目的 筛选肥胖小鼠与对照组小鼠血清外泌体差异表达的LncRNAs,分析差异表达LncRNAs相关靶基因的基因本体功能及相关信号通路,并对差异表达LncRNAs调控的蛋白进行互作网络分析,以探讨差异表达的LncRNAs与肥胖发生的关系.方法 用高脂饲料(肥胖组)和普通饲料(对照组)分别饲养C57BL/6小鼠各12只,喂养8周后通过对小鼠体质量的检测确定肥胖小鼠模型构建成功.提取两组小鼠血清外泌体,进行高通量测序以筛选差异表达的LncRNAs,应用TopGO软件和KEGG数据库对差异表达基因进行GO、KEGG分析.采用STRING蛋白质相互作用网络数据库构建差异表达基因蛋白互作网络,筛选差异表达的LncRNAs调控的蛋白.结果 两组血清外泌体中,共筛选出201个差异表达LncRNAs,其中32个表达上调,169个表达下调,主要存在于细胞内部分(intracellular part,其中富集712个候选基因)、细胞内(intracellular,其中富集730个候选基因)、细胞器部分(organelle part,其中富集483个候选基因),主要涉及脂肪酸降解、MAPK信号通路等相关通路.初步筛选出了8个肥胖相关LncRNAs调控的蛋白(Ehmt1、Epha3、MAPK13、Mark4、Irak2、Fgfr4、Prkce、MAPK1).结论 肥胖小鼠与对照组小鼠血清外泌体中共筛选出201个差异表达LncRNAs,其中32个表达上调,169个表达下调.差异表达LncRNAs主要涉及脂肪酸降解、MAPK信号通路等.初步筛选出8个LncRNAs调控的肥胖相关蛋白(Ehmt1、Epha3、MAPK13、Mark4、Irak2、Fgfr4、Prkce、MAPK1);差异表达LncRNAs与肥胖发生可能有关.

目的:探讨IL-6和B细胞活化因子(B cell activating factor，BAFF)的融合蛋白真核表达质粒对干燥综合征动物模型非肥胖糖尿病小鼠(non-obese diabetic mouse，NOD)唾液腺、泪腺组织病理的影响，阐明IL-6/BAFF融合蛋白真核表达质粒对NOD小鼠可能的治疗机制。方法:构建IL-6/BAFF融合蛋白真核表达质粒，转染CHO细胞，Western blot检测融合蛋白的表达水平。IL-6/BAFF融合蛋白真核表达质粒免疫BALB/c小鼠，每2周1次，共3次，免疫结束后处死小鼠，ELISA法检测血清中抗IL-6和抗BAFF抗体效价。将21只NOD小鼠随机数字表法分为空白组、阴性对照组、治疗组。治疗组小鼠肌肉注射IL-6/BAFF融合蛋白真核表达质粒，阴性对照组小鼠肌肉注射对照质粒，空白组不做处理，每周1次，6次免疫后处死NOD小鼠，心脏采血取血清，ELISA法检测血清中抗IL-6和抗BAFF抗体及细胞因子IL-6、BAFF、IFN-γ、IL-10、IL-17A的表达水平；取脾组织流式细胞术检测小鼠脾细胞中Th17、Treg、Th1、Th2的比例；HE染色观察小鼠泪腺、唾液腺中灶状淋巴细胞浸润情况和病理改变。结果:IL-6/BAFF融合蛋白真核表达质粒使BALB/c小鼠血清中抗IL-6和抗BAFF抗体水平升高( P<0.05)。治疗组NOD小鼠血清中抗IL-6和抗BAFF抗体含量升高( P<0.01)；IL-6、BAFF、IFN-γ、IL-10、IL-17A的表达量低于空白组和阴性对照组( P<0.01)；脾细胞中Treg、Th2细胞比例增高( P<0.05)；泪腺及唾液腺中腺泡大小不一和形态不规则明显改善，导管扩张减轻，灶状淋巴细胞浸润减少。 结论:IL-6/BAFF融合蛋白真核表达质粒可诱导NOD小鼠体内抗IL-6和抗BAFF抗体产生，进而减轻炎症因子的表达水平，逆转Th17/Treg、Th1/Th2的平衡，同时改善泪腺及唾液腺内不规则的腺泡结构及导管扩张，减少灶状淋巴细胞浸润。本研究结果表明IL-6/BAFF融合蛋白真核表达质粒可以作为靶向T、B细胞的潜在治疗靶点。

目的:探讨SPAG6基因沉默和地西他滨在体内外对SKM-1细胞凋亡和PTEN启动子甲基化的作用。方法:慢病毒载体转染SKM-1细胞沉默SPAG6基因的表达，地西他滨处理细胞后CCK-8检测细胞存活率，流式细胞术检测细胞凋亡，Western blot和甲基化特异性PCR检测PTEN的蛋白表达和甲基化情况，并构建非肥胖糖尿病/重度联合免疫缺陷（NOD/SCID）小鼠异体移植瘤模型，TUNEL法观察肿瘤组织凋亡，免疫组化检测PTEN在组织中表达情况。结果:慢病毒转染后SPAG6干扰组SPAG6基因被成功沉默；CCK-8检测结果提示地西他滨处理能够降低SKM-1细胞的存活率，同时流式细胞术检测显示地西他滨处理组的细胞凋亡率[（17.35±3.37）%]高于未处理组[（5.09±2.06）%]，且SPAG6基因沉默联合地西他滨处理组的凋亡率最高[（36.34±4.00）%]；地西他滨处理后DNMT1的表达降低而PTEN表达升高，同时PTEN启动子甲基化程度降低，而经地西他滨处理后的SPAG6干扰组的PTEN去甲基化引起的蛋白表达升高效果最明显；NOD/SCID小鼠异体瘤移植模型中地西他滨组的肿瘤体积明显小于生理盐水组，而地西他滨处理SPAG6干扰组的小鼠肿瘤体积最小，且经TUNEL检测发现其凋亡程度最高（阳性比值为3.57±0.48）。结论:SPAG6基因沉默在SKM-1细胞中能增强地西他滨诱导的凋亡和PTEN去甲基化作用，并且在NOD/SCID异体瘤移植模型小鼠中能够增强地西他滨的抗肿瘤特性。

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)甲磺酸普依司他(PM)对套细胞淋巴瘤(MCL)细胞系的抗增殖活性，以及对MCL皮下移植瘤小鼠模型的抗肿瘤效果。方法:选择MCL细胞系Jeko-1和Granta-519，以及非肥胖糖尿病/重度联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠为研究对象，采用不同浓度梯度PM原料药(PMF，终浓度分别为0.1、0.3、0.5、1.0、2.0、4.0 nmol/L)和同浓度帕比司他(LBH589)分别处理Jeko-1，采用不同浓度梯度PMF(终浓度分别为0.4、0.8、1.6、3.1、6.3、12.5 nmol/L)和同浓度LBH589分别处理Granta-519。加药孵育120 h后，采用细胞计数试剂盒(CCK)-8法检测细胞增殖活性并计算半数抑制浓度(IC50)值。建立Jeko-1 NOD/SCID小鼠皮下移植瘤模型，按照给药种类和剂量将其分为PM 2.5 mg/kg组( n＝7)、PM 5 mg/kg组( n＝7)、PM 10 mg/kg组( n＝7)、LBH589 10 mg/kg组( n＝6)和溶剂对照组( n＝7)。于给药第21天时，观察各组小鼠的相对肿瘤抑制率(T/C)、瘤重及肿瘤生长抑制率。不同组别间瘤重比较，采用单因素方差分析。同浓度PMF和LBH589的细胞增殖抑制率比较，采用双因素方差分析。动物实验方案的设计获得了四川大学华西医院动物实验中心伦理委员会的批准，符合国际通行的实验动物使用规范。 结果:①加药孵育120 h后，PMF和LBH589以剂量依赖性方式抑制Jeko-1和Granta-519的细胞增殖。除终浓度为0.1、0.3 nmol/L的PMF与同浓度LBH589相比外，其余各终浓度PMF对Jeko-1的细胞增殖抑制率均高于同浓度LBH589，并且差异有统计学意义(终浓度为0.5、1.0、2.0、4.0 nmol/L PMF比同浓度LBH589： F＝311.4、39 470.4、1 232.7、4 575.4， P＝0.03、<0.000 1、＝0.001、<0.000 1)。Jeko-1中PMF的IC50值为(366.8±3.4)pmol/L，低于LBH589的(1 570.0±51.6)pmol/L，并且差异有统计学意义( F＝2 367.4， P<0.000 1)。不同终浓度PMF对Granta-519的细胞增殖抑制率均高于同浓度LBH589，并且差异均有统计学意义(终浓度为0.4 、0.8、1.6、3.1、6.3、12.5 nmol/L PMF比同浓度LBH589： F＝15.8、190.0、172.1、314.5、741.5、236.8， P＝0.028、＝0.001、＝0.001、<0.000 1、<0.000 1、＝0.001)。Granta-519中PMF的IC50值为(2.9±0.1)nmol/L，低于LBH589的(7.4±0.4)nmol/L，并且差异有统计学意义( F＝686.4， P<0.000 1)。② PM 2.5、5、10 mg/kg和LBH589 10 mg/kg组小鼠d21(给药9次)时，T/C值分别为58.6%、26.0%、16.6%、24.1%，治疗有效。③ d21(给药9次)时，PM 2.5、5、10 mg/kg和LBH589 10 mg/kg组小鼠的瘤重分别为(2.1±0.4)g、(0.9±0.2)g、(0.9±0.2)g、(1.4±0.4)g，均低于溶剂对照组的(3.7±0.7)g，并且差异均有统计学意义( F＝16.2、78.1、83.4、36.7， P<0.002、0.000 1、0.000 1、0.000 1)，PM 5、10 mg/kg组小鼠瘤重均低于LBH589 10 mg/kg组，并且差异亦有统计学意义( F＝8.3、10.3， P＝0.015、0.008)。除PM 2.5 mg/kg组(38.0%)外，PM 5、10 mg/kg和LBH589 10 mg/kg组小鼠的肿瘤生长抑制率分别为73.8%、74.4%、58.0%，均治疗有效。 结论:PM作为一种新型高选择性HDACi，在MCL细胞系的抗细胞增殖作用明显，并优于已上市的LBH589，其在皮下移植瘤模型小鼠体内也表现出显著的抗肿瘤效果。

目的:探讨外源性活性肽spexin调节脂肪组织胰岛素抵抗的作用及机制。方法:高脂饮食16周诱导肥胖模型(DIO)小鼠和糖尿病模型(db/db)小鼠，分别腹腔注射spexin(50 μg/kg)，连续给药3周，对照组给予等体积生理盐水。给药结束后，分析各组小鼠体重、内脏脂肪重量及血浆生化指标。实时荧光定量PCR检测脂肪组织Krüppel样转录因子9(KLF9)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α(PGC-1α)及葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)基因水平；Western印迹法检测脂肪组织KLF9、PGC-1α、GLUT4及p-p38/p38蛋白水平。结果:与DIO模型对照组小鼠相比，spexin给药组小鼠体重和脂肪均明显减少( P＝0.043和 P<0.001)，血糖、胰岛素及HOMA-IR均显著下降( P<0.001、 P＝0.008和 P<0.001)，葡萄糖耐量和胰岛素耐量水平均显著提高( P＝0.006和 P＝0.002)；与db/db模型对照组小鼠相比，spexin给药组小鼠的体重和脂肪均明显减少(均 P<0.001)，血糖、胰岛素及HOMA-IR均显著下降( P＝0.041、 P＝0.009和 P＝0.007)，葡萄糖耐量和胰岛素耐量水平均显著提高( P＝0.008和 P＝0.031)。与DIO模型对照组小鼠相比，脂肪组织KLF9、PGC-1α及GLUT4基因及蛋白水平均显著升高[基因( P<0.001、 P<0.001和 P＝0.005)；蛋白( P＝0.047、 P＝0.022和 P＝0.001)]，而p-p38/p38蛋白水平显著降低( P＝0.002)；与db/db模型对照组小鼠相比，脂肪组织KLF9、PGC-1α及GLUT4基因及蛋白水平均显著升高[基因( P<0.001、 P<0.001和 P＝0.005)；蛋白( P＝0.001、 P＝0.004和 P<0.001)]，而p-p38/p38蛋白水平显著降低( P＝0.001)。 结论:外源性活性肽spexin可能通过调控p38MAPK介导炎症和KLF9-PGC-1α-GLUT4通路介导葡萄糖摄取，改善DIO小鼠和db/db小鼠脂肪组织胰岛素抵抗。

目的:探讨中药单体贯叶金丝桃素(HPF)与氨来呫诺(AM)联合给药时，对抗肥胖及改善代谢紊乱的叠加治疗作用。方法:采用ob/ob小鼠为肥胖小鼠模型，在HPF单药(2.5 mg/kg，腹腔注射)或与AM(50 mg/kg，灌胃)联合给药4周后，监测小鼠体重、摄食，检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平，并通过小动物核磁共振、代谢笼、糖耐量和胰岛素耐量检测及HE染色等方法，观察小鼠的体重变化、能量消耗、脂肪含量、糖代谢等的变化。Western印迹和酶联免疫吸附测定(ELISA)用以检测环磷酸腺苷(cAMP)-蛋白激酶A(PKA)信号通路。结果:给药4周后，与对照组相比(平均体重54.07 g)，HPF给药组的小鼠平均体重下降至51.33 g( P＝0.042)；与AM联合给药后，小鼠平均体重进一步降低至47.61 g( P＝0.041)，表现出明显的叠加效应。小鼠核磁共振结果显示，HPF给药后小鼠脂肪含量减少( P＝0.011)，表现为腹股沟白色脂肪和附睾旁白色脂肪的细胞直径都变小( P＝0.014, P＝0.032)，产生棕色化趋势，棕色脂肪组织中白色脂肪浸润减少。然而，与HPF给药组相比，两药联合治疗并没有使白色脂肪细胞进一步变小或减少其在棕色脂肪组织的脂质积累。代谢笼实验显示，HPF处理的小鼠在光照期的氧气消耗率( P<0.001)和二氧化碳释放率( P＝0.002)都显著高于对照组小鼠，HPF与AM的组合可以进一步提高小鼠的能量消耗。此外，HPF与AM联合给药可以进一步激活白色脂肪组织中的儿茶酚胺下游cAMP-PKA信号通路。当联合用药时，肥胖小鼠的胰岛素抵抗改善，肝脏三酰甘油含量减少( P＝0.049)，肝脏损伤指标血清ALT水平下降( P＝0.008)。 结论:HPF和AM联合用药有望成为治疗肥胖、改善代谢紊乱、缓解儿茶酚胺抵抗的有效策略。

目的:建立胃癌的人源肿瘤异种移植（PDX）动物模型，探讨化疗药物在该模型中的抑瘤效果。方法:将人胃癌组织接种于NOG小鼠两侧腋窝皮下，传3代。挑选第3代NOG小鼠肿瘤组织，接种于21只重度联合免疫缺陷-非肥胖糖尿病（SCID-NOD）小鼠左腋皮下，建立胃癌PDX小鼠模型。将接种后的小鼠分为对照组（仅用0.9%氯化钠注射液处理）、奥沙利铂组、顺铂组、紫杉醇组、氟尿嘧啶组、替吉奥组、卡培他滨组，每组3只，给予相应药物。记录不同时间小鼠存活情况、瘤体积及瘤质量，给药第61天后处死小鼠，评价6种化疗药物对该胃癌PDX模型的肿瘤抑制效果。结果:胃癌组织传3代后PDX动物模型传瘤稳定性提高，肿瘤生长初期均一性良好。该模型用药前期对奥沙利铂、氟尿嘧啶和卡培他滨较为敏感，第31天的肿瘤生长抑制指数（TGI）分别为63.37%、52.11%和78.48%；用药末期，模型对卡培他滨的敏感性最好，第61天TGI为59.22%，抑瘤率为58.65%。用药后TGI曲线显示，紫杉醇对模型无明显抑瘤效果，顺铂抑瘤效果最差，模型对替吉奥的耐受性较差。结论:成功建立胃癌PDX动物模型，卡培他滨对其抑瘤效果最好。

目的:探讨生存素对瘦素转录调控及其敏感性的影响。方法:用慢病毒构建过表达生存素的脂肪细胞模型，以RNA测序(RNA-seq)探讨生存素对脂肪细胞分泌蛋白表达调控的影响；通过腺相关病毒(adeno-associated virus, AAV)定点注射的方法在小鼠腹股沟脂肪组织(inguinal adipose tissue, iWAT)中实现过表达生存素，用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测瘦素、脂联素等转录水平，用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞上清、小鼠血清中瘦素、脂联素分泌水平。用Western印迹法检测下丘脑信号转导及转录激活蛋白3(STAT3)磷酸化水平，分析生存素对中枢瘦素敏感性的影响。结果:3T3-L1脂肪细胞及原代脂肪细胞中，过表达生存素在未影响脂肪细胞分化时，均可显著下调瘦素转录水平( P<0.01)。过表达生存素在未影响细胞上清中脂联素水平的同时，使瘦素水平显著下降( P<0.001)。同样，由注射AAV实现的小鼠iWAT中过表达生存素不仅可下调局部脂肪组织中瘦素转录水平，还可导致小鼠血清中瘦素分泌水平的下降( P<0.05)。在短期高脂饲料喂养小鼠中，iWAT过表达生存素小鼠下丘脑STAT3磷酸化水平增加，提示瘦素中枢敏感性改善。 结论:脂肪中过表达生存素可下调瘦素转录及分泌水平，改善高脂饲料喂养肥胖小鼠瘦素敏感性。

目的:探讨降钙素通过刺鼠相关蛋白（AgRP）神经元发挥调控能量平衡的作用。方法:将12周龄普通食物喂养雄性C57BL/6小鼠分为自由进食组和禁食24 h组，6周龄雄性C57BL/6小鼠分为普通食物组和高脂食物组（喂养3个月），每组3只，采用免疫荧光染色法检测脑组织切片降钙素受体（Calcr）的表达。12只6周龄雄性C57BL/6小鼠通过高脂食物喂养6个月构建高脂食物喂养小鼠模型，侧脑室置管后将小鼠分为生理盐水侧脑室注射组（侧脑室注射1 μl生理盐水）和鲑鱼降钙素（sCT）侧脑室注射组［侧脑室注射1 μl sCT（1 μg/μl）］，每组6只，测定各组小鼠注射后24 h的体重和进食量，并采用Oxymax/CLAMS代谢笼测定小鼠的氧气消耗量、二氧化碳生成量和能量消耗。将12周龄普通食物喂养雄性C57BL/6小鼠分为生理盐水腹腔注射组（腹腔注射，10 ml/kg）和sCT腹腔注射组（腹腔注射，150 μg/kg），每组3只，采用免疫荧光染色法检测脑组织切片AgRP、c-Fos、磷酸化信号转导子和转录激活子3（pStat3）的表达。采用独立样本 t检验比较组间差异。 结果:与自由进食组相比，禁食24 h组弓状核Calcr表达明显下降（ P<0.05）。与普通食物组相比，高脂食物组下丘脑弓状核Calcr表达明显下降（ P<0.05）。与生理盐水侧脑室注射组相比，sCT侧脑室注射组体重和进食量明显减少（ P<0.05），而氧气消耗量、二氧化碳生成量及能量消耗明显升高（ P<0.05）。与生理盐水腹腔注射组相比，sCT腹腔注射组弓状核AgRP和c-Fos的共染明显减少，室旁核AgRP表达明显减少而室旁核c-Fos表达明显增多，弓状核pStat3表达明显增多（ P<0.05）。 结论:弓状核Calcr与能量平衡密切相关。降钙素可通过Stat3通路抑制AgRP表达，抑制AgRP神经元活性，进而抑制食欲、促进能量消耗。

目的:通过评估高脂饮食（high-fat diet，HFD）诱导的肥胖相关肾病C57BL/6J小鼠肾周脂肪组织炎症，进一步探讨其可能机制。方法:将12只8~10周龄雄性C57BL/6J小鼠，采用简单随机抽样方法分为正常饲料饮食组（ND组， n=6）和高脂饲料饮食组（HFD组， n=6），喂养14周后，采集血液，剥离双肾，HE、PAS、Masson染色观察肾脏及肾周脂肪的病理改变；实时荧光定量PCR法检测肾周脂肪肿瘤坏死因子α（TNF-α）、M1型巨噬细胞标志物CD11c、白细胞介素（IL）-1β、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、IL-10、转化生长因子-β1、M2型巨噬细胞标志物CD206、纤维连接蛋白1 mRNA的表达量；免疫组化法检测肾脏及肾周脂肪巨噬细胞标志物F4/80、CD68及白细胞共同抗原（leukocyte common antigen，LCA）的表达。 结果:喂养14周后，HFD组体重明显高于ND组[（35.83±1.19）g比（24.06±0.37）g， P<0.05]。HFD组小鼠肾周脂肪细胞增生肥大，并伴有肾小球增生肥大、系膜基质增生扩张及肾间质纤维化等病理学改变（均 P<0.05），随机血糖、血脂、血肌酐及尿素氮水平明显高于ND组（均 P<0.05）。肾周脂肪组织M1型巨噬细胞相关TNF-α、CD11c、IL-1β、MCP-1的mRNA相对表达量明显高于ND组（均 P<0.05），且免疫组化显示HFD组肾周脂肪组织F4/80、CD68及LCA的表达亦显著高于ND组（均 P<0.05），表明HFD组肾周脂肪巨噬细胞和炎细胞显著多于ND组。Pearson相关分析结果显示，肾周脂肪平均面积与肾周脂肪组织内巨噬细胞数量、肾小球截面积等多个形态学指标以及尿素氮等肾功能指标呈正相关（均 P<0.05）。 结论:高脂饮食诱导的肥胖相关肾病C57BL/6J小鼠模型建模成功，且肾周脂肪组织确实存在明显的炎性反应，巨噬细胞发生明显极化，主要向M1型巨噬细胞促炎方向极化。