1.临床资料：患者女，49岁，因“体检发现白细胞减少3 d”就诊于哈尔滨医科大学附属第二医院，2021年11月1日入院后查血常规：WBC 2.8×10 9/L，HGB 103 g/L，PLT 159×10 9/L。外周血分类：分叶4%、淋巴细胞96%；骨穿：原始细胞63%。支持急性粒细胞性白血病未分化型（AML-M1）诊断。骨髓活检：HE及PAS染色示骨髓增生较低下（30%），幼稚阶段细胞增多（约70%），胞质中等大，胞浆中等量，胞核圆形或不规则，染色质细致，偏成熟阶段粒红系细胞散在分布，巨核细胞偏少见；少量淋巴细胞散在分布。网状纤维染色（MF-0级）。免疫分型：表达CD117、CD38、CD33、CD9、MPO、部分表达CD56、弱表达CD123、CD13，可见异常髓系原始细胞65.61，符合AML诊断。白血病43种融合基因：阴性。染色体：46，XX［10］。2代测序：Ⅰ类突变：TET2、NPM1阳性。最后诊断为“急性髓系白血病伴NPM1”，预后良好组。予以去甲氧柔红霉素20 mg，1 d；10 mg，2～3 d；阿糖胞苷200 mg，1～7 d，诱导达CR。免疫残留及TET2、NPM1阴性后，予以2个疗程大剂量阿糖胞苷巩固及MA方案动员，于2022年3月12日给与地西他滨+改良BUCY方案治疗。2022年3月23日回输CD34计数为2.1×10 6/kg，13 d粒系植活，21 d血小板植活。2022年5月15日患者出现尿频、尿急、尿痛，出现肉眼血尿伴凝块，查尿常规示：隐血+++，尿蛋白++，红细胞计数176个/L，BKV-DNA 1.96E+007↑，JCV-DNA 1.35E+007↑，EBV-DNA未检出，HCMV-DNA未检出；予以水化、碱化、利尿，琥珀酸索利那新片、吗啡缓释片对症、更昔洛韦、膦甲酸钠抗病毒治疗2周未见好转，甲强龙1 mg/kg治疗2周症状反复，疼痛加重，于2022年6月16日予行高压氧治疗，治疗压力0.16 MPa（1.6 ATA），升压10 min，稳压70 min，佩戴面罩吸氧，每20 min休息5 min吸舱内空气，减压10 min出舱。1次/d，治疗过程顺利，患者无不适。治疗当日尿痛缓解，连续治疗10 d，膀胱炎症状完全恢复，尿常规恢复正常。随访至今，未复发。

目的 探究维甲酸诱导基因Ⅰ(DDX58)中的单核苷酸多态性位点(SNPs)是否与乙型肝炎病毒(HBV)感染慢性化有关.方法 2009年9月-2010年3月间,选取张家港市20个村的48 417人进行健康检查并定期随访,于2020年11月共纳入842例基线乙肝表面抗原(HBsAg)阳性患者为研究对象,其中无症状感染者674例,慢性乙型肝炎(CHB)患者168例.对2个单核苷酸多态性位点(DDX58 rs9695310、rs10738889)进行基因分型,采用t检验、x2检验、多因素logistic回归等多种统计学方法,探讨其与HBV感染慢性化的关系.结果 rs9695310基因多态性与HBV感染慢性化相关(P=0.004).与无症状感染者相比,rs9695310的突变C等位基因与患者慢性化显著相关(显性模型:OR=1.74,95％CI:1.18～2.54).同时,rs9695310、性别、年龄、血小板、白球比例及总胆固醇是HBV感染慢性化的独立预测因子(P均＜0.05).ROC曲线显示,以上6个独立因素都能够较好地将HBV感染慢性化感染者同无症状感染者进行区分(AUC=0.738).结论 位于DDX58上的rs9695310的突变C等位基因与中国汉族人群HBV感染慢性化具有相关性,可作为HBV感染转归的预测指标.

目的 观察干扰素/维甲酸诱导凋亡相关基因(GRIM-19)、小鼠双微体2(MDM2)在肺腺癌组织中的表达变化,并探讨其与患者临床特征的关系.方法 选择行手术治疗的肺腺癌患者60例,术中收集其肺腺癌组织和癌旁正常肺组织各60例份,采用免疫组化法检测GRIM-19、MDM2蛋白阳性表达情况.比较不同临床特征的肺腺癌患者癌组织GRIM-19、MDM2阳性表达率,分析肺腺癌组织GRIM-19、MDM2表达的相关性.结果 肺腺癌组织和癌旁正常肺组织GRIM-19阳性表达率分别为55%(35/60)、78%(47/60),MDM2阳性表达率分别为43%(26/60)、23%(14/60),两者比较P均<0.05.有淋巴结转移、TNM分期Ⅲ期和低分化的肺腺癌患者癌组织GRIM-19阳性表达率分别低于无淋巴结转移、TNM分期Ⅰ期及Ⅱ期和高分化者,MDM2阳性表达率分别高于无淋巴结转移、TNM分期Ⅰ期及Ⅱ期和高分化者(P均<0.05).肺腺癌组织GRIM-19与MDM2的表达呈负相关关系(r=-0.530,P<0.05).结论 肺腺癌组织中GRIM-19表达降低而MDM2表达升高,两者可能共同参与了肺腺癌的发生发展.

目的 探讨导入酵母NDI1 基因能否替代人功能缺陷的线粒体复合体Ⅰ,为复合体Ⅰ功能障碍所致散发型帕金森病(PD)的基因治疗提供研究基础.方法 将表达酵母NDI1 的重组腺相关病毒(rAAV-NDI1)感染鱼藤酮诱导的分化型帕金森病细胞模型.设DMSO+空载、鱼藤酮+空载、鱼藤酮+NDI1 共 3 组.用Western blot、免疫荧光染色、氧耗测定、ATP含量测定、ROS测定等方法检测细胞病理学、线粒体功能方面指标.结果 鱼藤酮+NDI1 组较鱼藤酮+空载组,细胞形态明显改善,细胞存活率显著上升(P＜0.05),pS129 α-突触核蛋白、全细胞自噬显著下降(P＜0.05,P＜0.001);复合体Ⅰ依赖性氧耗显著升高(P＜0.01),细胞总ATP 合成、线粒体氧化磷酸化偶联的ATP合成显著上升(P＜0.01),线粒体ROS、线粒体自噬显著降低(P＜0.01,P＜0.001).结论 导入酵母NDI1 基因可以在鱼藤酮诱导的分化型帕金森病细胞模型中,替代性弥补复合体Ⅰ的功能缺陷,对细胞病理学、线粒体功能的损伤具有改善作用.

目的 探讨乙型肝炎病毒e抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)对Bewo细胞维甲酸诱导基因-I(retinoic acidinducible-Ⅰ,RIG-Ⅰ)和线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)表达的作用.方法 首先以终浓度2 μg/mL的RIG-Ⅰ配体poly(dAT∶dAT)处理Bewo细胞24 h,观察RIG-Ⅰ、MAVS mRNA的表达.然后将5μgHBeAg重组质粒pcDNA3.1 (+)-HBe转染Bewo细胞,转染48 h后,以2μg/mL的poly(dAT∶ dAT)刺激24 h.采用实时荧光定量反转录PCR和酶联免疫吸附测定分别检测细胞RIG-Ⅰ、MAVS mRNA表达及上清干扰素-β(interferon-β,IFN-β)水平.并采用免疫荧光染色法观察HBeAg对细胞核因子-κB (nuclear factor-κB,NF-κB)p65入核的影响.结果 poly(dAT∶ dAT)可诱导Bewo细胞RIG-Ⅰ、MAVS mRNA表达(27.86±9.49,21.75±8.04),高于对照组(14.51±6.27,11.59±4.73)(P＜0.01).转染5μg HBeAg重组质粒组poly(dAT∶ dAT)可诱导Bewo细胞RIG-Ⅰ、MAVS mRNA表达(13.33±4.23,10.48±3.17)及IFN-β产生[(14.20±5.01)pg/mL],低于对照组[27.86±9.49,21.75 ±8.04;(47.69± 14.3)pg/mL](P＜0.01),但与pcDNA3.1-HBe-5组[11.82±3.58,9.39±3.22;(10.82± 3.75)pg/mL]比较,差异无统计学意义(P＞0.05).且HBeAg可干扰poly(dAT∶dAT)诱导Bewo细胞NF-κB p65入核,抑制NF-κB的激活.结论 HBeAg可下调Bewo细胞RIG-Ⅰ、MAVS mRNA的表达,并抑制NF-κB入核及IFN-β产生,这可能是乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)逃避宿主免疫应答的一种重要策略.

目的 探讨不同浓度全反式维甲酸(ATRA)对小鼠肝癌细胞Hepa1-6成熟分化及细胞自噬水平的影响.方法 以小鼠肝癌细胞Hepa1-6为研究对象,分别给予0.1、1、10 μmol/L浓度的ATRA处理,荧光定量PCR和Western blot检测肝细胞相关标志基因的表达,吲哚菁绿(ICG)及过碘酸-希夫(PAS)染色检测小鼠肝癌细胞Hepa1-6的成熟功能,透射电镜观测细胞连接及自噬小体,选择最适的ATRA作用浓度;Western blot检测自噬相关标志蛋白的表达,ptfLC3质粒转染细胞后共聚焦观察自噬流变化,检测自噬流是否通畅.结果 相较于空白对照组,ATRA可呈浓度依赖性抑制肝前体标志蛋白AFP的表达,并促进肝细胞成熟标志ALB、CK18、TAT和ApoB的表达,ICG及PAS染色提示阳性细胞数明显增多;透射电镜结果显示ATRA诱导组的紧密连接和细胞骨架明显增多,可见高尔基复合体以及较多的自噬小体和自噬溶酶体.均以10 μmol/L组最为显著,作为最适终浓度.自噬相关标志蛋白LC3-II、Beclin-1、RAB7、P62的表达不同程度增高,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值明显增加(P<0.05),激光共聚焦可见10 μmol/L ATRA处理组细胞胞浆内绿色亮点的自噬小体及红色亮点的自噬溶酶体均较对照组明显增多.结论 ATRA可诱导小鼠肝癌细胞Hepa1-6的成熟分化,并促进细胞自噬水平增高.

目的 研究全反式维甲酸(atRA)诱导小鼠畸胎瘤P19细胞分化模型中LncRNA Neat1表达的变化,探究组蛋白修饰对其表达的影响.方法 用含终浓度为0.5 μmol/L atRA的培养基诱导P19细胞分化,检测神经分化标志物Mash1的mRNA表达;利用RT-qPCR检测在P19细胞神经分化过程中LncRNA Neat1的表达变化;利用组蛋白修饰调控因子抑制剂曲古柳菌素(TSA)、烟酰胺(NAM)、腺苷二醛(AdOx)处理P19细胞,观察对Neat1表达的影响.结果 成功建立atRA诱导的P19神经分化模型,神经分化标志物Mash1在P19分化过程中表达上调;诱导过程中Neat1表达显著上调( P＜0.01),Ⅰ类和Ⅱ类去乙酰化酶抑制剂TSA可诱导Neat1表达,但Ⅲ类去乙酰化酶抑制剂NAM和甲基转移酶抑制剂AdOx对Neat1的表达无显著影响.结论 全反式维甲酸诱导P19分化过程中,LncRNA Neat1表达显著上调,维持组蛋白高乙酰化状态的去乙酰化酶抑制剂TSA可参与促进Neat1的表达.

目的 探讨固有免疫模式识别受体(PRRs)包括Toll样受体(TLRs)、维甲酸诱导基因Ⅰ样受体(RLRs)和核苷酸结合寡聚化结构域样受体(NLRs)及其信号通路在登革热致病和免疫过程中的作用.方法 收集登革热患者病程中3个不同时间点的抗凝外周血标本,用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMC),提取细胞RNA,用聚合酶链反应芯片(PCR array)检测基因表达水平.结果 84个基因中部分受体分子、信号分子和效应分子基因在登革热患者PBMC中表达异常,与健康对照相比,主要表现为表达上调,尤其在登革热发病早期,之后随病情恢复,基因表达水平逐渐趋于正常;其中TLRs家族中TLR7和TLR8受体基因表达水平显著升高,而TLR3和TLR9基因表达没有明显变化;RLRs家族中3个受体分子RIG-Ⅰ、MDA5和LGP2基因表达水平均显著上调,NLRs家族中OAS2和NOD2受体基因表达也表现为上调.结论 PRRs介导的信号通路在登革热致病及免疫过程中起重要作用.

在天然免疫应答尤其是抗病毒天然免疫应答中,维甲酸诱导基因-Ⅰ(retinoic acid inducible gene Ⅰ,RIG-Ⅰ)是重要的胞内病毒RNA模式识别受体,其通过结合和识别病毒来源的RNA进而活化下游RIG-Ⅰ信号通路,从而激发炎症因子和Ⅰ型干扰素的表达,实现抗病毒天然免疫应答的启动.然而,新近研究表明,在肿瘤发生发展的过程中,RIG-Ⅰ亦可发挥重要的调控作用.在肿瘤进展的不同病理阶段,RIG-Ⅰ可发挥抑制或促进肿瘤进展的功能.本文就RIG-Ⅰ在不同肿瘤及其发生发展不同阶段所发挥的抑癌基因或促癌基因样作用的研究进展作一综述.

丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)急性感染期一般是无症状的,大多数感染者不能清除该病毒容易发展成慢性感染,少部分感染者甚至发展为肝硬化、肝癌.传统的治疗方法是聚乙二醇干扰素联合利巴韦林方案,但抗病毒疗效不佳且不良反应较大,这可能与HCV能够通过多种机制逃避宿主的免疫反应有关.固有免疫应答是机体抵抗病原微生物的第一道防线,维甲酸诱导基因I (Retinoic acid inducible gene Ⅰ,RIG-Ⅰ)作为模式识别受体,在识别HCV病毒,启动免疫应答中发挥重要作用.