目的:初步探讨抗中性粒细胞胞质髓过氧化物酶抗体相关性血管炎（MPO-AAV）患者中性粒细胞肽酰基精氨酸脱亚胺酶4（PAD4）表达的变化及临床意义。方法:选择39例初诊未治的MPO-AAV患者为病例组，记录患者伯明翰血管炎活动度积分（BVAS），选择39名健康志愿者为对照组。采用流式细胞术检测2组受试者外周血中性粒细胞PAD4的表达水平，ELISA法检测外周血中性粒细胞胞外陷阱（NETs）、补体C5活化片段a（C5a）及抗中性粒细胞胞质髓过氧化物酶抗体（MPO-ANCA）水平。采用 t检验比较2组间PAD4、C5a及NETs水平差异，采用Spearman相关分析和多元线性回归分析病例组内各检测指标与BVAS间关系。 结果:病例组表达PAD4中性粒细胞比例及PAD4表达的平均荧光强度（MIF）均显著高于对照组[分别为（71±11）%与（26±6）%， t=22.456， P<0.01；（33±4）与（14±4）， t=18.668， P<0.01]病例组NETs和C5a水平均高于对照组[分别为（0.62±0.22）与（0.26±0.15）， t=8.466， P<0.01；（4.6±1.0）ng/ml与（2.9±1.0）ng/ml， t=7.697， P<0.01]。相关分析结果显示病例组BVAS分别与表达PAD4的中性粒细胞百分比、PAD4的MFI、NETs、C5a和MPO-ANCA呈正相关（分别为 r=0.843， P<0.01； r=0.821， P<0.01； r=0.411 1， P<0.01； r=0.613， P<0.01； r=0.790， P<0.01）。多元线性回归分析显示表达PAD4中性粒细胞百分比和MPO-ANCA水平分别是BVAS的独立影响因素（分别为 β=0.325， t=5.889， P<0.01； β=0.796， t=4.298， P<0.01）。 结论:活动期MPO-AAV患者外周血中性粒细胞PDA4表达水平显著增强，且是影响MPO-AAV疾病活动度的独立因素，干预中性粒细胞PAD4的表达可能是MPO-AAV治疗的潜在新靶点。

类风湿关节炎（RA）是一种以慢性滑膜炎、关节软骨及骨破坏为特征的自身免疫性疾病。抗瓜氨酸化蛋白/多肽抗体（ACPAs）是RA特异性自身抗体。近年来研究发现，RA患者血清中还可以检测到针对肽酰基精氨酸脱亚胺酶4（PAD4）的自身抗体，该抗体具有较高的特异性，有助于RA的诊断。抗PAD4抗体与RA的临床表现、治疗反应以及预后相关，有望成为RA预后判断的生物标志物。本文就抗PAD4抗体在RA中的作用进行综述。

目的:探讨微小RNA-4298(miR-4298)靶向抑制肽酰精氨酸脱亚胺基酶4(PADI4)表达在组蛋白去乙酰化酶抑制因子曲古抑菌素A(TSA)诱导U251细胞凋亡中的作用机制。方法:实验分为TSA组(0.2 μmol/L TSA处理)和对照组。采用CCK8法检测TSA对U251细胞增殖的影响；流式细胞术检测药物作用后U251细胞的凋亡水平；反转录PCR和蛋白质印迹法测定miR-4298干扰后PADI4基因和蛋白表达的变化；Luciferase实验测定miR-4298对PADI4的3′UTR区靶向结合与荧光素酶活性的影响；PADI4转染U251细胞，观察miR-4298对凋亡功能的拯救作用。实验各分为3组，即NC组、miR-4298 mimic组、TSA+miR-4298 mimic组以及NC组、miR-4298 inhibitor组、TSA+miR-4298 inhibitor组。结果:U251细胞经0.2 μmol/L的TSA作用4 d后，对照组的吸光度( A)值为1.168±0.148，高于TSA组的0.737±0.007，差异有统计学意义( t＝4.948， P＝0.008)。与对照组相比，经0.2 μmol/L TSA处理48 h后，U251细胞发生明显的凋亡现象(27.62%±3.49% vs. 4.99%±0.13%， t＝11.190， P<0.001)。与药物作用前相比，TSA作用48 h后，PADI4基因表达(0.386±0.020 vs. 0.903±0.021)和蛋白表达水平(0.276±0.041 vs. 0.777±0.031)均有所降低，差异均有统计学意义( t＝30.400， P<0.001； t＝16.770，) P<0.001。miR-4298在TSA诱导U251细胞凋亡的过程中表达升高(2.573±0.289 vs. 1.003±0.136； t＝8.487， P＝0.001)，并且miR-4298与PADI4的表达呈负相关( r＝-0.877， P＝0.002)。Luciferase实验证实，miR-4298对野生型PADI4的3′UTR区具有靶向结合和荧光素酶抑制作用。与NC组(0.920±0.026)相比，miR-4298 mimic组(0.413±0.049)和TSA+miR-4298 mimic组(0.213±0.035)PADI4基因相对表达水平均有所降低，差异均有统计学意义(均 P<0.001)；其蛋白表达水平变化与基因变化趋势一致。与NC组(3.78%±0.68%)相比，miR-4298 mimic组(7.96%±1.10%)和TSA+miR-4298 mimic组(13.74%±1.26%)诱导细胞凋亡的水平均有所增加，差异有统计学意义( P＝0.005； P<0.001)。与NC组(0.183±0.025)相比，miR-4298 inhibitor组(0.483±0.032)和TSA+miR-4298 inhibitor组(0.386±0.025)PADI4基因表达均有所升高，差异有统计学意义( P<0.001； P＝0.015)。蛋白表达水平变化与基因变化趋势一致。与NC组(4.96%±0.59%)相比，miR-4298 inhibitor组(23.83%±2.20%)和TSA+miR-4298 inhibitor组(9.55%±1.49%)诱导细胞凋亡的水平均有所增加，差异有统计学意义(均 P<0.001)。救援实验中，miR-4298 mimic组明显升高PADI4表达水平( P<0.001)，miR-4298 mimic+PADI4组则相对逆转PADI4表达水平( P＝0.002)。 结论:miR-4298可通过靶向调控PADI4基因表达参与U251细胞的凋亡发生过程，miR-4298可能是脑胶质瘤靶向干预治疗的靶点。

目的:评估类风湿关节炎（RA）患者中抗PAD2自身抗体（α-PAD2）和抗PAD4自身抗体（α-PAD4）联合检测的临床应用价值。方法:本研究收集了2018年11月至2019年11月北京大学人民医院住院的RA患者148例和非RA的关节炎对照（DC组）35例。同时收集了2019年6—7月北京大学人民医院体检的健康体检者44名。通过ELISA方法检测血清中α-PAD2和α-PAD4水平。根据需要，采用Mann-Whitney U检验、Kruskal-Wallis（KW）检验、χ2检验或Fisher精确检验进行统计学分析。相关性分析采用逻辑回归模型。 结果:α-PAD2和α-PAD4在RA组、DC组及HC组中的阳性率分别为26.4%（39/148）和20.9%（31/148）、5.7%（2/35）和5.7%（2/35）、4.5%（2/44）和2.3%（1/44）。α-PAD4阳性的RA患者较α-PAD4阴性患者病程更长（17.3±13.2年比8.6±10.2年， P<0.001），其肺间质性疾病（ILD）发生率更高（54.8%比25.6%， P=0.002）。α-PAD2与RA-ILD间未发现显著相关（ OR：0.797， P=0.579），而α-PAD4与RA-ILD间存在显著相关（ OR：3.521， P=0.002）。对于血清阳性的RA患者，α-PAD4抗体仅与RA-ILD呈现弱相关（ OR：2.324， P=0.046），而联合检测α-PAD2和α-PAD4，即α-PAD2阴性同时α-PAD4阳性可以显著提高其与RA-ILD的相关性（ OR：4.059， P=0.007）。 结论:α-PAD2存在于RA中，其对于RA的诊断具有一定的潜在价值。此外，α-PAD2联合α-PAD4检测可以增强α-PAD4对于RA-ILD风险的预测价值。因此，α-PAD2作为RA新的潜在生物标志物，可能作为现有RA血清学标志物的重要补充。

肽基精氨酸脱亚胺酶（PAD）是一类可以介导修饰翻译后的蛋白质瓜氨酸化的钙依赖性半胱氨酸水解酶家族，目前发现家族中包括：PADI1、PADI2、PADI3、PADI4和PADI6。本文详述了人类PAD家族各成员的结构特征、具有的相关疾病区域特点及研究进展。

目的 探究肽酰基精氨酸脱亚胺酶4(PAD4)介导的中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)在甲状腺癌细胞增殖、侵袭和细胞周期中的作用机制以及临床相关性研究.方法 收集60例甲状腺癌患者和60例健康受试者的外周血,ELISA检测血清中PAD4和组蛋白H3瓜氨酸化(H3cit)水平,并分析甲状腺癌患者血清中PAD4和H3cit水平与疾病进展的相关性.提取甲状腺癌患者和健康受试者外周血中性粒细胞,qRT-PCR检测PAD4 mRNA表达水平,离子霉素刺激和绿菁染色检测NETs形成水平.将NETs、GSK484与人甲状腺癌细胞株CAL-62共孵育,分为Control组、NETs组和NETs+GSK484组.采用CCK-8法、Transwell法和流式细胞术分别检测细胞增殖和侵袭水平以及细胞周期进展.结果 与健康受试者相比,甲状腺癌患者血清中PAD4和H3cit水平升高(P<0.05),且PAD4和H3cit水平呈正相关(P<0.05).甲状腺癌患者的PAD4和H3cit水平均与TNM分期有关(P<0.05).与健康受试者相比,甲状腺癌患者外周血中性粒细胞PAD4 mRNA表达及NETs形成水平升高(P<0.05).与Control组相比,NETs组细胞增殖、侵袭水平升高(P<0.05),S期细胞比例升高(P<0.05),G1期细胞比例降低(P<0.05).GSK484可抑制NETs形成.与NETs组相比,NETs+GSK484组细胞增殖、侵袭水平降低(P<0.05),S期细胞比例降低(P<0.05),G1期细胞比例升高(P<0.05).结论 PAD4介导的NETs通过激活细胞周期进展,促进甲状腺癌细胞增殖和侵袭,加速甲状腺癌疾病进展.

目的 探究Cl-amidine对巨噬细胞M1型极化的影响以及其对强直性脊柱炎(AS)的临床指导意义.方法 选择60例AS患者,根据疾病活动度评分将患者分为低AS疾病组和高AS疾病组,同期纳入30例健康受试者作为对照组.EILSA检测三组人群血清PAD4、iNOS和骨形成指标BGP水平,皮尔逊相关系数分析肽酰基精氨酸脱亚胺酶4(PAD4)、一氧化氮合酶(iNOS)和骨钙素(BGP)的相关性;流式细胞术检测3组人群外周血M1型巨噬细胞(CD68+CD86+)比例.培养THP-1单核细胞系,体外诱导为M1型巨噬细胞,期间加入Cl-amidine共孵育,分组为:M0组、M1组、M1+Cl-amidine组,Western blot检测各组细胞PAD4和iNOS蛋白表达水平.RNA-seq检测M1组、M1+Cl-amidine组细胞差异表达基因并进行KEGG分析,Western blot检测JAK3、p-JAK3、STAT5、p-STAT5蛋白表达水平.结果 与对照组相比,低AS疾病组PAD4、iNOS水平升高,BGP水平降低,M1型巨噬细胞比例升高;与低AS疾病组相比,高AS疾病组PAD4、iNOS水平升高,BGP水平降低,M1型巨噬细胞比例升高.PAD4水平与iNOS水平呈正相关,PAD4、iNOS水平与BGP水平呈负相关.与MO组相比,M1组PAD4和iNOS蛋白表达升高;与M1组相比,M1+Cl-amidine组有163个基因表达上调,272个基因表达下调.上调基因主要参与JAK-STAT信号通路.与M1组相比,M1+Cl-amidine 组 iNOS、p-JAK3/JAK3、p-STAT5/STAT5 蛋白表达降低.结论 PAD4 和 M1 型巨噬细胞水平与AS疾病程度呈正相关.PAD4抑制剂Cl-amidine可能通过JAK3-STAT5信号通路抑制巨噬细胞向M1极化,该作用机制有助于AS临床治疗的研究.

目的 研究p16、肽酰基精氨酸脱亚胺酶(PADI)4 在食管癌组织中的表达及其与放射治疗后预后的相关性.方法 选取58 例接受放射治疗的食管癌患者,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法对癌组织中p16 和PADI4 表达水平的进行测定.所有患者采用三维适形放疗,并对临床放疗效果进行评价.分析p16 和PADI4 表达水平与患者临床病理特征相关性及其与放射治疗后预后的关系.结果 与癌旁组织相比,p16 在癌组织中表达水平明显较低,PADI4 在癌组织中表达水平明显较高(P＜0.05),p16 在癌组织中表达水平与PADI4 表达水平呈显著负相关(r=-0.874,P＜0.001).58 例食管癌患者放射治疗后,21 例完全缓解,33 例部分缓解,4 例无效.放疗不同敏感性患者癌组织中p16 和PADI4 的表达水平比较差异均有统计学意义(P＜0.05).完全缓解患者癌组织中p16 表达水平显著高于部分缓解患者和无效患者(P＜0.05),部分缓解患者癌组织中p16 表达水平显著高于无效患者(P＜0.05).完全缓解患者癌组织中PADI4 表达水平显著低于部分缓解患者和无效患者(P＜0.05),部分缓解患者癌组织中PADI4 表达水平显著低于无效患者(P＜0.05).食管癌患者癌组织中p16 和PADI4 表达水平与TNM分期、浸润程度及淋巴结转移有密切关系(P＜0.05).对58 例食管癌患者随访3 年,死亡例数28 例,存活例数30 例,3 年中的生存率为51.72%.其中 p16 高表达组和p16 低表达组 3 年存活率差异有统计学意义(P＜0.05).PADI4 高表达和低表达组3 年生存率比较差异显著(P＜0.05).结论 p16、PADI4 有望成为监测放疗敏感性的监测指标,且与放射治疗后预后的关系密切.

目的 探讨肽基精氨酸脱亚胺酶4 (PADI4)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达特点及其与临床病理特征、预后的关系.方法 采用实时定量聚合酶链反应方法检测NSCLC组织及配对癌旁组织中PADI4 mRNA表达水平,免疫组织化学染色方法检测NSCLC组织及癌旁组织中PADI4蛋白的表达情况,并分析其表达与患者临床病理特征及预后的关系.结果 NSCLC组织中PADI4的mRNA相对表达量及蛋白表达情况均高于癌旁正常组织(t=-80.384,x2=27.66,P值均＜0.001),且进一步分析表明PADI4表达水平与肿瘤TNM分期有关(x2=22.225,P＜0.05).生存分析结果显示,PADI4高表达组的生存时间显著低于低表达组(P＜0.001),且预后更差.Cox多因素回归分析证实PADI4表达情况可作为判定NSCLC患者预后的独立危险因素(P＜0.05).结论 PADI4在NSCLC癌组织中高表达,且与TNM分期相关,可作为判定预后的独立因子.

目的:制备介孔二氧化硅纳米载体(MSN)并包载肽酰基精氨酸脱亚胺酶4(PADI4)小干扰RNA(PADI4-siRNA-MSN),阐明PADI4-siRNA-MSN对类风湿关节炎成纤维滑膜细胞(RA-FLS)凋亡的影响.方法:采用模板法合成MSN,包被阳离子聚合物聚乙烯亚胺(PEI)及荧光标记分子罗丹明B(RhB),检测其表征,包括粒径、Zeta电势、荧光和形貌.设计并合成2对FAM标记的针对PADI4基因编码区的干扰核苷酸链(si-944、si-1225)及阴性对照si-NC,制备PADI4-siRNA-MSN和si-NC-MSN,转染RA-FLS,流式细胞术(FCM)鉴定转染率.采用荧光定量PCR、蛋白印迹技术检测转染48 h后,干扰组和阴性对照组细胞PADI4表达量,FCM检测细胞凋亡率,激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察PADI4-siRNA-MSN胞内分布.所有数据采用配对t检验进行分析.结果:MSN经表征检测显示已成功制备并包被RhB、PEI,FCM结果显示转染率为93.3％(si-944)和91.9％(si-1225).si-NC组中的PADI4 mRNA水平为1.23±0.27;si-944、si-1225干扰组中分别为0.35±0.12、0.44±0.12,均显著低于阴性对照组(P<0.05).蛋白印迹结果与PCR结果一致.与si-NC组细胞凋亡率(8.83±0.15)相比,si-944和si-1225组细胞凋亡率(11.72±0.82,13.00±1.42)显著增加(P<0.05).CLSM结果显示PADI4-siRNA-MSN分布于核周.结论:PADI4-siRNA-MSN成功制备,并转染RA-FLS,有效沉默PADI4基因,显著增加RA-FLS的凋亡率.PADI4-siRNA-MSN在抑制RA-FLS增殖、促进凋亡中具有一定的应用前景.