目的:探讨人类白细胞抗原（HLA）Ⅰ类（A、B、C）、Ⅱ类（DRB1、DQB1、DPB1）等位基因和单倍体多态性与中国南方汉族急性淋巴细胞白血病（ALL）、急性髓系白血病（AML）以及慢性粒细胞白血病（CML）的相关性。方法:收集深圳市血液中心845例中国南方汉族白血病患者（323例ALL、350例AML及172例CML）和745名中国南方汉族健康献血者的外周血样本。应用聚合酶链反应反向序列特异性寡核苷酸探针杂交（PCR-rSSO）及测序分型（PCR-SBT）方法对HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB1和-DPB1进行基因分型，鉴定HLA等位基因前4位数。采用Arlequin 3.5软件分析HLA单倍体；从HLA低分辨水平（等位基因前2位数）及高分辨水平（等位基因前4位数）分别统计分析HLA等位基因和单倍体多态性与3种白血病的相关性。结果:经Bonferroni校正，ALL组A*02（36.22%比28.26%， χ2=13.41， PC<0.01）及其单倍体A*02-B*46-C*01（15.35%比10.23%， χ2=10.90， PC=0.02）、DRB1*12（15.79%比11.10%， χ2=9.02， PC=0.03）、A*02：03（9.75%比5.32%， χ2=14.25， PC=0.002）及其单倍体A*02：03-B*38：02-C*07：02（3.80%比1.51%， χ2=10.41， PC=0.02）的频率均高于对照组，是ALL易感因素；AML组A*11-B*15-C*08-DRB1*15-DQB1*06-DPB1*02的频率高于对照组（1.34%比0.07%， χ2=12.54， PC=0.003），是AML易感单倍体；CML组A*02（36.63%比28.26%， χ2=9.33， PC=0.02）及其单倍体A*02-B*15-C*04（2.17%比0.29%， χ2=11.74， PC=0.02）、DRB1*03：01-DQB1*02：01-DPB1*02：01（1.86%比0.14%， χ2=13.10， PC=0.01）的频率均高于对照组，是CML易感因素；CML组DRB1*13的频率低于对照组（1.45%比5.25%， χ2=9.29， PC=0.03），是CML拮抗基因。 结论:在HLA低分辨及高分辨水平发现了白血病易感或拮抗HLA等位基因和单倍体，可为探究中国南方汉族白血病发病机制并制订有效治疗策略提供参考。

目的:确认人类白细胞抗原罕见等位基因HLA-DQB1*03：90N的序列，探讨检测方法，以提高HLA分型的准确性。方法:采用PCR-序列特异性寡核苷酸探针(sequence-specific oligonudeotide probe，SSOP)对2018年中国造血干细胞捐献者资料库深圳分库登记的2265例造血干细胞捐献者进行HLA分型检测，针对1例HLA-DQB1罕见等位基因进一步选择聚合酶链反应-直接测序分型(sequence-based tying，SBT)技术和基于Ion Torrent S5平台的二代测序(next generation sequencing，NGS)分析技术进行确认。结果:HLA-DQB1位点SSOP分型结果显示为罕见等位基因，经SBT复核发现序列在第2外显子疑似插入或缺失，最后通过NGS确认结果为DQB1*03：90N，DQB1*06：01。结论:经SSOP法检测得到的罕见等位基因不能轻易排除，应借助多种方法复核确认，保证HLA基因分型结果的准确性。罕见等位基因或新等位基因序列存在碱基缺失，采用二代测序技术可能得到更准确的结果。

目的:鉴定1例人类白细胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)罕见等位基因C*08：84，并调查该基因的家系遗传情况，预测分析其氨基酸残基改变在编码蛋白分子三维空间结构影响。方法:应用单核苷酸序列分析、序列特异性寡核苷酸探针聚合酶链反应及单等位基因组特异性测序确定 HLA- C分型并对该基因的先证者进行家系调查。应用Swiss-Model服务器，Phyre2和FATCAT在线软件对其三级结构进行模拟分析，对差异氨基酸结构和所处位置及可能的影响进行推测。 结果:家系分析表明 HLA- C*08：84来自先证者母亲，与同源性最高的 HLA- C*08：01相比较存在g.512G>C(p.Trp147Ser)变异。其编码三级结构模拟分析表明氨基酸变异位置为α2链，该位置参与构成抗原多肽结合凹槽F。 C*08：84与 C*08：01、 C*08：02、 C*08：03、 C*08：22肽结合区182个氨基酸主链分子间抗原结合槽均方根偏差(RMSD)分别为1.70 nm、1.79 nm、0.71 nm、1.70 nm。 结论:确认并分析了罕见等位基因C*08：84，对其临床意义进行初步探讨和分析。

目的:探讨1个家系中父源和母源人类白细胞抗原单体型 HLA- A/ C基因座之间的重组情况。 方法:选取2022年2月因"再生障碍性贫血"拟接受造血干细胞移植的1例患者作为研究对象。采集患者及其父母和胞兄的外周血样，分别采用测序和聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针技术对 HLA- A/ C/ B/ DRB1/ DQB1位点进行高分辨基因分型，通过家系分析确定个体的 HLA单体型。通过检测短串联重复序列位点确定家系成员之间的亲缘关系，再用二代测序技术对 HLA- A/ C/ B/ DRB1/ DRB345/ DQA1/ DQB1/ DPA1/ DPB1等11个位点进行高分辨分型，再次确认 HLA的重组位点。 结果:短串联重复序列位点结果证实家系成员之间存在亲缘关系。父源 HLA单体型 HLA- A* 24： 02 A* 33： 03/ C* 14： 03之间发生重组，母源 HLA单体型 HLA- A* 01： 01 A* 03： 01/ C* 08： 02之间发生重组，产生的新单体型被完整地遗传给子代。 结论:发现并证实了1个陕西汉族人群父源和母源 HLA- A/ C基因座位间同时发生重组的家系，为深入研究 HLA的重组机制提供依据。

目的 探讨人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)-A,-B,-DRB1高分辨等位基因及单倍型多态性与北方汉族急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)的相关性.方法 以1241名正常非亲缘造血干细胞捐献者为对照,应用聚合酶链反应-测序分型(polymerase chain reactionsequence-based typing,PCR-SBT)、序列特异寡核苷酸探针技术(sequence specific oligonucleotide probes,SSO)和组特异性引物扩增(sequence specific primer,SSP)方法对170例ALL患者进行HLA-A、-B、-DRB1高分辨分型,用Arlequin 3.5.2软件计算HLA基因频率和单倍型频率,计算疾病比值比(odd ratio,OR)进行病例对照研究.结果 经x2检验、连续校正显示,与对照组相比ALL患者的B*13:01和B* 40:02频率升高(7.35％ vs.4.63％,P=0.030;2.94％ vs.1.45％,P=0.042),而B*35:03和B*46:01频率降低(0.29％ vs.1.69％,P=0.048;4.41％ vs.7.82％,P=0.025),但经Bonferroni校正后显示差异均无统计学意义.在ALL患者中频率增加的DRB1*15组尽管经Bonferroni校正后差异无统计学意义,但其组内的DRB1*15:01基因频率经Bonferroni校正后仍显著高于对照组(16.18％ vs.10.19％,pc'=0.041),与ALL呈正相关(OR=1.70,95％CI:1.24～2.33).19种单倍型在ALL中的频率显著高于对照组,其中11种单倍型在对照组中未出现过,与白血病呈正相关.结论 本研究获得了HLA-A、-B、-DRB1高分辨等位基因及单倍型与北方汉族ALL相关性的资料,DRB1*15:01与北方汉族ALL患者正相关,可能是北方汉族发生ALL的易感基因,并与其特定单倍型关联.

目的 探讨中国南方汉族造血干细胞捐献者人类白细胞抗原(HLA)-A、-B、-C、-DRB1及-DQB1位点高分辨等位基因的多态性分布.方法 选择2016年1月至2017年12月于中国造血干细胞捐献者资料库(CMDP)深圳分库登记的4 262例中国南方汉族造血干细胞捐献者为研究对象.采用PCR-序列特异性寡核苷酸探针(SSO)和二代测序(NGS)技术对本研究4 262例造血干细胞捐献者的HLA-A、-B、-C、-DRB1及-DQB1位点进行高分辨等位基因分型检测.采用直接计数法分别计算上述5个HLA位点的常见、确认及罕见等位基因频率.采用x2检验判断研究对象的HLA-A、-B、-C、-DRB1及-DQB1各位点等位基因的分布是否符合Hardy-Weinberg平衡定律.结果 ①本研究4 262例中国南方汉族造血干细胞捐献者的HLA-A、-B、-C、-DRB1及-DQB1位点等位基因观察值与期望值分别比较,差异均无统计学意义(x2 =295.068、572.482、355.205、362.584、312.150,P＞0.05).本研究4 262例造血干细胞捐献者的HLA-A、-B、-C、-DRB1及-DQB1位点基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律.②本研究4 262例中国南方汉族造血干细胞捐献者中,检出的HLA-A、-B、-C、-DRB1及-DQB1位点的等位基因分别为49、97、37、48和22种,其中等位基因频率＞0.05的常见等位基因包括:HLA-A* 11∶01、24∶02、02∶07、02∶01、33∶03和02∶03,累计等位基因频率为0.767 1;HLA-B* 40∶01、46∶01、58∶01、13∶01和51∶01,累计等位基因频率为0.471 6;HLA-C* 01∶02、07∶02、03∶04、08∶01、03∶02、06∶02和03∶03,累计等位基因频率为0.782 5;HLA-DRB1* 09∶01、15∶01、12∶02、07∶01、08∶03、03∶01、11∶01和04∶05,累计等位基因频率为0.656 4;以及HLA-DQB1* 03∶01、03∶03、06∶01、05∶02、03∶02、02∶01、05∶03、06∶02和02∶02,累计等位基因频率为0.877 6.③本研究4 262例中国南方汉族造血干细胞捐献者中,HLA-A、-B、-C、-DRB1及-DQB1位点的确认及罕见等位基因分别检出22、42、14、11和7种,其中HLA-A* 29∶03,HLA-B* 18∶04、15∶296和54∶03,HLA-C* 12∶12、HLA-DRB1* 04∶101,以及HLA-DQB1*02∶10为罕见等位基因,目前尚未被收录于CMDP的《常见及确认等位基因表(CWD)》2.3版本.结论 本研究获得较为完整的中国南方汉族造血干细胞捐献者的HLA-A、-B、-C、-DRB1及-DQB1位点的高分辨等位基因多态性分布数据,记录并统计HLA确认及罕见等位基因.本研究结果有助于CMDP中HLA基因人群分布和多态性数据的积累,并且为完善CMDP的CWD提供参考依据.

背景:人类白细胞抗原HLA经过长期进化形成丰富的多态性,近几年由于受检人数增加及HLA分型技术快速发展,HLA新基因不断被发现.目的:采用下一代测序技术对1例白血病患者及家系HLA-B基因的全长序列及18个点突变进行分析.方法:应用序列特异性寡核苷酸探针杂交(PCR-SSOP)及聚合酶链反应-直接测序法(PCR-SBT)发现患者的HLA-B结果异常.为了鉴定该基因,采用下一代测序技术对该基因全长进行测序,同时采集患者父亲、母亲及2位同胞姐妹的血样进行HLA基因的遗传学分析.结果与结论:应用序列特异性寡核苷酸探针杂交及聚合酶链反应-直接测序法均提示该样本HLA-B无完全匹配的基因型.应用下一代测序技术分析发现,与同源性最高的等位基因B*15:09:01相比,该基因在外显子、内含子和3′UTR共存在18个碱基突变.5个外显子碱基突变位于第3,4外显子,分别为:第486位G→C、第583位T→C、第636位T→C、第652位A→G和第756位C→T,导致5个相应密码子发生改变,其中2个碱基替换为错义突变,第171位酪氨酸(Tyr)→组氨酸(His)、第194位异亮氨酸(Ile)→缬氨酸(Val).家系调查显示患者HLA-B新基因来源于父亲.新基因序列已递交给Genbank数据库(MG595995).应用下一代测序技术鉴定了1个HLA-B新等位基因,该基因于2017年12月被WHO HLA因子命名委员会正式命名为HLA-B*15:435.

目的 构建与骨肉瘤细胞高亲和性与特异性结合的DNA寡核苷酸适配体库,用于骨肉瘤临床特异性诊断.方法 体外合成40 nt高通量随机序列的单链DNA寡核苷酸文库(ssDNAs);骨肉瘤细胞(U-2OS)作为目标细胞与文库ssD-NAs反应;指数富集配体的系统进化(SELEX)技术用于筛选富集与靶细胞结合的寡核苷酸;聚合酶链反应(PCR)技术与亲和层析技术用于次轮反应文库的制备;应用荧光光谱跟踪筛选过程;对最后的筛选序列进行克隆、测序与保存.结果 十一轮至十三轮筛选后的ssDNAs荧光光谱曲线显示了有意义重叠,因此结束筛选;对十三轮筛选的ssDNAs进行了克隆测序,依据一级结构的同源序列建立了寡核苷酸探针组群.结论 应用SELEX技术最终从高通量的随机文库中获得了与U-2OS具有高度亲和性的寡核苷酸适配体,适配体库的建立不仅仅用于骨肉瘤的特异性诊断,也将为探针-载体-抗肿瘤药物复合体的研制与实施骨肉瘤定向治疗搭建了可行性平台.

为探讨上海地区特发性膜性肾病（IMN）与HLA-Ⅱ类基因的关联，本研究用聚合酶链反应（PCR）及序列特异性寡核苷酸（SSO）探针杂交方法，对33例上海地区汉族IMN患者及70例同一地区正常人作了HLA-DQA1、-DQB1位点的等位基因分型，并比较其基因频率。结果表明：IMN组DQA1*0101等位基因频率高于对照组，统计学处理有显著性差异（RR=3.043， P=0.002， Pc=0.018）。DQB1* 0604等位基因频率较对照组高，而DQB1 * 0301等位基因频率较对照组低，但统计学处理后差异均不显著（ P<0.05， Pc>0.05）。以上结果提示，IMN的发病机制可能与免疫遗传因素有关。

采用聚合酶链式反应（PCR）扩增可变串联重复序列（varibale rumber tandem repeat, VNTR）的33.6位点，加地高辛标记的位点特异性寡核苷酸探针杂交的方法，制作出PCR-DNA片段长度图像，它具有良好的个体特异性，遗传稳定性和同一性，灵敏度达0.5%。运用该方法成功地对1例慢性粒细胞性白血病患者进行了骨髓移植后的植入验证。