为了解茶树菇(Agrocybe aegerita)种质资源的遗传多样性和筛选优良的茶树菇新品种,采用菌株拮抗试验方法观察了92株茶树菇菌株间拮抗反应及其类型,ISSR-PCR(inter-simple sequence repeat-PCR)分子标记方法对92株茶树菇菌株的遗传多样性进行了综合分析.拮抗试验将92株茶树菇菌株分为27组;筛选出的20条ISSR引物共扩增出317条清晰条带,多态性条带平均比率为82.60％;在遗传相似系数为0.742时,ISSR分子标记分析可将92株茶树菇划分为6大类群,拮抗试验和ISSR分子标记分析的结果基本一致.通过对比农艺性状分析,初步筛选出滇农5、滇农14、茶5-800、白茶、闽农5及滇农8作为工厂化生产茶树菇菌种.结果表明茶树菇的遗传多样性丰富,结合栽培出菇试验可为茶树菇品种选育和杂交育种的亲本选择提供参考.

转录因子家族基因GRF(growth-regulating factor)是植物中特有的一类生长调控因子基因,在水稻和拟南芥中,GRF家族基因编码的蛋白质具有正向调控茎和叶生长发育的功能.为了探究在桃中GRF基因是否参与了狭叶桃“金蜜狭叶”的叶片发育,本试验首先分析桃基因组中鉴定出的GRF基因的序列信息;然后,以正常叶片的“上海水蜜”桃为对照,通过荧光定量PCR检测了这些GRF基因在“金蜜狭叶”桃的组织特异性表达情况;最后,利用126对简单序列重复标记对1个F2杂交群体进行连锁分析,定位狭叶性状,辅助筛选狭叶性状的候选基因.结果表明:桃基因组GRF基因包括10个成员,分布在除4和8外的其他染色体上,编码蛋白的氨基酸长度在191～ 612之间.蛋白序列分析表明,除ppa011917m的QLQ结构域中的Leu残基被Phe代替外,这10个GRF的N端均含保守的QLQ和WRC结构域.系统进化树将桃上的10个GRF基因分为3组.从10个GRF基因的表达结果可以看出,6个基因在茎尖的表达量高于幼叶,也高于其他成熟组织和器官;其中2个基因在狭叶桃中的表达显著高于正常叶对照.通过连锁分析将“金蜜狭叶”桃的狭叶性状定位在第6染色体的15.7 ～21.1 Mb之间,该区间仅含有1个GRF基因ppa003017m,是狭叶性状的候选基因.本研究将为“金蜜狭叶”桃狭叶性状基因的鉴定和高光效种质筛选奠定研究基础.

目的 构建溪黄草与线纹香茶菜的简单重复序列区间(inter-simple sequence repeat,ISSR)反应体系,为溪黄草药材种质资源的遗传多样性分析奠定基础.方法 通过设定溪黄草ISSR-PCR的各反应因子的不同梯度,对反应条件进行优化,建立适合溪黄草与线纹香茶菜的ISSR反应体系;以溪黄草DNA为模板,用该体系对100条引物进行初筛,用线纹香茶菜进行复筛,并用23个溪黄草、16个线纹香茶菜单株样品验证体系稳定性.结果 建立了溪黄草和线绞香茶菜ISSR最佳反应体系(25 μL):2×Taq Master Mix 12.5 μL(Mg2+浓度4mmol·L-1,dNTP浓度0.4 mmol·L-1)、引物0.6 μmol·L-1、模板DNA 10 ng.结论 建立的溪黄草和线纹香茶菜的ISSR反应体系稳定可靠、标记位点清晰、检测多态性能力强,可较好地应用于溪黄草与线纹香茶菜的ISSR遗传多样性分析的研究.

目的:优化远志简单重复序列区间(ISSR)扩增多态性反应体系,设计一对聚合酶链式反应(PCR)引物用于快速预测远志药材中sibiricose A5和sibiricoseA6的含量高低.方法:采用UPLC测定远志药材中sibiricose A5与sibiricose A6的含量,通过单因素试验优化远志ISSR反应体系,利用ISSR分子标记技术筛选出与sibiricose A5和sibiricose A6含量相关的特异性DNA片段,针对此片段设计特异性PCR引物.结果:7批远志药材中sibiricose A5和sibiricose A6的含量差异较大,变化范围分别为0.895 4 ～3.227 6,0.6442～2.0578 mg·g-1.对筛选出的与sibiricose A5和sibiricose A6含量相关片段(890-8)进行克隆测序后,设计出了1对特异性引物(YZ-SA),可用于快速预测远志药材中sibificose A5和sibiricose A6的含量高低.结论:优化后的远志ISSR反应体系具有标记位点清晰、检测多态性能力强等特点,设计出的特异性引物可用于快速预测远志药材中sibiricose A5和sibiricose A6的含量高低.

[目的]研究柑橘凤蝶Papilio xuthus细胞系RIRI-PX1的单细胞克隆株RIRI-PX1-C24的生物学和重组蛋白表达特性.[方法]用野生型苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(wild-type Autographa californica multiple nucleopolyhedrosis virus,wt-AcMNPV)侵染RIRI-PX1-C24与RIRI-PX1,检测细胞对野生型病毒的敏感性;使用重组绿色荧光蛋白杆状病毒(AcMNPV-GFP)、重组β-半乳糖苷酶杆状病毒(AcMNPV-Gal)以及重组分泌型碱性磷酸酶杆状病毒(AcMNPV-SEAP)分别侵染细胞系RIRI-PX1-C24和RIRI-PX1,在之后的24,48,72,96,120,144和168 h检测3种重组蛋白的表达量;通过简单重复序列区间(inter simple sequence repeat,ISSR)标记比较RIRI-PX1-C24与RIRI-PX1的遗传相似性.[结果]亲本细胞系RIRI-PX1和克隆株RIRI-PX1-C24均能被wt-AcMNPV侵染,其中RIRI-PX-C24对wt-AcMNPV的敏感性较RIRI-PX1有显著提高.3种重组蛋白均能在2个细胞系中表达,其中重组绿色荧光蛋白在RIRI-PX1-C24中的表达水平远高于在亲本细胞系RIRI-PX1中的表达水平,但重组β-半乳糖苷酶蛋白和重组分泌型碱性磷酸酶蛋白在RIRI-PX1-C24中的表达水平较在RIRI-PX1中的无显著提高.用10条ISSR引物进行的RIRI-PX1-C24和RIRI-PX12个细胞系的指纹图谱分析中,4条引物扩增条带在这2个细胞系间存在差异;2个细胞系的遗传相似性范围在0～ 83.33％之间,说明克隆株及其亲本细胞系在基因型上存在差异.[结论]通过对柑橘凤蝶细胞系RIRI-PX1进行单细胞克隆,确实获得了使重组绿色荧光蛋白表达水平有显著提高的克隆株RIRI-PX-C24,其利用价值仍需进一步的研究.

采用简单重复序列区间(ISSR)分子标记对不同产地白花蛇舌草的遗传多样性进行分析.分别在广西壮族自治区、广东省、湖南省、浙江省、福建省、江西省和安徽省共采集23份白花蛇舌草样品,选用150条ISSR引物进行PCR扩增,运用POPGENE1.32、NTSYS2.10软件进行遗传多样性分析.筛选出11条引物,扩增出115条多态性条带,多态性比率为85.22％,等位基因数(Na)为1.852 2,有效等位基因(Ne)为1.543 4,Neis基因多样性指数(H)为0.316 5,Shannon's信息指数(Ⅰ)为0.470 0.聚类分析结果表明白花蛇舌草可分成3类,实验结果表明ISSR分子标记可以为白花蛇舌草的系统分类和鉴定提供分子水平的科学依据.

目的:对藏药"蒂达"的3种基源植物紫红獐牙菜、青叶胆和椭圆叶花锚进行亲缘关系研究.方法:利用简单重复序列区间(ISSR)分子标记技术对紫红獐牙菜9个样品(样品ZT-1～ZT-5采自大理苍山感通寺,样品ZC-1～ZC-4采自大理宾川县)、青叶胆2个样品(QYD-1～QYD-2)和椭圆叶花锚2个样品(HM-1～HM-2)进行聚合酶链式反应(PCR)扩增.采用青叶胆的DNA基因组为模板DNA进行引物筛选,对筛选得到的8条引物进行PCR反应;对PCR扩增产物进行人工读带,建立原始数据矩阵,并计算多态性条带比率;同时,采用NTSYS 2.1软件计算遗传相似系数,并选择UPGMA法绘制聚类图.结果:通过8条ISSR引物共反应获得113条清晰可辨的PCR扩增产物条带,多态性位点百分率为100％.紫红獐牙菜、青叶胆和椭圆叶花锚3个品种共13个样品的遗传相似系数在0.301～0.500之间;紫红獐牙菜9个样品的种内遗传相似系数在0.752～0.929之间.聚类分析结果显示,当距离线为0.410时,可将13个样本分为3个类群,即青叶胆、椭圆叶花锚、紫红獐牙菜;当距离线为0.780时,可将紫红獐牙菜的9个样品分为2个亚类,一个亚类只有苍山感通寺采集的样品ZT-1,另一个亚类含有其余8个样品.结论:利用ISSR分子标记技术能从分子水平对紫红獐牙菜、青叶胆和椭圆叶花锚进行鉴别.紫红獐牙菜与青叶胆、椭圆叶花锚存在一定的亲缘关系,但亲缘关系相对较远、遗传差异较大;大理地区两个不同地点产紫红獐牙菜的遗传差异较小、亲缘关系较近,但表现出丰富的遗传多样性.

目的 建立一种快速鉴别长梗黄精种的分子技术手段.方法 基于简单序列重复区间扩增多态性(ISSR)和相关序列扩增多态性(SRAP)分子标记对多花黄精与长梗黄精的基因组DNA进行种间的多态性分析,获得ISSR和SRAP-PCR差异片段,经测序设计种特异性的特征性片段扩增区域(SCAR)引物,用于二种黄精属植物的准确快速鉴别.结果 3对SCAR引物在各自最适退火温度下,分别只从长梗黄精中扩增出了150、354和518 bp的特异性片段,而多花黄精不扩增任何片段,实验操作便捷,结果重复性好.通过对市场上8份黄精块茎材料的鉴定,SCAR分子鉴别技术的可靠性进一步得以验证.结论 本实验开发的SCAR分子技术可用于长梗黄精种的辅助鉴别.

目的:从表型性状和分子学角度研究双色金鸡菊种质资源的多样性.方法:对双色金鸡菊19个采集地120份供试样品的10个表型性状进行统计,并用14条简单重复序列区间(ISSR)引物进行聚合酶链式反应(PCR)扩增,电泳检测后统计条带;使用SPSS 21.0等软件分析表型数据,PopGene 32分析条带统计结果.结果:表型性状中株高的遗传多样性信息指数最高,其次是花冠大小和花色差异、茎杆粗细;聚类结果可将19个采集地样品聚为两大类,其中引种高海拔山区的双色金鸡菊有聚在一起的趋势.ISSR-PCR扩增结果显示双色金鸡菊在物种水平上有较高的遗传多样性,不同产地有明显的遗传分化;聚类结果将19个采集地的双色金鸡菊分为5大类,皮山县等高海拔地区样品在遗传物质上显示出较强的地域性.结论:昆仑雪菊种质资源存在地域性的遗传分化,表型性状和ISSR分子标记可对昆仑雪菊的种质资源进行评价.

贝母属植物有较高的药用与经济价值,对其开展分子标记研究,不仅能够应用于物种鉴定,而且能为种质资源的保护及选育方针的制定提供理论指导.结合课题组前期开展的贝母属植物分子标记的研究,就随机扩增多态性DNA、简单重复区间序列、单核苷酸多态性、扩增片段长度多态性和DNA条形码等5种分子标记技术,对贝母属植物的种质资源鉴定、遗传多样性分析等方面的研究现状进行归纳总结,以期为贝母属植物的资源保护、可持续发展等方面提供良好的借鉴.