目的:探讨丁酸钠对严重烫伤小鼠肠道屏障的作用及相关机制。方法:将18只雌性8～12周龄C57BL/6小鼠按随机数字表法分为假伤组、单纯烫伤组、烫伤＋丁酸钠组，每组6只。将单纯烫伤组、烫伤＋丁酸钠组小鼠背部浸入90 ℃热水中9 s，造成30%体表总面积Ⅲ度烫伤；将假伤组小鼠背部浸入37 ℃温水中9 s模拟致假伤。3组小鼠均于伤后即刻腹腔内注射乳酸林格液1 mL。此外，烫伤＋丁酸钠组小鼠分别于伤前30 min及伤后即刻经腹腔注射300 mg/kg剂量丁酸钠溶液；假伤组及单纯烫伤组小鼠仅腹腔注射相同体积的无菌磷酸盐缓冲液。伤后24 h，取3组小鼠抽取门静脉血采用异硫氰酸荧光素-葡聚糖荧光探针示踪法检测肠道通透性，取回肠组织采用蛋白质印迹法检测肠黏膜带状闭合蛋白1(ZO-1)、闭合蛋白、密封蛋白1、密封蛋白2、核苷酸结合寡聚化结构域蛋白样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18蛋白表达，采用间接免疫荧光法检测肠黏膜ZO-1分布。对数据行单因素方差分析、LSD检验及Bonferroni校正。结果:(1)伤后24 h，假伤组、单纯烫伤组、烫伤＋丁酸钠组小鼠肠道通透性分别为0.88±0.19、2.62±0.48、1.23±0.16。与假伤组比较，单纯烫伤组小鼠肠道通透性明显增强( P<0.01)，烫伤＋丁酸钠组无明显变化( P>0.05)。与单纯烫伤组比较，烫伤＋丁酸钠组小鼠肠道通透性明显减弱( P<0.01)。(2)伤后24 h，与假伤组比较，单纯烫伤组和烫伤＋丁酸钠组小鼠肠黏膜紧密连接蛋白ZO-1、闭合蛋白及密封蛋白1表达量均明显降低( P<0.05)，密封蛋白2表达量明显增加( P<0.05)。伤后24 h，与单纯烫伤组比较，烫伤＋丁酸钠组小鼠肠黏膜ZO-1及闭合蛋白表达量明显增加( P<0.05)，密封蛋白2表达量明显减少( P<0.05)，密封蛋白1表达量无明显变化( P>0.05)。(3)伤后24 h，与假伤组比较，单纯烫伤组和烫伤＋丁酸钠组小鼠肠黏膜NLRP3、IL-1β、IL-18蛋白表达量均明显增加( P<0.05)；与单纯烫伤组比较，烫伤＋丁酸钠组小鼠肠黏膜NLRP3、IL-1β及IL-18蛋白表达量均明显减少( P<0.05)。(4)伤后24 h，假伤组小鼠肠黏膜ZO-1沿细胞膜均匀分布，光滑连续；单纯烫伤组小鼠肠黏膜ZO-1分布不规则，有断裂；烫伤＋丁酸钠组小鼠肠黏膜ZO-1分布改变较单纯烫伤组有所改善。 结论:丁酸钠能够抑制严重烫伤后小鼠肠黏膜NLRP3炎症小体激活，减少IL-1β和IL-18产生，从而减轻紧密连接蛋白表达和分布异常，保护肠道屏障功能。

报道1例编码紧密连接蛋白claudin-16的 CLDN16基因突变导致的家族性低镁血症高钙尿症和肾钙质沉着症（familial hypomagnesaemia with hypercalciuria and nephrocalcinosis，FHHNC）病例。患者女，18岁，临床表现为低镁血症、高钙尿症和肾钙质沉着症。FHHNC是一种罕见的常染色体隐性遗传病，需结合基因检测明确诊断，具有较高的进行性肾衰竭风险，目前尚缺乏有效的治疗措施，预后较差，故临床医生应提高对该疾病的重视。

目的:探讨内毒素致急性肺损伤（ALI）时核因子E2相关因子2（Nrf2）对细胞紧密连接蛋白Claudin-18的影响。方法:将18只健康雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为对照组、内毒素致ALI模型组（ALI组）及Nrf2激活剂叔丁基对苯二酚（tBHQ）预处理组（tBHQ+ALI组），每组6只。通过腹腔注射脂多糖（LPS）15 mg/kg制备小鼠内毒素致ALI模型；对照组注射等量磷酸盐缓冲液（PBS）。tBHQ+ALI组于制模前3 h分3次腹腔注射tBHQ，每次间隔1 h（合计50 mg/kg），最后一次注射tBHQ的同时给予LPS 15 mg/kg；对照组和模型组给予等量PBS，最后一次给药时分别注射PBS或LPS。注射LPS后12 h处死小鼠取肺组织，苏木素?-?伊红（HE）染色后，光镜下观察肺组织病理学改变，并计算肺损伤评分；测定肺湿/干质量比值（W/D）；采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测肺组织Nrf2蛋白表达；采用免疫组化法检测肺组织Claudin-18阳性表达。结果:对照组肺组织结构完整，无明显病理学改变。与对照组相比，ALI组肺泡间隔增宽，伴有炎症细胞浸润、毛细血管充血及组织水肿，肺损伤评分及肺W/D比值均明显升高〔肺损伤评分（分）：6.50±1.05比1.83±0.75，肺W/D比值：3.79±0.22比3.20±0.14，均 P<0.01〕，且肺组织Nrf2蛋白表达及Claudin-18阳性表达均明显降低〔Nrf2蛋白（Nrf2/β-actin）：0.41±0.33比1.22±0.33，Claudin-18（ A值）：0.28±0.07比0.44±0.10，均 P<0.05〕。tBHQ预处理后，肺组织病理损伤程度较ALI组明显减轻，肺泡间隔轻度异常，炎症细胞浸润及组织水肿减轻，肺损伤评分及肺W/D比值均明显降低〔肺损伤评分（分）：3.00±0.89比6.50±1.05，肺W/D比值：3.28±0.19比3.79±0.22，均 P<0.01〕，且肺组织Nrf2蛋白表达及Claudin-18阳性表达均明显升高〔Nrf2蛋白（Nrf2/β-actin）：1.26±0.09比0.41±0.33，Claudin-18（ A值）：0.45±0.04比0.28±0.07，均 P<0.05〕。 结论:Nrf2能通过上调Claudin-18表达减轻肺水肿，从而改善内毒素致ALI。

目的:探讨NOD样受体家族核苷酸结合寡聚化结构域样受体3（NLRP3）炎症小体活化在脓毒症大鼠肠道黏膜屏障破坏中的作用，以及乌司他丁（UTI）对脓毒症大鼠肠道核转录因子-κB（NF-κB）/NLRP3炎症小体信号通路表达的影响。方法:按照随机数字表法将64只雄性Wistar大鼠分为假手术（Sham）组、盲肠结扎穿孔术（CLP）组、UTI干预组（CLP术后1、6、12、18 h腹腔注射100 kU/kg UTI）和UTI预处理组（在UTI干预组基础上于CLP术前1 h腹腔注射100 kU/kg UTI），每组16只。观察大鼠24 h存活情况，于制模后24 h腹主动脉采血并处死大鼠取回肠组织。采用苏木素-伊红（HE）染色观察回肠病理学改变并进行回肠黏膜Chiu评分；用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、肠型脂肪酸结合蛋白（I-FABP）水平；用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测小肠组织核转录因子-κB p65（NF-κB p65）表达；用免疫组化法检测肠道紧密连接蛋白-1（Claudin-1）、闭合蛋白（Occludin）以及炎症小体NLRP3、凋亡相关斑点蛋白（ASC）、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1（caspase-1）的表达。结果:与Sham组相比，CLP组术后24 h存活率明显下降；组织病理学结果显示黏膜及黏膜下间质严重水肿，炎性细胞浸润明显，绒毛排列紊乱，部分腺体结构不完整、绒毛结构严重破坏，Chiu评分显著升高；血清TNF-α、IL-1β、I-FABP水平均明显升高；小肠组织NF-κB p65蛋白表达明显增加；小肠黏膜组织Claudin-1、Occludin表达减少，而炎症小体NLRP3、caspase-1、ASC表达增加。提示脓毒症大鼠小肠黏膜屏障功能障碍、黏膜通透性增加、紧密连接蛋白表达减少，NLRP3炎症小体及其上游分子NF-κB p65活化。与CLP组相比，给予UTI干预或UTI预处理后，脓毒症大鼠24 h存活率虽无明显差异（62.5%、68.8%比43.8%，均 P>0.05），但肠道组织损伤得到明显缓解，具体表现为：Chiu评分及血清TNF-α、IL-1β、I-FABP水平明显降低〔Chiu评分（分）：3.37±0.25、3.23±0.16比4.08±0.13，TNF-α（ng/L）：147.62±20.74、140.71±24.81比222.82±16.84，IL-1β（ng/L）：80.64±5.68、78.11±4.75比133.73±3.92，I-FABP（μg/L）：38.29±3.60、35.88±4.52比59.81±4.66，均 P<0.05〕，小肠组织NF-κB p65蛋白表达明显下降（NF-κB p65/β-actin：0.65±0.10、0.69±0.11比0.99±0.10，均 P<0.05），小肠组织Claudin-1、Occludin阳性表达有所升高〔Claudin-1阳性面积：（19.43±3.08）%、（23.99±6.27）%比（7.77±2.03）%，Occludin阳性面积：（19.58±4.75）%、（23.28±3.68）%比（11.69±4.30）%，均 P<0.05〕，而炎症小体NLRP3、caspase-1、ASC阳性表达有所降低〔NLRP3阳性面积：（7.80±3.14）%、（6.86±2.63）%比（14.44±3.68）%，caspase-1阳性面积：（10.62±3.52）%、（9.49±3.09）%比（26.69±8.05）%，ASC阳性面积：（9.95±2.81）%、（10.53±3.61）%比（24.16±5.48）%，均 P<0.05〕。但UTI干预组与UTI预处理组的改善作用差异均无统计学意义。 结论:脓毒症时肠道屏障功能障碍可能与肠黏膜中NLRP3炎症小体活化有关；UTI的肠道黏膜保护作用可能与抑制肠黏膜中NLRP3炎症小体活化有关，但UTI预处理与UTI干预比较并未有明显优势。

目的:探讨七氟醚通过炎症类受体蛋白-3（Nod-like receptor associated protein 3, NLRP3）介导的细胞焦亡途径对蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage, SAH）后早期脑损伤（early brain injury, EBI）的影响。方法:108只10~12周雄性C57BL/6小鼠，按随机数字表法分为3组（每组36只），假手术组（A组）、模型组（B组）和模型+七氟醚组（C组）。B组和C组采用线穿法制作SAH模型，A组做相同的手术，但不刺破大脑中动脉。C组于SAH模型建立后1 h，持续吸入3%七氟醚和空气1 h。各组小鼠进行SAH分级和神经功能评分，测定脑水含量，伊文思蓝（evans blue, EB）染色法计算EB渗出量评判小鼠血脑屏障通透性；Western blot法检测与血脑屏障通透性密切相关的基质金属蛋白酶9（matrix metalloprotein 9, MMP-9）和紧密连接蛋白[闭合小环蛋白-1（zonula occludens-1, ZO-1）、咬合蛋白（occludin）、靠停蛋白-5（claudin-5）]及NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing CARD, ASC）、裂解半胱氨酸蛋白酶（caspase-1）、IL-18、IL-1β的表达；实时荧光定量PCR检测NLRP3 mRNA、caspase-1 mRNA的表达水平；caspase-1活性检测试剂盒检测caspase-1的活性；TUNEL和NeuN双重染色检测神经细胞焦亡情况。结果:SAH分级和神经功能评分显示：与A组比较，B组的SAH分级明显增高（ P<0.05）；与B组比较，C组SAH分级明显降低（ P<0.05）；与C组比较，B组的神经系统评分明显降低（ P<0.05）。脑水含量及EB渗出量检测显示：与A组比较，B组的脑含水量与EB渗出量明显增加（ P<0.05）；与B组比较，C组的脑含水量与EB渗出量明显减少（ P<0.05）。Western blot检测结果显示：与A组比较，B组中ZO-1、occludin和claudin-5蛋白表达水平明显降低（ P<0.05），NLRP3、ASC、裂解caspase-1、IL-1β和IL-18的蛋白表达水平明显增高（ P<0.05）；与B组比较，C组中ZO-1、occludin和claudin-5表达水平明显增高（ P<0.05），NLRP3、ASC、裂解caspase-1、IL-1β和IL-18表达水平明显降低（ P<0.05）；与A组比较，B组中MMP-9表达水平明显增高；与B组比较，C组中MMP-9表达水平明显降低（ P<0.05）。实时荧光定量PCR实验显示：与A组比较，B组中NLRP3和caspase-1的mRNA水平明显增加；与B组比较，C组中NLRP3和caspase-1的mRNA水平明显降低（ P<0.05）。与A组比较，B组的caspase-1活性明显增加；与B组比较，C组的caspase-1的活性明显减少（ P<0.05）。TUNEL染色检测显示：与A组比较，B组的TUNEL阳性神经元细胞数量明显升高（ P<0.05）；与B组比较，C组TUNEL神经元细胞阳性数量明显降低（ P<0.05）。 结论:七氟醚能够抑制SAH后NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡，改善SAH后的EBI情况。

目的 探讨紧密连接蛋白5(Claudin-5)水平与老年脑卒中患者溶栓后出血转化(HT)风险的相关性.方法 选取2021年2月至2022年10月于联勤保障部队第九八○医院神经内科住院治疗的老年脑卒中患者192例,根据溶栓后48 h头颅CT或MRI结果分为HT组32例(脑实质血肿型14例,出血性脑梗死型18例)和非HT组160例.比较2组一般临床资料、实验室检查指标,采用多因素logistic回归分析老年脑卒中患者溶栓后HT风险的影响因素,绘制限制性立方样条图分析Claudin-5水平与老年脑卒中患者溶栓后HT风险的相关性.结果 HT组心房颤动、发病至溶栓时间、基线美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、空腹血糖、Claudin-5水平显著高于HT组(P＜0.05,P＜0.01).多因素logistic回归分析显示,发病至溶栓时间、基线NIHSS评分、空腹血糖、Claudin-5是老年脑卒中患者溶栓后HT的危险因素(OR=2.589,95％CI:1.202～5.573,P=0.015;OR=1.415,95％CI:1.213～1.651,P=0.000;OR=1.552,95％CI:1.014～2.375,P=0.043;OR=1.174,95％CI:1.076～1.281,P=0.000).限制性立方样条分析显示,Claudin-5水平与老年脑卒中患者溶栓后HT风险呈非线性关系(x2=12.380,P=0.006).结论 血清Claudin-5水平与老年脑卒中患者溶栓后HT有关,与HT呈剂量-反应关系.

目的 结合社会心理应激导致炎症性肠病、肠易激综合征等一系列疾病的特点,建立实验性慢性束缚小鼠肠道应激损伤模型,为探讨慢性束缚应激诱导胃肠病的致病机制以及防治措施奠定基础.方法 18只雄性SPF级BALB/c小鼠,适应7 d后,根据体重按随机数字表法分为2组,对照组及慢性束缚应激组.对小鼠进行束缚应激,每天3 h,连续束缚14 d,建立肠道损伤模型.通过观察体重、肠道组织病理形态变化、检测紧密连接蛋白表达、肠上皮细胞凋亡以及炎症细胞因子mRNA表达水平等指标对模型进行评价.结果 慢性束缚应激14 d,小鼠表现为体重减轻,十二指肠绒毛高度变短、隐窝结构异常、绒毛/隐窝比下降;结肠黏膜炎性细胞浸润、隐窝结构不规则.蛋白免疫印迹、免疫组化和免疫荧光染色结果显示,慢性束缚应激后小鼠十二指肠和结肠紧密连接蛋白Occludin、Claudin-1表达显著下降(P＜0.05);肠上皮细胞凋亡蛋白Cleaved-Caspase-3的表达显著增加(P＜0.05).此外,肠道炎症因子和趋化因子mRNA表达结果显示,慢性束缚应激14 d显著提高了小鼠十二指肠IL-1β、IL-6、MCP-1、TNF-α、IL-10基因的表达(P＜0.05);慢性束缚应激14 d显著提高了小鼠结肠IL-1β、IL-6、MCP-1的表达(P＜0.001).结论 利用小鼠行为限制装置对小鼠连续束缚14 d,导致应激小鼠肠道组织结构异常、肠屏障功能障碍、肠上皮细胞凋亡,引发肠道炎症反应,表明慢性束缚应激肠道损伤小鼠模型构建成功.

目的 探讨二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)通过调节肠道紧密连接蛋白拮抗细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱发的孕鼠炎症和胎儿生长受限的影响及机制.方法 模型建立:ICR孕鼠分为对照、DHA、LPS和DHA+LPS四组,每组11只孕鼠,DHA和DHA+LPS组全孕期(GD0-17)给予DHA(300mg/kg)灌胃处理,其余两组灌以等量的玉米油;LPS和DHA+LPS组在GD15-17灌胃1 h后腹腔注射LPS(100 μg/kg),其余两组给予等量的生理盐水处理,GD18取材时测量胎鼠、胎盘发育指标.机制探索:分组同上,每组6只孕鼠,DHA和DHA+LPS组在GD0-15给予DHA(300 mg/kg)灌胃处理,其余两组灌以等量的玉米油;LPS和DHA+LPS组在GD15灌胃1小时后腹腔注射LPS(100 μg/kg),其余两组给予等量的生理盐水处理,LPS注射1h后收集孕鼠血清及小肠组织.ELISA检测孕鼠血清中IL-6、TNF-α及DAO的水平;Western blot、qPCR和IHC法检测母鼠小肠上皮紧密连接相关蛋白的表达及分布情况.qPCR方法检测孕鼠小肠组织中炎性因子和紧密连接相关蛋白的基因表达水平.结果 DHA预处理可使LPS所致胎儿生长受限发生率从61％下降至42％(P＜0.05),每窝胎鼠生长受限的只数由(6.373±0.706)下降至(4.0 ±0.289)(P＜0.05).LPS组孕鼠血清中IL-6、TNF-α和DAO以及小肠组织Il-1β、Il-6、Tnf-α和KcmRNA水平均较对照组明显升高(P＜0.01),DHA预处理均可使其降低(P＜0.05).LPS组肠道紧密连接相关蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-1在蛋白和基因水平上表达较对照组均明显降低(P＜0.01),DHA+LPS组各指标水平均高于LPS组(P＜0.05).结论 DHA预处理可能通过增加孕鼠肠道上皮紧密连接蛋白的表达,降低肠道通透性,缓解体内炎症水平达到拮抗胎儿生长受限的作用.

目的:探讨miR-155在脓毒症致肠道功能障碍中的表达及作用.方法:(1)临床实验:以2022年5月至2022年8月入住新疆医科大学第一附属医院重症医学科的脓毒症患者和同期健康体检者为研究对象,根据急性胃肠损伤分级(AGI)将脓毒症患者分为AGI组和非AGI组.根据28 d生存情况分为存活组和死亡组,采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)法前瞻性观察各组外周血miR-155的变化.(2)体内实验:将20只雄性S/D大鼠按照随机数字表法分为假手术组(sham组)和盲肠结扎穿孔术组(CLP组),采用qRT-PCR及Western blot法检测miR-155、肠道紧密连接蛋白(ZO-1、claudin-1)的表达,ELISA法检测大鼠肠道组织中IL-1β、IL-6、IL-18的表达水平.(3)体外实验:培养人结直肠腺癌细胞(Caco-2),并分为正常对照组(完全培养基培养48h)、脂多糖组(完全培养基培养24h后加入10μg/mLLPS处理24h).采用qRT-PCR检测miR-155的表达.在倒置荧光显微镜下观察细胞形态的变化.采用CCK-8检测细胞活力.采用免疫荧光观察Caco-2细胞中紧密连接蛋白ZO-1分布的变化.并行细胞旁通透性实验,观察两组细胞旁通透性的变化.结果:(1)脓毒症组和健康对照组相比,脓毒症患者外周血miR-155较健康对照组明显升高,差异具有统计学意义(P＜0.05).AGI组患者外周血miR-155表达较非AGI组明显升高,差异具有统计学意义(P＜0.05).脓毒症死亡患者外周血miR-155表达显著升高(P＜0.05).(2)应用CLP模型进行体内动物实验,CLP组大鼠肠道组织miR-155表达较假手术组(sham组)明显升高.CLP组大鼠肠道紧密连接蛋白(ZO-1、claudin-1)较sham组下降,差异具有统计学意义(P＜0.05).ELISA结果提示,CLP大鼠肠道组织中IL-1β、IL-6、IL-18水平较sham组显著升高(P＜0.05),且肠道组织中miR-155水平与IL-1β、IL-6、IL-18呈正相关(r=0.542,r=0.906,r=868,P＜0.05).(3)与正常对照组相比,经LPS处理后细胞形态破坏、细胞间紧密连接破坏、细胞活力减弱、细胞旁通透性增加.结论:脓毒症发生时伴有肠道屏障功能障碍,miR-155在脓毒症肠道屏障功能障碍中表达升高,并可能通过促进炎症因子的释放参与脓毒症肠道屏障功能障碍的发生发展.miR-155异常表达对脓毒症患者早期肠道功能障碍诊断及预后的评估具有重要价值,可作为脓毒症早期肠道损伤诊断及预后情况的重要指标.

目的 探讨外源性一氧化碳释放分子-2(CORM-2)减轻脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的Caco-2细胞屏障损伤的作用及机制.方法 用50μg/mL LPS刺激24 h,建立LPS诱导的Caco-2细胞单层损伤模型.将100μmol/L CORM-2置于37℃、5％CO2的细胞培养箱中18h,其中的CO已全部释放,即为无活性的CORM-2(iCORM-2).实验设正常对照组、LPS损伤组、CORM-2预处理+LPS损伤组(用不同浓度CORM-2(10μmol、50μmol、100μmol)预处理1h,PBS水洗三遍,然后50μg/mL LPS刺激24h处理,再分为LC1(10 μmol/L CORM-2预处理)、LC2 (50μmol/L CORM-2预处理)、LC3(100 μmol/L CORM-2预处理)、LC4 (iCORM-2预处理)4个亚组.采用流式细胞术检测各组Caco-2单层细胞的凋亡率.免疫荧光法检测Caco-2单层细胞及紧密连接蛋白(tight junction proteins,TJ)的分布及结构变化.ELISA法检测各组Caco-2细胞炎症因子(TNF-α、IL-1 β与HMGB-1)的分泌水平.Western blotting法检测各组Caco-2细胞紧密连接蛋白(occludin、ZO-1、claudin-1与claudin-4)的表达变化.结果 LPS损伤后,与对照组相比,LPS损伤组Caco-2单层细胞的凋亡率明显升高(P＜0.05)、细胞炎症因子(TNF-α、IL-1 β与HMGB-1)分泌增加(P＜0.05)、相邻Caco-2细胞间TJ结构遭受破坏,TJ相关蛋白(occludin、ZO-1、claudin-1与claudin-4)的表达量降低(P＜0.05);经过CORM-2预处理后,Caco-2单层细胞的凋亡率显著降低(P＜0.05)、TNF-α、IL-1 β和HMGB-1的分泌明显减少(P＜0.05),LPS诱导引起的TJ结构损害减轻,TJ蛋白的表达量升高(P＜0.05),且与CORM-2的预处理浓度呈正相关.结论 CORM-2呈浓度依赖性减轻LPS诱导的Caco-2细胞屏障结构损伤.其作用机制可能是通过抑制炎症细胞因子TNF-α、IL-1β与HMGB-1的产生和释放、降低Caco-2单层细胞的凋亡率、改善Caco-2细胞间TJ结构的变化和相关蛋白的表达与分布而实现.