近年来，细胞治疗显现出巨大的研究潜力和临床价值。嵌合抗原受体T细胞（CAR-T细胞）治疗在血液肿瘤领域已取得重大进展，CD19 CAR-T治疗B-ALL完全缓解率高达90% [1]。但CAR-T治疗仍面临诸多挑战：①自体T细胞质量不足，异体T细胞引起移植物抗宿主病（GVHD）风险；②制备耗时；③细胞因子释放综合征（CRS）和免疫效应细胞相关神经毒性综合征（ICANS）等不良反应；④复发；⑤价格高昂。CAR-自然杀伤（NK）细胞可以在一定程度上弥补CAR-T治疗的局限，是最具潜力的新一代CAR细胞治疗产品。2020年一项靶向CD19 CAR-NK治疗B系肿瘤的临床研究实现了73%的缓解率和64%的完全缓解率，并且无GVHD、CRS和ICANS发生，首次确定CAR-NK临床应用的有效性和安全性 [2]。本文我们主要对NK细胞生物学特点、CAR-NK作用机制、CAR-NK与CAR-T的比较、血液肿瘤CAR-NK研究现状、目前的优化措施进行了总结归纳。

目前全球器官移植领域所面临的仍是供体短缺的主要问题.由于受体需求量和标准供体的数量的严重不平衡,外科医生们将目光转移到心脏死亡供体(DCD).相比于脑死亡供体(DBD),DCD面临的主要问题是经历更长的热缺血时间(WIT),以致患者术后并发症发生率增加,尤其是胆道并发症.受控心脏死亡供体(cDCD)是指在符合患者或家属意愿的情况下有计划地退出维持生命的治疗,在一段"无接触"时间后(通常为5 min),宣布患者大脑循环永久缺失,同时快速进行器官恢复.由于使用常规器官保存方法保存的DCD移植物的移植效果不尽如人意,近年来,常温灌注技术所展现出的优势在移植过程中愈发明显,逐渐引起外科医生和科学家们的关注.与活体肝移植以及DBD肝移植不同,DCD在宣布死亡前无法取出移植物.而在常温局部灌注(NRP)中,外科医生们能够在宣布死亡后阻断流向大脑的血液,并通过体外膜氧合启动器官的热灌注,在供体体内恢复供体肝脏的功能,使肝脏产生胆汁并清除乳酸.这一过程为供体肝脏离开供体和移植前的各项指标监测和优化提供宝贵时间.目前已有多项临床研究表明,NRP作为一种原位器官修复技术能够使cDCD供体肝脏的移植效果与DBD供体相近.另外,一些研究者还开发了多种灌注技术的联合应用,包括NRP与机器灌注(MP)以及双低温氧合机灌注(D-HOPE)的联合使用,均展现出良好的移植效果,为肝移植供体保存提供更多可能性.虽然许多学者认为NRP是一种获取更多高质量器官的保存方法,但有研究者质疑该技术的伦理问题.他们认为该技术违背死亡捐赠规则,NRP灌注程序中所涉及的操作可能导致患者的死亡,因此,确保患者的循环以及呼吸的永久性不可恢复状态以及在NRP期间确保脑部循环的缺失尤其重要.鉴于NRP在移植领域的重要性,笔者对NRP技术在cDCD中的应用进行归纳总结.

肾移植是目前终末期肾病有效治疗手段之一,二十世纪初欧美学者开始对肾移植的临床应用进行研究,1954年Murray医生在一对同卵双胞胎之间成功完成首例同种异体肾移植术.相较于国内众多的终末期肾病患者人数,每年仅能完成约5000例的肾移植,远远无法满足患者的需求[1].为扩大供者来源,中国自2010年开始启动心脏死亡器官捐赠(Donation after Cardiac Death,DCD)并于2015年1月宣布取消使用传统死囚器官,DCD已成为目前我国器官供体的主要来源[2].截至2017年12月24日,中国大陆已累计实现公民逝世后器官捐献15 011例,捐献大器官41 509个,器官捐献者志愿登记人数超过373 536万人[3].然而,与活体器官捐献(Living Related Donor,LRD)以及脑死亡器官捐献(Donation Brain after Death,DBD)相比,DCD供体的一般情况相对较差,所获取的器官常经历较长的热缺血时间.因此,系统评估DCD供受体的基本情况、供肾的获取、灌注及供肾的保存等一系列因素对DCD供肾的影响,将有助于提高肾移植术后患者及移植物的存活率.

目的 系统评价ABO血型不合活体肝移植(ABO-I LDLT)术后的疗效,并与ABO血型相合活体肝移植(ABO-C LDLT)相比较.方法 系统检索国内外多个数据库,收集关于ABO-I LDLT及ABO-C LDLT疗效对比的文献.根据标准筛选文献,并进行文献质量评价,提取数据.采用Rev Man 5.3软件,应用随机效应模型或固定效应模型进行Meta分析.结果 检索文献432篇,按纳入标准筛选共纳入6篇英文文献.Meta分析结果表明ABO-I LDLT组与ABO-C LDLT组的受体及移植物术后1、3、5年存活率和排斥反应发生率差异均无统计学意义(均为P≥0.05);ABO-I LDLT组术后胆道并发症发生率和肝动脉栓塞发生率均高于ABO-C LDLT组,差异均有统计学意义[比值比( OR)=2.08,95%可信区间( CI)1.25～3.45,P=0.005;OR=2.24,95%CI 1.03～4.89, P=0.04).结论 与ABO-C LDLT相比,ABO-I LDLT疗效稍差,但仍是一种可供选择的治疗终末期肝病的有效手段.

目的 分析移植物与受体质量比(graft and recipient weight ratio,GRWR)对胆道闭锁患儿亲属活体肝移植术后早期移植物功能及预后的影响.方法 回顾性分析天津市第一中心医院2013年2月至2015年4月施行的201例因胆道闭锁接受亲属活体肝移植患儿的临床资料,其中18例为低GRWR组(GRWR ＜2.0％)受者,160例为中GRWR组(2.0％≤GRWR＜4.0％)受者,23例为高GRWR组(4.0％≤GRWR)受者.比较三组患儿一般资料,采用单因素及多因素logistic回归分析GRWR与术后早期并发症的相关性,并绘制Kaplan-Meier生存曲线对患儿肝移植术后1、12、24个月累积存活率进行分析.结果 GRWR＜2％与胆道闭锁患儿亲属活体肝移植术后发生早期移植物功能不良存在显著相关性(OR=0.143, 95％可信区间0.022～0.947).累计生存率分析显示,低GRWR组1、12、24个月生存率分别为88.89％、83.33％、77.78％,明显低于中GRWR组及高GRWR组,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 GRWR对儿童亲属活体肝移植手术预后有重要的预测作用,其中GRWR ＜2.0％是术后早期移植物功能不良及2年病死率的高危风险因素.

活体肝移植比公民逝世后器官捐献肝移植操作更为复杂,围手术期评估及技术实施直接影响供体安全和受体预后.目前,行活体肝移植时,供体选择应遵循“自愿、知情、无害”伦理原则,利用影像学评估供肝质量、解剖结构及残肝体积;受体选择时优先考虑良性终末期肝病病人,而选择肝癌病人应考虑肿瘤分期;移植物选择应满足不同受体的“移植物-受体重量比”标准,对于＜3岁的儿童,其比值在2％～4％为宜;在传统开放手术供肝获取经验基础上,腹腔镜供肝获取技术发展与挑战并存;术中各管道重建时,管道条件、匹配程度及通畅性是移植技术的关键;供受体血型不相容时,应用利妥昔单抗可起到减少并发症及改善预后作用;术后精细化管理,尽量减少免疫抑制剂用量以期减少其药物相关副反应.尽管存在诸多问题,相信随着外科技术的进步,医生对肝脏解剖认识的加深及移植物再生血流动力学的理解,活体肝移植技术会更加完备、更加安全.作为公民逝世后器官捐献肝移植的重要补充,活体肝移植将为更多终末期肝病病人提供有效治疗手段.

目的 分析儿童重型再生障碍性贫血(SAA)单倍体造血干细胞移植和同胞全相合移植并发症发生率.方法 回顾性分析2010年1月1日至2018年12月31日于苏州大学附属儿童医院进行治疗的SAA患儿(56例),分为治疗组(单倍体造血干细胞移植,35例),对照组(同胞全相合移植,21例).其中患儿年龄、诊断距离移植时间、总单个核细胞数、总CD34+细胞数、中位随访时间、粒细胞植入时间、血小板植入时间及等级资料[供受体血型相合程度、急性移植物抗宿主病(aGVHD)分级、广泛性慢性移植物抗宿主病(cGVHD)分级、出血性膀胱炎分级、渗漏综合征分级]采用Mann-Whitney U检验.性别、疾病种类、供体与受体性别、预处理方案、CD20单抗的使用、HLA配型、供体来源、移植物来源、植入综合征、巨细胞病毒(CMV)血症、EB病毒(EBV)血症、死亡人数、植入失败人数和骨髓增殖不良人数使用卡方检验进行组间分析.生存曲线以及累积发生率用Kaplan-Meier法绘制,并使用Log-rank检验分析组间差异.结果 与对照组比较,治疗组CD19+B细胞的重建延迟,而CD16+CD56+NK细胞数量移植后6个月开始增加,逐渐达到对照组的水平.与对照组比较,治疗组aGVHD、cGVHD、植入综合征和骨髓增殖不良累积发生率(14.29﹪±7.64﹪比57.14﹪ ±8.36﹪,11.67﹪±7.75﹪比61.59﹪±9.65﹪,9.53﹪±6.41﹪比74.86﹪ ±7.43﹪,0.0﹪比14.29﹪ ±5.91﹪)均升高,差异具有统计学意义(P<0.05),两组CMV与EBV感染,5年总体生存率(OS)、无失败生存率(FFS)、无GVHD失败存活率(GFFS)、III-IV度aGVHD及广泛性cGVHD累积发生率比较差异无统计意义(P>0.05).结论 单倍体移植是治疗儿童SAA的有效治疗方案,但与同胞全合造血干细胞移植比较,其GVHD发生率较高,植入综合征和骨髓增殖不良的发生率较高,优化单倍体移植方案有望降低并发症,提高儿童重型再生障碍性贫血的生活质量.

目的 通过动物实验验证临床双肝移植后移植物萎缩的现象.方法 清洁级雄性SD大鼠18只,8～10周龄,体质量230～250 g,术前禁食12 h.12只SD大鼠作为供体,6只作为受体.建立大鼠双肝移植模型,通过磁共振检查观测受体大鼠术后移植物体积变化.采用成组t检验比较受体大鼠左、右侧移植物体积和重量.P ＜0.05为差异有统计学意义.结果 移植肝叶均为双右上叶.供肝重量和受体大鼠肝重量分别为(4.30±0.06)和(9.4±0.2)g,移植物与受体大鼠体质量、肝重量比分别为1.79％～1.88％、45.7％～46.8％.手术时间(70±4) min,冷缺血时间(30.0±1.5)min,热缺血时间(12.0±1.5)min,无肝期(20.0±2.5)min.6只受体大鼠双肝移植后1d行磁共振检查,两侧移植物体积相同;术后15 d行磁共振检查,有3只发生单侧移植物萎缩.结论 大鼠双肝移植后部分受体一侧移植物会发生萎缩.

随着我国公民逝世后器官捐献来源供肝时代的到来,应用劈离式肝移植(SLT)可以有效扩大供肝来源、减少患者移植等待时间,尤其是解决儿童器官短缺的问题.近年来,国内多个移植中心均不同程度地开展了SLT,疗效不尽相同.现阶段需结合国际上移植技术先进国家的成熟经验来形成适合我国国情的SLT共识,以进一步提高SLT的比例和疗效.本文结合专家经验,从供者及供肝评估,受者的选择标准和供、受者匹配,劈离方式和工具的选择,劈离供肝的血管、胆管分离和分配,SLT的围手术期处理以及器官分配等方面形成SLT的专家共识.

目的:探讨人源IL-15转基因NCG小鼠(NCG-hIL-15鼠)在CAR-NK细胞肿瘤治疗临床前评价中的作用.方法:通过qPCR结合WB法检测NCG-hIL-15鼠骨髓及主要器官(脾、肝、肺、肾和胰)中的表达丰度.将人PBMC来源的NK(PB-NK)细胞回输到NCG-hIL-15鼠及对照NCG鼠,监测NK细胞的体内扩增与受体鼠的体质量、生存期变化,流式细胞术检测体内扩增NK细胞的活化受体与抑制受体表达差异,WB法检测穿孔素与颗粒酶B的表达.MIAPaca-2细胞原位荷瘤NCG-hIL-15鼠或NCG鼠用anti-MUC 1-CAR-NK细胞回输治疗,流式细胞术检测CAR-NK细胞在不同组鼠体内的存活情况,小动物活体成像术检测肿瘤生长并记录荷瘤鼠生存期.结果:NCG-hIL-15鼠中PB-NK细胞可以在10周内稳定增殖,且观察期内未发生显著的移植物抗宿主反应.NCG-hIL-15鼠中扩增NK细胞的KAR与KIR丰度与原始细胞相比差异较小;与NCG鼠体内增殖的NK细胞相比,NCG-hIL-15鼠体内扩增的NK细胞有更高水平的穿孔素与颗粒酶B表达(均P＜0.05).CAR-NK细胞在NCG-hIL-15鼠体内存活比显著增加、抑瘤效果增强,与对照组相比NCG-hIL-15鼠生存期显著延长(均P＜0.01).结论:NCG-hIL-15鼠模型可用于基于NK细胞免疫疗法的临床前实验与生物学评价.