目的:探讨斑点型锌指结构蛋白[speckle-type POZ(pox virus and zinc finger protein) protein, SPOP]在肠道病毒71型(EV71)感染中的作用。方法:免疫共沉淀分析SPOP对EV71非结构蛋白2A蛋白酶(2A pro)泛素化水平的影响，Western blot检测干扰素调节因子3(IRF3)蛋白磷酸化水平，过表达或敲低细胞中SPOP后感染EV71，RT-qPCR分析IFN-β转录水平，RT-qPCR和Western blot检测EV71结构蛋白VP1的转录水平及蛋白质水平。 结果:过表达HA-SPOP后感染EV71，发现EV71感染RD细胞受抑，同时EV71-2A pro的泛素水平呈HA-SPOP梯度依赖增多。转染shSPOP质粒进行内源性SPOP敲低后，黑色素瘤分化相关基因5(MDA5)、接头蛋白线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)、磷酸化干扰素调节因子3 (p-IRF3)水平呈剂量依赖地减少，而转染HA-SPOP质粒后，MDA5、MAVS、p-IRF3蛋白质水平呈剂量依赖地增加。SPOP高、低表达促进或降低EV71感染的细胞表达IFN-β mRNA，同时抑制和增加VP1在mRNA或蛋白质水平表达。 结论:SPOP可提高EV71-2A pro的泛素化水平从而促进2A pro降解，推测SPOP可通过抑制2A pro对视黄酸诱导基因蛋白-Ⅰ(RIG-Ⅰ)样受体(RLR)信号通路中关键分子MAVS和MDA5的降解，从而上调IRF3磷酸化水平促进IFN-β释放，最终活化宿主细胞抗病毒固有免疫抑制EV71复制。

线粒体相关内质网膜(mitochondria-associated membranes，MAMs)是内质网和线粒体外膜通过蛋白质连接组成的一个高度特化亚细胞区，许多蛋白质通过定位或招募到MAMs参与钙稳态维持、细胞凋亡、脂质合成与利用、细胞自噬等重要细胞事件，并为抗病毒信号转导和NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体组装提供平台。鉴于这些功能，MAMs在抵抗病原体感染中发挥重要作用，而病原体也进化出不同策略，靶向MAMs以逃避或拮抗宿主免疫应答，或通过调控MAMs功能为感染建立提供便利。病原体感染是引起炎症反应最常见的原因，急性炎症反应失调常引起一系列慢性炎症性疾病。本文将对MAMs功能与病原体诱导的炎症反应之间联系作一综述。

目的:探讨新型冠状病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2）非结构蛋白1（nonstructural protein 1，NSP1）对I型干扰素（type I interferon，IFN-I）应答的影响及其作用机制。方法:为研究SARS-CoV-2的NSP1对I型IFN产生的影响，构建NSP1表达质粒，并通过免疫荧光检测其蛋白表达能力。通过双荧光素酶报告基因实验检测NSP1对IFN-β启动子激活的作用。构建NSP1突变体M1（K163AH164A）和M2（△161-180），验证突变位点对IFN-β启动子激活的影响。结果:NSP1显著抑制维甲酸诱导基因蛋白I、黑色素瘤分化相关蛋白5、线粒体抗病毒信号蛋白、TANK结合激酶1、干扰素调节因子3、干扰素调节因子7诱导的下游IFN-β启动子的激活，并对I型IFN通路的各关键分子的蛋白表达具有抑制作用，NSP1 C端的KH基序是其发挥抑制作用的关键位点。结论:SARS-CoV-2 NSP1能够拮抗宿主I型干扰素免疫应答，实现病毒的天然免疫逃逸。

目的 发现严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)木瓜样蛋白酶(PLpro)的宿主互作分子,探索其生物学意义.方法 邻近蛋白标记结合质谱分析筛选宿主互作分子DEAD-box解旋酶3(DDX3);免疫荧光法分析PLpro与DDX3的胞内共定位;免疫共沉淀法分析PLpro与DDX3的相互作用,以及PLpro对DDX3与IκB激酶ε(IKKe)和TANK结合激酶1(TBK1)、DDX3与线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)互作的影响;荧光素酶报告基因法检测PLpro对β干扰素(IFN-β)通路的影响和对底物的酶切效率.结果 DDX3能够与PLpro发生细胞内共定位和相互作用;PLpro可能抑制DDX3-MAVS复合体形成,抑制DDX3-IKKε-TBK1之间的相互作用,负调控Ⅰ型干扰素通路;DDX3过表达情况下,PLpro/PLP-TM对底物位点的切割效率显著升高,而DDX3表达降低时,切割效率则显著降低.结论 DDX3可能是PLpro的宿主相互作用分子之一;PLpro负调控DDX3活化的IFN-β表达,为病毒复制提供有利的免疫环境,提升蛋白酶切割活性,共同促进病毒复制.

目的 探讨HBV刺激下人绒毛膜滋养层细胞(HTR8-S/Vneo)线粒体抗病毒信号蛋白(Mitochondrial Antiviral Signaling Protein,MAVS)信号通路对外周血单个核细胞(Peripheral Blood Mononuclear Cell,PBMC)乙肝疫苗免疫反应的影响及作用机制.方法 HBV DNA阳性患者血清刺激HTR8-S/Vneo 后,采用MAVS过表达质粒/siRNA分别转染至HTR8-S/Vneo以过表达/沉默MAVS,并将其与人类免疫细胞集合体PBMC共培养后给予乙肝疫苗刺激.采用逆转录-实时荧光定量 PCR(Reverse Transcription-Quantitative Real-Time PCR,RT-qPCR)及流式细胞术(Flow CytoMetry,FCM)检测MAVS信号通路相关分子(MAVS、NF-κB、pNF-κB、IRF3和pIRF3等)mRNA及蛋白水平;酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测 IL-2、IL-6、IFN-β 和 IL-17 等细胞因子表达;FCM 检测PBMC中CD4+T细胞比例.采用独立样本t检验进行数据分析.结果 HBV下调MAVS、NF-κB、IRF3 mRNA表达(t=6.66,P=0.003;t=14.18,P＜0.001;t=3.70,P=0.021)及 MAVS、NF-KB、pNF-κB 蛋白表达(t=3.42,P=0.042;t=4.23,P=0.013;t=4.86,P=0.008),抑制抗病毒因子 IFN-β 的产生(t=9.83,P=0.010);沉默 HTR8-S/Vneo中MAVS下调MAVS mRNA及蛋白表达(t=31.20,P＜0.001;t=6.53,P=0.023),抑制PBMC乙肝疫苗免疫反应中IFN-β的产生(t=5.46,P=0.032),降低CD4+T细胞比例(t=9.07,P=0.001);过表达MAVS则上调MAVS mRNA及蛋白表达(t=-34.26,P＜0.001;t=-5.11,P=0.036),诱导PBMC乙肝疫苗免疫反应中IFN-β的产生(t=-7.04,P=0.020),CD4+T细胞比例数值上升高(t=-0.73,P=0.506).结论 HBV可抑制HTR8-S/Vneo中MAVS信号通路;过表达MAVS则促进PBMC乙肝疫苗的免疫反应.

肝细胞癌是一种肝脏最常见且严重威胁人类生命健康的恶性肿瘤.蒽醌类化合物大黄素,广泛存在于诸多天然中草药和保健品中,因其抗肿瘤、抗氧化、抗病毒、抗炎、免疫调节等药理作用而被国内外研究人员广泛关注.经过查阅国内外文献,总结出大黄素抗肝癌作用机制为:调控细胞周期蛋白,阻滞细胞周期,抑制肝癌细胞增殖;通过调控线粒体、内质网应激、死亡受体和经典信号通路等途径诱使肝癌细胞凋亡;调控E-钙黏蛋白、缺氧诱导因子-1α蛋白和炎症因子表达;靶向癌基因和癌通路抑制肝癌细胞侵袭迁移;调控M2巨噬细胞极化;联合多种抗癌手段增效解毒;与其他药物合成的新型化合物也有较好的抗癌活性.通过综述大黄素抗肝细胞癌的研究现状,得出大黄素抗肝癌作用机制广泛,有潜力推动未来的肝癌药物治疗或联合放化疗、免疫治疗.

目的 探讨乙型肝炎病毒e抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)对Bewo细胞维甲酸诱导基因-I(retinoic acidinducible-Ⅰ,RIG-Ⅰ)和线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)表达的作用.方法 首先以终浓度2 μg/mL的RIG-Ⅰ配体poly(dAT∶dAT)处理Bewo细胞24 h,观察RIG-Ⅰ、MAVS mRNA的表达.然后将5μgHBeAg重组质粒pcDNA3.1 (+)-HBe转染Bewo细胞,转染48 h后,以2μg/mL的poly(dAT∶ dAT)刺激24 h.采用实时荧光定量反转录PCR和酶联免疫吸附测定分别检测细胞RIG-Ⅰ、MAVS mRNA表达及上清干扰素-β(interferon-β,IFN-β)水平.并采用免疫荧光染色法观察HBeAg对细胞核因子-κB (nuclear factor-κB,NF-κB)p65入核的影响.结果 poly(dAT∶ dAT)可诱导Bewo细胞RIG-Ⅰ、MAVS mRNA表达(27.86±9.49,21.75±8.04),高于对照组(14.51±6.27,11.59±4.73)(P＜0.01).转染5μg HBeAg重组质粒组poly(dAT∶ dAT)可诱导Bewo细胞RIG-Ⅰ、MAVS mRNA表达(13.33±4.23,10.48±3.17)及IFN-β产生[(14.20±5.01)pg/mL],低于对照组[27.86±9.49,21.75 ±8.04;(47.69± 14.3)pg/mL](P＜0.01),但与pcDNA3.1-HBe-5组[11.82±3.58,9.39±3.22;(10.82± 3.75)pg/mL]比较,差异无统计学意义(P＞0.05).且HBeAg可干扰poly(dAT∶dAT)诱导Bewo细胞NF-κB p65入核,抑制NF-κB的激活.结论 HBeAg可下调Bewo细胞RIG-Ⅰ、MAVS mRNA的表达,并抑制NF-κB入核及IFN-β产生,这可能是乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)逃避宿主免疫应答的一种重要策略.

新近的研究结果表明,当机体受到病原微生物感染、应激等刺激时,细胞的线粒体会由于活性氧(ROS)的积累、钙离子的异常等发生损伤,受损的线粒体与线粒体双磷脂酰甘油、线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)等通过调控炎性小体的形成,进而影响含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)依赖的炎性细胞因子如白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素18(IL-18)等的分泌以及细胞焦亡(pyroptosis)的发生,在机体抵抗感染的发生发展中发挥重要作用.本文将着重探讨线粒体在炎性小体激活过程中的双向调节作用.

华蟾素是我国传统中药材中华大蟾蜍干皮的提取物,其主要成分为蟾毒内酯类、生物碱类、多肽类、胆固醇类等.随着对华蟾素药理作用的深入研究,已证实华蟾素在抗炎、抗病毒、抗肿瘤、消肿止痛等方面具有重要的应用价值.近年来,华蟾素的抗肿瘤活性逐渐被国内外学者重视.分子药理学研究表明,华蟾素主要通过增强机体免疫功能、抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、逆转肿瘤细胞多药耐药性以及抑制肿瘤血管生成等多种途径发挥抗肿瘤作用.华蟾素诱导细胞凋亡的机制涉及广泛,包括死亡受体介导的外源性信号通路和线粒体参与的内源性信号通路,有多种酶或蛋白参与了华蟾素诱导细胞凋亡的过程.临床研究表明,华蟾素作为临床上常用的抗肿瘤中药制剂,具有低毒、副作用少、抗癌谱广等特点,广泛应用于肝癌、胃癌、肺癌、结肠癌、食管癌、胆囊癌、非霍奇金淋巴瘤等发病率较高的肿瘤的治疗,无论单独应用还是与其他药物联合应用均表现出良好疗效,单独应用时,对中晚期肿瘤患者具有较好疗效,联合应用时,可以提高疗效,减少不良反应.为了促进华蟾素抗肿瘤活性的研究,扩大其应用前景,本文通过对华蟾素近年来相关文献的整理归纳,对其抗肿瘤机制的研究进展及其在临床上的应用做一综述,以供实验研究及临床参考.

目的:了解藏药红景天的药理作用及其机制的研究进展,为该药材的进一步开发和临床应用提供理论参考.方法:以"红景天""药理作用""机制"等的中英文为关键词,在中国知网、万方、Web of Science、PubMed、ScienceDirect等数据库中进行检索,检索时限设置为2007-2017年.结果共获得文献15027篇,并筛选出835篇文献作为基础数据,就红景天对心脑血管系统、神经系统、呼吸系统等的药理作用及其机制进行综述.结果与结论:我国药典以大花红景天为红景天的基源植物.红景天及其活性单体(以红景天苷为主)具有改善心肌损伤、保护心肌细胞的作用;能治疗阿尔茨海默病、帕金森病、重度抑郁症、创伤性颅脑损伤及缺血性脑损伤等神经系统疾病;能治疗肺动脉高压、肺组织纤维化、慢性阻塞性肺疾病等呼吸系统疾病;还具有护肝、抗肿瘤、抗病毒等药理活性.其机制多与抗氧化应激、抗炎及抑制凋亡等有关,涉及对丝裂原活化蛋白激酶信号通路、磷酯酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/糖原合成酶激酶3β信号通路、Wnt/β-catenin信号通路、活性氧自由基/一氧化氮相关的线粒体信号通路、应激活化蛋白激酶/Jun氮端蛋白激酶信号通路、核因子E2相关因子2抗氧化信号通路、细胞核因子κB、转化生长因子β1/Smad-2/-3通路、腺苷受体A2a相关的线粒体通路、Janus激酶2/信号传导及转录激活因子3信号通路等的调控.但目前对红景天及其活性成分的体内生物学过程及在各组织、靶器官中的分布等尚缺乏研究数据,其作用机制仍需进一步深入研究;同时,应集中关注其优势病种,尤其是缺氧诱发的心脑血管及呼吸系统疾病(高原红细胞增多症、高原脑水肿、高原肺水肿等)进行机制研究,找出红景天或其主要单体成分的关键调控靶标等,为其治疗高原缺氧引起的心脑血管疾病提供确切的分子机制.