目的:探讨坐骨神经损伤后长链非编码RNA（LncRNA）差异表达的基因，以及LncRNA MX1对大鼠雪旺细胞迁移、增殖能力的影响。方法:选取10周龄无特定病原体级雄性SD大鼠24只，随机分为0 d（T0）、3 d（T1）、7 d（T2）和14 d（T3）4组，每组6只，建立坐骨神经损伤动物模型。分别于模型建立后第0、3、7、14天取相应组大鼠坐骨神经损伤处的残端组织提取RNA，制备RNA基因芯片进行Heatmap聚类分析，筛选出各个时间点发生差异表达的基因，并选择其中差异表达显著的基因LncRNA MX1。培养iCell-r030大鼠雪旺细胞，分为对照组、Control siRNA组（siRNA组）和LncRNA MX1 siRNA组（siRNA-MX1组），使用相应试剂进行转染。转染后采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测3组雪旺细胞的LncRNA MX1mRNA表达情况，采用Transwell小室检测雪旺细胞的迁移能力，采用5-乙炔基-2'-脱氧尿苷（EDU）实验检测雪旺细胞的增殖能力。结果:各组大鼠均造模成功，实验过程中无大鼠死亡。大鼠损伤坐骨神经组织LncRNA差异基因Heatmap聚类分析的热图显示，与T0组比：T1组共3 066个LncRNA基因发生差异性表达，其中1 634个LncRNA基因表达上调，1 432个LncRNA基因表达下调；T2组共2 498个LncRNA基因发生差异性表达，其中1 634个LncRNA基因表达上调，864个LncRNA基因表达下调；T3组3 567个LncRNA基因发生差异性表达，其中有1 643个LncRNA基因表达上调，1 924个 LncRNA基因表达下调。各组差异表达的LncRNA基因中LncRNA MX1的差异倍数数值较大，差异表达显著。大鼠雪旺细胞qRT-PCR结果显示，转染LncRNA MX1 siRNA后，siRNA-MX1组LncRNA MX1的相对表达量为1.0±0.2，低于对照组的2.3±0.2和siRNA组的2.2±0.2，差异有统计学意义（ F=78.47， P<0.001）；而对照组和siRNA组组间差异无统计学意义（ P>0.05）。迁移、增殖试验结果显示，siRNA-MX1组细胞迁移数量为（24.1±4.2）个、EDU阳性细胞与DAPI阳性细胞的比率为27.5%±2.8%，低于对照组的（50.3±7.8）个、44.1%±7.2%和siRNA组的（49.2±6.2）个、41.8%±7.0%，差异均有统计学意义（ F=93.15、121.26， P值均<0.001）；而对照组和siRNA组间差异均无统计学意义（ P值均>0.05）。 结论:大鼠坐骨神经损伤后LncRNA MX1差异表达显著，下调LncRNA MX1在大鼠雪旺细胞中的表达可显著降低细胞的迁移、增殖能力。

周围神经系统是覆盖全身的神经网络,但也因其分布广泛而更易受到损伤,随着周围神经损伤发病率的逐年增高,神经损伤后再生与修复已成为各类神经科学的研究重点.周围神经的再生机制与多种细胞种群有关,特别是雪旺细胞(Schwann cells,SCs)和巨噬细胞,它们是周围神经内包含最重要的两类细胞,参与周围神经生长、修复、重建的各个过程,并从炎症反应、细胞碎片清除、营养支持、轴突再生等方面促进神经损伤的修复.本文分别从SCs和巨噬细胞在周围神经再生修复过程中的作用及二者的交互作用等方面进行综述,以期为周围神经损伤的基础和临床研究提供新思路.

目的 采用网络药理学及分子对接技术探究鸡血藤治疗糖尿病周围神经病变(diabetic peripheral neuropathy,DPN)的活性成分及机制.方法 基于 TCMSP、GeneCards、String、Uniprot等数据库获取鸡血藤活性成分及DPN靶点,利用GO、KEGG数据库进行功能富集分析,对预测的关键活性化合物和靶点进行分子对接实验.使用UPLC-MS/MS测定鸡血藤水提物化学成分,结合网络药理学推测鸡血藤对DPN可能发挥作用的成分,并通过细胞实验验证鸡血藤活性成分芒柄花黄素对高糖环境下雪旺细胞的保护作用.结果 鸡血藤治疗DPN的可能机制是通过作用于白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)、信号传导转录激活因子 3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)等靶点影响DPN的AGE-RAGE信号通路,黄酮类化合物是其发挥疗效的物质基础.鉴定出鸡血藤水提物中9 种化学成分,包括芒柄花黄素、芒柄花苷等.细胞实验证实芒柄花黄素通过抑制STAT3-NF κB信号通路减轻高糖引起的雪旺细胞(schwann cell,SCs)炎症反应,减少SCs凋亡,具有抗DPN的潜力.结论 鸡血藤中以芒柄花黄素为代表的黄酮类成分可能通过抑制AGE-RAGE通路中的炎症反应治疗DPN.

我们采用雌性食蟹猴腓肠神经为模型,目的在于探索一种利用少量周围神经组织在较短时间内获取大量高纯度雪旺细胞(SCs)的方法,为其临床应用奠定基础[1].本研究旨在探讨非人灵长类动物高纯度SCs原代培养方法.一、材料与方法雌性食蟹猴5只[syxk(津)2014-0002],体重(3.70±0.19) kg,实验过程经天津医科大学伦理委员会批准(伦审100702).麻醉后暴露双侧腓肠神经并结扎,7d后取出结扎远端的腓肠神经.剥除神经束膜及周围组织,剪碎至1 mm3,加入5ml0.2％胰蛋白酶(Sigma公司,T6424)和0.2％Ⅱ型胶原酶混合消化液(Sigma公司,C6885,4∶1),消化30 ～ 35 min至无明显组织块后终止消化,离心,弃上清.重悬细胞并计数,分别接种于层粘连蛋白包被的5个25 cm2培养瓶中,密度为(3.10±0.17)×105/ml.

目的 研究自组装多肽水凝胶的表征及其生物相容性、促轴突再生的作用.方法 本文制备两种分别模拟神经生长因子(NGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)的功能化自组装多肽,通过圆二色谱分析、扫描电镜和原子力显微镜观察其表征,并将其用于培养雪旺细胞和PC12细胞.结果 扫描电镜结果表明这种纳米纤维水凝胶具有类似细胞外基质的三维网络结构,圆二色谱分析和原子力显微镜结果显示该水凝胶具有典型的 β折叠的色谱.体外结果表明雪旺细胞能很好地在多肽水凝胶中生长、铺展,同时PC12细胞能在多肽水凝胶中长出不同长度的轴突.结论 自组装多肽水凝胶具有类似细胞外基质的纳米纤维结构,与神经类细胞的生物相容性良好,并且能够促进轴突生长.

目的 探讨复合脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)的脱细胞异种神经联合富血小板血浆(platelet rich plasma,PRP)修复兔面神经损伤的早期效果.方法 取 15 只 3 月龄雌性 SD 大鼠双侧坐骨神经进行脱细胞处理,作为异种神经移植体.取成年新西兰大耳白兔颈背部脂肪垫,采用Ⅰ型胶原酶单独消化法分离培养 ADSCs;兔耳静脉采血后经两步离心法提取 PRP;观察不同体积分数 PRP 对 ADSCs 增殖的影响,以及诱导其为类雪旺细胞可行性.取第 3 代 ADSCs,CM-Dil 活细胞染色剂标记后,荧光显微镜观察细胞标记及传代后荧光衰减情况.另取 32 只新西兰大耳白兔建立左侧面神经 1 cm 长缺损模型,随机分成 4 组(n=8),A、B、C、D组分别采用 CM-Dil-ADSCs 复合脱细胞异种神经+自体PRP、CM-Dil-ADSCs 复合脱细胞异种神经、脱细胞异种神经、自体神经移植修复神经缺损.术后 1、8 周静态下测量各组动物左侧上唇与面正中线成角(θ 角);4、8 周神经电生理检测记录神经传导速度;8 周荧光显微镜观察 A、B 组再生神经远近端 CM-Dil-ADSCs 数量,各组再生神经甲苯胺蓝染色计数有髓神经纤维、透射电镜观察再生神经纤维结构.结果 5％～20％ PRP 均能促进 ADSCs 增殖,经 20％ PRP诱导后细胞 S-100 免疫荧光染色呈阳性.ADSCs 经 CM-Dil 标记后荧光显微镜下观察示细胞标记率达90％ 以上,被标记细胞传代后细胞增殖良好,传代后荧光稍衰减.术后各组动物均存活至实验完成.术后 1 周各组动物面部均发生不同程度功能障碍,A、B、C、D 组左侧 θ 角分别为(53.4±2.5)、(54.0±2.6)、(53.7±2.4)、(53.0±2.1)°,均显著低于健侧(P<0.05);术后 8 周分别为(61.9±4.7)、(56.8±4.2)、(54.6±3.8)、(63.8±5.8)°,与健侧及术后 1 周比较差异均有统计学意义(P<0.05).大体观察各组动物再生神经完整性及连续性均良好.术后 4、8 周神经电生理检测示,A、D 组神经传导速度均显著快于 B、C 组,B 组快于 C 组(P<0.05),A、D 组间比较差异无统计学意义(P>0.05).术后 8 周荧光显微镜观察示,A 组移植神经远、近端横断面均可见大量 CM-Dil-ADSCs通过,B 组通过细胞相对较少.甲苯胺蓝染色示,A、D 组有髓神经纤维密度均显著高于 B、C 组,B 组高于 C 组(P<0.05);A、D 组间差异无统计学意义(P>0.05).透射电镜观察示,D 组有髓神经纤维鞘直径大、壁厚,形态规则;A 组髓鞘形态与 D 组相似;B、C 组髓鞘形态不规则,直径小、壁薄.结论 ADSCs 可以作为种子细胞在体内存活,并可在 PRP 诱导下分化为类雪旺细胞,与脱细胞异种神经复合后修复兔周围神经损伤可获得较好效果.

目的 探究舒筋祛痹汤对腰椎间盘突出症(LDH)大鼠磷脂酶A2(PLA2)活性、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平及椎间盘退变的影响.方法 将60只SD雄性大鼠随机分为正常组、西医组、中医组各20只,除正常组大鼠正常环境下继续饲养以外,西医组、中医组建立LDH模型,并分别给予西药双氯芬酸钠肠溶片、中药舒筋祛痹汤连续灌胃给药14 d.于制模后3、7、14d分别取出移植髓核观察移植髓核组织内PLA2活性,并于断头处死大鼠后取血测定血清IL-6、TNF-α 浓度,取L5神经根组织,常规脱蜡、HE染色、脱水、封片后观察病理改变.结果制模成功经大鼠灌胃后第3天,中药组、西药组大鼠髓核组织中PLA2活性达到最高,均显著高于正常组(P<0.05);此时中药组髓核组织中PLA2活性略高于西药组,但差异无显著性(P>0.05).第7、14天中药组、西药组髓核组织中的PLA2活性均显著较第3天降低(P<0.05),且第7、14天中药组髓核组织中PLA2活性均略低于西药组,但差异无显著性(P>0.05).制模成功经大鼠灌胃后第14天西药组、中药组血清IL-6、TNF-α 浓度略高于正常组,但差异无显著性(P>0.05);且中药组血清IL-6、TNF-α 浓度略低于西药组,但差异无显著性(P>0.05).中药组大鼠神经根髓鞘、轴突及雪旺细胞病理变化较西药组改善明显.结论 舒筋祛痹汤可降低 LDH 大鼠突出髓核组织 PLA2活性及血清 IL-6、TNF-α 浓度,抑制炎症介质合成,从而起到与抗炎镇痛类西药类似效果,对延缓椎间盘退变有重要作用.

造血微环境是造血干细胞(HSC)自我更新、定向分化、维持相对稳态的重要场所,能够通过多种细胞成分因子调节造血活动. HSC是血液系统中的原始多能干细胞,存在于骨髓中,具有长期自我更新的能力和分化成各类成熟血细胞的潜能,在调节和维持体内血液系统各个细胞组分的生理平衡中具有重要作用.造血微环境时刻影响着HSC的发生发展,但造血微环境与HSC之间的具体作用机制仍不明确.文章就造血微环境的主要成分、信号通路以及其异常改变对疾病的影响进行综述.

目的 探讨化学联合冻融方式处理的脱细胞异种神经支架复合体外培养的同种异体类雪旺细胞后修复面神经损伤的实验效果.方法 取日本大耳白兔腹股沟脂肪垫,通过单酶消化法体外培养脂肪间充质干细胞(adiopose-deribed stem cell,ADSCs),并通过化学试剂及自体富血小板血浆(platelet rich plasma,PRP)体外定向诱导成类雪旺细胞(schwann cell-like cell lineages,SCs-like);取Wistar大鼠双侧坐骨神经,通过化学联合冻融的方式制备脱细胞异种神经支架.使用DiOC16(3)荧光探针进行类雪旺细胞的标记.建立兔面神经5 mm的缺损模型,以不同移植物确立3组实验分组(n=10):A组(自体神经修复组);B组(复合DiOC16-SCs的异种神经支架修复组);C组(单纯异种神经支架修复组).术后8周通过再生神经的电生理、有髓神经纤维密度及特异性蛋白定量评价神经功能的早期修复效果.结果 术后各组动物分笼饲养,均存活良好.解剖时发现各组动物再生神经连续性及完整性均良好,未形成明显的神经瘤.术后8周各组术侧动作电位潜伏期延长,A、B组明显快于C组,且A组与B、C组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).甲苯胺蓝染色计算再生有髓神经纤维密度,A、B组明显高于C组(P＜0.05),A、B组之间比较差异无统计学意义.再生神经内特异性蛋白神经生长因子(nerve growth factor,NGF)及脑源性神经生长因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)染色观察,可见A、B组内NGF及BDNF的蛋白含量均高于C组(P＜0.05),且A组NGF蛋白含量最高,B组BDNF蛋白含量最高.结论 复合体外定向诱导的类雪旺细胞的脱细胞异种神经支架在修复面神经5 mm的缺损中早期获得的修复效果与自体神经的修复效果相近.

2例类结核型麻风病伴发麻风性周围神经病，经神经活检超微结构观察，证实有间质性神经炎改变，同时发现麻风菌存在于雪旺细胞、吞噬细胞和神经内膜内。复习了11例麻风性神经病的临床表现，结合文献对本病的临床特点、诊断和鉴别诊断，以及病理改变与类型、发病机理等进行了讨论。