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抑制miR-206对子痫前期滋养细胞增殖凋亡及侵袭能力的影响
编辑人员丨16小时前
目的 探究抑制miR-206对子痫前期滋养细胞HTR-8/Svneo增殖、凋亡及侵袭能力的影响.方法 体外培养人绒毛膜滋养细胞HTR-8/Svneo细胞系,将其分为对照组、缺氧组、缺氧+阴性对照(NC)组和缺氧+miR-206抑制剂(miR-206 inhibitor)组4组.miR-206相对表达量、增殖、凋亡和侵袭情况分别采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)、5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)、Hoechst 33258染色法和Transwell小室测定.E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)相对表达量使用蛋白质印迹技术法测定.结果 经过转染及氯化钴(CoCl2)处理后,缺氧组miR-206、E-cadherin和Caspase-3表达及凋亡细胞数均高于对照组,而细胞增殖率、相对侵袭率及Vimentin、N-cadherin和Cyclin D1表达水平均低于对照组(P<0.05).与缺氧+NC组相比,缺氧+miR-206 inhibitor组miR-206、E-cadherin和Caspase-3表达水平及凋亡细胞数明显降低(P<0.05),而细胞增殖率、相对侵袭率及Vimentin、N-cadherin和Cyclin D1表达水平明显增加(P<0.05).结论 抑制miR-206可能通过促进上皮间质转化(EMT),下调Caspase-3表达水平和上调Cyclin D1蛋白水平来促进缺氧条件下HTR-8/Svneo细胞的增殖和侵袭能力,抑制其凋亡能力.
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编辑人员丨16小时前
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CIB1通过Wnt/β-catenin信号通路调控三阴性乳腺癌细胞增殖和迁移及侵袭机制研究
编辑人员丨1周前
目的 探讨CIB1对三阴性乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制.方法 通过慢病毒转染构建过表达CIB1的MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞,实验分为NC组和CIB1组.采用细胞计数试剂盒8(CCK8)、5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)实验检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力.同时,采用实时荧光定量-聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹实验检测细胞内β-catenin、活化蛋白C(APC)、糖原合酶激酶3β(GSK-3β)、c-myc的mRNA和蛋白表达情况.结果 MDA-MB-231 细胞内 NC 组和 CIB1 组 CIB1 蛋白表达水平分别为 0.75±0.17 和 1.53±0.38,t=3.267,P=0.031.MDA-MB-468 细胞内 NC 组和 CIB1 组 CIB1 蛋白表达水平分别为 0.91±0.01 和 1.12±0.07,t=4.953,P=0.008.CCK8实验结果显示,MDA-MB-231细胞中NC组和CIB1组增殖力差异有统计学意义,F组别=120.088,P组别<0.001;F时间=408.784,P时间<0.001;F组别×时间=14.177,P组别×时间<0.001.MDA-MB-468细胞中NC组和CIB1组增殖力差异有统计学意义,F组别=277.649,P组别<0.001;F时间=1 281.882,P时间<0.001;F组别×时间=33.378,P组别×时间<0.001.EdU实验结果显示,MDA-MB-231细胞中NC组和CIB1组增殖率分别为(31.42±0.01)%和(46.20±0.02)%,t=14.610,P<0.001;MDA-MB-468 细胞中 NC 组和 CIB1 组增殖率分别为(30.57±0.02)%和(42.61±0.03)%,t=6.397,P=0.003.MDA-MB-231 细胞中 NC 组和 CIB1 组细胞凋亡率分别为(4.77±0.01)%和(2.07±0.10)%,t=3.785,P=0.019;MDA-MB-468 细胞中 NC 组和 CIB1 组细胞凋亡率分别为(9.53±0.00)%、(3.90±0.00)%,t=19.390,P<0.001.MDA-MB-231 细胞中 NC 组和 CIB1 组细胞迁移率分别为(46.20±0.01)%和(64.35±0.10)%,t=3.386,P=0.028;MDA-MB-468 细胞中 NC 组和 CIB1 组细胞迁移率分别为(24.84±0.05)%和(56.83±0.06)%,t=7.278,P=0.002.MDA-MB-231 细胞中 NC 组和 CIB1 组穿膜细胞数分别为(300.67±25.17)和(411.67±24.99)个,t=5.421,P=0.006;MDA-MB-468 细胞中 NC 组和 CIB1 组穿膜细胞数分别为(257.00±31.43)和(388.00±8.72)个,t=6.956,P=0.002.qRT-PCR 和蛋白质印迹实验结果显示,MDA-MB-231 和 MDA-MB-468 细胞中 CIB1 组 β-catenin、APC、c-myc mRNA和蛋白表达均升高,GSK-3β mRNA和蛋白表达均降低,差异均有统计学意义,均P<0.05.结论 CIB1促进乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移能力,抑制细胞凋亡,可能通过促进Wnt/β-catenin信号通路的激活发挥促癌作用.
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编辑人员丨1周前
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树突表达特异性7跨膜蛋白促进甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制
编辑人员丨1周前
目的:观察树突表达特异性7跨膜蛋白(DCSTAMP)对甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其机制。方法:在基因表达谱交互式分析平台(GEPIA)中分析DCSTAMP在甲状腺乳头状癌组织中的表达;采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测甲状腺乳头状癌细胞系KTC-1、FTC-133及甲状腺正常细胞Nthy-ori 3-1中DCSTAMP表达的差异;在KTC-1和FTC-133细胞中分别转染过表达和敲低质粒及其对照,构建DCSTAMP过表达和敲低细胞模型;过表达组通过细胞增殖/毒性检测试剂盒(CCK-8)、5-乙炔基-2’-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)细胞增殖检测试剂盒检测DCSTAMP基因过表达后对增殖的影响;蛋白印迹法验证过表达后对细胞核增殖抗原(Ki-67)蛋白、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的影响;敲低组通过细胞划痕、侵袭测定实验(Transwell)实验检测DCSTAMP基因敲低后对迁移、侵袭的影响;蛋白印迹法验证敲低后对神经钙黏着蛋白(NCAD)、磷酸化蛋白激酶B蛋白(p-Akt)、总蛋白激酶B蛋白(t-Akt)表达的影响;两样本均数比较采用成组配对 t检验分析。 结果:RT-qPCR和Western blot结果均显示DCSTAMP基因在甲状腺乳头状癌细胞KTC-1、FTC-133中的表达高于甲状腺正常细胞Nthy-ori 3-1(RT-qPCR:DCSTAMP基因在Nthy-ori 3-1、KTC-1、FTC-133细胞中mRNA相对表达量分别为1.020±0.202、17.350±3.326、8.684±0.030,Nthy-ori 3-1与KTC-1比较: t=4.901, P<0.05;Nthy-ori 3-1与FTC-133比较: t=37.460, P<0.01;Western blot:DCSTAMP基因在Nthy-ori 3-1、KTC-1、FTC-133细胞中蛋白相对表达量分别为1.000±0.009、3.227±0.444、3.367±0.073,Nthy-ori 3-1与KTC-1比较: t=9.628, P<0.01;Nthy-ori 3-1与FTC-133比较: t=55.580, P<0.01);KTC-1、FTC-133细胞中DCSTAMP过表达组细胞增殖速度高于对照组(KTC-1对照组与过表达组第3天相对增殖速度:0.215±0.010:0.397±0.029, t=6.198, P<0.01;FTC-133对照组与过表达组第3天相对增殖速度:0.350±0.364:0.432±0.025, t=33.640, P<0.01),过表达组增殖能力高于对照组[KTC-1对照组比过表达组:(8.382±1.400)%比(91.253±1.699)%, t=65.220, P<0.01;FTC-133对照组与过表达组:(14.385±2.441)%比(91.332±1.159)%, t=49.320, P<0.01],过表达组Ki-67表达高于对照组(KTC-1对照组与过表达组蛋白相对表达量:1.000±0.038比1.282±0.134, t=9.968, P<0.01;FTC-133对照组与过表达组蛋白相对表达量:1.000±0.011比1.382±0.221, t=40.920, P<0.01),过表达组MAPK表达高于对照组(KTC-1对照组与过表达组:1.000±0.012比1.088±0.057, t=10.720, P<0.01;FTC-133对照组与过表达组:1.000±0.039比1.220±0.123, t=9.404, P<0.01),过表达组MAPK通路亚家族细胞外信号调节激酶(ERK)蛋白表达高于对照组:(1.000±0.005比7.047±0.088, t=68.650, P<0.01;FTC-133对照组与过表达组:1.000±0.003比1.983±0.029, t=34.000, P<0.01);而在KTC-1、FTC-133中敲低DCSTAMP基因后,对照组细胞迁移速度高于敲低组(KTC-1对照组与敲低组:(72.545±0.704)%比(45.016±2.156)%, t=21.020, P<0.01;FTC-133对照组与敲低组:(82.422±0.196)%比(49.824±5.402)%, t=10.450, P<0.01),对照组侵袭能力高于敲低组(KTC-1对照组与敲低组:(320.667±13.013)%比(172.333±11.240)%, t=14.940, P<0.01;FTC-133对照组与敲低组侵袭细胞数:302.667±24.111比228.000±14.422, t=4.603, P<0.01),p-Akt表达对照组高于敲低组(KTC-1对照组与敲低组:1.000±0.029比0.376±0.355, t=21.980, P<0.01;FTC-133对照组与敲低组:1.000±0.010比0.809±0.110, t=35.900, P<0.01)。 结论:DCSTAMP基因通过激活MAPK通路亚家族ERK及Akt磷酸化在甲状腺乳头状癌细胞系中可以促进肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭。
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编辑人员丨1周前
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结肠癌转移相关基因1调控β-连环蛋白通路在肺腺癌侵袭转移中的作用
编辑人员丨1周前
目的:探讨结肠癌转移相关基因1(MACC1)在侵袭转移中的作用及其机制。方法:收集2016年7月至2017年9月于江南大学附属医院手术切除肺癌组织及其对应的癌旁组织180例,构建组织微阵列免疫组织化学检测组织中MACC1与β-连环蛋白(β-catenin)的表达情况。采用慢病毒介导的小干扰RNA(siRNA)下调MACC1在A549细胞中的表达,分为对照组、慢病毒空载体组和敲低组。构建短发卡RNA(shRNA)质粒实现MACC1-shRNA干扰质粒后慢病毒感染H1299细胞(购自美国ATCC公司)使MACC1基因的沉默,分为质粒转染组与慢病毒空载体组,采用5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)法、Transwell小室实验、划痕试验分别检测细胞增殖能力、侵袭性和迁移性。组间比较采用两独立样本 t检验。 结果:组织芯片免疫组织化学显示肺腺癌组织中MACC1与β-catenin的表达水平呈正相关(相关系数0.397, P<0.05);慢病毒介导A549细胞MACC1下调后引起β-catenin表达下降[对照组(0.83±0.04)比空载体组(0.91±0.09, t=-0.241, P>0.05;空载体组(0.91±0.09)比敲低组(0.24±0.02, t=1.940, P<0.05);对照组(0.83±0.04)比敲低组(0.24±0.02, t=1.699, P<0.05];沉默MACC1后行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测H1299的β-catenin表达显著下降(0.79±0.07比0.38±0.08, t=3.267, P<0.05),且质粒转染组H1299细胞平均穿膜细胞数[(18.3±2.36)个]少于慢病毒空载体组[(36.2±2.1)个, t=-13.460, P<0.05];划痕实验显示24 h后质粒转染组[(266±27) μm]距离明显小于慢病毒空载体组[(931±36) μm, t=2.631, P<0.01]。 结论:MACC1在肺腺癌中高表达,促进癌基因β-catenin的表达,从而促进肺腺癌的侵袭转移。
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编辑人员丨1周前
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环状RNA_0001495/微小RNA-527/Robo1轴对膀胱癌细胞增殖和转移的影响
编辑人员丨1周前
目的:探讨环状RNA(circRNA)_0001495/微小RNA(miR)-527/Robo1轴对膀胱癌细胞增殖和转移的影响。方法:人膀胱癌细胞系T24培养至对数生长期,分为circRNA对照组和circRNA_0001495 KD组,采用对照circRNA短发卡RNA(shRNA)和circRNA_0001495 shRNA慢病毒感染T24细胞,建立稳转细胞系。分别采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色分析两组细胞增殖能力;采用划痕实验和Transwell实验分析两组细胞迁移和侵袭能力。生物信息学和双荧光素酶报告基因分析circRNA_0001495的靶基因;采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析circRNA_0001495靶基因miR-527表达水平;采用蛋白质印迹法(Western blot)分析miR-527的靶蛋白。组间计量数据比较采用 t检验。 结果:对照组细胞circRNA_0001495表达水平(1.02±0.06)明显高于circRNA_0001495 KD组细胞(0.67±0.05),差异有统计学意义( t=10.750, P<0.05)。对照组细胞吸光度( A)值水平(1.97±0.06)明显高于circRNA_0001495 KD组细胞(1.67±0.09),差异有统计学意义( t=6.262, P<0.05)。对照组细胞EdU阳性率水平(1.97±0.06)明显高于circRNA_0001495 KD组细胞(1.67±0.09),差异有统计学意义( t=6.262, P<0.05)。对照组细胞划痕愈合率[(79.65±4.05)%]明显高于circRNA_0001495 KD组细胞[(55.13±5.41)%],差异有统计学意义( t=8.880, P<0.05)。对照组细胞迁移数量[(114.50±12.37)个]明显高于circRNA_0001495 KD组细胞[(84.50±12.90)个],差异有统计学意义( t=4.112, P<0.05)。miR-527是circRNA_0001495的靶基因。对照组细胞miR-527表达水平(0.88±0.05)明显低于circRNA_0001495 KD组细胞(1.38±0.10),差异有统计学意义( t=10.690, P<0.05)。Western blot结果显示,对照组细胞Robo1蛋白表达水平(1.25±0.14)明显高于circRNA_0001495 KD组细胞(0.79±0.08),差异有统计学意义( t=7.196, P<0.05)。 结论:circRNA_0001495敲降可显著抑制膀胱癌细胞的增殖和转移,可能通过靶向调节miR-527/Robo1轴实现的。
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编辑人员丨1周前
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微小RNA-490-3p靶向高迁移率族蛋白A2/Wnt5a轴抑制脑胶质瘤细胞增殖、迁移机制
编辑人员丨1周前
目的:探讨微小RNA(miRNA,miR)-490-3p抑制脑胶质瘤细胞增殖和迁移的影响及其分子机制。方法:选取2021年7月到2023年7月新乡医学院第一附属医院收治的70例原发性脑胶质瘤标本和癌旁组织作为研究对象,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析癌旁组织和胶质瘤组织miR-490-3p的表达水平。复苏脑胶质瘤细胞U251,分为对照组和miR-490-3p组,分别采用脂质体转染对照miRNA和miR-490-3p至U251细胞,转染48 h后,采用细胞计数试剂(CCK-8)和5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色分析两组细胞增殖能力;体外异体成瘤实验分析两组细胞体内增殖能力;划痕实验和Transwell实验分析两组细胞的迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告基因分析miR-490-3p的靶基因,采用蛋白质免疫印迹分析miR-490-3的表达水平。组间计量数据比较采用 t检验。 结果:脑胶质瘤组织中miR-490-3p水平(0.55±0.11)明显低于癌旁组织(1.18±0.25),差异有统计学意义( t=20.050, P<0.05)。对照组细胞CCK-8吸光度值、EdU染色阳性率和肿瘤体积[1.93±0.08、(90.66±4.69)%、(1 085.27±118.17) mm 3]明显高于miR-490-3p组[1.47±0.11、(64.12±6.56)%、(685.20±57.28) mm 3],差异有统计学意义( t=10.120、10.410、9.634, P<0.05)。对照组细胞划痕愈合率和迁移细胞数量[(80.26±5.51)%、(136.60±10.50)个]明显高于miR-490-3p组[(55.81±6.64)%、(99.50±10.42)个],差异有统计学意义( t=8.958、7.932, P<0.05)。高迁移率族蛋白A2(HMGA2)/Wnt5a是miR-490-3p的靶基因。对照组细胞HMGA2和Wnt5a蛋白表达水平(1.12±0.14、1.21±0.12)明显高于miR-490-3p组(0.68±0.09、0.75±0.09),差异有统计学意义( t=8.441、10.120, P<0.05)。脑胶质瘤组织中HMGA2和Wnt5a蛋白表达水平(1.06±0.14、0.91±0.09)明显高于癌旁组织(1.65±0.18、2.18±0.25),差异有统计学意义( t=21.660、41.030, P<0.05)。 结论:miR-490-3p在脑胶质瘤组织中呈低表达,通过靶向调节HMGA2/Wnt5a表达水平,调控脑胶质瘤细胞增殖和迁移过程。
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编辑人员丨1周前
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外泌体微小RNA-183-5p诱导淋巴管生成促进肺腺癌转移
编辑人员丨1周前
目的:探讨外泌体微小RNA(miR)-183-5p在肺腺癌(LUAD)中作用。方法:通过定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)验证LUAD患者外周血miR-183-5p的表达,通过5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)增殖、侵袭试验和淋巴管形成试验探讨其在LUAD中的作用。利用生物信息学预测和荧光素酶报告基因实验,确定miR-183-5p的靶基因。采用 t检验或单因素方差分析进行统计分析。 结果:miR-183-5p在LUAD患者血浆表达高于健康组(2.746±1.111比1.346±0.474, t=8.195, P<0.05),且在淋巴结(LN)转移中表达高于LN阴性者(3.503±1.304比2.320±0.706, t=4.174, P<0.05),在LUAD血浆外泌体中表达也高于健康组(2.071±0.931比0.830±0.633, t=6.039, P<0.05)。EdU增殖实验表明miR-183-5p mimic及其对照组和miR-183-5p inhibitor及其对照组个数分别为83.000±4.000、55.670±5.508、25.330±5.508、50.330±5.132,差异有统计学意义( F=65.180, P<0.05),4组中淋巴管形成实验结果分别为1.400±0.141、0.983±0.080、0.733±0.103、1.006±0.030,差异有统计学意义( F=24.150, P<0.05),Transwell各组穿膜细胞数分别为84.000±6.557、53.000±4.000、40.670±6.429、59.000±7.000,差异有统计学意义( F=26.710, P<0.05)。C端小磷酸酶类似物(CTDSPL)是miR-183-5p的靶点,上调或下调人淋巴内皮细胞(HLEC)中miR-183-5p,CTDSPL的表达呈相反改变(1.010±0.076比0.383±0.025,1.540±0.098比0.983±0.071, F=127.300, P<0.05)。 结论:外泌体miR-183-5p在LUAD癌组织和血浆中均高表达,并可能通过靶向CTDSPL诱导淋巴管生成,可能成为LUAD的标志物。
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编辑人员丨1周前
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siah E3泛素蛋白连接酶2对胰腺癌细胞增殖的影响及机制
编辑人员丨1周前
目的:检测siah E3泛素蛋白连接酶2(SIAH2)对胰腺癌细胞增殖的影响及探讨其机制。方法:应用生物信息学分析胰腺癌与SIAH2的临床相关性。用免疫组织化学(IHC)染色检测癌组织与癌旁组织中SIAH2的表达量。实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)及蛋白质印迹法(Western blot)检测胰腺癌细胞和正常胰腺导管细胞中基因的表达。用SIAH2的小干扰RNA(siRNA)感染PANC-1及SW1990胰腺癌细胞;5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EDU)和细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测SIAH2对胰腺癌细胞增殖的影响。组间比较采用 t检验。 结果:生物信息学及IHC实验显示SIAH2在胰腺癌中表达升高( P<0.05)。SIAH2的表达与患者的总生存期和无病生存期呈负相关,与肿瘤分级、分期和T分期相关( P<0.05)。RT-qPCR及Western blot结果显示,正常胰腺导管细胞(HPDE)中SIAH2 mRNA及蛋白表达量低于胰腺癌细胞(BXPC-1、PANC-1、SW1990、MIA-PaCA-2、ASPC-1)(RT-qPCR:0.997±0.047比2.533±0.404比3.000±0.458比2.800±0.400比2.267±0.351比1.667±0.153, t=6.489、7.247、7.570、5.536、10.220, P<0.05;Western blot:1.000±0.027比1.740±0.187比2.213±0.474比2.242±0.328比1.734±0.209比1.898±0.189, t=7.697、4.672、7.139、6.219、7.925, P<0.05)。敲低SIAH2后胰腺癌细胞增殖能力降低。Western blot实验结果发现,siRNA组SMO、GLI1、PCNA表达低于NC组[SMO:PANC-1(0.999±0.019比0.473±0.010比0.412±0.017; t=92.380、34.670);SW1990(1.000±0.054比0.476±0.023比0.453±0.017; t=21.740、14.010);GLI1:PANC-1(0.999±0.014比0.484±0.040比0.514±0.039; t=2.817、2.790);SW1990(1.004±0.030比0.443±0.024比0.476±0.018, t=24.860、50.780);PCNA:PANC-1(0.999±0.007比0.390±0.030比0.390±0.079, t=24.240、13.790;SW1990(1.001±0.016比0.534±0.050比0.450±0.026, t=14.080、50.540, P<0.05)]。在回复实验中,敲低后的SIAH2加入SAG后,细胞增殖能力恢复,并且Western blot实验结果发现,si-SIAH2#1+SAG组SMO、GLI1、PCNA表达高于si-SIAH2#1组[SMO:PANC-1(0.974±0.018比0.466±0.012, t=36.200);SW1990(0.965±0.026比0.410±0.018, t=6.880);GLI1:PANC-1(1.005±0.023比0.464±0.042; t=20.850);SW1990(1.002±0.021比0.504±0.018, t=21.980);PCNA:PANC-1(0.956±0.036比0.501±0.015, t=16.580);SW1990(0.989±0.066比0.535±0.031, t=8.620, P<0.05)]。si-SIAH2#2+SAG组SMO、GLI1、PCNA表达高于si-SIAH2#2组[SMO:PANC-1(1.002±0.043比0.410±0.018, t=18.200);SW1990(1.000±0.015比0.415±0.023, t=49.400);GLI1:PANC-1(0.999±0.077比0.458±0.043, t=15.610);SW1990(0.974±0.030比0.527±0.037, t=26.350);PCNA:PANC-1(0.974±0.014比0.512±0.021, t=47.470);SW1990(1.000±0.035比0.535±0.053, t=14.320, P<0.05)]。 结论:SIAH2在胰腺癌组织及细胞中高表达及表达量与患者预后负相关,且SIAH2通过Hedgehog通路促进胰腺癌细胞增殖。
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编辑人员丨1周前
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长链非编码RNA H19靶向微小RNA-675对结肠癌细胞增殖的影响及其机制
编辑人员丨1周前
目的:观察长链非编码RNA(lncRNA)H19靶向微小RNA(miRNA,miR)-675/EHZ2对结肠癌细胞增殖的影响。方法:收集2013年7月到2018年7月郑州大学附属肿瘤医院结肠癌组织及其对应的癌旁组织各150例,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析LINC00052和miR-330-3p表达水平。待细胞完全贴壁后,采用lncRNAH19 shRNA、lncRNA control shRNA、miRNA Control和miR-675慢病毒感染SW480细胞,感染12 h更换含嘌呤霉素(1 mg/L)的杜尔伯科改良伊格尔(DMEM)培养基处理24 h,存活的细胞即为稳定细胞株,分别命名为Lnc Control组、lncRNAH19 KD组、miR-Control组和miR-675组。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析lncRNAH19和miR-675关系以及miR-675的靶基因。在结肠癌细胞株SW480建立lncRNAH19沉默细胞株和miR-765过表达细胞株,采用5-乙炔基-2’-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)法和细胞计数试剂盒(CCK-8)法测定不同处理结肠癌细胞的增殖能力。体内异体移植瘤实验分析不同处理对成瘤的影响。采用 t检验分析两组数据的统计学意义。 结果:与癌旁组织lncRNAH19和miR-675[(1.12±0.18)、(1.09±0.17)]比较,结肠癌组织中lncRNAH19表达水平(3.49±0.27)显著增加,miR-675表达水平(0.32±0.11)显著下调,差异均有统计学意义( t=3.109、2.981, P<0.05)。与Lnc-Contrtol组和miR-Control组结肠癌细胞EdU阳性率[(89.44±10.25)%、(85.41±12.33)%]比较,lncRNAH19 KD组和miR-675组结肠癌细胞EdU阳性率[(30.14±6.89)%、(41.72±8.32)%]显著下调,差异有统计学意义( t=2.981、2.981, P<0.05)。CCK-8实验显示,与Lnc-Contrtol组和miR-Control组结肠癌细胞增殖能力比较,lncRNAH19 KD组和miR-675组结肠癌细胞能力显著下调,差异有统计学意义( F=2.441、2.592, P<0.05)。与Lnc-Contrtol组和miR-Control组结肠癌细胞体内增殖能力比较,lncRNAH19 KD组和miR-675组结肠癌细胞能力显著下调,差异有统计学意义( F=1.980、2.019, P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶分析显示lncRNAH19能与miR-675互补结合,EHZ2是miR-675的靶蛋白。与Lnc-Contrtol组和miR-Control组结肠癌细胞EHZ2蛋白表达水平[(1.19±0.13)、(1.04±0.14)]比较,lncRNAH19 KD组和miR-675组结肠癌细胞EHZ2蛋白表达水平[(0.32±0.13)、(0.47±0.13)]显著下调,差异有统计学意义( t=3.109、3.011, P<0.05)。 结论:lncRNAH19通过靶向miR-675/EHZ2调控结肠癌细胞的增殖。
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编辑人员丨1周前
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长链非编码RNA HOX转录反义RNA对乳腺癌细胞增殖的影响及其机制
编辑人员丨1周前
目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA) HOX转录反义RNA(HOTAIR)对乳腺癌细胞增殖的影响及其机制。方法:收集2013年8月到2018年1月新乡市中心医院120例乳腺癌和癌旁组织,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析lncRNA HOTAIR表达水平。在乳腺癌细胞株MCF-7细胞株中建立lncRNA HOTAIR敲降细胞株(lnc HOTAIR KD组)和对照细胞株(lncRNA对照组),采用细胞计数试剂盒(CCK-8)试剂盒和5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色分析两组细胞的增殖能力;采用异种移植瘤模型分析细胞在体内的增殖能力。采用生物信息学分和双荧光素酶报告基因分析lncRNA HOTAIR作用靶点。组间数据比较采用 t检验。 结果:与癌旁组织(1.09±0.19)比较,乳腺癌组织中lncRNA HOTAIR表达水平(2.98±0.21)显著升高,差异有统计学意义( t=3.011, P<0.05)。与lncRNA对照组(1.10±0.10)比较,Lnc HOTAIR KD组乳腺癌细胞增殖能力(0.25±0.05)明显下降,差异有统计学意义( t=2.510, P<0.05)。与lncRNA对照组EdU阳性率[(87.34±9.12)%]比较,Lnc HOTAIR KD组乳腺癌细胞EdU阳性率[(28.13±7.10)%]增殖能力明显下降,差异有统计学意义( t=3.918, P<0.05)。体内异种成瘤模型显示lnc HOTAIR KD组乳腺癌细胞增殖能力较LncRNA对照组显著下降,差异有统计学意义( F=2.109, P<0.05)。生物信息学研究显示lncRNA HOTAIR能与微小RNA(miRNA,miR)-126结合,进而调节CXC趋化因子受体4(CXCR4)表达水平。 结论:lncRNA HOTAIR通过靶向作用于miR-126/CXCR4轴进而调节着乳腺癌细胞增殖。
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编辑人员丨1周前
