目的 优选土茯苓乙酸乙酯部位总黄酮的纯化条件,建立其特征图谱,并评价其对重金属铅解毒作用,以期为土茯苓解铅毒作用方面的开发和应用提供数据基础及参考.方法 采用紫外分光光度法测定总黄酮的含量,并以此作为评价指标,考察6种不同色谱填料对土茯苓乙酸乙酯部位总黄酮纯化性能,筛选最佳纯化工艺;采用高效液相色谱法建立纯化后总黄酮的特征图谱;并以重金属铅致小鼠慢性毒性为动物模型,以铅含量、生化指标及组织形态学检测结果为指标,评价纯化后总黄酮解铅毒的活性.结果 土茯苓乙酸乙酯部位总黄酮最佳纯化工艺为选用微孔树脂(MCI)填料,25％乙醇水溶液为上样溶剂冲洗3倍柱体积(VB),60％乙醇水溶液为洗脱溶剂洗脱3 VB,总黄酮含量78.0％.建立了总黄酮高效液相色谱(HPLC)特征图谱,指认了 5个特征共有峰.与模型组对比,总黄酮组小鼠采食量增加,血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、肌酐(Cr)、血尿素氮(BUN)水平趋于正常,小鼠血液、肝脏和肾脏铅含量显著降低;病理切片结果显示,总黄酮对于铅诱导的肝、肾功能损伤具有一定的保护作用.结论 土茯苓总黄酮纯化工艺具有结果稳定、操作方便、含量较高特点.总黄酮特征图谱精密度、重复性和稳定性良好.纯化后的总黄酮对重金属铅具有显著解毒作用.研究结果可为土茯苓解铅毒的药效物质基础阐明提供参考,并为研发解铅毒新药提供理论基础.

目的 使用一种在微米尺度空间对流体进行操控,以模拟体内微环境为主要特征的微流控肝器官芯片技术,评价雷公藤提取物(Tripterygium wilfordii extract,TWE)和雷公藤多苷片提取物(Tripterygium Glycosides Tablet extract,TGE)的肝脏毒性,比较微流控-精密肝切片、静态-精密肝切片、微流控-HepaRG细胞培养体系的差异性.方法 将新鲜的大鼠肝脏进行精密切片处理后,分别置于静态/微流控培养体系中进行培养,微流控-HepaRG细胞培养体系则是将HepaRG细胞接种到己预先接种人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)的培养小室中加药培养;TWE终质量浓度为0.30、0.60、1.20mg/mL(以生药量计),TGE终质量浓度为31.25、62.50、125.00μg/mL,共孵育24h后进行肝脏损伤标志物的测定及形态学观察.结果 在不额外添加药物的正常培养情况下,微流控/静态精密肝切片培养上清中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、总胆汁酸(total biliary acid,TBA)的表达均明显高于微流控-HepaRG细胞培养体系.与TWE和TGE共培养后,微流控-精密肝切片培养体系中,高剂量的TWE和TGE均可导致培养上清中ALT、LDH和谷氨酰转移酶(gamma glutamyl transferase,GGT)活性的显著升高,TWE还可以显著升高总胆红素(total bilirubin,TBil)的含量,并显示出一定的量-毒关系;而在静态-精密肝切片培养体系中,仅中剂量的TGE可导致ALT和LDH活性的显著升高,且未见剂量相关性;在微流控-HepaRG细胞培养体系中,仅GGT的含量显 著升高.组织病理学检查结果显示,TWE和TGE低、中、高剂量对共培养体系中的HUVECs形态均未见明显影响,说明受试药不影响共培养体系的血管仿生结构;TWE和TGE在微流控培养体系或静态培养体系下,低、中、高剂量均会对精密肝切片造成不同程度的损伤,肝细胞出现不同程度肿胀,弥漫性肝细胞核溶解、消失,肝细胞索结构松散,但仅在微流控-精密肝切片培养体系下,形态学的改变呈现出一定的剂量相关性;在微流控-HepaRG细胞培养体系中,仅高剂量的TWE和TGE可导致细胞形态的明显改变.结论 在微流控-精密肝切片培养体系下,TWE和TGE所造成的肝损伤特点一致,具有明显的量-毒关系,表明微流控肝器官芯片技术可以更灵敏、更准确地反映出受试物对肝脏的损伤情况,且有可能成为临床前中药肝毒性评价的新的技术手段.

目的:建立同时测定ICR小鼠肝脏中15种胆汁酸的LC-MS/MS法,将其应用到雷公藤甲素肝毒性研究中.方法:小鼠经腹腔注射1 mg·kg-1雷公藤甲素后,进行血清生化、肝病理切片检查.将肝脏用0.1％甲酸-75％乙腈混合液进行匀浆并经样品处理,采用Ultimate(R) AQ-C18色谱柱,流速0.3 mL·min-1,进行15种胆汁酸色谱分离.结果:LC-MS/MS法测定的15种胆汁酸在2.8～8 000.0 nmol· L-1浓度范围内具有较好的线性关系,加样回收率在85.8％～114.0％之间,日内、日间精密度均在0.7％～10.8％范围内;腹腔注射1mg·kg-1雷公藤甲素后小鼠出现了肝毒性,雷公藤甲素组的胆汁酸浓度有明显上升.结论:该方法准确、稳定性好、灵敏度高,能满足ICR小鼠肝脏中多种胆汁酸的含量测定,为雷公藤甲素肝毒性研究提供了进一步的理论基础.

目的 建立血液中乙醛和头孢哌酮的测定方法并通过动物模型和实际案例结合.对方法进行可行性验证.方法 血液样品采用顶空气相色谱法检测乙醛,液相色谱串联质谱法检测头孢哌酮.动物实验中,A组大鼠注射头孢哌酮并灌胃白酒,B组注射头孢哌酮并灌胃纯净水,C组注射生理盐水并灌胃白酒,收集血液测定乙醛和头孢哌酮,肝脏经甲醛固定后观察病理变化.结果 血液样品中乙醛在0.5～50mg/100mL范围内线性关系良好,相关系数R2大于0.9999,检出限和定量限分别为0.1mg/100mL和0.5mg/100mL.血液样品中头孢哌酮在0.01～1μg/g范围内线性关系良好,R2大于0.99,检出限和定量限分别为0.005μg/mL和0.01μg/mL.血液样品中乙醛和头孢哌酮的准确度为88.79％～114.19％,日内和日间精密度均小于15％.A组大鼠血液中测出的头孢哌酮含量与B组无异,乙醛含量高于C组,且病理切片显示肝静脉淤血肝窦扩张水肿其余无特异性变化.案件应用中,在死者血液中测出高于正常含量的乙醛.结论 本研究建立的血液中的乙醛含量和头孢哌酮含量方法准确、灵敏,可以为疑似双硫仑样反应的相关法医学鉴定案件中毒物分析提供依据.

脂肪肝是仅次于病毒性肝炎的第二大肝病.脂肪肝的发病率不断升高,且发病年龄日趋年轻化,正严重威胁人类的健康.脂肪肝包含一系列病理症状,随病情进展,患者可发生脂肪性肝炎、肝硬化和肝细胞性肝癌.一般而言,脂肪肝属于可逆性疾病,通过早期诊断和及时治疗往往能恢复正常.细胞模型是研究脂肪肝病理机制的重要途径.该文讨论了脂肪肝的发病机制,并从细胞模型使用的细胞类型(动物和人的原代肝细胞、永生细胞系、诱导多能干细胞分化而来的类肝细胞和精密肝切片)、培养方式(单独培养、共培养、三维培养)和诱导方式(高脂、高糖和酒精)这三个方面对近年来常用的细胞培养模型进行总结和分析,以期为脂肪肝的研究和药物筛选提供参考.