类固醇生成因子(SF-1，NR5A1)是在性腺及肾上腺发育过程中起关键调控作用的转录因子。NR5A1基因突变是性发育异常(disorders of sex development，DSD)常见病因之一，目前临床报道的病例多为杂合突变。该基因突变患者临床表型复杂，早期报道的患者表现为不同程度的46，XY性腺发育不良，近年发现该基因突变与男性无精症或女性的卵巢早衰有关，多数患者无肾上腺皮质功能不全。目前认为患者临床表型异质性，可能与不同基因突变对转录活性的功能影响、下游靶基因(如SOX9等)基因剂量效应以及寡基因突变等的遗传背景等相关。通过对NR5A1突变的基因型和相关表型开展研究，有助于人们深入理解性腺发育的过程及其调控机制。

目的:探讨46，XY性发育异常(DSD)患者的分子诊断方法和临床特点，加深对疾病的认识。方法:采用基于多重PCR的AA芯片法和探针捕获法两种靶向二代测序技术，对2009年7月至2021年6月于上海交通大学医学院附属第九人民医院诊治的206例46，XY DSD患者进行基因检测，并对分子诊断明确患者的临床特点进行分析。结果:206例患者中，同时有小阴茎、尿道下裂、隐睾三种表型的患者诊断率最高，可达75.28%。患者均有不同程度外生殖器男性化不全表现，其中小阴茎伴有尿道下裂最为常见(87.25%)。81例(39.32%)患者检测为单一基因突变，104例(50.49%)患者存在多个基因突变，21例(10.19%)患者未检测到基因突变。根据美国医学遗传学和基因组学(ACMG)指南统计致病和可疑致病比例，发现明确分子诊断的有107例，诊断率为51.94%，包括类固醇5α-还原酶2(SRD5A2)突变40例(37.38%)，雄激素受体(AR)突变36例(33.64%)，类固醇生成因子1(NR5A1)突变18例(16.82%)，17β-羟类固醇脱氢酶3(HSD17B3)突变6例(5.61%)，17α-羟化酶/17，20-裂解酶(CYP17A1)、Wilms肿瘤相关基因1(WT1)、GATA结合蛋白4(GATA4)突变各2例(1.87%)，黄体生成素受体(LHCGR)突变1例(0.93%)。在81例青春期后患者中，29例有乳房发育，其中25例(86.21%)为AR突变。结论:46，XY DSD患者的临床表型和分子病因复杂。靶向二代测序具有高通量、高效率、低成本的优势，尤其对遗传异质性较强的46，XY DSD病因诊断具有重要价值。

过度瘢痕化和纤维化是烧伤最严重和最常见的并发症。长时间暴露于高水平的糖皮质激素会对皮肤产生不良影响，导致皮肤变薄和创面愈合受阻。悉尼大学康科德医院ANZAC研究所的Kevin H?Y Tsai教授团队在《Burns & Trauma》杂志上发表了题为《Skin 11β?hydroxysteroid dehydrogenase type 1 enzyme expression regulates burn wound healing and can be targeted to modify scar characteristics》的文章，该研究检测了烧伤患者和小鼠皮肤中11β?羟基类固醇脱氢酶1（11β?HSD1）的表达，并使用小鼠11β?HSD1 基因敲除模型来验证11β?HSD1介导糖皮质激素代谢对烧伤创面愈合、瘢痕形成以及瘢痕弹性和质量的影响，同时开发了含有治疗剂（包括活性和非活性糖皮质激素）的缓释支架，并在烧伤小鼠中进行了临床前测试。结果表明，烧伤后患者和小鼠皮肤中的11β?HSD1表达水平均显著升高。11β?HSD1 基因敲除小鼠的创面愈合速度比野生型小鼠快，但愈合创面明显表现出更多的胶原沉积，以及更高的韧度和硬度，即过度瘢痕化的特征。应用缓释泼尼松（一种无活性的糖皮质激素）会减缓烧伤小鼠创面初始愈合速度，但通过改善炎症，减少肌Fb生成、胶原蛋白生成和降低瘢痕硬度，可显著减少烧伤后瘢痕形成。该研究证明了皮肤11β?HSD1是烧伤后创面愈合和瘢痕形成的关键调节因子。应用一种能够被皮肤局部11β?HSD1激活的非活性糖皮质激素，虽然减缓了创面初期愈合速度，但显著改善了烧伤后的瘢痕特征。

睾丸3β-羟基类固醇脱氢酶（3β-hydroxysteroid dehydrogenase，3β-HSD）是一种类固醇生成酶，催化3β-羟基类固醇转化为3-酮类固醇。目前已克隆了人类的两种不同亚型， HSD3B1和 HSD3B2；其中， HSD3B2位于睾丸中，表达3β-HSD2。 HSD3B2是一种双底物酶，可与辅因子NAD +和3β-类固醇结合。许多内分泌干扰物，包括工业化合物（邻苯二甲酸盐、双酚类、全氟烷基物质和二苯甲酮类）、杀虫剂和杀菌剂（有机氯杀虫剂和有机锡）、食品添加剂（丁基羟基苯甲醚、白藜芦醇、棉酚、黄酮和异黄酮、类姜黄素和查尔酮类）和药物（依托咪酯、甲羟孕酮和酮康唑）可抑制睾丸中3β-HSD的活性，可能干扰雄激素合成。本文总结了3β-HSD的独特睾丸亚型，其基因、化学、亚细胞、位置以及直接抑制睾丸3β-HSD的内分泌干扰物及其抑制模式，期望为临床研究雄激素调控方法及以雄激素为靶点的药物研发提供参考。

目的:探讨连续重复给予含左炔诺孕酮（levonorgestrel，LNG）紧急避孕药（emergency contraception pills，ECPs）对雌性大鼠生育力及其F1代仔鼠健康的影响。方法:成年SPF级雌性大鼠于每个动情周期连续给予3次LNG-ECPs，分别给予3个（P-3）、6个（P-6）和12个（P-12）动情周期。雌性大鼠每个给药时程下，采用Excel产生随机数按体质量分层随机分为2组，分别为LNG-ECPs组和溶媒对照组，分别灌胃给予0.12 mg/kg LNG-ECPs和等体积溶媒。各组于末次给药后4 h分别取1/2动物（12~18只）进行解剖（6~9只）和交配（6~9只）；剩余1/2动物（12~18只）于停药恢复3个动情周期后再分别进行解剖（6~9只）和交配（6~9只），计算脏器系数。采用酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测雌性大鼠血清中卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone，FSH）、黄体生成素（lutenizing hormone，LH）、雌激素、孕激素、睾酮、抗苗勒管激素（anti-Müllerian hormone，AMH）以及游离甲状腺激素3（free thyroid hormone，fT3）的水平。雌性大鼠卵巢组织切片苏木精-伊红（hematoxylin and eosin，HE）染色后进行卵泡计数。记录LNG-ECPs给药结束和停药恢复期雌性大鼠妊娠率及窝仔数，测定F1代仔鼠生长指数以及主动和被动运动能力等指标。取P-12大鼠卵巢组织进行转录组学测序，建立LNG-ECPs致卵巢差异表达基因谱，分析LNG-ECPs致卵巢损伤的差异基因，并进行基因本体（gene ontology，GO）和京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）通路富集分析。结果:①连续给予3个和6个动情周期后，LNG-ECPs组雌鼠的血清激素水平和生育力与溶媒对照组相比，差异均无统计学意义（均 P>0.05）；F1代仔鼠生长指数和行为学结果与溶媒对照组仔鼠相比差异均无统计学意义（均 P>0.05）。②连续给予12个动情周期后，与溶媒对照组相比，LNG-ECPs组大鼠血清中FSH［（0.21±0.17）U/L］、LH［（0.27±0.08）U/L］和孕激素［（0.68±0.23）μg/L］水平显著低于溶媒对照组［（1.00±0.82）U/L， P=0.043；（1.00±0.50）U/L， P=0.006；（1.00±0.20）μg/L， P=0.027］，雌二醇［（2.24±1.03）μg/L］和睾酮［（1.25±0.25）μg/L］水平明显高于溶媒对照组［（1.00±0.35）μg/L， P=0.019；（1.00±0.07）μg/L， P=0.044］；卵巢中原始卵泡数量（4.88±2.36）显著少于溶媒对照组（16.13±9.36， P=0.005），闭锁卵泡数量（24.38±5.01）显著高于溶媒对照组（19.13±2.30， P=0.018）；LNG-ECPs组中F1代仔鼠负重游泳时间［（157.13±32.29）s］明显低于溶媒对照组［（198.06±40.01）s， P=0.003］。停药恢复3个动情周期后，LNG-ECPs可造成大鼠血清中FSH［（2.48±1.18）U/L］、LH［（1.60±0.41）U/L］、睾酮［（1.37±0.23）μg/L］及FSH/LH值（1.61±0.41）显著高于溶媒对照组［（1.00±0.67）U/L， P=0.024；（1.00±0.27）U/L， P=0.014；（1.00±0.18）μg/L， P=0.011；1.00±0.49， P=0.042］，且雌激素水平［（0.49±0.15）μg/L］和AMH水平［（0.79±0.15）μg/L］显著低于溶媒对照组［（1.00±0.37）μg/L， P=0.011；（1.00±0.10）μg/L， P=0.016］，同时，大鼠卵巢中原始卵泡数量（6.25±5.06）仍显著少于溶媒对照组（12.00±5.56， P=0.048）；F1代仔鼠在旷场中的运动总距离［（89.85±36.98）m］以及负重游泳时长［（112.00±29.52）s］均显著低于溶媒对照组［（147.55±23.13）m， P<0.001；（137.69±25.85）s， P=0.014］。③转录组测序结果表明，与溶媒对照组相比，LNG-ECPs组雌性大鼠卵巢组织中存在 Cd5、 Cxcr1、 Lexm、 Fga、 Mybphl和 Gstm5等显著差异表达的基因，参与萜类骨架生物合成、卵巢类固醇生成和皮质醇的合成与分泌等类固醇激素合成相关过程，还涉及碳代谢、丁酸甲酯代谢和半胱氨酸等物质代谢过程，以及细胞因子-细胞因子受体相互作用、病毒蛋白与细胞因子及细胞因子受体的相互作用等免疫调节过程。 结论:在雌性大鼠中，短期重复（<12个周期）给予LNG-ECPs对雌鼠生育力及其F1代仔鼠生长发育和行为学未见明显影响；而长期重复（12个周期）给予LNG-ECPs会导致卵巢功能损伤，并会对F1代仔鼠的健康产生负面影响，停药恢复3个动情周期后仍未见明显改善。

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)对小鼠卵巢类固醇合成相关基因表达的影响及其机制.方法 利用四环素可逆调节VEGF表达的转基因小鼠模型,采用聚合酶链反应(PCR)法鉴定小鼠基因型,通过喂食强力霉素将20只小鼠分为VEGF表达正常组(Dox+)与VEGF表达抑制组(Dox-)(n=10).采用Western blotting检测卵巢组织中VEGF蛋白的表达情况;荧光定量PCR检测VEGF、VEGF受体2(KDR)及已知在卵泡发育中发挥作用的基因卵泡刺激素(FSH)、抑制素B(INHBB)mRNA的表达情况.HE染色观察卵巢组织的变化.取小鼠卵巢组织提取总RNA进行转录组测序,并通过FPKM、log2FC值分析相关差异基因.结果 与Dox+组比较,Dox-组VEGF mRNA和蛋白水平明显降低,KDR mRNA水平明显降低(P<0.05).HE染色结果显示,与Dox+组比较,Dox-组卵泡发育障碍,并出现闭锁卵泡.根据测序结果分析筛选出两组小鼠的卵泡发育相关基因、类固醇合成相关基因具有明显差异(P<0.05);富集分析发现小鼠卵巢中VEGF主要参与调控卵巢类固醇生成等通路.荧光定量PCR结果显示,与Dox+组相比,Dox-组小鼠卵巢组织中卵泡发育相关基因(INHBB、FSHR)明显上调(P<0.05),类固醇合成的关键基因(StAR、CYP11A1、3β-HSD)明显下调(P<0.05),定量结果与测序结果基本一致.结论 VEGF抑制可使小鼠卵泡发育障碍,其可能的机制是通过下调卵巢类固醇合成相关基因FSH、INHBB的表达从而阻碍胆固醇代谢来实现的.

目的 探讨慢病毒载体介导的类固醇生成因子-1(SF-1)沉默对人子宫内膜基质细胞(hESCs)蜕膜化进程的影响及机制.方法 收集子宫内膜异位症(EM)患者与正常妊娠者的子宫内膜组织,通过Real-time PCR和免疫组织化学染色检测SF-1的差异表达情况.从正常妊娠者的子宫内膜组织中分离并鉴定hESCs,将hESCs分为对照组、雌二醇(E2)+孕酮(P4)组、短发夹RNA(shRNA,sh)-正常对照(NC)+E2+P4 组、sh-SF-1+E2+P4 组,进行对应处理后,倒置显微镜下观察hESCs形态变化,Real-time PCR和Western blotting分别检测细胞内人胰岛素样生长因子结合蛋白 1(IGFBP-1)、泌乳素(PRL)的mRNA表达水平和蛋白表达水平,流式细胞术测定细胞周期分布,免疫荧光染色观察细胞内自噬标记物微管相关蛋白轻链 3(LC3)表达情况,Western blotting测定细胞内自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、Beclin-1表达水平.结果 EM患者子宫内膜组织中SF-1 mRNA相对表达量和SF-1蛋白阳性率均高于正常妊娠者子宫内膜组织(P<0.05).与sh-NC+E2+P4 组比较,sh-SF-1+E2+P4 组细胞多为长梭形,未见明显蜕膜化,IGFBP1、PRL的 mRNA相对表达量与蛋白相对表达量均显著下调(P<0.05),G0/G1 期细胞比例显著减少而S期细胞比例显著增加(P<0.05),细胞内LC3 荧光表达增强,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著升高,Beclin-1 蛋白相对表达量也显著上调(P<0.05).结论 EM 患者子宫内膜组织内SF-1 表达升高,通过慢病毒载体介导的SF-1 沉默能够抑制hESCs蜕膜化过程,该作用可能与调控细胞自噬水平相关.

[目的]基于网络药理学方法及分子对接技术,探讨补骨脂是否可能促进儿童性早熟及其潜在机制.[方法]通过BATMAN-TCM在线平台获取补骨脂主要活性成分及其作用靶点,从GeneCards数据库中获取性早熟相关疾病靶点,采用Cytoscape 3.7.1软件构建"活性成分-疾病靶点"可视化网络.基于STRING在线数据库进行蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)的网络图构建.使用Metascape在线工具进行靶点基因的基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路的富集分析.从PubChem数据库中获取主要活性成分结构,从RCSB PDB数据库中获取核心靶点结构,导入Autodock进行分子对接,最后利用PyMOL软件绘制分子对接模拟图.[结果]得到12种补骨脂的活性成分,涉及274个靶点,其中11种活性成分和98个靶点与性早熟相关.主要活性化合物为豆甾醇、补骨脂酚、异补骨脂素、补骨脂查尔酮、补骨脂乙素、甲氧基补骨脂素,主要靶点有雌激素受体1(ESR1)、雌激素受体2(ESR2)、胰岛素样生长因子1(IGF1)、孕酮受体(PGR),主要涉及卵巢类固醇生成通路、Hippo信号通路.分子对接结果表明这些活性化合物与靶标具有良好的结合作用.[结论]补骨脂存在促进儿童性发育的可能性及具有潜在药理作用机制,分析结果可为儿童性早熟、青春期早发育等临床防治提供理论参考.

洋地黄毒苷作为中药洋地黄中重要的次生代谢产物,是临床中最常用的强心药物之一.3β-羟基类固醇脱氢酶(3βHSD)是洋地黄毒苷生物合成途径酶,属于短链脱氢酶/还原酶(SDR)家族,起到氧化和异构前体化合物甾醇的作用,参与强心苷类化合物的生物合成.该研究从洋地黄中首次克隆得到2 个3βHSD基因,实验结果显示:Dp3βHSD1 开放阅读框为780 bp,编码 259 个氨基酸;Dp3βHSD2 开放阅读框为774 bp,编码257 个氨基酸.Dp3βHSD1/2 均具有TGxxxA/GxG辅因子结合位点和YxxxK催化位点基序,含有SDR酶的活性位点和NAD(P)结合位点.通过体外酶促试验证实Dp3βHSD1/2 均能催化孕烯醇酮生成洋地黄毒苷前体化合物黄体酮,且 Dp3βHSD1 较 Dp3βHSD2 具有更强的催化能力.基因表达水平分析表明Dp3βHSD1 基因在叶中的表达水平显著高于Dp3βHSD2,而洋地黄毒苷在叶中特异性富集,基于以上结果推测洋地黄毒苷生物合成途径中孕烯醇酮脱氢生成黄体酮过程主要由Dp3βHSD1 催化完成.该研究成功解析了功能性 3β-羟基类固醇脱氢酶,为进一步解析洋地黄中强心苷类化合物的生物合成途径奠定基础.

目的 探讨临床无功能腺瘤中碳水化合物硫转移酶(CHST)家族基因的RNA表达水平及其临床意义.方法 收集90例临床无功能腺瘤的组织样本,反转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测样本中的CHST1、CHST2、CHST7、CHST8、促卵泡激素亚单位p(FSHb)、POU结构域转录因子1(POU1F1)和类固醇生成因子1(SF-1)mRNA的表达水平;分析CHST家族mRNA水平和患者临床病理特征的关系;受试者工作特征(ROC)筛选具有诊断无功能腺瘤谱系分化的CHST分子.结果 体积大的肿瘤CHST1基因和CHST7基因表达水平高于体积小的肿瘤(P=0.014,P=0.044),女性患者CHST2基因表达水平高于男性患者(P=0.016),侵袭性肿瘤的CHST8基因表达水平低于非侵袭肿瘤(P=0.044).按照SF-1染色强弱分组,各组CHST1、CHST2、CHST7、CHST8基因表达水平的差异有统计学意义(P＜0.05);按照PIT1染色强弱分组,各组CHST1、CHST7基因表达水平的差异有统计学意义(P＜0.01).相关性分析显示,CHST1水平与肿瘤体积和POU1F1水平呈正相关(r=0.322,P=0.002;r=0.686,P＜0.001),与NR5A1水平呈负相关(r=-0.227,P=0.032);CHST7 水平与 POU1F1 水平呈正相关(r=0.774,P＜0.001);CHST8 与 FSHb、NR5A1 水平呈正相关(r=0.485,P＜0.001;r=0.725,P＜0.001).诊断未成熟 POU1F1 谱系,CHST1 的ROC 曲线下面积(AUC)为 0.750(P=0.023);诊断 SF-1 谱系,CHST8 的 AUC 为 0.776(P=0.008),CHST1联合CHST8的AUC为0.823(P=0.002).结论 CHST家族参与临床无功能腺瘤的增殖和分化,CHST1联合CHST8具有诊断SF-1谱系分化的价值.