目的:本研究旨在通过生物信息学算法探讨影响同种异体肾移植术后肾功能的关键基因及生物学因素。方法:通过GEO网站筛选GSE181757、GSE30718和GSE147089数据集进行数据挖掘。使用R语言的limma包进行数据预处理及差异基因分析。使用R语言的Clusterprofiler包进行GO、KEGG富集分析。蛋白互作网络是基于STRING数据库构建，并使用Cytoscape进行可视化。使用Cytoscape中的插件CytoHubba计算蛋白互作网络中排名前5的核心基因。采用CIBERSORT和Xcell反卷积算法被用来进行基于转录谱的免疫微环境量化。结果:基于GSE181757芯片数据，247个基因被鉴定和肾移植患者的远期肾功能相关。差异基因参与的生物学过程主要有类固醇激素生物合成、化学致癌、细胞色素P450-外源性物质代谢、细胞色素P450-药物代谢、视黄醇代谢和全身动脉血压的调节。基于STRING数据库的蛋白互作网络结果显示，MMP7、LCN2、LGALS3、ALB、CYP3A5被认为在调控肾移植患者的远期肾功能中起到核心作用。此外，GSE30718和GSE147089的结果提示，这5个核心基因可能通过介导急性肾损伤和抗体介导的排斥反应来影响移植肾的远期肾功能。浆细胞和活化的NK细胞在肾功能下降患者的组织中也显著增多。结论:通过芯片数据的深入挖掘，发现了肾移植患者肾功能下降的潜在生物学机制，为术后出现肾功能下降的肾移植患者提供了新的诊断与治疗思路。

目的:探讨滋阴补肾序贯法对多囊卵巢综合征（PCOS）大鼠卵巢类固醇激素合成急性调控蛋白（StAR）及 SIRT1基因表达的影响。 方法:用脱氢表雄酮（DHEA）创建PCOS大鼠模型。80只21日龄清洁级SD大鼠随机分为空白对照组（16只）和PCOS组（64只）。将造模成功大鼠随机分为生理盐水组、滋阴组、补肾组和序贯组，每组各16只。各组连续灌胃20 d。用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清雌二醇、孕酮和睾酮浓度。分别用Western blotting和RT-PCR测定各组卵巢StAR、SIRT1蛋白及mRNA表达。结果:生理盐水组血清雌二醇水平较空白对照组显著升高（ P=0.004）；滋阴组、补肾组和序贯组血清雌二醇水平较生理盐水组显著降低（ P=0.005、 P=0.003、 P=0.002）。生理盐水组血清睾酮水平显著高于空白对照组（ P=0.005）；序贯组血清睾酮水平较生理盐水组、滋阴组和补肾组均显著降低（ P=0.002、 P=0.005和 P=0.005）。与空白对照组相比， 生理盐水组StAR蛋白含量高（ P<0.001），而SIRT1蛋白显著减少（ P<0.001）；序贯组StAR蛋白及mRNA水平较生理盐水组、滋阴组和补肾组均显著降低（ P<0.001、 P=0.008、 P<0.001）；序贯组SIRT1蛋白表达水平较生理盐水组和补肾组均显著升高（ P均<0.001）；与空白对照组相比， 生理盐水组 StAR mRNA显著升高（ P<0.001），而 SIRT1 mRNA显著减少（ P<0.001）；滋阴组和序贯组 SIRT1 mRNA水平较生理盐水组均有显著升高（ P均<0.001），而序贯组比补肾组显著升高（ P<0.001）。 结论:滋阴补肾序贯法可能通过 SIRT1基因高表达调控卵巢局部StAR等类固醇激素合成相关蛋白，而降低PCOS大鼠血清高雄激素血症。

先天性类脂性肾上腺皮质增生症(congenital li-poid adrenal hyperplasia,CLAH)是先天性常染色体隐性遗传病,是类固醇激素合成过程中最严重和最罕见的一种类型.临床呈现失盐、肾上腺皮质功能减退、男性假两性畸形和女性性幼稚等表现.它是由类固醇生成急性调控蛋白(StAR)基因或编码胆固醇侧链裂解酶(P450scc)的基因CYP11A1突变引起,其中以StAR基因突变最为常见[1].

目的 探讨镉对小鼠睾丸间质细胞睾酮合成的影响.方法 镉处理组采用20 μmol/L CdCl2处理TM3细胞,分别在加入CdCl2 4 h和8 h后收集细胞上清液,对照组TM3细胞给予等容积磷酸盐缓冲液(DPBS).采用ELISA法测定细胞上清液中睾酮含量,采用RT-PCR和Western blot技术检测睾酮合成关键酶mRNA和蛋白表达水平.结果 镉处理组细胞上清液中睾酮含量明显降低(P＜0. 01).与对照组相比,镉显著下调TM3细胞类固醇激素合成急性调控蛋白(StAR)、细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)与 17β-羟类固醇脱氢酶(17β-HSD) mRNA表达(P＜0.01),镉处理组TM3细胞StAR、P450SCC、细胞色素P45017α-羟化酶(P45017α)、3β-HSD与17β-HSD的蛋白表达水平也明显降低,与对照组相比,差异均有统计学意义(P＜ 0.05,P＜0.01).结论 镉抑制小鼠睾丸间质细胞睾酮的分泌,其原因可能与镉抑制间质细胞部分睾酮合成关键酶mRNA和蛋白表达水平有关.

目的 探讨骨形态发生蛋白 9 (bone morphogenetic protein-9 ,BMP-9 )对人卵巢黄素化颗粒细胞雌激素(estradiol,E2)和孕激素(progesterone,P)分泌功能的影响.方法 收集因输卵管因素行体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization embryo transfer,IVF-ET)患者的颗粒细胞.将颗粒细胞在不同的浓度 BMP-9(0、3、6、12 μg/L)单独及与卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)75 U/L共培养 72 h,采用酶联免疫吸附测定法检测颗粒细胞 E2、P的浓度,Western-blot检测颗粒细胞中 E2生成相关因子芳香酶化 P450(aromatase P450,P450 arom)、P生成相关因子类固醇急性调节蛋白(steroidogenic acute regulatory protein,StAR)的表达水平.结果 单独 BMP-9培养时,BMP-9 各浓度组分泌的 E2和P浓度变化不大,差异均无统计学意义(P＞0.05);加入 FSH 后,BMP-9 各浓度组分泌的E2变化不大,而P浓度则随着BMP-9 浓度的增加,出现下降趋势,各浓度组间差异均有统计学意义(P＜0.05).单独BMP-9 培养时,P450 arom蛋白、StAR蛋白表达水平在 BMP-9 各浓度组变化不大,各组间差异无统计学意义(P＞0.05);加入 FSH 后,BMP-9 各浓度组分泌的 P450 arom 蛋白变化不大,而 StAR 蛋白浓度则随着BMP-9 浓度的增加,出现下降趋势,各浓度组间差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 BMP-9 在缺少 FSH刺激下对颗粒细胞分泌 E2、P无明显影响;BMP-9 可抑制 FSH 诱导的P的生物合成,对 E2无明显影响;BMP-9 可作为黄素化抑制剂,防止卵泡提前黄素化,并调控卵泡的发育.

目的 研究硫酸镍对小鼠睾丸间质细胞(以下简称“TM3细胞”)增殖及睾酮合成的影响.方法 分别以质量浓度为13.14、26.28、78.84、131.40 mg/L硫酸镍染毒TM3细胞,对照组不予硫酸镍染毒处理,分别于处理后0、6、12、24、48 h采用CCK-8法检测TM3细胞的细胞存活率;采用酶联免疫吸附法测定细胞上清液中睾酮水平,并通过蛋白免疫印迹法检测细胞内类固醇激素合成急性调控蛋白(StAR)、细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450SCC)、细胞色素P45017α-羟化酶(P45017α)、17β-羟类固醇脱氢酶(17β3-HSD)蛋白的表达水平.结果 经硫酸镍染毒后,TM3细胞存活率在染毒剂量和染毒时间主效应以及两者的交互效应上均有统计学意义(P＜0.01).以剂量为78.84、131.40 mg/L硫酸镍染毒12 h后,与对照组比较,TM3细胞睾酮水平及StAR、P450SCC、P45017α、17β-HSD相对表达水平均降低(P＜0.01),且131.40 mg/L组上述指标低于78.84 mg/L组(P＜0.01).结论 硫酸镍可能通过影响细胞内StAR及部分睾酮合成关键酶的合成,从而抑制TM3细胞的增殖及睾酮的分泌.

目的 观察小白菊内酯对异位子宫内膜间质细胞雌激素合成相关酶——类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)、ER亚型、VEGF表达的影响.方法 原代培养异位子宫内膜间质细胞,再分别使用1、5、10、20 μmol/L 4组不同浓度的小白菊内酯刺激异位子宫内膜间质细胞,使用实时PCR技术检测StAR、ERα、ERβ、PR、血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素6(IL?6)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、肿瘤坏死因子受体(TNFR)1、TNFR2 mRNA的表达变化,应用ELISA方法检测细胞上清液中雌二醇、孕酮浓度的变化.结果 4组不同浓度的小白菊内酯刺激后,异位子宫内膜间质细胞中StAR mRNA的表达有上调(F=5.722,P<0.05),其中20 μmol/L组StAR mRNA的表达较对照组增高[分别为2.6±0.3和1.0],两组比较,差异有统计学意义(P<0.01);ERα mRNA的表达有下调(F=6.921,P<0.01),其中20 μmol/L组、10 μmol/L组ERα mRNA的表达较对照组显著降低[分别为0.2±0.3、0.3±0.3和1.0,P均<0.05];ERα/ERβ mRNA比值显著下降(F=4.209,P<0.05).4组不同浓度的小白菊内酯刺激后,异位子宫内膜间质细胞中VEGF mRNA的表达明显上调(F=10.964,P<0.01),其中20 μmol/L组VEGF mRNA的表达较1 μmol/L组、5 μmol/L组、10 μmol/L组、对照组均显著增高[分别为2.8±0.5、1.3±0.3、1.4±0.4、1.7±0.5和1.0,P均<0.05];TNFR1 mRNA的表达明显上调(F=7.286,P<0.01);而ERβ、PR、IL?6、TNFα和TNFR2 mRNA的表达无差异(P均>0.05).4组不同浓度的小白菊内酯刺激后,异位子宫内膜间质细胞上清液中雌二醇和孕酮的浓度无差异(F=3.376,P=0.054;F=0.932,P=0.483).结论 小白菊内酯可能通过调控异位子宫内膜间质细胞中雌激素合成相关酶、ER亚型的表达及血管生成,促进子宫内膜异位症的病情进展.

目的 本研究旨在通过网络药理学方法探讨参芪地黄汤治疗药源性肾病的作用机制.方法 对参芪地黄汤的有效成分进行全面文献检索,确定相应靶点,并从多个数据库中获得已知的药源性肾病靶点.建立蛋白质相互作用网络,分析参芪地黄汤靶点与已知治疗药源性肾病的靶点之间的关系.结果 STS、MAOB、CA2和BMP2可被20种化合物调控,可能是参芪地黄汤中重要的复合靶点.细胞因子(VEGF、CCR2、TGF-β、PKC)、氧化应激和炎症是药源性肾病发生的关键因素,涉及显著差异表达的最丰富的途径是TNF信号通路、类固醇激素生物合成和VEGF信号通路.结论 本研究从整体角度对参芪地黄汤治疗药源性肾病的药理和分子机制进行了部分验证和预测.为实验研究补充了理论基础,拓展了参芪地黄汤在临床上的合理应用.

目的:探究骨髓间充质干细胞(BMSC)来源的外泌体对环磷酰胺(CP)导致的小鼠睾丸间质细胞TM3损伤的改善作用.方法:利用超高速离心法提取BMSC来源的外泌体(exo),然后分析其粒径大小和观察其在电镜下的形态,蛋白免疫印迹法检测exo的典型标志蛋白.将外泌体与睾丸间质细胞TM3共培养做摄取实验,观察TM3细胞对exo的摄取情况.构建睾丸间质细胞CP损伤模型,主要分组为对照组、CP组及CP+exo组,利用CCK-8法检测各组细胞活力,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,ELISA法检测细胞上清液的睾酮水平,最后利用蛋白免疫印迹法检测与睾酮合成相关的关键酶类固醇激素合成急性调控蛋白(StAR)的表达.结果:CP组与对照组相比活力明显降低,而加入exo共培养后,可以恢复TM3细胞的部分活力(P＜0.05).流式凋亡结果图中,CP组的凋亡率明显比对照组的升高,而CP+exo组则在一定程度上降低了凋亡率(P＜0.01).CP组细胞上清液中的睾酮水平较对照组下降,而加入exo后可提高睾丸间质细胞TM3分泌的睾酮水平(P＜0.01).StAR蛋白免疫印迹上,提示在CP组中StAR的表达量相比于对照组是降低的,而CP+exo组则是有一定程度的升高(P＜0.01).结论:BMSC-exo对CP导致的睾丸间质细胞TM3损伤具有保护作用,并且在一定程度上能恢复TM3细胞分泌的睾酮水平.

目的:研究二甲双胍(Met)对D-半乳糖构建的亚急性衰老模型大鼠睾丸功能的影响及其分子调控机制.方法:颈部皮下注射D-半乳糖制备亚急性衰老大鼠模型.次月予以Met溶液灌胃治疗,每周监测大鼠的体重,测定大鼠睾丸重量、睾丸指数;ELISA法检测大鼠血清睾酮(testosterone,T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)和雌二醇(E2)水平;HE染色法观察睾丸形态;免疫组化染色检测衰老相关蛋白[β-半乳糖苷酶(β-gal)、p16和p21]、睾丸自噬相关蛋白[磷酸酶张力蛋白同源物诱导激酶1(PINK1)、Par-kin、自噬效应蛋白(Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)和p62]和睾酮合成关键酶[类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)、细胞色素侧链裂解酶(CYP11A1)和17-β-羟基类固醇脱氢酶3(HSD17β3)]的表达情况,并用Western blot检测上述蛋白的表达量.结果:与对照组相比,衰老模型组和Met组大鼠体重整体呈下降趋势;衰老模型组睾丸重量及指数下降(P<0.01),Met干预后显著上升(P<0.001).衰老模型组中T,FSH和E2水平均显著下降(P<0.05),LH水平明显升高(P<0.01).模型组衰老相关蛋白β-gal,p16和p21在睾丸细胞质中有明显阳性表达;与衰老模型组相比,Met干预后睾酮合成关键酶StAR,CYP11A1和HSD17β3的表达水平均显著性上升(P<0.05),自噬相关蛋白PINK1,Parkin,Beclin-1和LC3蛋白表达显著升高(P<0.05),p62蛋白表达显著下降(P<0.05).结论:二甲双胍能激活睾丸自噬水平,增加睾酮合成关键酶的水平,从而预防亚急性衰老大鼠睾丸功能减退.