目的:评价Ras同源家族成员A(RhoA)在氢减轻脂多糖(LPS)致小鼠肺微血管内皮细胞屏障功能损伤中的作用。方法:小鼠肺微血管内皮细胞培养于含10%胎牛血清和1%青链双抗的DMEM/F12培养基中，传代至第4～6代的细胞用于实验，采用随机数字表法分为6组( n＝36)：对照组(A组)、富氢液组(B组)、LPS组(C组)、LPS＋富氢液组(D组)、LPS＋RhoA抑制剂C3酶组(E组)和LPS＋富氢液＋RhoA激活剂U-46619组(F组)。A组、C组和E组采用正常培养基培养，B组、D组和F组采用含饱和氢气培养基培养，C组、D组、E组和F组加入LPS，终浓度1 μg/ml；E组于加入LPS前2 h加入C3酶，终浓度3 μg/ml；F组于加入LPS前3 h加入U-46619，终浓度10 mg/ml。分别于LPS孵育后6、12和24 h时采用Western blot法检测血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)和紧密连接蛋白(occludin)的表达；于LPS孵育后24 h时采用LDH法测定细胞LDH释放率，MTT法测定细胞活力，GST pull-down法测定RhoA活性。 结果:与A组比较，C组孵育6、12和24 h时occludin和VE-cadherin表达下调，孵育24 h时细胞活力降低，LDH释放率和RhoA活性升高( P<0.05)；与C组比较，D组孵育6、12和24 h时occludin和VE-cadherin表达上调，孵育24 h时细胞活力升高，LDH释放率和RhoA活性降低( P<0.05)；与C组比较，E组孵育6、12和24 h时occludin和VE-cadherin表达上调，孵育24 h时细胞活力升高，LDH释放率和RhoA活性降低( P<0.05)；与D组比较，F组孵育6、12和24 h时occludin和VE-cadherin表达下调，孵育24 h时细胞活力降低，LDH释放率和RhoA活性升高( P<0.05)。 结论:RhoA参与了氢减轻LPS致小鼠肺微血管内皮细胞屏障功能损伤的过程。

外界理化因素和情绪改变等会诱发玫瑰痤疮患者出现面部阵发性潮红，并伴有灼热、刺痛和瘙痒感。大量研究提示，离子通道激活后释放神经肽诱导的神经血管失调和神经源性炎症与玫瑰痤疮发病相关。本文综述近年来离子通道与玫瑰痤疮发病机制的研究进展，为以离子通道作为玫瑰痤疮的治疗靶点提供依据。

目的:基于生物信息学分析慢性阻塞性肺疾病(COPD)状态对非小细胞肺癌(NSCLC)的影响，以期揭示COPD状态对非小细胞肺癌的影响。方法:从癌症基因组图谱数据库中下载161例肺癌患者的相关信息并根据病理类型与肺功能结果进行分组。在同一病理下，比较有无COPD的两组的差异。京都基因与基因组百科全书(KEGG)和基因本体论(GO)分析用于功能富集分析，进行加权共表达网络分析(WGCNA)并构建蛋白互作网络(PPI)筛选核心枢纽基因。所有计量资料组间比较采用 t检验，计数资料组间比较采用 χ2检验。 结果:本研究纳入了161例肺癌患者的样本数据。有、无COPD在临床特征、体细胞基因突变频率以及免疫细胞浸润上差异无统计学意义( P>0.05)。在鳞癌及腺癌中，COPD组别中大量代谢有关通路上调，而细胞趋化能力的调节等通路下调。后续WGCNA及PPI分析鉴定出钠离子通道α2亚基(SCN2A)、富酪蛋白(STATH)、细胞色素P450家族成员(CYP1A2及CYP1B1)、γ-氨基丁酸A型受体亚基(GABRA1)紧密连接蛋白17 (CLDN17)、调节突触膜胞吐蛋白1 (RIMS1)、维生素D结合蛋白(GC)以及血浆铜蓝蛋白(CP)可能是潜在枢纽基因。只有在腺癌中，COPD组的患者年龄组成比率上[<60岁：80.8%(21/26)；>60岁：19.2%(5/26)]相比无COPD组[<60岁：56.1%(32/57)；>60岁：43.9%(25/57)]，结果差异有统计学意义( χ2＝4.693， P<0.05)。 结论:COPD状态对肺癌的预后，体细胞突变等无贡献，并提出9个潜在的COPD型肺癌关键枢纽基因。

目的:探讨黄花蒿花粉对鼻黏膜上皮细胞（HNEpC）紧密连接的损伤作用及机制。方法:体外培养HNEpC，采用不同质量浓度黄花蒿花粉（0、20、40、80、100、160、200 μg/ml）分别干预细胞24 h，CCK-8法检测细胞增殖活性；p38丝裂原素活化蛋白激酶（p38MAPK）抑制剂SB203580干预HNEpC前后，Western Blot法检测p38MAPK信号通路表达及其磷酸化水平；免疫荧光化学染色法、Western Blot法和实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）观察细胞紧密连接Occludin、Claudin-1的表达和分布情况。采用SPSS 21.0软件分析数据。结果:CCK-8结果显示，与对照组相比，不同质量浓度黄花蒿花粉干预6 h后，HNEpC增殖活性均增高（ P值均<0.05）；干预12 h后，20、40、80、100、160 μg/ml组的HNEpC增殖活性未见明显改变（ P值均>0.05），200 μg/ml组降低（ P<0.05）；干预24 h后，20、40 μg/ml组的细胞增殖活性未见明显改变（ P值均>0.05），80、100、160、200 μg/ml组降低（ P值均<0.05）。免疫荧光染色可见正常对照组Occludin和Claudin-1蛋白定位于细胞膜上，表达多，围绕细胞膜形成环状结构；而在高浓度黄花蒿花粉干预下，其表达水平下降，出现断裂、模糊，分布不均匀。Western Blot和qPCR实验结果表明，干预24 h后，黄花蒿花粉（40、80、100、160、200 μg/ml）干预组HNEpC Claudin-1蛋白及其mRNA表达水平较对照组降低（mRNA表达量分别为0.567±0.214、0.443±0.109、0.462±0.160、0.497±0.134、0.388±0.076比1.001±0.067， P值均<0.05），而Occludin蛋白及其mRNA仅在200 μg/ml黄花蒿花粉处理组降低（mRNA表达量为0.631±0.109比1.016±0.026， P<0.05），其他处理组均增高（mRNA表达量分别为1.258±0.134、1.827±0.1034、2.429±0.077、1.707±0.085、1.477±0.066比1.016±0.026， P值均<0.05）。Western Blot结果表明，100、160、200 μg/ml黄花蒿花粉干预24 h后，磷酸化p38MAPK（p-p38MAPK）表达增加。SB203580能够抑制黄花蒿花粉引起的紧密连接蛋白Occludin表达下降（mRNA表达量为1.255±0.179比0.631±0.109， P<0.05），而对Claudin-1蛋白表达无影响。 结论:黄花蒿花粉可能通过激活p38MAPK信号通路，破坏HNEpC的紧密连接。

目的:基于生物信息学方法筛选肾透明细胞癌关键基因，识别可能的微RNA（miRNA）-mRNA作用轴，探讨相关基因在肾透明细胞癌组织和细胞中的表达。方法:选取基因表达综合（GEO）数据库基因表达谱GSE40435、GSE71302数据集，肾透明细胞癌TCGA-KIRC数据集来自癌症基因组图谱（TCGA）数据库。采用R软件筛选差异表达的mRNA和miRNA，并对mRNA进行功能富集分析。采用STRING数据库和Cytoscape软件进行蛋白质互作分析。采用Oncomir数据库筛选预后相关的差异表达miRNA。采用TargetScan和miRDB靶基因预测工具筛选miRNA可能调控的靶基因。收集2021年6月至12月山西医科大学第一医院收治的34例肾透明细胞癌患者的组织样本及临床资料，并选择正常肾细胞株293T和肾透明细胞癌细胞株786O。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测基因的相对表达量；蛋白质印迹法、免疫组织化学染色法检测目的蛋白的表达水平；双荧光素酶报告基因实验验证基因间的靶向关系。结果:差异分析筛选得到1 351个差异表达mRNA和50个差异表达miRNA。功能富集分析提示肾透明细胞癌中脂肪酸代谢、异生物质代谢等途径被抑制，细胞凋亡、免疫应答途径被激活。蛋白质互作分析提示肾透明细胞癌中信号转导、蛋白泛素化等途径起到关键作用。筛选结果显示miRNA-224-5p（miR-224-5p）与肾透明细胞癌进展关系最紧密，且在肿瘤组织中高表达，其预后相关靶基因为NEDD4L。肾透明细胞癌组织与癌旁组织的NEDD4L mRNA相对表达量分别为0.138±0.103、1.000±0.026（ t＝46.23， P<0.05）；miR-224-5p相对表达量分别为1.000±0.043、0.129±0.108（ t＝45.28， P<0.05）。不同分级及分期肾透明细胞癌组织NEDD4L mRNA、miR-224-5p的表达差异均有统计学意义（均 P<0.05）。NEDD4L蛋白在肾透明细胞癌中表达降低。293T与786O细胞中NEDD4L基因相对表达量分别为1.000±0.125、0.210±0.044 （ t＝17.52， P<0.05）；miR-224-5p基因相对表达量分别为0.209±0.049、1.000±0.234（ t＝10.609， P<0.05）。转染后的293T细胞样本中，miRNA模拟物组与阴性对照组的NEDD4L mRNA相对表达量分别为0.236±0.062、1.000±0.024，差异有统计学意义（ t＝43.56， P<0.05）。NEDD4L蛋白在miRNA模拟物组中表达降低。双荧光素酶报告基因实验提示NEDD4L是miR-224-5p的直接靶基因。 结论:在肾透明细胞癌中，miR-224-5p靶向调节NEDD4L表达，这一机制可能与肾透明细胞癌的发生、发展有关。

目的:通过研究基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）2(MMP-2）和基质金属蛋白酶9(MMP-9）在噪声暴露前、后豚鼠耳蜗血管纹上表达和分布的差异，探索MMP在噪声破坏血-迷路屏障完整性中的作用以及广谱MMP抑制剂多西环素对血-迷路屏障噪声性损伤的保护作用，为进一步研究和防治噪声性聋提供参考。方法:45只健康成年豚鼠采用随机数表法随机分为对照组（15只，腹腔注射生理盐水，连续4 d）、单纯噪声暴露组（15只，120 dB SPL白噪声每天暴露4 h，连续2 d；腹腔注射生理盐水，连续4 d）及噪声暴露+多西环素组（15只，120 dB SPL白噪声每天暴露4 h，连续2 d；腹腔注射多西环素50 mg/kg/d，连续4 d）。应用免疫荧光染色、蛋白质印迹（western blot）、荧光实时定量PCR等方法分析对比对照组、单纯噪声暴露组及噪声暴露+多西环素组豚鼠耳蜗血管纹上MMP-2和MMP-9的分布和表达差异。观察三组豚鼠血管纹上紧密连接蛋白ZO-1的变化，探索噪声损伤对血管纹的影响。应用听性脑干反应（ABR）测试分析三组豚鼠听力学差异。静脉注射伊文思蓝，观察血管纹毛细血管渗漏情况在三组间的差异，了解噪声导致血-迷路屏障通透性改变的情况。应用SPSS 22.0软件进行统计学分析。结果:单纯噪声暴露组与噪声暴露+多西环素组在噪声暴露后2 h听力改变无明显差异；噪声暴露后7 d、14 d和28 d，噪声暴露+多西环素组听力恢复明显好于单纯噪声暴露组（ P值均<0.05）。免疫荧光染色发现对照组MMP-2和MMP-9在血管纹上仅有少量表达，ZO-1呈致密线性表达；单纯噪声暴露组可见血管纹上MMP-2和MMP-9表达显著增加，ZO-1结构松散、不连续；噪声暴露+多西环素组血管纹上MMP-2和MMP-9的表达与对照组无明显差异（ P值均>0.05)，比单纯噪声暴露组明显减少（ P值均<0.05)，ZO-1仅出现少量破口，但整体仍保持致密的线性结构。血管纹毛细血管中伊文思蓝染料在单纯噪声暴露组的渗漏显著增加，噪声暴露+多西环素组与对照组相比，差异无统计学意义（ P>0.05)。 结论:MMP-2、MMP-9引起的紧密连接蛋白结构的损伤可能是噪声暴露后豚鼠血-迷路屏障破坏的重要机制，多西环素可抑制MMP的分泌，在一定程度上保护血-迷路屏障的完整性，减轻噪声暴露导致的听力损伤。

目的:运用单细胞转录组测序分析牙周炎小鼠脑膜的生物学改变，探讨牙周炎小鼠脑膜生物学改变与认知障碍的相关性。方法:将30只C57BL/6小鼠按随机数字表法随机分为2组（每组15只），在对照组小鼠上颌双颊侧局部涂抹不含牙龈卟啉单胞菌（Pg）的2%羧甲基纤维素（CMC），在实验组小鼠上颌双颊侧局部涂抹Pg W83和2%CMC的混合物，3次/周，持续16周。观察对照组和实验组小鼠上颌牙槽骨吸收情况、自主活动能力与认知功能的变化、大脑皮层中小胶质细胞和星形胶质细胞激活情况、检测小鼠脑膜和大脑内紧密连接蛋白Occludin mRNA表达情况。然后使用统一流形逼近与投影（UMAP）算法对单细胞转录组各细胞亚群数据进行降维整合处理。对内皮细胞差异基因进行基因本体（GO）和京都基因和基因组数据库（KEGG）富集分析，进一步采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）验证差异基因转录激活因子3（Atf3）、含载脂蛋白L域1（Apold1）的表达情况。结果:亚甲蓝染色实验显示，实验组小鼠上颌颊、腭侧釉质牙骨质界到牙槽嵴顶的距离［分别为（185.60±17.60）、（206.90±13.37）μm］均显著大于对照组［分别为（135.33±9.57）、（163.05±14.98）μm］（ t=5.02， P=0.002； t=4.37， P=0.005）。旷场实验显示实验组小鼠的总路程和平均速度［（971.88±164.57）cm和（3.25±0.55）cm/s］与对照组［（914.24±278.81）cm和（3.05±0.93）cm/s］相比差异均无统计学意义（ t=0.65， P=0.525； t=0.65， P=0.520）。新物体识别实验中实验组小鼠相对辨别指数［（48.02±16.92）%］显著低于对照组［（66.27±17.90）%］（ t=2.40， P=0.027）。Y迷宫实验显示，实验组小鼠的自发交替率［（50.99±14.17）%］显著低于对照组［（63.56±11.88）%］（ t=2.33， P=0.030）。免疫组化染色结果显示，实验组小鼠脑内小胶质细胞和星形胶质细胞被激活。RT-qPCR结果显示，实验组小鼠脑膜和大脑中紧密连接蛋白Occludin mRNA的表达（分别为0.61±0.10、0.64±0.20）均显著低于对照组（分别为1.02±0.25、1.04±0.31）（ t=3.47， P=0.010； t=2.66， P=0.024）。单细胞转录组测序显示，脑膜存在11种细胞类型，包括内皮细胞、成纤维细胞、免疫细胞等，其中内皮细胞占比最大［对照组为26.47%（1 589/6 004），实验组为26.26%（807/3 073）］，是脑膜中最主要的细胞类型；实验组小鼠脑膜组织中粒细胞比例［11.65%（358/3 073）］较对照组［5.56%（334/6 004）］增加。进一步聚类分析内皮细胞，GO富集分析显示差异基因与血管生成、细胞黏附、细胞凋亡等有关；KEGG分析显示差异基因与白细胞介素-17信号通路、松弛素信号通路等相关。RT-qPCR显示，实验组小鼠脑膜组织中Atf3和Apold1 mRNA表达（分别为0.42±0.24、0.54±0.27）均显著低于对照组（分别为1.03±0.26、1.02±0.23）（ t=3.88， P=0.005； t=3.02， P=0.017）。 结论:Pg W83慢性感染的牙周炎小鼠认知能力下降，存在神经炎症，屏障功能改变；单细胞转录组测序发现脑膜组织存在免疫细胞浸润，Atf3和Apold1基因表达下调，提示脑膜免疫和屏障功能的改变在牙周炎导致的认知障碍中发挥作用。

目的:探讨七氟醚通过炎症类受体蛋白-3（Nod-like receptor associated protein 3, NLRP3）介导的细胞焦亡途径对蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage, SAH）后早期脑损伤（early brain injury, EBI）的影响。方法:108只10~12周雄性C57BL/6小鼠，按随机数字表法分为3组（每组36只），假手术组（A组）、模型组（B组）和模型+七氟醚组（C组）。B组和C组采用线穿法制作SAH模型，A组做相同的手术，但不刺破大脑中动脉。C组于SAH模型建立后1 h，持续吸入3%七氟醚和空气1 h。各组小鼠进行SAH分级和神经功能评分，测定脑水含量，伊文思蓝（evans blue, EB）染色法计算EB渗出量评判小鼠血脑屏障通透性；Western blot法检测与血脑屏障通透性密切相关的基质金属蛋白酶9（matrix metalloprotein 9, MMP-9）和紧密连接蛋白[闭合小环蛋白-1（zonula occludens-1, ZO-1）、咬合蛋白（occludin）、靠停蛋白-5（claudin-5）]及NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing CARD, ASC）、裂解半胱氨酸蛋白酶（caspase-1）、IL-18、IL-1β的表达；实时荧光定量PCR检测NLRP3 mRNA、caspase-1 mRNA的表达水平；caspase-1活性检测试剂盒检测caspase-1的活性；TUNEL和NeuN双重染色检测神经细胞焦亡情况。结果:SAH分级和神经功能评分显示：与A组比较，B组的SAH分级明显增高（ P<0.05）；与B组比较，C组SAH分级明显降低（ P<0.05）；与C组比较，B组的神经系统评分明显降低（ P<0.05）。脑水含量及EB渗出量检测显示：与A组比较，B组的脑含水量与EB渗出量明显增加（ P<0.05）；与B组比较，C组的脑含水量与EB渗出量明显减少（ P<0.05）。Western blot检测结果显示：与A组比较，B组中ZO-1、occludin和claudin-5蛋白表达水平明显降低（ P<0.05），NLRP3、ASC、裂解caspase-1、IL-1β和IL-18的蛋白表达水平明显增高（ P<0.05）；与B组比较，C组中ZO-1、occludin和claudin-5表达水平明显增高（ P<0.05），NLRP3、ASC、裂解caspase-1、IL-1β和IL-18表达水平明显降低（ P<0.05）；与A组比较，B组中MMP-9表达水平明显增高；与B组比较，C组中MMP-9表达水平明显降低（ P<0.05）。实时荧光定量PCR实验显示：与A组比较，B组中NLRP3和caspase-1的mRNA水平明显增加；与B组比较，C组中NLRP3和caspase-1的mRNA水平明显降低（ P<0.05）。与A组比较，B组的caspase-1活性明显增加；与B组比较，C组的caspase-1的活性明显减少（ P<0.05）。TUNEL染色检测显示：与A组比较，B组的TUNEL阳性神经元细胞数量明显升高（ P<0.05）；与B组比较，C组TUNEL神经元细胞阳性数量明显降低（ P<0.05）。 结论:七氟醚能够抑制SAH后NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡，改善SAH后的EBI情况。

目的:探索小鼠肝细胞、肝星状细胞（HSC）和淋巴细胞分离、纯化的简易可行方案。方法:雄性C57bl/6小鼠采用经肝门静脉灌注消化法获取细胞悬液，随后percoll非连续密度梯度离心法分离、纯化细胞。台盼蓝拒染法检测细胞存活率，糖原染色、细胞角蛋白18和透射电子显微镜鉴定肝细胞，α-平滑肌肌动蛋白联合结蛋白免疫荧光鉴定HSC，流式细胞术分析肝脏淋巴细胞亚群。结果:体质量约22 g的小鼠其肝脏经分离纯化后可获得约2.7×10 7个肝细胞，约5.7×10 5个HSC，约4.6×10 6个肝单个核细胞，各组分中细胞存活率均> 95%。肝细胞中可见成片紫红色糖原颗粒和细胞角蛋白18，电镜结果显示肝细胞内存在丰富的细胞器，细胞间存在紧密连接；HSC表达α-平滑肌肌动蛋白和结蛋白；流式细胞术显示肝单个核细胞中包括CD4、CD8、自然杀伤细胞和自然杀伤T细胞等淋巴细胞亚群。 结论:肝门静脉灌注消化法可同步分离小鼠肝脏中多种原代细胞，具有简便、高效的特点。

目的:探讨不同剂量右美托咪定（Dex）对腹腔镜下妇科恶性肿瘤根治术患者紧密连接蛋白claudin-1及二胺氧化酶（DAO）水平的影响。方法:选取山西医科大学第二医院2019年1月至2020年1月拟择期行全身麻醉腹腔镜下根治术的妇科恶性肿瘤患者60例，其中子宫颈癌（Ⅰ~Ⅱ A期）43例，卵巢癌（Ⅰ A~Ⅲ C期）9例，子宫内膜癌（Ⅰ期）8例。按照随机数字表法将其分为对照组（C组）、低剂量Dex组（D 1组）、高剂量Dex组（D 2组），每组20例。D 1组于诱导后恒速静脉泵注Dex 0.5 μg·kg -1·h -1至手术结束前30 min；D 2组于诱导后恒速静脉泵注Dex 1.0 μg·kg -1·h -1至手术结束前30 min；C组采取同样方法计算，泵注等量0.9%氯化钠溶液。于麻醉诱导前10 min（T 1）、解除气腹后1 h（T 2）、解除气腹后12 h（T 3）抽取患者5 ml肱静脉血，分别检测claudin-1蛋白、DAO及血糖水平的变化。 结果:在T 1、T 2、T 3时刻，C组claudin-1表达水平分别为（77.05±17.61）pg/ml、（66.76±12.97）pg/ml、（55.93±12.71）pg/ml，差异具有统计学意义（ F=10.449， P<0.05）；DAO表达水平分别为（4.83±0.93）ng/ml、（5.62±1.01）ng/ml、（5.98±1.21）ng/ml，差异具有统计学意义（ F=6.139， P<0.05）；血糖水平分别为（4.82±0.66）mmol/L、（7.55±0.94）mmol/L、（6.51±0.54）mmol/L，差异具有统计学意义（ F=70.197， P<0.05）。T 2时刻，D 1组claudin-1表达水平为（69.12±13.02）pg/ml，与C组相比差异无统计学意义（ t=-0.575， P>0.05），D 2组claudin-1表达水平为（76.36±14.89）pg/ml，与C组相比有所上升，差异有统计学意义（ t=-2.175， P<0.05）。T 3时刻，D 1组、D 2组claudin-1表达水平分别为（66.14±14.36）pg/ml、（73.37±16.93）pg/ml，与C组相比均升高，差异均有统计学意义（ t值分别为-2.380、-3.682，均 P<0.05）。D 1、D 2组T 2时刻DAO表达水平分别为（5.02±0.84）ng/ml、（4.91±0.93）ng/ml，T 3时刻分别为（5.29±0.86）ng/ml、（5.20±0.98）ng/ml，与C组相比均降低，差异均有统计学意义（ t值分别为2.051、2.295、2.079、2.285，均 P<0.05）；D 1、D 2组T 2时刻血糖水平分别为（7.10±0.66）mmol/L、（6.77±0.97）mmol/L，T 3时刻分别为（5.95±0.94）mmol/L、（5.93±0.74）mmol/L，与C组相比均降低，差异均有统计学意义（ t值分别为2.565、5.374、2.293、2.765，均 P<0.05）。 结论:在腔镜妇科恶性肿瘤根治术中，持续输注Dex，可抑制长时间CO 2气腹带来的应激反应，调整患者claudin-1蛋白及DAO表达水平的改变，减轻肠黏膜细胞的损伤，有利于肠道功能恢复，其中高剂量Dex的作用优于低剂量Dex。