目的:探究负压微环境对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）新生的影响及其机制。方法:采用实验研究方法。取第3~5代对数生长期HUVEC进行后续实验。取3批细胞，各批次细胞均分为常规培养24 h的正常对照组和单纯负压处理组以及加入17-丙烯胺基-17-去甲氨基格尔德霉素（17-AAG）培养24 h的单纯17-AAG组与17-AAG+负压处理组，另采用自行设计研发的全自动三维细胞梯度负压加载装置对2个负压处理组细胞行持续8 h的间歇负压吸引（负压值为-5.33 kPa，吸引30 s、暂停10 s），第1个批次细胞处理完成后于培养0（即刻）、24、48、72 h，采用细胞计数试剂盒8法检测细胞增殖水平，样本数为6；第2个批次细胞处理完成后进行划痕试验，于划痕后12 h，在倒置相差显微镜下观察细胞迁移情况后计算细胞迁移率，样本数为3；第3个批次细胞处理完成后进行小管形成实验，于培养6 h，在倒置相差显微镜下观察成管情况后计算细胞成管总长度与分支节点数，样本数为3。取细胞，分为正常对照组、单纯负压处理组、17-AAG+负压处理组，同前相应组别进行处理，处理完成后，采用蛋白质印迹法检测细胞中热休克蛋白90（HSP90）、窖蛋白1、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、eNOS磷酸化位点1177蛋白表达并计算eNOS磷酸化位点1177/eNOS比值（样本数为3），采用免疫共沉淀（共沉淀HSP90与窖蛋白1、窖蛋白1与eNOS）与蛋白质印迹法检测各组细胞中窖蛋白1、eNOS的蛋白表达（样本数为3），采用免疫荧光双重染色法评估细胞中HSP90与窖蛋白1、窖蛋白1与eNOS的蛋白共定位情况。通过HADDOCK 2.4蛋白质-蛋白质对接程序对窖蛋白1和eNOS进行分子对接预测。数据分析采用析因设计方差分析、单因素方差分析、LSD法。结果:与正常对照组相比，单纯17-AAG组细胞增殖水平于处理完成后培养24、48、72 h均明显降低（ P<0.01），单纯负压处理组细胞增殖水平于处理完成后培养24、48、72 h均明显升高（ P<0.01）；与单纯17-AAG组相比，17-AAG+负压处理组细胞增殖水平于处理完成后培养48、72 h均明显升高（ P<0.05或 P<0.01）；与单纯负压处理组相比，17-AAG+负压处理组细胞增殖水平于处理完成后培养24、48、72 h均明显降低（ P<0.01）。划痕后12 h，与正常对照组的（39.9±2.7）%相比，单纯17-AAG组细胞迁移率明显降低［（10.7±2.7）%， P<0.01］，单纯负压处理组细胞迁移率明显升高［（61.9±2.4）%， P<0.01］；与单纯17-AAG组相比，17-AAG+负压处理组细胞迁移率明显升高［（37.7±3.7）%， P<0.01］；与单纯负压处理组相比，17-AAG+负压处理组细胞迁移率明显降低（ P<0.01）。处理完成后培养6 h，与正常对照组相比，单纯17-AAG组细胞成管总长度明显缩短（ P<0.05）且分支节点数明显减少（ P<0.05），单纯负压处理组细胞成管总长度明显延长（ P<0.01）且分支节点数明显增加（ P<0.01）；与单纯17-AAG组相比，17-AAG+负压处理组细胞成管分支节点数明显增加（ P<0.05）；与单纯负压处理组相比，17-AAG+负压处理组细胞成管总长度明显缩短（ P<0.01）且分支节点数明显减少（ P<0.01）。蛋白质印迹法检测显示，处理完成后，3组细胞中eNOS、窖蛋白1蛋白表达总体比较，差异均无统计学意义（ P>0.05）；单纯负压处理组细胞中HSP90蛋白表达与eNOS磷酸化位点1177/eNOS比值均明显高于正常对照组（ P<0.01），17-AAG+负压处理组细胞中HSP90蛋白表达与eNOS磷酸化位点1177/eNOS比值均明显低于单纯负压处理组（ P<0.01）。处理完成后免疫共沉淀与蛋白质印迹法检测显示，与正常对照组相比，单纯负压处理组细胞中窖蛋白1蛋白表达明显升高（ P<0.01），eNOS蛋白表达明显降低（ P<0.05）；与单纯负压处理组相比，17-AAG+负压处理组处理完成后细胞中窖蛋白1蛋白表达明显降低（ P<0.01），eNOS蛋白表达明显升高（ P<0.01）。处理完成后，与正常对照组相比，单纯负压处理组细胞中HSP90与窖蛋白1的蛋白共定位明显增多，窖蛋白1与eNOS的蛋白共定位明显减少；与单纯负压处理组比，17-AAG+负压处理组细胞中HSP90与窖蛋白1的蛋白共定位明显减少，窖蛋白1与eNOS的蛋白共定位明显增多。分子对接预测提示，窖蛋白1与eNOS相互作用较强，抑制eNOS 1177位点的磷酸化。 结论:负压微环境可能通过促进HUVEC中HSP90结合窖蛋白1进而抑制窖蛋白1结合eNOS，以解除窖蛋白1对eNOS 1177位点磷酸化的抑制，从而促进HUVEC增殖、迁移和成管，最终促进HUVEC新生。

目的 报道3例窖蛋白相关肌病患者的临床、肌肉病理及分子病理特点,并结合文献对本病进行回顾.方法 总结3例以肌肉波纹样蠕动为突出特点患者的临床和随访资料,分析肌肉活体组织检查(活检)病理和窖蛋白-3免疫组织化学病理特点,行CAV3和PTRF基因检测.结果 3例患者临床均有典型的肌肉兴奋性增高症状,包括叩击诱发的肌肉快速收缩和肌肉隆起以及机械刺激诱发的肌肉波纹样蠕动.例1尚有手肌无力和萎缩;例2在病程早期仅表现为肌肉兴奋性增高症状,起病12年后出现不对称的下肢远端肌无力和肌萎缩;例3肌力和肌张力均正常.3例患者均有肌肉酸痛或压痛.肌活检病理提示2例患者呈轻度肌源性损害,1例为肌营养不良样改变.肌肉窖蛋白-3免疫组织化学染色示例1肌膜着色呈均一性减弱,另2例为窖蛋白-3表达减弱肌纤维与表达正常肌纤维呈镶嵌样分布.基因检测发现例1有CAV3基因突变(c.80G>A,p.R27Q),另2例CAV3和PTRF基因检测均未见突变.结论 窖蛋白相关肌病患者的临床表现变异较大,可表现为肢带综合征、波纹样肌病、远端肌病、肌肉肥大、高肌酸激酶血症以及心肌病.对伴有肌肉波纹样蠕动的患者应常规行肌活检窖蛋白-3免疫组织化学染色.

食管癌是常见的恶性肿瘤,病因及发病机制尚不明确.近些年来,基因靶向治疗肿瘤成为研究热点.窖蛋白1(C av-1)是胞膜窖的标志性蛋白,在细胞的分子信号转导、胆固醇转运及细胞侵袭、迁移、周期等多个方面有重要作用.Caveolin-1在多种肿瘤发生发展中充当抑癌样作用,但在肿瘤中的作用不尽相同.因此,明确Caveolin-1对肿瘤发生发展的机制具有重要意义.本研究通过RNA干扰技术抑制Caveolin-1表达,检测细胞增殖及侵袭情况,并探讨其可能的作用机制.

心脏缺血缺氧导致的T管重构是引起胞内Ca2+紊乱的重要机制.主要就T管系统以及桥接整合因子1(BIN1)、2型junctophilin蛋白(JP-2)、窖蛋白-3(caveolin-3)等T管重构相关蛋白对心肌细胞Ca2+调节的研究进展进行综述.

目的 观察膀胱癌患者癌组织窖蛋白1(CAV-1)、性别决定区Y框蛋白2(SOX-2)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达,分析其与患者临床病理学特征的相关性.方法 采用免疫组化法检测80例膀胱癌患者癌组织和癌旁组织中的CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白,比较不同临床病理特征膀胱癌患者癌组织中CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白表达情况,分析影响膀胱癌患者CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白表达的因素.结果 膀胱癌组织中CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白阳性表达率均高于癌旁组织(P均<0.001);中低分化、有淋巴结转移、浸润深度为T3～T4、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期的膀胱癌患者癌组织中CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白阳性表达率高于高分化、无淋巴结转移、浸润深度为T1～T2、TNM分期Ⅰ～Ⅱ期者(P均<0.05),而不同年龄、性别患者癌组织中CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白阳性表达率差异无统计学意义.Logistic回归分析显示,分化程度和淋巴结转移是影响膀胱癌患者CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白表达的因素(OR分别为5.034、4.359、4.446,4.987、5.021、4.987).结论 膀胱癌组织中CAV-1、SOX-2、MMP-2蛋白表达水平增高,与癌组织分化程度和淋巴结转移有关,有助于肿瘤分期诊断.

采用察氏培养基对山西省长治市潞酒有限公司地下酒窖墙壁及酒缸外壁上采集的灰黑色霉状物进行分离纯化以获得真菌纯培养物,然后用扫描电镜和乳酸石炭酸棉蓝染色法在显微镜下观察纯培养物的菌丝体,再利用18S rDNA序列、β-tubulon微管蛋白基因(BenA)序列、Calmodulon钙调蛋白基因(CaM)序列分析技术分别对分离的纯培养物进行分子水平的鉴定并构建系统发育树.共分离到3株可培养真菌,分别是LJB-1、LJ3-2和LJ5-2.其中菌株LJB-1鉴定为地窖无孢霉Racodium cellare,该种在国内未见报道,属于国内新记录种;菌株LJ3-2和LJ5-2分别鉴定为小刺青霉Penicillium spinulosum和产黄青霉Penicillium chrysogenum,这两个种在酒窖菌中鲜见报道.

目的 研究依折麦布联合瑞舒伐他汀对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的平滑肌源性泡沫细胞小凹蛋白-1(Caveolin-1)mRNA表达的影响.方法 将大鼠胸主动脉VSMCs分为9个组,分别为空白对照组、泡沫细胞组、不同浓度的依折麦布组(3、10、30 μmol/L)、不同浓度的瑞舒伐他汀组(0.1、1.0、5.0 μmol/L)、联合组(依折麦布30 μmol/L+瑞舒伐他汀5.0 μmol/L),油红0染色鉴定泡沫细胞模型,real-time PCR检测各组细胞Caveolin-1 mRNA表达.结果 与空白对照组相比,泡沫细胞组Caveolin-1 mRNA表达降低[(0.2487±0.0420) vs(1.004 1 ±0.017 1)],差异有统计学意义(P＜0.05);与泡沫细胞组相比,不同浓度的依折麦布组[(0.371 3 ±0.025 2)、(0.489 8±0.027 9)、(0.726 1±0.029 1)]及瑞舒伐他汀组[(0.4602±0.0228)、(0.623 7±0.028 8)、(0.751 8±0.043 1)]Caveolin-1 mRNA表达增加,各组间差异有统计学意义(P＜0.05),且呈一定浓度依赖性(P＜0.05);且联合组(0.937 6±0.029 7)与单药组比较,Caveolin-1 mRNA表达增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 依折麦布及瑞舒伐他汀均促进平滑肌源性泡沫细胞中胆固醇的逆向转运(RCT),此过程可能通过上调Caveolin-1 mRNA的表达实现;且两者联合此作用更显著.

脑胶质瘤是原发性颅内恶性肿瘤.患者的5年存活率不足1％.目前,除手术切除外,尚无有效的治疗手段.近年来发现,脑胶质瘤发病可能与多种钾离子通道的异常表达有关.自噬是膜包裹部分胞质和细胞内需降解的蛋白质、细胞器,并与溶酶体一起降解其所包裹内容物的生理过程.诱导胶质瘤细胞的自噬,促进其凋亡是肿瘤治疗的一种新策略.本室前期研究发现,电压依赖型钾通道1.5(Kv1.5)参与胞膜小窖标志蛋白质(caveolae,Cav-1)介导的多种肿瘤细胞的增殖和凋亡,但是否参与胶质瘤细胞的自噬并不清楚.本文首先利用不同浓度的K+通道阻断剂四乙胺(tetra-ethylammonium,TEA)、Kv通道阻断剂四氨基吡啶(4-amino-pyridine,4-AP)和Kv1.5通道特异性阻断剂DPO-1(diphenyl phosphine oxide-1)分别在不同时间,作用于人脑胶质瘤细胞U251,观察其对细胞存活的影响.发现DPO-1对U251细胞具有双向作用:低浓度促进存活,高浓度抑制存活.其中,1 mmol/L DPO-1处理6h,可促进自噬相关蛋白质LC3的表达,而抑制mTOR信号蛋白质的磷酸化水平,表明Kv1.5通道可能参与胶质瘤细胞的自噬.然后,利用基因转染技术分别敲低和过表达Kv1.5通道的蛋白质水平,发现敲低Kv1.5通道蛋白,促进胶质瘤细胞的自噬,激活ERK信号通路,而过表达Kv1.5通道蛋白,则抑制胶质瘤细胞的自噬.进一步利用流式细胞技术观察细胞凋亡,发现改变Kv1.5通道蛋白的表达水平,可诱发细胞早期凋亡.提示Kv1.5通道参与人脑胶质瘤细胞的自噬过程.这为临床利用特异性Kv通道阻断剂靶向治疗胶质瘤提供了新的理论和实验依据.

目的 建立急性高眼压(acute ocular hypertension,AOH)小鼠模型,探索视网膜中窖蛋白(Caveolin,Cav)-1表达变化,明确其是否参与青光眼视网膜损伤的病理生理过程.方法 C57小鼠75只,60只纳入实验组,15只纳入对照组.对照组不做任何处理,实验组随机选取一眼建立AOH小鼠模型.分别于造模后1d、2d、3d、7d取眼球或视网膜通过荧光定量PCR(Q-PCR)、Western blot、免疫荧光检测Cav-1 mRNA和蛋白表达变化,并与对照组比较.结果 Q-PCR检测结果显示,实验组小鼠造模后1 d、2 d、3 d、7 d时视网膜中Cav-1 mRNA表达均升高,与对照组比较差异均有统计学意义(均为P<0.05),其中造模后2 d表达最高.Western blot检测结果显示,Cav-1蛋白在造模后2 d、3 d、7 d的实验组小鼠视网膜中表达均升高,与对照组比较差异均有统计学意义(均为P<0.05),其中造模后3d表达最高.免疫荧光检测结果显示,Cav-1在造模后1d、2d、3d、7d均可检测到高荧光表达.结论 Cav-1参与了AOH的病理过程,并且其表达变化在早期较明显.

目的 研究左金丸对DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠中免疫记忆性T细胞水平的调节作用.方法 将40只健康成熟的BALB/c小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、左金丸组和美沙拉嗪(5-ASA)阳性对照组.正常对照组给予生理盐水自由饮用,其余组给予3％ 葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液自由饮水建立溃疡性结肠炎模型.模型复制成功后分别给予3 g·kg-1左金丸或300 mg·kg-1美沙拉嗪灌胃治疗7 d.每日给药前记录体质量,给药7 d后测量结肠长度、质量,计算结肠质量指数,并通过病理学观察及评分评价其疗效;ELISA法检测结肠组织中白细胞介素(IL)17和IL-12p70的含量;免疫蛋白印迹法检测人酪氨酸激酶蛋白1(JAK1)、信号转导及转录激活蛋白3(STAT3)、磷酸化信号转导及转录激活蛋白3(p-STAT3)、窖蛋白1(Caveolin-1)、活化的STAT3的蛋白质抑制剂(PIAS3)、PIAS1、细胞因子信号传导抑制剂1(SOCS1)的表达情况;流式细胞术检测中枢免疫记忆性T细胞与效应免疫记忆性T细胞水平.结果 与模型对照组比较,左金丸组小鼠结肠质量与结肠质量指数明显降低(P<0.01)结肠长度明显恢复(P<0.05),结肠镜下损伤评分明显降低(P<0.05);同时IL-7、IL-12p70及JAK1、STAT3、p-STAT3、PIAS3、SOCS1、p-STAT3/STAT3的水平降低(P<0.05,P<0.01),而PIAS1的水平及中枢免疫记忆性T细胞(Tcm)的比率明显升高(P<0.05,P<0.01),效应免疫记忆性T细胞(Tem)的比率明显降低(P<0.01).结论 左金丸可通过抑制JAK1/STAT3信号通路调节中枢免疫记忆性T细胞与效应免疫记忆性T细胞间的平衡,从而治疗实验性溃疡性结肠炎.