心脏收缩力调节器能增强心肌收缩力，改善心功能，对于不适合心脏再同步化治疗的窄QRS波患者疗效确切，联合植入式心律转复除颤器治疗能有效预防心脏性猝死。该文报道2例一站式心脏收缩力调节器联合植入式心律转复除颤器治疗慢性心力衰竭的案例。2例患者使用优化药物治疗效果均不佳，经评估后进行一站式手术，术后器械正常工作，短期随访显示两患者心功能均得到改善，为一站式手术的有效性及安全性提供了一定参考。

目的:探讨烟酰胺核糖对肥胖相关脂毒性心肌病的影响及其具体机制。方法:将C57BL/6N雄性小鼠（8周龄）分为标准饮食组（对照组）、高脂饮食组和高脂+烟酰胺核糖饮食组（ n=10），高脂饮食组通过高脂饲料喂养24周构建肥胖小鼠脂毒性心肌病模型，高脂+烟酰胺核糖饮食组小鼠在高脂饲料的基础上在饮用水中加入40 mmol/L烟酰胺核糖喂养12周。造模结束后检测小鼠尾动脉血压，收集小鼠外周血分析血糖、血脂等指标，应用超声心动图评估小鼠心功能，随后进行小鼠心脏取材并用于病理学和分子生物学分析。分别通过心脏大体拍照检测小鼠心重与胫骨长、麦胚凝集素（WGA）定量小鼠心肌细胞面积和苦味酸-天狼猩红（PSR）染色显示小鼠心肌纤维化水平评估烟酰胺核糖对小鼠心肌重构的影响。采用透射电镜检测小鼠心肌脂滴浸润情况；采用免疫印迹检测小鼠心肌细胞Sirt1及Serca2a蛋白表达水平。 结果:与对照组比较，高脂饮食小鼠的体质量、收缩压、舒张压、总胆固醇、三酰甘油和LDL-c水平均明显增高（均 P<0.05），应用烟酰胺核糖后可缓解高脂所致的上述指标的增高（均 P<0.05）；高脂饮食和应用烟酰胺核糖均不影响小鼠心率和血糖。与对照组比较，高脂饮食组小鼠左心室射血分数和心脏超声E峰、A峰比值（E/A）降低（均 P<0.05），烟酰胺核糖则增高左心室射血分数和E/A比值（均 P<0.05）。与对照组比较，高脂饮食组小鼠心重与胫骨长比值、左心室心肌细胞横截面积、胶原含量均增加（均 P<0.05），烟酰胺核糖则可抑制小鼠心肌的上述肥大和纤维化表现（均 P<0.05）。与对照组比较，高脂饮食导致小鼠左心室心肌脂滴沉积明显增多[（13.8±0.86）/100 μm 2比（4.7±0.51）/100 μm 2， P<0.05]，而烟酰胺核糖可减轻高脂诱导的心肌纤维化[（6.2±0.77）/100 μm 2比（13.8±0.86）/100 μm 2， P=0.021]。免疫印迹显示脂毒性心肌组织中Sirt1及心肌肌浆网Ca 2+-ATP酶（Serca2a）蛋白表达水平均较对照组降低（均 P<0.05），Serca2a的乙酰化水平增高（均 P<0.05），但烟酰胺核糖可增加Sirt1及Serca2a的表达并促进Serca2a的去乙酰化（均 P<0.05）。 结论:烟酰胺核糖通过刺激Sirt1介导的Serca2a去乙酰化缓解高脂所致的脂毒性心肌病。

目的 探讨二氢青蒿素(DHA)与肌浆/内质网钙ATP酶(SERCA)的结合位点及其通过线粒体途径诱导人结肠癌HCT-116细胞凋亡的作用机制.方法 分别于不同浓度(0,10,20,40μmol/L)DHA环境中培养HCT-116细胞24h后,用Western blotting检测细胞中SERCA2蛋白表达水平;CCK-8法检测细胞增殖情况;行Hoechst核染色;用JC-1探针检测细胞线粒体膜电位.通过LeDock分子对接方法,预测DHA与SERCA的结合位点.基于生物膜干涉技术,将合成的Ile315与Thr316位点突变后的SERCA2b突变蛋白和非突变蛋白分别与小分子DHA进行结合检测.结果 Western blotting与CCK-8检测结果显示,随着DHA浓度升高,SERCA2蛋白表达水平显著下降,细胞增殖显著降低,并呈剂量相关(P＜0.01).Hoechst核染色显示,DHA诱导了HCT-116细胞核变圆、固缩.JC-1探针检测结果表明,在DHA处理4h内,线粒体膜电位逐渐降低,其后线粒体膜电位则出现明显降低.分子对接预测提示DHA与Thr316形成氢键相互作用,与Ile315则有疏水相互作用.进一步的生物膜干涉技术提示DHA与SERCA2b非突变蛋白结合信号良好,而与Ile315与Thr316位点突变后的SERCA2b突变蛋白结合信号较差.结论 DHA可直接与SERCA2b的Ile315与Thr316位点结合,并通过线粒体途径诱导结肠癌HCT-116细胞凋亡.

目的:探讨机械敏感性离子通道Piezo1激活促进冠状动脉平滑肌细胞(CASMCs)内Ca2+浓度([Ca2+]i)升高的机制.方法:采用原代成年大鼠CASMCs为研究对象,用细胞免疫荧光技术观察Piezo1在CASMCs中的表达与亚细胞定位情况;利用Western blot检测用siRNA敲减CASMCs中Piezo1和基质相互作用分子1(STIM1)后CASMCs中的蛋白表达情况;利用激光共聚焦显微镜,通过基于Flou-4 AM负载的细胞内Ca2+成像技术,测量CASMCs[Ca2+]i的变化.结果:细胞免疫荧光染色结果显示,Piezo1在原代大鼠CASMCs中表达;Piezo1与肌浆/内质网Ca2+-ATP酶2(SERCA2)、线粒体外膜蛋白TOM20和核膜蛋白lamin B1共定位程度较高.Western blot结果表明,siRNA转染后STIM1和Piezo1蛋白表达下调(P<0.05).激光共聚焦显微镜检测[Ca2+]i结果表明:与对照组相比,Piezo1激动剂Yoda1诱导CASMCs的胞外Ca2+内流增加(P<0.01),抑制L型钙通道不影响Yoda1诱导的Ca2+内流;Yoda1诱导CASMCs胞内Ca2+释放增加(P<0.01),抑制内质网上的钙通道(雷诺丁受体和1,4,5-三磷酸肌醇受体)不影响Yoda1诱导的胞内Ca2+释放;使用毒胡萝卜素(TG)排空内质网中Ca2+后,Yoda1仍能诱导CASMCs中其它细胞器的Ca2+释放(P<0.01);抑制L型钙通道后,使用钙库操纵性钙通道(SOCC)抑制剂BTP2或敲减STIM1使Yo-da1诱导CASMCs胞外Ca2+内流减少(P<0.01);敲减Piezo1使TG诱导的CASMCs内质网Ca2+释放增加(P<0.05),但不影响TG诱导的胞外Ca2+内流;抑制L型钙通道和SOCC后,敲减Piezo1导致Yoda1诱导的CASMCs胞内Ca2+释放以及胞外Ca2+内流均减少(P<0.01).结论:Piezo1激动剂诱导CASMCs胞外Ca2+内流主要通过细胞膜上的Piezo1通道和间接激活的SOCC,也可触发胞内细胞器Ca2+释放,共同升高[Ca2+]i.

目的 探讨甲基化抑制剂5-氮杂胞苷(5-AZA-2'-dC)在血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的心肌肥大细胞的对肌浆网Ca2+-ATP泵(SERCA2a)表达等的影响.方法 培养SD大鼠乳鼠原代心肌细胞,根据处理方法,分为5组,分别为对照组、血管紧张素Ⅱ组、5-氮杂胞苷组、血管紧张素Ⅱ与5-氮杂胞苷同时处理组和5-氮杂胞苷预处理组;按照分组处理48 h后分别测定心肌细胞A型利钠肽(ANP)mRNA及蛋白表达、细胞面积等心肌细胞肥大的指标;Western blot检测心肌细胞肌浆网Ca2+-APT泵(SERCA2a)、钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMK Ⅱ)、磷酸化钙调蛋白激酶Ⅱ(p-CaMK Ⅱ)的蛋白质表达的水平;激光共聚焦检测胞内钙变化情况.结果 血管紧张素Ⅱ(10-6 mol/L)处理心肌细胞48 h,可使ANP mRNA及蛋白表达增加(P＜0.05).与对照组相比,血管紧张素Ⅱ组心肌细胞ANP、p-CaMK Ⅱ蛋白表达明显增加(P＜0.01);而5-氮杂胞苷(10-6 mol/L)同时加药组及预处理组较之血管紧张素Ⅱ组则下降(P＜0.01);与对照组相比,血管紧张素Ⅱ组心肌细胞的SERCA2a蛋白质表达下降(P＜0.01),而5-氮杂胞苷同时加药组及预处理组较血管紧张素Ⅱ组的上升(P＜0.01).钙离子变化情况,与对照组相比,血管紧张素Ⅱ组胞内钙离子峰值上升时间和下降时间均延长(P＜0.05),而5-氮杂胞苷同时加药组及预处理组较之血管紧张素Ⅱ组则稍缩短(P＜0.05).结论 5-氮杂胞苷可抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大,其机制可能通过促进SERCA2a表达有关;SERCA2a表达的增加,缩短胞浆钙再摄取入肌浆网的时间,有利于维持胞内钙稳态.

青蒿素及其衍生物是一类含有过氧基团的倍半萜内酯药物,已经成为国际上广泛认可并使用的抗疟疾首选药物.青蒿素类药物需要经过血红素依赖或线粒体途径激活后,释放自由基来杀死疟原虫,但目前其激活的具体机制还不清楚.尽管青蒿素抗疟疾作用的靶标蛋白如翻译调控肿瘤蛋白、肌浆网/内质网钙转运ATP酶和磷脂酰肌醇-3-激酶已经研究的比较清楚,但新近发现的一些潜在作用靶点仍有待进一步阐明.青蒿素及其衍生物除了具有神奇的抗疟疾疗效外,近年来也发现具有免疫调节和抗肿瘤的作用.本文将对青蒿素及其衍生物激活方式、作用靶标以及免疫调节和抗肿瘤作用机制进行综述.

目的 构建肌浆网-内质网钙离子转运ATP酶(SERCA)基因的干扰慢病毒表达载体,建立稳定转染的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC 12)细胞系.方法 人工设计、合成针对SERCA基因干扰序列,退火后连接到PGLV3干扰载体上,与pGag/Pol、pRev、pVSV-G共转染293T细胞,包装产生慢病毒颗粒并测定病毒滴度,感染PC 12细胞,建立稳定细胞株;应用RT-PCR和Western blot技术检测PC 12稳定细胞中SERCA基因和蛋白表达情况,并与对照组进行比较.结果 成功构建了针对SERCA基因的RNAi慢病毒表达载体,病毒滴度为3×10s U·mL-1;建立稳定转染的PC 12细胞株.有效干扰验证显示,shSERCA能明显降低SERCA的mRNA及蛋白水平(P＜0.01).结论 成功构建SERCA基因的shSERCA慢病毒表达载体,建立稳定干扰SERCA表达的PC 12细胞株.

目的:探讨苦参碱(MAT)对人正常肝细胞株L02内质网应激的作用及其机制.方法:将L02肝细胞分为正常对照组、软脂酸(PA)模型组及MAT高(800 μmol·L-1)、中(400 μmol·L-1)、低(200 μmol·L-1)剂量组,借助Fura-3/AM钙离子荧光指示剂和毒胡萝卜素(Tg),分别考察MAT长时孵育和短时刺激对钙离子的影响;应用分子对接技术确定MAT的作用位点.结果:经过12 h孵育,MAT低、中剂量给药组对PA诱导所致L02细胞胞浆钙离子升高有明显的抑制作用( P<0. 05或P<0. 01),而MAT高剂量组差异无统计学意义(P>0. 05);短时刺激实验结果表明,MAT能够影响内质网钙离子充盈,并可以剂量依赖性的升高胞浆钙离子水平;分子对接结果进一步明确了MAT可抑制肌浆网/内质网钙ATP 酶(SERCA),且抑制能力弱于SERCA经典抑制剂毒胡萝卜素.结论:MAT可调节肝细胞钙平衡、改善内质网应激,其机制可能与调控SERCA钙通道有关.

目的 探讨结直肠癌中肌浆网/内质网钙离子转运ATP酶3(sarcoendoplasmic reticulum Ca2+ transporting ATPase 3.SERCA3) mRNA的表达与临床病理特征的关系.方法 收集40例病理确诊的结直肠癌腺癌组织及其癌旁正常组织标本.采用实时RT-PCR检测SERCA3 mRNA表达,分析其与患者临床病理特征的关系.结果 结直肠癌标本中SERCA3 mRNA表达较癌旁正常组织低(P＜0.05).结直肠癌SERCA3 mRNA水平在淋巴结转移和TNM分期方面比较,差异均具有统计学意义(均P＜0.05).结论 结直肠癌组织中SERCA3的异常表达与结直肠癌淋巴结转移和TNM分期密切相关.

目的 探讨哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)中肌浆/内质网Ca2+-ATP酶(SERCA2)的表达对IL-8分泌的影响.方法 建立卵清蛋白(OVA)诱导的哮喘大鼠模型,分离原代ASMCs,分别用qRT-PCR及Western blotting、Fura PE-3/AM和ELISA法检测各组ASMCs中SERCA2表达、细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)和IL-8,利用siRNA技术下调SERCA2、毒胡萝卜素(TSG)抑制SERCA2以及吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)抑制NF-kB活化,检测不同状态下IL-8的变化.结果 与正常组比较,哮喘组SERCA2的表达减少,经缓激肽(BK)刺激的钙瞬变峰值明显下降,需更长时间重新摄取钙使[Ca2+]i恢复至基线水平,IL-8基础值和经IL-17刺激后的诱导值均增加(P<0.05或0.01).无论有无IL-17刺激,基因下调组IL-8 mRNA表达和分泌均显著增加(均P<0.01),与哮喘对照组比较差异均无统计学意义(均P>0.05).哮喘组IkBα磷酸化和NF-kB p65核转位均较正常组增加(P<0.05或0.01),基因下调组和TSG抑制组的NF-kB p65核转位亦增加(P<0.05或0.01),而使用PDTC后,基因下调组、哮喘对照组和正常对照组在IL-17刺激诱导下的IL-8 mRNA表达和分泌均减少(P<0.05或0.01).结论 哮喘大鼠ASMCs中SERCA2表达减少,导致钙稳态的改变,可能通过增强NF-kB活化来介导IL-8分泌亢进.