目的:制备一种针对整合素αM(CD11b)受体的预定位分子探针 68Ga-1，4，7-三氮杂环壬烷-1，4，7-三乙酸-甘氨酸-精氨酸-谷氨酸-精氨酸-谷氨酸-十一聚乙二醇-1，2，4，5-四嗪/CD11b抗体片段-反式-环辛烯[ 68Ga-NOTA-Polypeptide-PEG 11-Tz/anti-CD11b-F(ab′) 2-TCO]，并通过microPET显像探讨其作为CD11b受体靶向分子探针的可行性。 方法:采用免疫荧光法检测小鼠巨噬细胞RAW264.7膜表面CD11b受体的表达情况。将CD11b抗体与TCO连接，并通过酶切法得到anti-CD11b-F(ab′) 2-TCO。对配体NOTA-Polypeptide-PEG 11-Tz进行 68Ga标记，检测标记率以及放化纯。进行预定位细胞结合实验，建立CT26结肠癌荷瘤裸鼠模型，进行预定位生物分布以及microPET显像实验。用免疫组织化学检查验证肿瘤微环境中CD11b +细胞的浸润情况。用单因素方差分析比较组间差异。 结果:免疫荧光检测结果显示RAW264.7细胞膜表面高度表达CD11b受体。十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)验证成功合成anti-CD11b-F(ab′) 2-TCO。放射性配体 68Ga-NOTA-Polypeptide-PEG 11-Tz标记率约为94.6%，比活度为7.0~7.4 MBq/μg，放化纯大于95%。预定位细胞结合实验证实该分子探针与CD11b受体有较好的靶向性。生物分布及显像结果示，在预定位4、12以及24 h时间间隔下，模型鼠肾放射性摄取较高，表明分子探针通过肾代谢；肿瘤/肌肉比值为9.23±1.45、12.53±1.36和10.74±1.11( F＝848.8， P<0.05)；在预定位12 h注射放射性配体后1 h显像，肿瘤与非靶器官对比度最佳：肿瘤标准摄取值(SUV)为0.67±0.12，肌肉SUV为0.09±0.04。免疫组织化学结果示，CT26结肠癌微环境中浸润了大量CD11b +细胞。 结论:成功合成预定位分子探针 68Ga-NOTA-Polypeptide-PEG 11-Tz/anti-CD11b-F(ab′) 2-TCO，该标记物对CD11b阳性结肠癌具有较强的靶向能力，有望用于靶向CD11b受体的体内示踪。

目的:分析15例应用贝利尤单抗治疗的儿童难治性系统性红斑狼疮(SLE)患儿的转归，初步评价该药的安全性和有效性。方法:采用回顾性、真实世界临床研究方法，选取2020年4月1日至2022年3月31日北京儿童医院风湿科明确诊断并完整随访的难治性SLE患儿15例为研究对象。通过对比不同治疗时期(治疗前、治疗4周、8周、12周、6个月和12个月)患儿的临床症状、辅助检查结果、SLE疾病活动指数(SLEDAI-2000)、医师整体评估(PGA)评分的变化情况及不良事件发生情况，判断贝利尤单抗治疗的安全性和有效性。其中计数资料采用百分比表示，计量资料满足正态分布的采用 ± s表示，计量资料两样本比较采用 t检验， P<0.05为差异有统计学意义。 结果:患儿男女比例为3∶2，起病年龄(7.93±4.99)岁；基础治疗时间4个月~5年1个月；以狼疮性肾炎(LN)为主要靶器官损害者8例，持续1年以上低补体血症为主者2例，中枢神经系统受累为主者2例；合并抗磷脂综合征2例；婴幼儿早发型SLE 1例。其中1例LN患者合并神经精神性狼疮及双膝关节股骨头远端梗死、3例合并腰椎压缩性骨折及髋关节梗死。患儿均经规范传统治疗诱导缓解3个月及以上，维持期存在疾病活动度轻-中度活动，糖皮质激素减药困难。应用贝利尤单抗基线时，SLEDAI-2000评分4~13分；PGA评分1~2.50分。基础治疗包括糖皮质激素联合免疫抑制剂(环孢素、吗替麦考酚酯、来氟米特片)和抗疟药，依据靶器官损伤情况不同，同时应用环磷酰胺和/或雷公藤治疗。接受静脉注射贝利尤单抗后的药物安全性显示，本研究患儿中有1例治疗后4周出现呼吸道感染症状；另外1例患儿于治疗后8周出现谷丙转氨酶轻度升高，分别给予对症治疗后恢复正常。余13例患儿未发现与药物相关的不良反应。治疗后4周，SLEDAI-2000与PGA评分较基线水平改善，差异有统计学意义(SLEDAI-2000 P＝0.002；PGA P＝0.006)，临床无复发病例。1例家族性冻疮样红斑狼疮患儿，治疗2周后，皮疹明显改善，治疗8周后出现低热伴皮疹增多；治疗16周后，体温正常，皮疹基本消退。 结论:贝利尤单抗治疗难治性儿童SLE临床有效，至今无严重不良事件记录。但其长期疗效及安全性尚需进行多中心、大样本、长期深入的研究。

目的:探究肾型谷氨酰胺酶（kidney-type glutaminase，KGA）在肝母细胞瘤中表达及与患儿预后的关系，探究KGA对肝母细胞瘤细胞增殖的影响。方法:从GEO数据库获取44例肝母细胞瘤患儿的临床资料和测序数据，差异基因表达分析探究基因KGA在正常肝组织和肝母细胞瘤组织中的表达情况。根据KGA的中位mRNA相对水平表达量将44例患儿分为两组，即KGA高表达组（mRNA相对水平>37.181）和低表达组（mRNA相对水平<37.181），用Kaplan-Meier曲线比较两组患儿的生存差异。用单因素和多因素Cox回归分析研究基因KGA与患儿预后的关系。蛋白质印迹法检测KGA在正常肝细胞株LO2以及肝母细胞瘤细胞株HuH-6及HepG2中表达情况。分别用干扰小RNA和KGA抑制剂1（glutaminase-IN-1，GIN-1）处理HuH-6细胞，通过实时定量聚合酶链反应（real time quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR）和蛋白质印迹法检测KGA的mRNA相对表达水平和蛋白表达水平。细胞增殖能力检测（CCK8实验）和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力变化。结果:与正常肝脏组织及LO2细胞株相比，KGA在肝母细胞瘤中表达量显著升高。Kaplan-Meier生存分析显示KGA高表达组患儿无进展生存期更短（ P=0.014）。多因素Cox回归分析表明KGA是肝母细胞瘤患儿预后的独立预测因子[ HR（95% CI）为5.74（1.21~27.33）， P=0.028]。RT-qPCR、蛋白质印迹法、CCK8实验和平板克隆形成实验证实干扰KGA后，肿瘤细胞增殖能力显著降低，GIN-1处理HuH-6细胞后蛋白质印迹法、CCK8实验和平板克隆形成实验证实抑制KGA后肿瘤细胞生长能力降低。 结论:与正常肝脏相比，KGA在肝母细胞瘤中呈高表达，且高表达的KGA与肝母细胞瘤不良预后相关，是HB患儿预后的独立预测因子，抑制KGA后肝母细胞瘤细胞增殖能力降低。

目的 研究柴胡Bupleuri Radix不同极性部位对慢性不可预知应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)模型大鼠抑郁样行为干预作用和神经递质调节作用,筛选出最佳药效部位,并建立一种能够测定抑郁大鼠胆汁酸谱的方法.方法 雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、盐酸文拉法辛(35mg/kg)组、柴胡低极性部位(15g/kg)组、柴胡中极性部位(15 g/kg)和柴胡高极性部位(15g/kg)组,每组9只,造模28d同时给药,动态测定大鼠的体质量变化,通过糖水偏好实验和旷场实验检测行为学变化;采用UPLC-MS测定血清中色氨酸(tryptophane,Trp)、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、5-羟基吲哚乙酸(5-hydroxyindoleacetic acid,5-HIAA)、去甲肾上腺素(noradrenaline,NE)、多巴胺(dopamine,DA)、乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)、γ-氨基丁酸(γ-aminobutyricacid,GABA)、谷氨酸(glutamic acid,Glu)、酪氨酸(tyrosine,Tyr)含量;采用全自动生化分析仪测定γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyl transpeptidase,γ-GT)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性和血清总胆红素(serum bilirubin,TBIL)含量;采用ELISA测定盲肠内容物中总胆汁酸(total bile acid,TBA)水平;采用UPLC-MS/MS拟靶向代谢组学建立36种胆汁酸的拟靶向相对定量方法,测定盲肠内容物胆汁酸谱,并对组间胆汁酸差异性进行分析.结果 柴胡不同极性部位组和盐酸文拉法辛组均可回调CUMS引起的大鼠体质量、糖水偏爱率、直立次数、水平穿越格数异常和血清中 Trp、5-HT、5-HIAA、NE、DA、Ach、GABA、Glu、Tyr 水平(P＜0.05、0.01、0.001),且柴胡低极性部位回调效果最好.同时柴胡低极性部位可显著回调大鼠血清γ-GT活性及血清TBIL、盲肠内容物TBA含量(P＜0.05、0.01);建立了 36种胆汁酸的拟靶向相对定量方法,所建立的方法具有良好的稳定性,胆汁酸谱分析表明,柴胡低极性部位可调节盲肠内容物胆汁酸谱,通过回调其中5种差异胆汁酸(牛磺熊去氧胆酸、熊去氧胆酸、牛磺去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、牛磺石胆酸)发挥药效作用.结论 柴胡低极性部位为抗抑郁最佳药效部位,同时能够调节胆汁酸谱的代谢紊乱,发挥肝保护作用.

减少乳酸积累一直是哺乳动物细胞生物技术产业的一个目标.体外培养动物细胞时,乳酸积累主要是2种代谢途径作用的综合结果:一方面,葡萄糖在乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)的作用下生成乳酸;另一方面,乳酸可通过乳酸脱氢酶B(LDHB)或乳酸脱氢酶C(LDHC)氧化为丙酮酸重新进入三羧酸循环.本研究综合评估了乳酸代谢关键基因调控对人胚胎肾细胞(human embryonic kidney 293 cells,HEK-293)细胞生长、代谢和人腺病毒(human adenovirus,HAdV)生产的影响,有效提高了HEK-293 细胞的HAdV生产能力,并为哺乳动物细胞的乳酸代谢工程调控提供了理论基础.通过改造乳酸代谢关键调控基因(敲除ldha基因以及过表达ldhb和ldhc基因),有效改善了HEK-293 细胞的物质和能量代谢效率,显著提高了HAdV的生产.与对照细胞相比,3 个基因改造均能促进细胞生长,降低乳酸和氨的积累,明显增强细胞的物质和能量代谢效率,显著提高了HEK-293细胞的HAdV生产能力.ldhc基因过表达对HEK-293细胞的生长、代谢和HAdV生产调控最显著,最大细胞密度提高了约 38.7%,乳酸对葡萄糖得率和氨对谷氨酰胺得率分别下降了 33.8%和 63.3%,HAdV滴度提高了至少 16 倍.此外,相比于对照细胞株,改造细胞株的腺苷三磷酸(adenosine triphosphate,ATP)生成速率、ATP/O2 比率、ATP 与腺苷二磷酸(adenosine diphosphate,ADP)的比值以及还原型辅酶Ⅰ(nicotinamide adenine dinucleotide,NADH)含量均有不同程度的提高,能量代谢效率明显改善.

目的 探讨逍遥补肾方治疗桥本甲状腺炎(HT)的潜在作用机制.方法 通过网络药理学对逍遥补肾方的成分靶点及HT的相关疾病靶点取交集,构建交集靶点的蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络、药物-成分-交集靶点网络,并筛选出核心成分及靶点.随机将65只大鼠分为正常组(10只),造模组(55只).高碘水喂养大鼠,联合多次甲状腺球蛋白注射建立实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)大鼠模型,造模成功后随机分为模型组、硒酵母组和逍遥补肾组.硒酵母组给予硒酵母片水溶液[25.2 mg/(kg·d)],逍遥补肾组给予逍遥补肾方溶液[11.79 mg/(kg·d)],正常组、模型组给予等体积的蒸馏水.连续灌胃8周后收集血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠血清中白蛋白(ALB)、蛋白激酶B1(AKT1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量.收集粪便,采用超高液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)进行代谢组学检测.结果 共获得逍遥补肾方治疗HT的6个核心成分,包括槲皮素、山奈酚、β-谷甾醇、豆甾醇、异鼠李素和木犀草素;5个核心靶点,包括ALB、AKT1、TNF、白细胞介素-6(IL-6)和TP53.动物实验结果显示,与硒酵母组比较,逍遥补肾组ALB、AKT1、TNF-α的表达明显下调(P<0.01).代谢组学分析结果显示共鉴定出5个共同差异代谢物,包括(4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-二十二碳六烯酸乙酯、(S)-(+)-柠苹酸、2-酮-6-乙酰氨基己酸盐、烟酰胺和黄氧酸;涉及苯丙氨酸代谢、味觉传导、花生四烯酸代谢等20条代谢通路.结论 逍遥补肾方可以从多靶点、多成分、多代谢物、多代谢通路对HT产生调节作用.

目的 探讨肝硬化合并门静脉血栓形成的相关危险因素.方法 回顾性分析2013年6月至2017年6月在新疆医科大学第一附属医院218例肝硬化患者的临床资料,患者中109例为肝硬化并门静脉血栓患者,109例为肝硬化无门静脉血栓的患者.分析两组患者的一般资料、临床表现、并发症、实验室检查及影像学检查资料的结果,组间计量资料比较使用 t检验,计数资料比较采用 X2检验,应用非条件Logistic回归模型进行多因素分析、筛选出独立危险因素.结果 门静脉血栓的发生与Child-Pugh分级(X2 =20.293,P<0.01)、脾脏切除术(X2 =11.869,P<0.01)、门静脉主干内径宽度(t=3.125,P<0.01)、脾脏的厚度(t=2.283,P=0.024)、血红蛋白(t= -3.751,P< 0.01)、白蛋白(t= -3.924,P<0.01)、D-二聚体(t=5.861,P<0.01)、纤维蛋白降解产物(t=3.110,P<0.01)有关,不受性别、年龄、族别、吸烟、病因、白细胞计数、血小板计数、凝血酶原时间、国际标准化比值、部分凝血活酶时间、纤维蛋白原、胱抑素、血肌酐、总胆红素、直接胆红素、丙氨酸转氨酶、碱性磷酸酶、谷胺酰转肽酶、脾静脉内径宽度、脾脏的长径、高血压、糖尿病的影响.两组患者发生腹泻、肝性脑病、肝肾综合征差异无统计学意义(均 P> 0.05),腹痛(X2 = 4.598)、发热(X2 = 7.72)、消化道出血(X2 =18.435)、原发性腹膜炎(X2 =16.987),差异有统计学意义(均 P<0.05).D-二聚体、门静脉主干内径宽度、Child-Pugh分级、脾脏切除术是肝硬化患者PVT形成的独立危险因素(OR=0.686、0.161、3.193、9.515),均 P<0.05).结论 D-二聚体、门静脉主干内径宽度、Child-Pugh分级、脾脏切除术是肝硬化患者PVT形成的独立危险因素,肝硬化合并PVT 可以使患者的临床症状加重,并发症发生率增加.

目的 探讨转谷氨酰胺酶2C多肽(TGM2)在过敏性紫癜(HSP)肾损伤中的表达及其临床意义.方法 采用实时荧光定量PCR检测HSP患儿(HSP组,20例)、HSPN患儿[HSPN组,20例,其中HSPN(Ⅱ,ISKD)4例,HSPN(Ⅲ,ISKD)12例,HSPN(Ⅳ,ISKD)4例]和健康对照组20例外周血有核细胞TGM2 mRNA的表达;应用免疫组织化学的方法检测HSPN组患儿和对照组(5例)肾组织TGM2蛋白的表达.结果 HSPN组外周血TGM2 mRNA表达高于健康对照组和HSP组(P<0.05),健康对照组和HSP组外周血TGM2 mRNA表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05).HSPN组和对照组肾组织的表达差异有统计学意义(P<0.01),且TGM2的表达水平与HSPN病理分级严重程度有关联,即病理分级越重,TGM2的表达越强(P<0.001).结论 TGM2的表达与HSP肾脏损害有关,且与肾脏损害病理程度有关,TGM2可能参与了HSPN的发病机制.

肾型谷氨酰胺酶(GLS1)表达可能与多种肿瘤发生、发展相关[1].本研究旨在探讨GLS1在原发性肝癌(HCC)中表达的意义.一、资料与方法1.材料:收集本院HCC病理标本66例.2.方法:免疫组织化学检测标本GLS1表达;细胞功能实验检测GLS1对肝癌细胞的影响.3.统计学方法:应用SPSS 17.0统计软件分析,采用t检验、x2检验、COX回归模型,以P＜0.05为差异有统计学意义.二、结果1.GLS1相关性分析:GLS1表达与TNM分期明显相关(x2=7.273,P=0.007).

目的 研究谷氨酰胺(Gln)代谢与鼻咽癌放疗抵抗的关系及作用机制.方法 采用慢病毒感染技术建立肾型谷氨酰胺酶(GLS1)敲低的人鼻咽癌细胞系CNE1、6-10B及对照细胞系,脂质体转染技术建立GLS1过表达的人鼻咽癌细胞系CNE2及对照细胞系;采用谷氨酰胺酶抑制剂BPTES抑制GLS1的活性;采用Gln/Glu及Glu检测试剂盒检测细胞Gln代谢情况;体外放射克隆形成实验及流式检测细胞凋亡实验检测Gln代谢改变对放疗敏感性的影响;采用Westem blot检测Gln代谢改变对自噬相关蛋白的表达;质粒转染LC3-EGFP后观察自噬荧光斑点.结果 Gln分解代谢降低后,体外放射克隆形成能力降低,细胞凋亡增加及细胞自噬水平降低;而分解代谢增加后,体外放射克隆形成能力增强,细胞凋亡降低及细胞自噬水平增加.结论 Gln分解代谢增强,激活鼻咽癌细胞自噬,增加鼻咽癌的放疗抵抗性.