目的 探讨黄芪甲苷(astragaloside,AST)对多囊卵巢综合征(PCOS)小鼠性激素水平及卵巢衰老的影响.方法 30只雌性C57BL/6小鼠随机分为:正常对照组、模型组、AST组,每组10只.小鼠连续21 d颈背部皮下注射脱氢表雄酮(70 mg/kg)联合腹腔注射D-半乳糖(200 mg/kg)制备PCOS模型;黄芪甲苷干预组在造模成功后每天1次黄芪甲苷(50 mg/kg)灌胃给药,连续4周.给药最后10 d通过阴道涂片观察各组小鼠动情周期;给药结束后计算卵巢指数,HE染色观察卵巢组织病理学变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)、雌二醇(estradiol,E2)、睾酮(testos-terone,T)和促黄体生成素(luteinizing hormone,LH)水平.免疫组织化学法检测各组小鼠卵巢组织衰老标志物β半乳糖苷酶l(GLB1)、P16、磷酸化P65(p-P65)表达水平,免疫印迹法检测各组小鼠卵巢组织GLB1、P16、p-P65及P65蛋白表达水平.结果 与对照组比较,模型组小鼠动情周期紊乱,卵巢指数增加(P＜0.05),卵巢呈多囊样改变,血清中T和LH含量显著增加(P＜0.05),E2和FSH含量显著降低(P＜0.05),卵巢组织GLB1、P16、p-P65蛋白水平显著上调(P＜0.05).与模型组比较,AST组小鼠动情周期恢复,卵巢指数降低(P＜0.05),卵巢多囊样明显减少,血清中T和LH含量显著减少(P＜0.05),E2和FSH含量显著增加(P＜0.05),卵巢组织中GLB1、P16和p-P65蛋白水平显著降低(P＜0.05),P65表达水平未见明显变化.结论 黄芪甲苷能有效平衡PCOS小鼠的性激素水平,缓解卵巢组织衰老,其机制可能与抑制NF-κB信号通路有关.

目的:利用生物信息学方法筛选外阴鳞状细胞癌(VSCC)的关键基因及分析免疫浸润特征.方法:从GEO数据库中下载VSCC相关基因表达数据,应用差异表达基因(DEGs)分析和加权基因共表达网络分析筛选出共同的DEGs,对DEGs进行富集分析.采用STRING数据库和Cytoscape软件构建蛋白互作(PPI)网络,并通过4种算法筛选出关键基因,进行关键基因GSEA分析.应用CIBERSORT分析VSCC相关免疫细胞浸润特征及关键基因与免疫细胞的相关性.结果:共筛选出182个DEGs,DO富集主要涉及生殖器官良性肿瘤、结缔组织癌等疾病;GO和KEGG富集结果主要与表皮发育、角质化包膜、氧化应激、免疫细胞迁移等有关;PPI网络中有65个节点,90条边,筛选出6个关键基因,S100A7、SPRR2B、SPRR2G、CASP14、CDSN、ESR1,共同富集到了细胞周期、蛋白酶体信号通路.免疫浸润分析结果显示,与对照组相比,VSCC组初始B细胞、静息CD4+T记忆细胞下调(均P＜0.05),记忆B细胞、调节性T细胞、活化的NK细胞、巨噬细胞M0型、静息肥大细胞、活化的肥大细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞上调(均P＜0.05).Spearman相关性分析显示,S100A 7、SPRR2G、CASP14、CDSN均与γδT细胞呈负相关(均P＜0.05),与巨噬细胞M0型呈正相关(均P＜0.05);ESR1与巨噬细胞M0型呈负相关(P＜0.05),与静息CD4+T记忆细胞呈正相关(P＜0.05);S100A7、CASP14 与静息 CD4+T 记忆细胞呈负相关(均 P＜0.05);SPRR2G、CDSN 与 CD8+T 细胞呈负相关(均 P＜0.05).结论:S100A7、SPRR2B、SPRR2G、CASP14、CDSN、ESR1可能是VSCC潜在的生物标志物,长期慢性炎症刺激导致表皮终末分化过程异常可能是VSCC发生、发展的关键因素.

目的:探究多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]抑制剂尼拉帕利作为胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)放疗增敏剂的可行性及作用机制.方法:生物信息学分析PARP抑制剂奥拉帕利和他拉唑帕利在胶质瘤中的作用机制及其与放疗的相关性;CCK-8测定尼拉帕利在GBM细胞(A172、U251和U87)中的最适作用浓度和最适作用时间;克隆形成实验检测尼拉帕利对GBM细胞放疗敏感性的影响;流式细胞术检测尼拉帕利联合放疗对GBM细胞周期的影响,蛋白质印迹检测尼拉帕利联合放疗对DExD-box解旋酶(DExD-box helicase,DDX21)蛋白表达的影响,免疫荧光法研究尼拉帕利联合放疗对DDX21在GBM中细胞核定位的影响,以探讨尼拉帕利在GBM中放疗增敏的作用机制.结果:生物信息学分析表明,在519个肿瘤细胞系中,PARP抑制剂在胶质瘤中发挥作用的途径主要与核糖体生物合成和功能相关;在44个实体肿瘤细胞系中,同源重组修复能力与核糖体生物合成能力高度正相关.尼拉帕利在A172和U87细胞系中的IC5.值分别为(10.77±3.31)μmol/L和(32.37±2.84)μmol/L;在尼拉帕利浓度为348 nmol/L和1 044 nmol/L时A172细胞的辐射剂量增强因子(DEF37)分别为1.99和2.17,在1 056 nmol/L和3 169 nmol/L时U87细胞的DEF37分别为1.10和1.44,尼拉帕利对p53野生型的A172细胞和U87细胞具有放疗增敏作用,但对p53突变型的U251细胞无放疗增敏作用;在A172细胞和U87细胞中尼拉帕利联合放疗组的G2/M期细胞均明显多于对照组,尼拉帕利联合放疗可以使A172和U87细胞阻滞在对射线敏感的G2/M期,从而实现放疗增敏.最后,尼拉帕利联合放疗处理U87细胞后,DDX21蛋白表达无显著变化(P＞0.05),免疫荧光结果提示尼拉帕利联合放疗处理U87细胞后,DDX21从核仁到核质重新定位;敲低DDX21会引起U87细胞产生放疗抵抗,尼拉帕利对DDX21敲低后的U87细胞仍有放疗增敏作用.结论:尼拉帕利通过使DDX21从核仁到核质重新定位,影响核糖体生物合成,产生G2/M期细胞周期阻滞,从而增加U87细胞的放疗敏感性.

目的:探讨lncRNA HCP5 靶向mlR-409-3p对皮肤鳞状细胞癌(CSCC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法:采用qRT-PCR法检测CSCC细胞(SCC13、A431、HSC-5)中HCP5 和miR-409-3p的表达情况,筛选用于实验的CSCC细胞.将抑制 HCP5 表达的质粒si-HCP5 及其对照(si-NC)、过表达miR-409-3p的miR-409-3p模拟物及其对照(miR-NC)、抑制HCP5 和miR-409-3p的si-HCP5+anti-miR-409-3p及其对照(si-HCP5+anti-miR-NC)分别转染SCC13 细胞.采用CCK-8 法和Transwell 实验检测SCC13 细胞增殖、迁移、侵袭能力,Western blot法检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9 蛋白表达水平.通过双荧光素酶报告基因实验验证HCP5 和miR-409-3p的靶向关系.结果:SCC13 细胞中HCP5 表达最高,miR-409-3p表达最低(P<0.05).抑制HCP5 表达后SCC13 细胞增殖能力降低,细胞迁移数和侵袭数减少,CycIinD1、MMP2、MMP9 蛋白表达水平降低(P<0.05).过表达miR-409-3p后SCC13 细胞增殖能力降低,细胞迁移数和侵袭数减少,CycinD1、MMP2、MMP9 蛋白表达水平降低(P<0.05).双荧光素酶报告基因实验结果显示 lncRNA HCP5 和miR-409-3p存在靶向关系.抑制miR-409-3p表达可减弱HCP5 低表达对SCC13 细胞增殖以及迁移、侵袭能力的影响(P<0.05).结论:抑制HCP5 可通过靶向促进miR-409-3p表达来抑制CSCC细胞增殖、迁移和侵袭.

目的 观察吲哚-3-甲醇(I3C)对低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的作用.方法 采用0.2％Ⅰ型胶原酶消化分离SD大鼠PASMCs,以低氧(1％O2)作为诱导剂,建立PASMCs增殖的细胞模型,以不同浓度的I3C(25、50、100、200 μmol·L-1)干预24h,检测细胞增殖及存活率;设置哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)抑制剂rapamycin或缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)抑制剂LW6为阳性对照组,以100 μmol·L-1 I3C,HIF-1α稳定剂DMOG或mTOR激活剂MHY1485干预24 h后,CCK-8试剂盒检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期;Western blot检测HIF-1α、总的mTOR及磷酸化的mTOR和细胞周期调控相关蛋白的表达,确定I3C抑制PASMCs增殖的作用机制.结果 25～100μmol·L-1 I3C抑制低氧诱导的PASMCs增殖的作用具有浓度依赖性(P＜0.05),而100 μmol·L-1与200 μmol·L-1 I3C抑制细胞增殖的作用无明显差异,且I3C无明显细胞毒性作用.I3C(100 μmol·L-1)与LW6均可抑制低氧诱导的PASMCs增殖,阻滞细胞周期于G0/G1期,抑制HIF-1α、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、Cyclin E、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)2、CDK4和CDK6的表达(P＜0.05),且DMOG能够逆转I3C的上述作用(P＜0.05).另外I3C与rapamycin在抑制低氧诱导的PASMCs增殖与mTOR/HIF-1α信号通路活化方面作用相似,且MHY1485能够逆转I3C抑制细胞增殖及mTOR/HIF-1α信号通路活化的作用(P＜0.05).结论 I3C可通过抑制mTOR/HIF-1α信号通路减弱低氧诱导的PASMCs增殖.

目的 观察基于FOLFOX方案球囊阻断肝动脉灌注化疗(b-HAIC)治疗不可切除肝细胞癌(uHCC)的有效性和安全性.方法 回顾性分析20例接受FOLFOX方案b-HAIC治疗的uHCC患者资料,根据氟尿嘧啶剂量分为低(600 mg/m2·22 h,8例)、中(1200 mg/m2·44 h,6例)及高剂量组(2400 mg/m2·44 h,6例);记录b-HAIC治疗周期,评估临床疗效,计算客观反应率(ORR)和疾病控制率(DCR),并通过甲胎蛋白(AFP)变化评估治疗有效性.记录治疗相关不良事件.结果 20例接受1～4个(中位数为2个)周期b-HAIC治疗.随访7～31周、中位随访时间15周,期间完全缓解 4例(4/20,20.00%),部分缓解 12例(12/20,60.00%),疾病稳定 4例(4/20,20.00%),ORR达 80.00%(16/20),DCR 100%(20/20);最佳疗效出现于开始治疗 4～16 周后,中位时间为 6 周.低、中、高剂量组ORR分别为75.00%(6/8)、83.33%(5/6)、83.33%(5/6),各组DCR均为 100%;17例b-HAIC前AFP升高,治疗后均不同程度降低.治疗相关不良事件包括灌注期间上腹部疼痛、恶心和呕吐,以及b-HAIC后转氨酶及总胆红素升高、中性粒细胞百分比升高、骨髓抑制等,均经对症处理后改善.结论 基于FOLFOX方案的b-HAIC用于uHCC近期疗效佳且不良反应可控.

目的 基于中医经典"有故无殒"理论,探讨附子水煎液对健康小鼠及慢性心力衰竭小鼠心脏的不同作用.方法 将SPF级别8周龄C57BL/6J品系雄性小鼠随机分为对照组(Ctrl)、附子组(FZH)、多柔比星组(Dox)、多柔比星加附子组(Dox+FZH).分别给予Dox小鼠和Dox+FZH小鼠每3天腹腔注射5 mg/kg多柔比星,Ctrl与FZH给予等体积氯化钠溶液(9 g/L)腹腔注射,实验开始第1天给予Dox、Dox+FZH小鼠5 mg/kg多柔比星腹腔注射后,分别给FZH与Dox+FZH小鼠每日2 g/kg附子灌胃,Ctrl与Dox小鼠分别使用等体积氯化钠溶液(9 g/L)灌胃,造模周期共4周.观察小鼠的一般情况,对小鼠生存率、心质量、体质量、心质量比、心胫比及心超指标等进行统计,分析小鼠心脏组织及血清中脑利尿钠肽(BNP)和心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)的含量,并检测心脏组织中凋亡相关蛋白的表达情况,观察小鼠心脏组织切片单个心肌细胞横截面积大小,评估附子对健康和慢性心力衰竭状态下小鼠心肌损伤的影响.结果 ①健康状态下,Ctrl和FZH小鼠被毛毛色光亮,形体匀称,四肢活动正常且Ctrl和FZH小鼠均未见死亡;与Ctrl比较,FZH小鼠的心质量、心质量比、心胫比、左室射血分数、左室短轴缩短率、心率、收缩期左室后壁厚度均降低(P<0.05),左室舒张末期内径升高(P<0.05);与Ctrl比较,FZH小鼠活化后的半胱氨酸蛋白3(Cleaved-Caspase3)表达升高(P<0.05),B-细胞淋巴瘤因子2蛋白/Bcl2关联X蛋白(Bcl2/Bax)比值降低(P<0.05);血清中BNP和cTnⅠ的含量差异无统计学意义(P>0.05);小鼠心脏组织切片单个心肌细胞横截面积相应缩小(P<0.05).与Ctrl比较,FZH小鼠心房利尿钠肽(ANP)基因表达升高(P<0.05).②慢性心力衰竭状态下,Dox小鼠毛色晦暗,形体消瘦,活动迟缓,进食量减少,而Dox+FZH小鼠活动能力和进食情况均较Dox有所改善;Dox共计死亡6只,Dox+FZH小鼠死亡3只,附子可以改善病理状态小鼠生存率但差异无统计学意义(P>0.05);与Dox比较,Dox+FZH小鼠心率降低(P<0.05),左室射血分数轻度上升但差异无统计学意义(P>0.05);与Dox比较,Dox+FZH小鼠Bcl2/Bax比值明显升高(P<0.05),Cleaved-Caspase3蛋白表达降低但差异无统计学意义(P>0.05);血清中BNP和cTnⅠ的含量减少(P<0.05);小鼠心脏组织切片单个心肌细胞横截面积增大(P<0.05).与Dox比较,Dox+FZH小鼠ANP基因表达变化差异无统计学意义(P>0.05).结论 附子对健康状态下的小鼠心脏产生毒性作用,对慢性心力衰竭状态下的小鼠具有一定治疗作用.

目的 探讨序列相似性家族107成员A(FAM107A)调控缺氧诱导因子3A(H1F3A)对前列腺癌(PCa)迁移、侵袭、凋亡的影响.方法 通过生物信息学技术筛选目的基因并进行分析.体外培养人PCa细胞PC-3,采用反转录病毒稳定转染,采用蛋白质印迹法(Western blot)技术验证HIF3A及DNA甲基转移酶1(DNMT1)的表达量;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡;焦磷酸测序检测启动子甲基化程度;细胞功能试验验证对PCa迁移和侵袭的影响.两组间差异表达采用独立样本t检验方法比较.结果 生信分析提示FAM107A基因在PCa组织中表达低于正常前列腺组织(P＜0.01),Gleason评分(GS)越高,FAM107A表达量越低(P＜0.01).划痕实验、Transwell侵袭实验提示过表达 FAM107A会抑制 PCa 细胞的迁移(C4-2:0.337±8.930 比 29.334±2.651,t=-7.260,P＜0.05;PC-3:18.672±10.494 比 52.043±3.512,t=-6.024,P＜0.05)、侵袭(DU145:117.703±12.845 比 242.303±21.401,t=10.273,P＜0.05;PC-3:51.674±9.502 比 139.303±13.394,t=16.025,P＜0.05),促进凋亡(17.180±0.700 比 0.527±0.121,t=40.600,P＜0.05).细胞周期实验表明oe-FAM107A-ENZ组细胞G1期比例高于对照组(80.410±0.786比35.583±0.714,t=73.130,P＜0.05),S 期比例低于对照组(11.233±0.374 比 38.747±1.809,t=25.790,P＜0.05),细胞分裂被阻滞在S期.蛋白免疫印迹实验证明过表达FAM107A组的DNMT1表达量低于对照组(0.277±0.032 比 0.900±0.026,t=25.93,P＜0.05),HIF3A 表达量高于对照组(0.657±0.040 比0.523±0.043,t=4.041,P＜0.05).sh-FAM107A-5-aza 组的 HIF3A 的表达量明显恢复(0.550±0.020比0.427±0.067,t=3.073,P＜0.05).蛋白免疫印迹实验证明过表达FAM107A时E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达量高于对照组(0.773±0.095 比 0.307±0.046,t=7.683,P＜0.05),N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达量低于对照组(0.380±0.060 比 0.733±0.045,t=8.154,P＜0.05),波形蛋白(Vimentin)表达量低于对照组(0.347±0.107 比 0.700±0.040,t=5.361,P＜0.05).结论 FAM107A高表达可抑制HIF3A启动子甲基化促进其表达,进而抑制PCa的迁移、侵袭,是PCa进展的生物标志物.

目的 分析子宫内膜癌病灶超声造影参数与Beclin1、Beclin1关联X蛋白(Bax)及周期素依赖性激酶4(CDK4)表达水平的相关性.方法 选取2022年1月至2023年1月在联勤保障部队第九○○医院就诊的4 2例子宫内膜癌患者作为恶性组,5 8例癌前病变患者作为良性组.两组患者均给予超声造影成像检查并测定造影剂平均渡越时间(MMT)、达峰时间(TTP)及峰值强度(Peak),均进行子宫切除术并采集病灶组织,检测Beclin1、Bax、CDK4及周期素依赖性激酶6(CDK6)表达水平.采用Pearson相关分析子宫内膜癌病灶超声造影参数与Beclin1、Bax及CDK4表达水平的相关性.结果 恶性组病灶Peak高于良性组,MMT长于良性组,TTP短于良性组,Beclin1、Bax表达水平低于良性组,CDK4、CDK6表达水平高于良性组,差异均有统计学意义(P＜0.05).恶性组中TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期患者病灶Peak高于 Ⅰ～Ⅱ期患者,MMT长于Ⅰ～Ⅱ期患者,TTP短于Ⅰ～Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P＜0.05).恶性组中TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期患者病灶组织Be-clin1、Bax表达水平低于Ⅰ～Ⅱ期患者,CDK4、CDK6表达水平高于Ⅰ～Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(P＜0.05).Pearson相关分析结果显示,子宫内膜癌病灶Peak、MTT与CDK4及CDK6表达水平呈正相关(P＜0.05),与Beclin1、Bax表达水平呈负相关(P＜0.05),TTP与病灶组织CDK4及CDK6表达水平呈负相关(P＜0.05),与Beclin1、Bax表达水平呈正相关(P＜0.05).结论 子宫内膜癌患者MTT长于癌前病变患者,以及Peak、CDK4、CDK6表达水平均高于癌前病变患者,子宫内膜癌患者病灶超声造影参数 MTT、TTP及Peak与Beclin1、Bax及CDK4表达水平相关,超声造影检查有助于辅助临床判断子宫内膜癌患者细胞凋亡相关蛋白表达情况.

目的 探讨长链非编码核糖核酸(lncRNA)GIHCG靶向微小核糖核酸-429(miR-429)对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞增殖、迁移及侵袭的影响.方法 常规培养人ESCC细胞系(EC9706、TE1、KYSE150细胞)及正常食管鳞状上皮细胞系(Het-1A细胞),用RT-PCR法筛选实验细胞.将对数生长期实验细胞随机分为si-NC组、si-GIHCG组,分别转染lncRNA敲低质粒阴性对照、lncRNA GIHCG敲低质粒.用RT-PCR法检测细胞中lncRNA GIHCG、miR-429表达,用CCK-8法检测细胞增殖能力[吸光度值(OD值)],用细胞划痕实验检测细胞迁移能力,用Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,用Western blotting法检测细胞中细胞增殖表型蛋白[细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、增殖细胞核抗原(PCNA)]和转移表型蛋白[基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)]表达.将对数生长期实验细胞随机分为GIHCG-WT+miR-429 mimics组、GIHCG-WT+NC-mimics组、GIHCG-MUT+miR-429 mimics组、GIHCG-MUT+NC-mimics组,用双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA GIHCG与miR-429的靶向关系.结果 与Het-1A细胞比较,EC9706、TE1、KYSE150中lncRNA GIHCG相对表达量高(P均<0.05),miR-429相对表达量低(P均<0.05).由于TE1细胞中lncRNA GIHCG的相对表达表达量最高、miR-429相对表达量最低,因此以TE1细胞作为实验细胞.与si-NC组比较,si-GIHCG组lncRNA GIHCG相对表达量低,miR-429相对表达量高,各时间OD值低,细胞移动距离百分比低,Cyclin D1、PCNA、MMP-2、MMP-9相对表达量低,差异均有统计学意义(P均<0.05).与GIHCG-WT+NC-mimics组比较,GIHCG-WT+miR-429 mimics组荧光素酶相对活性低(P<0.05);GIHCG-MUT+miR-429 mimics组、GIHCG-MUT+NC-mimics组荧光素酶相对活性比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 ESCC细胞中lncRNA GIHCG高表达,miR-429低表达;敲低lncRNA GIHCG通过靶向调控miR-429抑制ESCC细胞增殖、迁移及侵袭.