目的:探讨 68Ga-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸(DOTA)- D-苯丙氨酸1-酪氨酸3-苏氨酸8-奥曲肽(TATE)注射液放化纯与体内显像效果的关系。 方法:采用高效液相色谱(HPLC)和薄层色谱(TLC)法测定 68Ga-DOTATATE、 68Ga 3+、 68Ga胶体及 68Ga-DOTA- D-苯丙氨酸1-酪氨酸3-苏氨酸8-去苏氨酸-奥曲肽(heptapeptide)，考察标记前体DOTATATE的纯度对标记产物放化纯的影响。建立大鼠胰腺外分泌腺肿瘤细胞AR42J荷瘤裸鼠模型，行microPET显像，考察不同放化纯 68Ga-DOTATATE注射液的摄取情况，计算肿瘤组织的靶/非靶(T/NT)比值。采用单因素方差分析和Pearson相关分析数据。 结果:68Ga 3+和 68Ga胶体的含量与标记前体DOTATATE的纯度无明显相关性( r值：0.385、0.497， P值：0.306、0.137)， 68Ga-DOTA-heptapeptide的含量与标记前体中DOTA-heptapeptide的纯度呈正相关( r＝0.957， P<0.001)。纯度分别为90.9%、91.6%、99.2%的DOTATATE，其标记产物 68Ga-DOTATATE注射液的放化纯分别为(87.0±2.3)%、(86.8±0.8)%、(94.0±3.1)%。MicroPET显像示，将放化纯为95.7%、85.8%、84.5%和79.9%的 68Ga-DOTATATE注射液分别注入荷瘤裸鼠体内，肿瘤组织的摄取与放化纯呈正相关( r＝0.828, P<0.001)，其T/NT比值分别为21.25±8.84、8.50±1.51、11.38±1.65和6.01±0.99 ( F＝11.48, P＝0.001)。 结论:68Ga-DOTATATE注射液的放化纯受标记前体纯度及制备工艺的影响，其放化纯与体内显像效果有一定关系。

目的:探讨基于CFN-100氟多功能模块自动化制备 18F-阿法肽(Alfatide Ⅱ)的方法并进行前列腺癌显像。 方法:通过氟离子分装器分出200～500 μl氟离子至反应管中，与标记前体1，4，7-三氮杂环壬烷-1，4，7-三乙酸-E[(聚乙二醇)] 4-环(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸- D-苯丙氨酸-酪氨酸)] 2{NOTA-E[PEG 4-c(RGDfk)] 2}(冻干药盒)反应，在水相中与 18F经铝介导螯合标记，再经C18柱分离纯化，自动化制备得到 18F-阿法肽，测定其放化产率。对 18F-阿法肽注射液进行质量分析，并对2例前列腺癌患者(72岁和66岁)行 18F-阿法肽PET/CT显像。 结果:采用结合双管路氟离子分装器的CFN-100氟多功能模块成功自动化制备 18F-阿法肽，合成时间约30 min，放化产率为(28±3)% (非衰变校正， n＝6)，放化纯>98%，比活度为2.8×10 7 MBq/mmol，核素纯度大于99%。2例患者PET/CT显像示 18F-阿法肽高度浓聚于前列腺癌病灶，最大标准摄取值(SUV max)分别为35.6和5.0。 结论:利用改进的CFN-100氟多功能模块成功自动化制备 18F-阿法肽，产物合成方法稳定，合成时间短，放化产率高，可高度浓聚于前列腺癌病灶。

目的:探讨CD137-CD137L信号（简称CD137信号）是否通过调控巨噬细胞M1/M2极性转变促进血管新生。方法:将3%巯基乙酸盐肉汤诱导的小鼠腹腔原代巨噬细胞分3组，即对照组、CD137信号激动组和CD137信号抑制组，通过检测M1和M2型巨噬细胞的相关特异性标志物观察巨噬细胞表型的变化，采用流式细胞术（FCM）检测巨噬细胞表面CD137、CD86及CD206的表达，Western blot和RT-PCR检测巨噬细胞诱导性一氧化氮合酶（iNOS）、Ⅰ型精氨酸酶（Arg-1）的蛋白和mRNA表达。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测巨噬细胞培养上清中白细胞介素（IL）-12和IL-10分泌水平。将巨噬细胞和内皮细胞（bEnd.3）共培养，上室种植巨噬细胞，下室基质胶种植内皮细胞，实验分为3组，即对照组、CD137信号激动组和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（PPAR-γ）抑制组，检测各组内皮细胞的管腔形成能力。结果:（1）分离的小鼠腹腔原代巨噬细胞纯度为（97.93±1.31）%，巨噬细胞表面CD137表达为（97.40±2.70）%。（2）与对照组比较，CD137信号激动组Arg-1 mRNA和蛋白表达水平较高（ P<0.05），iNOS mRNA和蛋白表达水平较低（ P<0.05）；与CD137信号激动组比较，CD137信号抑制组Arg-1 mRNA和蛋白表达水平较低（ P<0.05），iNOS mRNA和蛋白表达水平较高（ P<0.05）。流式细胞术显示，CD137信号激动组CD206平均荧光强度高于对照组（ P<0.05），而CD86平均荧光强度低于对照组（ P<0.01）；CD137信号抑制组CD206表达明显低于CD137信号激动组（ P<0.05），CD86表达高于CD137信号激动组（ P<0.01）。ELISA显示，CD137信号激动组IL-10分泌高于对照组（ P<0.01），IL-12分泌明显低于对照组（ P<0.01）；而与CD137信号激动组比较，CD137信号抑制组IL-10分泌较低（ P<0.05），IL-12分泌较高（ P<0.05）。（3）内皮管腔形成实验显示，CD137信号激动组内皮细胞小管长度大于对照组，分支数量多于对照组（ P<0.05）；PPAR-γ抑制组的内皮细胞小管长度及分支数量的形成明显被抑制（ P<0.05）。 结论:CD137信号可能通过调控巨噬细胞M1/M2极性转变促进血管新生。

目的:初步了解重组人tau441 (P301S)蛋白体外聚集、抗原性及免疫原性等生物学性质。方法:原核表达带His标签的tau441 (P301S)重组质粒，镍亲和层析纯化重组蛋白，BCA测定蛋白浓度，SDS-PAGE凝胶考马斯亮蓝染色确定蛋白的纯度；采用Western blot (WB)和负染透射电镜(transmission electron microscopy, TEM)鉴定；间接酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测所得蛋白的抗原性；以重组蛋白免疫小鼠，检测免疫血清特异性抗体滴度来分析其免疫原性。结果:所得重组人tau441 (P301S)纯度为70%，WB显示在相对分子质量(Mr.×10 3)64和更高相对分子质量处有特异性条带。TEM显示，tau441 (P301S)呈絮状团块聚集，团状面积显著大于tau441野生型蛋白(t＝6.439, P＝0.003)；4 ℃孵育9 d后，tau441 (P301S)形成明显的纤维状结构。间接ELISA结果显示，tau441 (P301S)能被tau单抗HT7(1∶80 000)识别；小鼠免疫血清tau特异性抗体滴度达到1∶128 000，且WB显示，免疫后血清识别阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)转基因小鼠脑裂解抽提物。 结论:重组人tau441 (P301S)蛋白具有体外聚集性增强的特性但其抗原性和免疫原性未改变。

目的:表达和纯化重组人Ⅲ型胶原蛋白（rhCol），并评价其性能。方法:构建重组基因工程菌pET30a（+）-1880/pACYCDuet-hy726/BL21（DE3），稳定共表达rhCol和脯氨酰羟化酶。通过大肠杆菌高密度发酵与盐析和柱层析蛋白纯化技术制备并纯化rhCol。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定rhCol的纯度，全自动蛋白质多肽测序仪测定rhCol的N端氨基酸序列，紫外分光光度法测定rhCol中的羟脯氨酸含量，噻唑蓝法评价rhCol的细胞相容性。结果:高密度发酵最终菌体湿重约200 g/L，表达量约3 g/L，通过亲和层析获得的rhCol的纯度大于95%。rhCol的羟脯氨酸含量为11.44%，其水溶性及细胞相容性良好。结论:本研究制备的rhCol可作为一种优良的生物材料广泛用于皮肤护理及生物医药等领域。

目的:探讨不同实验条件对淋病奈瑟球菌（淋球菌）体外转化效率的影响。方法:以淋球菌D株DNA为模板扩增penA基因，采用重叠延伸PCR制备penA A501V（耐药突变）基因，购买淋球菌penA H041基因（耐药阳性对照）。制备含penA/penA A501V/penA H041基因的质粒转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞，采用蓝白筛选培养基克隆扩增；分别采用日本TaKaRa公司质粒提取试剂盒和天根生化科技（北京）有限公司高纯度质粒小提试剂盒提取质粒。以penA质粒、penA A501V质粒、penA H041质粒、penA A501V基因、penA H041基因为底物采用直接孵育法转化淋球菌受体菌株A43、A49，测定转化率（CFU/μg）及头孢曲松（CRO）的最小抑菌浓度（MIC）。以penA A501V、penA H041基因为底物，采用脂质体法转化受体菌株A43、A49，观察转化效率及头孢曲松的MIC。 结果:以D株淋球菌DNA为模板，成功获得1 749 bp的penA及penA A501V基因。提取质粒并电泳后，TaKaRa试剂盒提取的含淋球菌penA、penA A501V、penA H041基因的质粒主要集中在2 500 bp处，迁移速度较快；天根试剂盒提取的质粒主要集中在5 000 bp处，迁移速度较慢。直接孵育法转化时，含野生型penA的A43株的MIC为0.001 μg/ml，转入penA质粒后MIC上升至0.002 μg/ml，转入penA A501V质粒和penA A501V基因转化株MIC均为0.004 μg/ml，转入阳性对照penA H041质粒和penA H041基因后MIC均升至0.512 μg/ml；各底物孵育后CRO对A49株的MIC值与空白对照相同，均为0.016 μg/ml。脂质体法转化时，含野生型penA的A43株对CRO的MIC是0.002 μg/ml，A49株MIC为0.016 μg/ml；penA A501V基因转化A43株后MIC升至0.004 μg/ml，转化A49株后仍为0.016 μg/ml；阳性对照penA H041基因转化A43和A49株后MIC均升至0.250 μg/ml，较空白对照分别升高至125倍和15.6倍。 结论:选择质粒为底物采用直接孵育法对A43株淋球菌有较好转化效率，不同质粒提取方法可能影响转化效率，对于直接孵育法转化效率不高的A49株可采用脂质体法。

目的:构建猪带绦虫重组质粒pET30a-富含亮氨酸重复序列（LRR）结构域15（LRRC15），原核表达纯化的LRRC15重组蛋白，制备兔多克隆抗体。方法:采用全基因合成方法，获得猪带绦虫LRRC15蛋白编码基因；将其克隆至pET30a载体，构建重组质粒pET30a-LRRC15，并进行双酶切PCR鉴定；将重组质粒转化至大肠埃希菌BL21（DE3）感受态细胞，用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达LRRC15重组蛋白，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析鉴定表达产物；用Ni-IDA亲和层析柱纯化LRRC15重组蛋白，SDS-PAGE进行分析鉴定；蛋白质印迹法（Western blot，WB）鉴定纯化重组蛋白特异性；用纯化的LRRC15重组蛋白免疫新西兰兔，制备LRRC15多克隆抗体，用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）测定纯化多克隆抗体的效价。结果:经PCR鉴定，扩增出长度为1 506 bp的条带，与LRRC15基因相符；经SDS-PAGE和WB鉴定，获得相对分子质量（ Mr）约为55.36 × 10 3的LRRC15目的蛋白；用LRRC15重组蛋白免疫新西兰兔，获得LRRC15多克隆抗体，其效价为1∶1 587 200。 结论:成功构建重组质粒pET30a-LRRC15，制备出猪带绦虫LRRC15重组蛋白，并获得了高纯度、高效价的LRRC15重组蛋白兔抗多克隆抗体。

目的:建立汉城病毒(Seoul virus, SEOV)L99株特异性双抗体夹心ELISA抗原检测方法，验证其检测性能，为双价肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome, HFRS)疫苗研制、生产和检定过程中Ⅱ型病毒抗原含量检测提供有效手段。方法:小鼠体内诱生法制备L99病毒单克隆抗体(monoclonal antibody, McAb)腹水，Protein-A亲和层析纯化腹水抗体，SDS-PAGE鉴定纯化抗体纯度，间接ELISA法测定McAb效价，Western blot鉴定其特异性；叠加ELISA法对4株McAb进行抗体配对。用辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)标记单抗后，通过正交试验优化包被和标记抗体使用浓度，建立双抗体夹心ELISA病毒抗原检测方法。以Ⅱ型HFRS疫苗标准品作为定量标准，验证方法的检测限、线性范围、专属性、准确性、精密度；通过检测3批Ⅱ型病毒疫苗灭活原液验证方法适用性。结果:4株McAb腹水效价均>1∶10 6，抗体纯度均>98%；经Western blot鉴定，1D5、3A4、5B7特异识别Ⅱ型L99株出血热病毒核衣壳蛋白，2E3与Ⅰ型PS-6株出血热病毒存在交叉反应；经抗体配对筛选后，选择3A4为包被抗体，1D5为标记抗体；棋盘滴定法确定包被抗体工作浓度为20 μg/ml，HRP标记抗体工作浓度为1∶4 000。该方法对SEOV L99抗原最低检测限为0.078 1 μg/ml；线性范围为0.078 1~2.500 0 μg/ml， R2>0.99；专属性验证其对Ⅱ型HFRS疫苗具有检测特异性；抗原回收率在95.8%~108.7%之间，精密度验证变异系数<10%。用该方法检测3批Ⅱ型HFRS灭活疫苗原液结果均呈剂量依赖性。 结论:成功建立了SEOV L99株型特异性双抗体夹心ELISA抗原检测方法，为地鼠肾双价肾综合征出血热疫苗生产及检定过程中，SEOV L99株病毒抗原含量测定提供了检测方法。

目的:探讨放射性核素 131I标记的程序性死亡受体配体1单克隆抗体（PD-L1 McAb）的物理性质及其在人乳腺癌荷瘤小鼠模型中进行分子成像的可行性。 方法:采用氯胺T法以放射性核素 131I标记PD-L1 McAb，采用纸层析法测定 131I标记PD-L1 McAb的标记率，并计算放射性比活度；标记产物 131I-PD-L1 McAb采用葡聚糖凝胶G-25层析柱分离纯化，采用纸层析法测定 131I-PD-L1 McAb的放射性化学纯度，以及 131I-PD-L1 McAb在生理盐水和健康成人血浆中的稳定性。培养人乳腺癌PD-L1阳性细胞株MDA-MB-231细胞，随机分为总结合实验（TB）组和非特异性结合实验（NSB）组，每组又分为6个亚组，各亚组在PH 7.4的磷酸盐缓冲液中分别加入不同体积的 131I-PD-L1 McAb溶液和PD-L1 McAb溶液，配制总量500 μL，使用GC-300型免疫γ-计数器测量各组细胞中 131I-PD-L1 McAb的每分钟计数（cpm）值。根据TB组与NSB组各亚组之间cpm值的差值，使用Scatchard作图分析方法计算 131I-PD-L1 McAb的平衡解离常数KD值，评估 131I-PD-L1 McAb与MDA-MB-231细胞亲和力。取裸鼠3只，于右前肢前臂皮下接种MDA-MB-231细胞悬液制备人乳腺癌荷瘤小鼠模型，观察接种部位成瘤情况并计算肿瘤体积。裸鼠肿瘤接种后第15天按200 MBq/kg尾静脉注射 131I-PD-L1 McAb溶液，分别于注射后5 min、30 min、60 min、24 h、48 h、72 h使用小动物活体成像仪进行放射性核素成像检查，观察 131I-PD-L1 McAb在荷瘤鼠体内浓聚情况；在小动物活体成像检查图像上选择肿瘤部位、对侧前肢相应部位为感兴趣区，计算相应的放射性计数靶（T）值和放射性计数非靶（NT）值，比较不同时间点肿瘤部位与非肿瘤部位的放射性活度比值（T/NT）的变化情况。 结果:131I标记PD-L1 McAb的标记率为80.10%~82.20%（81.07%±1.06%），标记产物 131I-PD-L1 McAb的放射性比活度为（2.78±0.23）MBq/μg，放射性化学纯度为99.10%~99.60%（99.37%±0.25%）。 131I-PD-L1 McAb在生理盐水与人新鲜血浆溶液中6 h内放射性化学纯度均大于80%。 131I-PD-L1 McAb与MDA-MB-231细胞KD值为60~64（62±2）nmol/L。3只裸鼠均成功建立乳腺癌荷瘤小鼠模型，接种乳腺癌MDA-MB-231细胞后第6天触及肿块，第15天测量肿瘤体积为0.92~1.12（1.00±0.11）cm 3。尾静脉注射 131I-PD-L1 McAb后，不同时间点小动物活体放射性核素成像显示， 131I-PD-L1 McAb早期主要在荷瘤鼠腹部浓聚，24 h时荷瘤鼠右前肢肿瘤部位开始显影，48 h时肿瘤显影最为清晰，72 h时肿瘤部位显影开始模糊。不同时间点放射性计数T/NT值随着注射时间的延长逐渐增加，48 h时T/NT值最大（6.66±1.10），72 h时开始下降，不同时间点T/NT值比较，差异有统计学意义（ F=38.04， P=0.011）。 结论:放射性核素 131I标记PD-L1 McAb，具有较高的标记率。标记产物 131I-PD-L1 McAb具有较高的放射性化学纯度及适宜的放射性比活度，在体外有良好的稳定性，且与MDA-MB-231细胞亲和力较高，可用于人乳腺癌荷瘤小鼠模型的分子成像研究。

目的:原核表达GII.6型诺如病毒(norovirus, NoV)P蛋白和制备多克隆抗体。方法:扩增NoV GII.6型P区基因并克隆至pET28a载体，转化感受态 E. coli BL21(DE3)，IPTG诱导进行原核表达。使用Ni－NTA亲和柱层析进行纯化，重组蛋白进行寡糖结合分析，免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体血清，ELISA测定该抗体的效价，western blot (WB)检测抗体的特异性，并进行有效性评估。 结果:成功构建了原核表达载体GII.6P-pET28a并表达相对分子质量约40×10 3的GII.6型P蛋白；Ni柱亲和层析纯化后纯度达90%以上；寡糖结合显示GII.6型P蛋白与B、le b、H2型结合，与A、H1、le a型不结合；ELISA测得抗体的效价为1∶160 000；WB显示抗体具有较高特异性；交叉实验未显示出对GII.4的亲和力。 结论:成功表达了GII.6型P蛋白并获得高效价的抗体，为GII.6的检测和疫苗研发提供有效工具。