目的:观察狼疮鼠肝脏组织细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ（MT-CO1）、BCL2相互作用蛋白3（BNIP3）和IL-1β表达特点及其意义。方法:以实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测狼疮鼠和对照鼠MT-CO1和BNIP3、IL-1β、线粒体微管相关蛋白1轻链3β（LC3B）、p16和p21的mRNA和蛋白水平，苏木精-伊红（HE）染色和免疫组织化学法检测狼疮鼠肝组织，免疫组织化学明确IL-1β在狼疮鼠肝组织的炎症损害表达部位，比色法检测2组肝组织丙二醛表达差异；以脂多糖刺激肝细胞和巨噬细胞，同时以脂多糖刺激巨噬细胞后上清液培养肝细胞，实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测上述基因蛋白表达，比色法检测各组肝细胞丙二醛表达差异。免疫荧光检测线粒体活性氧（mtROS）表达。各组均数比较使用单因素方差分析法，多个样本均数之间的两两比较，方差齐时用LSD法，方差不齐时用Tamhane′s T2法。 结果:PCR结果显示，狼疮鼠肝组织MT-CO1和BNIP3的mRNA（0.14±0.04；0.16±0.05）较对照组（0.11±0.04；0.16±0.06）表达明显下降，差异具有统计学意义（ t=7.16， P<0.001； t=4.54， P<0.001），狼疮组IL-1β、p16和p21（2.06±0.69；0.37±0.14；0.16±0.06）较对照组（0.23±0.07；0.25±0.08；0.11±0.04）表达显著增高，差异具有统计学意义（ t=9.58， P<0.001； t=24.35， P<0.001； t=22.36， P<0.001）。蛋白质印迹法结果与PCR结果趋势一致。HE染色显示狼疮鼠肝组织中有淋巴细胞浸润，免疫组织化学显示狼疮鼠肝组织中IL-1β阳性细胞主要集中在血窦中，肝实质细胞表达不明显。狼疮组肝组织丙二醛的含量（0.19±0.10）高于对照组（0.17±0.09），差异具有统计学意义（ t=4.33， P=0.005）。与对照组（0.176±0.072；0.08±0.03）相比，脂多糖直接刺激AML12肝细胞MT-CO1、BNIP3 mRNA表达（0.069±0.028；0.17±0.07）无明显变化，差异无统计学意义（ t=1.01， P=0.337； t=0.88， P=0.399）；脂多糖刺激巨噬细胞IL-1β（0.28±0.09）较对照组（0.15±0.05）表达增高，差异具有统计学意义（ t=28.26， P<0.001）。以脂多糖刺激巨噬细胞12 h后的上清培养肝细胞24 h，MT-CO1和BNIP3在脂多糖刺激组的mRNA水平（0.046±0.026；0.17±0.05）较对照组（0.144±0.083；0.18±0.06）表达明显下降，差异具有统计学意义（ t=7.52， P<0.001； t=4.24， P<0.001），脂多糖刺激组p16和p21（0.29±0.09；0.27±0.09）较对照组（0.18±0.06；0.22±0.07）表达增高，差异具有统计学意义（ t=13.54， P<0.001； t=8.69， P<0.001）。蛋白质印迹法结果与PCR结果趋势一致。免疫荧光提示脂多糖刺激组（0.25±0.10）mtROS荧光强度高于对照组（0.08±0.03），差异具有统计学意义（ t=4.86， P<0.001）。 结论:狼疮鼠肝脏免疫炎症可以刺激肝脏实质细胞发生细胞内线粒体功能损害，狼疮鼠肝脏器官损害机制不止局限于免疫活性细胞的免疫炎症，还有实质细胞线粒体功能障碍共同参与。

目的 建立一种龟甲配方颗粒高分辨熔解曲线(HRM)技术鉴别方法.方法 根据乌龟Chinemys reevesii及其混伪品的细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(cytochrome oxidase subunitⅠ,COI)基因序列上的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)位点设计鉴别引物,扩增产物直接进行HRM分析,并优化反应体系,根据最佳条件进行适用性验证.结果 在模板DNA质量浓度为0.62～374.88 ng/μL、引物浓度为0.1～0.4 μmol/L、退火温度为62℃、循环数为45个的条件下,龟甲饮片和配方颗粒的熔解曲线为单峰,其Tm均值分别为(82.39±0.09)、(82.38±0.05)℃,而混伪品和醋龟甲配方颗粒未有扩增.结论 该研究建立的高分辨熔解曲线鉴别方法可快速鉴别龟甲原料和配方颗粒的真伪,以及区分其生品和炮制品配方颗粒,为龟甲配方颗粒的质量标准研究提供了理论依据.

目的 以线粒体细胞色素C氧化酶亚基(COI)基因为目的基因,利用DNA条形码技术对未知鼠样本进行鉴定.方法 采用夹夜法对九江市武宁县宋溪镇某村的鼠密度进行调查,经形态学初步鉴定后,以捕获的 1 只无法明确鉴定的大型鼠样本为对象,提取基因组DNA并采用COI基因通用引物BatL5310 和R6036R进行PCR扩增及测序,将测序结果在NCBI网站进行BLAST比对,采用MEGA7 软件选择最大似然法构建系统发育树.结果 共捕获小型兽类7 只,密度为3.38%,经形态学鉴定有褐家鼠2 只,黑线姬鼠2 只,臭鼩鼱2只,形态学初步鉴定为青毛巨鼠或小泡巨鼠的未知鼠1 只,提取的未知鼠样本DNA通过PCR成功扩增出COI基因目的条带,与NCBI基因库中小泡巨鼠(KP995219)序列同源性高达 100%,系统发育树显示该鼠样本与小泡巨鼠(KP995219、KP995203)处于同一分支,遗传距离分别为 0、0.0016,而青毛巨鼠(NC_036730)单独处于另一分支,遗传距离较远.结论 赣北地区首次报道小泡巨鼠,采用COI基因的DNA条形码技术可快速、准确的进行鼠种鉴定,有助于弥补非常见鼠形态学鉴定困难的不足.

目的:建立一种鳖甲配方颗粒特异性聚合酶链式反应(PCR)鉴别方法.方法:根据中华鳖Trionyx sinen-sis及其混伪品的细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COXⅠ)基因序列,筛选出中华鳖的特异性单核苷酸多态性(SNP)位点,设计鳖甲鉴别专属引物BJ-5F及BJ-5R.通过优化PCR反应条件,确定最佳的PCR反应体系,并对该方法进行耐受性、适用性考察和测序验证.结果:当退火温度为 60℃,循环 33 次时,鳖甲药材、标准汤剂冻干粉及配方颗粒均可在约 236 bp处得到清晰单一的中华鳖条带,其混伪品及阴性对照品均无此条带.结论:该研究所建立的特异性PCR鉴别方法适用于快速鉴定鳖甲药材、标准汤剂冻干粉及配方颗粒的真伪,且具有专属性强、准确性高、简便易行等特点,为鳖甲配方颗粒质量标准的制定提供了参考依据.

目的:建立一种能同时鉴别全蝎(东亚钳蝎)及其混伪品细尖狼蝎的有效方法.方法:基于东亚钳蝎和细尖狼蝎的线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(CO Ⅰ)基因差异,设计区分东亚钳蝎、细尖狼蝎的特异性引物,建立多重PCR方法,并对退火温度、引物浓度、循环次数、DNA模板用量等条件进行优化筛选.对不同来源的东亚钳蝎和细尖狼蝎样品进行实测验证,根据特异性条带大小进行鉴别.结果:当退火温度为51.6℃,循环次数为30,DNA模板用量为30 ng时,东亚钳蝎和细尖狼蝎分别出现约342 bp和108 bp的特异性条带.结论:该方法可以实现东亚钳蝎、细尖狼蝎及掺杂样品的快速而又准确地鉴别,并可弥补传统鉴别方法的不足.

目的 分析山东省济南市和济宁市白纹伊蚊(Aedes albopictus)线粒体细胞色素c氧化酶的一个亚基Ⅰ基因(mitochondrial cytochrome c oxidase subunit Ⅰ,mtDNA-CO Ⅰ),揭示白纹伊蚊不同亚群体间的遗传差异、亲缘关系,探讨白纹伊蚊遗传多样性与地理分布之间的关系.方法 分别从济南市历城区和济宁市任城区采集白纹伊蚊样本,利用PCR技术扩增白纹伊蚊种群的mtDNA-CO Ⅰ基因序列,结果通过NCBI的BLAST比对工具进行比对,运用BioEdit 7.0、DnaSP v6和PopART 1.7软件进行数据分析,计算白纹伊蚊遗传多样性参数并绘制单倍型网络图.结果 对山东省济南市和济宁市的白纹伊蚊mtDNA-CO Ⅰ基因进行了基因测序,分别获得了 86条和84条基因片段.与BLAST比对结果显示,全部序列存在5个突变位点,核苷酸多样性(nucleotide diversity,Pi)为0.000 97,G+C含量为33.4％,表现出线粒体DNA特性.与济宁市相比,济南市的白纹伊蚊种群在核苷酸多样性和单倍型多样性上均较高,核苷酸差异也更大,但这些差异无统计学意义.济南市和济宁市的白纹伊蚊种群各自拥有6种单倍型,其中3种是共同存在的,而另外3种仅在济南市的种群中发现.种群结构分析结果显示,济南与济宁两地的白纹伊蚊种群的群体间核苷酸差异很小.结论 mtDNA-CO Ⅰ基因可用于物种鉴定以及研究白纹伊蚊种群遗传多样性的分子标志,为更有效的分类和防控策略提供支持.

目的 结合鼠疫疫源地调查和监测工作对青海省海东市小型兽类体表寄生蚤的构成、宿主选择和分布进行调查研究,并应用分子生物学方法对部分常见和疑难蚤种进行分子鉴定,以提高蚤种分类鉴别准确性.方法 应用细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(CO Ⅰ)基因对蚤类进行分子鉴定,并结合传统形态学分类方法综合鉴别蚤类.结果 海东市共发现和记录体表寄生蚤61种(亚种),隶属4总科5科28属.测得4科13属20种计99条蚤CO Ⅰ基因序列片段(约658 bp),种内遗传距离为0.2％～2.9％,种间为3.3％～22.9％,种间距离明显大于种内.结论 系统进化分析显示各蚤种单系的支持率均＞99％,CO Ⅰ基因和传统形态分类方法的结合可以更准确地鉴定海东市蚤类.

目的 对云南大理毛腿鼠耳蝠体表寄生虫的感染状况进行分析,并描述两种蛛蝇的形态特征,探究其系统进化关系.方法 2022年7月,在云南大理州剑川县捕捉毛腿鼠耳蝠,采集其体表寄生虫并进行鉴定.计算各体表寄生虫的构成比、感染率、平均多度和平均感染强度;使用优势度指数(Y)确定各体表寄生虫类群中的优势种;运用扩散指数(C)、I指数、聚块指数(m*/m)和K指数判断优势种的空间分布类型;利用协调系数(V)分析优势种之间的相互关系.描述两种寄生蛛蝇的主要形态学特征.提取蛛蝇基因组DNA,PCR扩增线粒体细胞色素C氧化酶1亚基(cox1)、细胞色素B(cytb)和16S核糖体RNA(16S rRNA)序列,测序并串联后,用MEGA 11以最大似然法构建基于这3个基因的系统进化树.结果 共捕获毛腿鼠耳蝠72只(雄性24只,雌性48只),体表寄生虫感染率为97.3％(70/72).共采集体表寄生虫1 745只,其中革螨1 463只,分属于2科5属7种,分别为织金巨刺螨、鼠耳蝠螨、围睫肪刺螨、柯氏蝠螨、盾板浆刺螨、宽埃螨和朝鲜巨刺螨;蛛蝇282只,分属于2属2种,分别为台湾蛛虱蝇和叉笔虱蝇;未检获其他体表寄生虫.毛腿鼠耳蝠的革螨感染率、平均多度和平均感染强度分别为94.4％(68/72)、20.32、21.53,均高于蛛蝇[91.7％(66/72)、3.92、4.27](Fisher 精确检验,P＜0.05;U=700、424,均P＜0.01).织金巨刺螨、鼠耳蝠螨和围睫肪刺螨为优势种(Y=0.30、0.23、0.22).优势种鼠耳蝠螨(C=1.98、I=0.98、m*/m=1.18、K=5.55)、织金巨刺螨(C=9.43、I=8.43、m*/m=2.15、K=0.87)和围睫肪刺螨(C=6.50、I=5.50、m*/m=2.02、K=0.98)在不同毛腿鼠耳蝠个体间均呈现聚集分布.鼠耳蝠螨与围睫肪刺螨(V=0.33,P＜0.05)、鼠耳蝠螨与织金巨刺螨(V=0.34,P＜0.05)、围睫肪刺螨与织金巨刺螨(V=0.72,P＜0.01)之间均存在正协调关系.台湾蛛虱蝇体长约3 mm,背板Ⅰ呈宽圆形,末端有约25根长刚毛,背板Ⅱ和背板Ⅵ之间有较多长毛,背板Ⅵ上有6根长刚毛和10根长刺.叉笔虱蝇体长为3.5～4.0 mm,背板Ⅰ呈长宽状,边缘有一排短刚毛,背板Ⅱ长约为宽的3倍,背板Ⅱ后方有两个突起,突起表面呈凹状,后缘尖锐带有色素沉着.台湾蛛虱蝇cox1、cytb和16S rRNA序列分别为875、338和455 bp,提交至GenBank获得的登录号分别为OQ127648、OQ134944和OQ127330;叉笔虱蝇cox1、cytb和16S rRNA序列分别为832、332和451 bp,提交至GenBank获得的登录号分别为OQ119629、OQ129602和OQ119632.系统进化树分析结果显示,台湾蛛虱蝇与短铗蛛虱蝇聚在同一个分支上,再与叉笔虱蝇聚在一支.结论 云南大理毛腿鼠耳蝠体表寄生虫感染率高,主要为革螨和蛛蝇,其中台湾蛛虱蝇与同属的短铗蛛虱蝇的亲缘关系最近,叉笔虱蝇与台湾蛛虱蝇和铗蛛虱蝇的亲缘关系较近.

DNA条形码目前广泛用于昆虫多样性研究.本研究采用DNA条形码(即线粒体细胞色素c氧化酶亚基Ⅰ基因COI5'端),通过比较所获分子分类操作单元(Molecular operational taxonomic units,MOTU)的种内遗传距离,探究DNA条形码在亚热带森林(位于我国江西省新岗山)不同昆虫类群中的物种鉴定和界定效用.数据分析中结合数据库比对信息,采用jMOTU、ABGD、bPTP、GMYC这4种物种界定方法获得MOTU,从而开展种内遗传距离分析.本研究共挑选出479个昆虫样本,获得475条COI序列,经NCBI、BOLD在线数据库比对属于6个目,与形态初步划分一致;物种界定分析获得288个MOTU,其中鳞翅目最多,达85个,膜翅目、双翅目、半翅目、鞘翅目次之,分别为80、74、21和20个,直翅目最少,仅8个.膜翅目和双翅目的种内遗传距离均值及标准偏差较大(膜翅目:0.89％±0.87％;双翅目:0.73％±0.58％),鳞翅目的最小(0.28％±0.20％).研究表明:不同昆虫类群的种内遗传距离虽然整体在一定范围,但仍然存在一定的差异,因此不能笼统地依靠遗传距离的距离阈值进行物种划分;现有数据库需要补充足够的昆虫物种信息,才能提升物种鉴定效率.本研究丰富了亚热带森林昆虫分子数据库,同时也为进一步探索基于分子分类学开展昆虫多样性研究提供了基础数据和参考.

目的:为保障临床用药的安全性和有效性,建立五倍子药材及其加工制品混伪、掺假特异性聚合酶链式反应(PCR)鉴定方法.方法:根据五倍子细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因序列设计引物,筛选出五倍子的稳定引物区间,并在区间内筛选获得五倍子的特异性单核苷酸多态性(SNP)位点,根据SNP位点设计五倍子特异性鉴别引物WBZ-F、WBZ-R,分别收集五倍子及其混伪品,建立五倍子配方颗粒特异性PCR鉴别方法并优化PCR体系,对该方法进行耐受性和适用性考察.结果:退火温度为 53℃,循环 36 次,五倍子及其配方颗粒经PCR及凝胶电泳后,可在约 138 bp处观察到单一明亮的特异性鉴别条带,伪品倍蛋蚜虫虫瘿无条带.结论:建立的特异性PCR鉴别方法可准确鉴别五倍子药材、标准汤剂冻干粉、配方颗粒中的五倍子蚜虫源性成分,也可为其他中药配方颗粒的质量标准研究提供参考.