍基强度诱发动作电位次数(No.of APs at 2×rheobase)的作用.结果:(1)SEFP记录实验发现:100μM NE干预SNI侧DRG,可抑制A纤维诱发的脊髓背角SEFP(P<0.01)并增强C纤维诱发的脊髓背角SEFP(P<0.01).(2)离体膜片钳实验发现:在钳制电压为-80 mV时,与Sham+Vehicle组相比,SNI+Vehicle组DRG神经元CT下降(P<0.001),两倍基强度诱发的动作电位放电次数增加(P<0.001),即SNI组神经元兴奋性增加;而100μM NE灌流,SNI+NE组和Sham+NE组的动作电位的放电次数与同组NE灌流前相比,未见明显变化(P>0.05).结论:NE通过抑制SNI大鼠DRG中大、中神经元的兴奋性,同时间接兴奋小神经元而参与痛觉传入信号的调控.
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编辑人员丨2023/8/5
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基于肾脏尿酸转运的中药降尿酸活性成分筛选及评价——以菊苣酸为例
编辑人员丨2023/8/5
目的:基于肾脏尿酸转运环节,筛选及评价中药降尿酸活性成分,为阐释中药降尿酸物质基础提供理论和技术支撑.方法:以不同灌注压力进行大鼠离体肾脏灌流,通过肾小球滤过率、尿流率、葡萄糖重吸收率、钠离子重吸收率、钾离子重吸收率等评价肾功能,建立离体肾脏模型;设置尿酸组、菊苣酸组和丙磺舒组进行离体肾脏灌流,观察肾脏尿酸排泄情况,以菊苣酸示例应用离体肾脏灌流模型;设置对照组、尿酸组、苯溴马隆组、丙磺舒组及菊苣酸组,通过蛋白免疫印迹法检测高尿酸状态下HKC细胞GLUT9蛋白表达变化,及高尿酸状态下菊苣酸干预后的表达变化,结合离体肾脏灌流技术评价降尿酸活性成分.结果:在120 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)灌注压力下离体肾功能良好;菊苣酸在20~40 min、40~60 min均能提高肾脏清除率,增加肾脏尿酸排泄分数;且菊苣酸能够显著抑制高尿酸状态下HKC细胞的GLUT9蛋白表达.结论:该研究基于肾脏尿酸转运环节,应用离体肾脏灌流技术结合体外HKC细胞筛选并评价中药降尿酸活性成分,筛选出菊苣酸可能是菊苣通过促进尿酸排泄发挥降尿酸作用的活性成分,为抗高尿酸血症药物的研发奠定实验基础,为中药的开发和临床应用提供实验依据,以更好服务于临床.
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编辑人员丨2023/8/5
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异叶青兰总黄酮对离体大鼠胸主动脉环的舒张作用及其机制
编辑人员丨2023/8/5
探讨异叶青兰总黄酮(DHBF)对大鼠胸主动脉血管环张力的影响,并探讨其可能的作用机制,为新疆地方药材的开发和有效利用提供理论依据.采用离体血管灌流技术,通过生物信号采集和分析系统测定不同质量浓度的DHBF(0.015,0.030,0.060,0.120,0.240和0.360 mg/L)对大鼠胸主动脉环血管环张力的影响.结果显示:(1)不同质量浓度的DHBF对静息状态下血管环的张力无明显影响(P>0.05);(2)与对照组比较,DHBF对去甲肾上腺素预收缩的内皮完整组和去内皮组血管环均具有明显的舒张作用(P<0.05),且内皮完整组的舒张作用明显强于去内皮组(P<0.05);与对照组比较,DHBF对KC1预收缩的血管环有明显的舒张作用(P<0.05),且内皮完整组和去内皮组血管环的差异无统计学意义(P>0.05);(3)与对照组和去内皮组比较,DHBF+L-NAME组(DHBF+MB)组对血管环的舒张作用明显被抑制(P<0.05),并呈浓度依赖性.DHBF对NE及KC1预收缩的血管环有明显的舒张作用,这可能与抑制了胞内肌浆网钙释放和Ca2+通道等有关,且部分依赖于内皮细胞,这可能与作用于内皮依赖性的NO-cGMP信号通路有关.
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编辑人员丨2023/8/5
