探讨胆管结扎(BDL)诱导的肝损伤对血脑屏障(BBB)上有机阳离子转运体 1/2(OCT1/2)功能和表达的影响及其可能机制.构建BDL大鼠模型,通过试剂盒、Western blot和LC-MS考察BDL大鼠生理生化指标、BBB完整性、皮层OCT1/2蛋白表达和功能以及血浆鹅去氧胆酸(CDCA)浓度.连续 14d灌胃CDCA后测定大鼠生理生化指标、血浆各胆汁酸浓度和皮层OCT1/2蛋白表达.结果显示,BDL大鼠血清天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)和碱性磷酸酶(ALP)等浓度升高,血浆CDCA浓度升高,金刚烷胺脑血浓度比值(Kp)降低,皮层Claudin-5和Occludin无明显变化,OCT1表达下调,OCT2无明显变化.大鼠灌胃CDCA后,血清AST、ALT和ALP无明显变化,血浆CDCA浓度升高,皮层OCT1表达下调,OCT2无明显变化.本研究表明,BDL大鼠BBB上OCT1功能与表达下调与血液中升高的CDCA有关.

肝内胆管细胞癌(ICC)起源于二级胆管以上的肝内胆管上皮细胞，其生物学行为和治疗方式不同于原发肝癌。手术治疗仍然是目前最有效的治疗手段，微创技术、联合肝脏离断和门静脉结扎的二步肝切除术、区域淋巴结清扫以及肝移植是ICC手术治疗领域的重要进展。对传统检查手段的深入挖掘，包括术前增强CT、肿瘤标志物、白蛋白、血小板等，使可切除ICC的术前评估更全面，并对术后辅助化疗和新辅助化疗的筛选提供了进一步分层的依据。随着分子生物学的进步，大量针对ICC靶向治疗及免疫治疗的临床试验正在开展，并可见靶向治疗和免疫治疗的有效报道，然而尚无专门针对ICC的靶向药物获批应用。总之，随着对ICC生物学行为认识的深入，手术方案和综合治疗均有个体化治疗的趋势。

目的:探讨成体肝脏 Numb基因过表达是否可有效干预胆汁淤积性肝纤维化（CLF）的进展。 方法:SD大鼠24只，随机分为假手术组（Sham， n=6）、胆总管结扎组（BDL， n=6）、空载体质粒组（Numb-EV， n=6）和 Numb基因过表达组（Numb-OE， n=6）。胆总管结扎制备CLF模型，并于造模的同时将载有克隆 Numb基因的腺相关病毒（AAV）经脾脏注射至大鼠体内，4周末取材。检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、白蛋白（Alb）、血清总胆红素（TBil）、血清胆汁酸（TBA）、肝组织羟脯氨酸（Hyp）含量、肝组织中平滑肌肌动蛋白（α-SMA）与细胞角蛋白（CK）7、CK19的表达情况及肝组织病理情况。多组均数比较采用方差分析。 结果:与Sham组比较，BDL组大鼠肝组织 Numb mRNA水平显著降低（0.872±0.237与0.452±0.147， P=0.003）；与Numb-EV组比较，Numb-OE组肝组织 Numb mRNA水平显著升高（0.487±0.122与1.094±0.345， P<0.01）。与Sham组比较，BDL组肝组织Hyp含量（μg/L）（288.46±49.49与901.98±271.85， P<0.01）及α-SMA mRNA水平（0.858±0.234与8.976±1.398， P<0.01）均显著升高；与Numb-EV组比较，Numb-OE组Hyp含量（μg/L）（864.32±113.54与580.44±171.77， P=0.039）及α-SMA mRNA水平（6.138±1.443与1.322±0.859， P<0.01）以及蛋白水平显著降低。与Sham组比较，BDL组血清ALT、AST、TBil、TBA水平均显著升高（ P值均<0.01），Alb含量显著降低（ P<0.01）；与Numb-EV组比较，Numb-OE组AST、TBil水平均显著降低（ P值均<0.01），ALT、TBA水平也明显降低（ P值均<0.05），Alb含量显著升高（ P值均<0.01），差异有统计学意义。与Sham组比较，BDL组CK7、CK19的mRNA表达水平均显著升高（1.40±0.42与43.78±7.56、1.11±0.51与363.81±134.84， P值均<0.01）；与Numb-EV组比较，Numb-OE组CK7、CK19的mRNA表达水平显著降低（343.19±81.22与3.22±2.34、40.53±14.02与15.68±9.36， P值均<0.01）。 结论:成体肝脏 Numb基因过表达可抑制CLF进展，这可能成为CLF治疗的新靶点。

目的:评价干扰素基因刺激蛋白(STING)信号通路在一氧化碳释放分子-3(CORM-3)减轻肝缺血再灌注大鼠肝细胞焦亡和凋亡中的作用。方法:清洁级健康雄性SD大鼠48只，9~11周龄，体重320~380 g，采用随机数字表法分为4组( n＝12)：假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)、CORM-3组(C组)和STING激动剂ADU-S100组(A组)。IR组、C组和A组采用可逆性结扎肝左中叶肝动脉、门静脉及胆管分支45 min后恢复灌注的方法建立肝缺血再灌注损伤模型。C组于再灌注即刻股静脉注射CORM-3 4 mg/kg，S组、IR组和A组股静脉注射含二甲基亚砜的等容量生理盐水。股静脉注射后1.5 h，A组腹腔注射ADU-S100 10 mg/kg，S组、IR组和C组腹腔注射等量生理盐水。再灌注3 h时，采用速率法检测血清ALT和AST浓度。再灌注12 h时处死，取肝组织，采用比色法检测一氧化碳(CO)含量，进行肝损伤评分，采用Western blot法检测IL-1β、IL-18、Bcl-2、Bax、干扰素调节因子3(IRF3)、磷酸化IRF3(p-IRF3)、STING、NOD样受体蛋白3(NLRP3)、消皮素D(GSDMD)和活化的caspase-1的表达，采用免疫荧光染色法确定肝细胞焦亡率和凋亡率。 结果:与S组比较，IR组血清ALT和AST浓度、肝损伤评分、CO含量、肝细胞焦亡率和凋亡率升高，IL-1β、IL-18、p-IRF3、STING、NLRP3、GSDMD和活化的caspase-1表达上调，Bcl-2/Bax比值降低( P<0.05)；与IR组比较，C组血清ALT和AST浓度、肝损伤评分、肝细胞焦亡率和凋亡率降低，CO含量升高，IL-1β、IL-18、p-IRF3、STING、NLRP3、GSDMD和活化的caspase-1表达下调，Bcl-2/Bax比值升高( P<0.05)；与C组比较，A组血清ALT和AST浓度、肝损伤评分、肝细胞焦亡率和凋亡率升高，CO含量降低，IL-1β、IL-18、p-IRF3、STING、NLRP3、GSDMD和活化的caspase-1表达上调，Bcl-2/Bax比值降低( P<0.05)。 结论:CORM-3减轻肝缺血再灌注大鼠肝细胞焦亡和凋亡的机制可能与抑制STING信号通路激活有关。

目的:探讨Rab11抑制剂细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂-73(CDKI-73)在肝纤维化中的治疗作用及潜在分子机制。方法:将人LX2细胞分成4组：阴性对照组、转化生长因子-β(TGF-β)组、CDKI-73组和TGF-β+CDKI-73组。取15只5周龄雌性C57小鼠，体重(18.04±0.62)g，分成3组，每组5只：对照组(腹腔注射橄榄油+CDKI-73空载体灌胃)、四氯化碳(CCl 4)组(腹腔注射CCl 4+CDKI-73空载体灌胃)和CCl 4+CDKI-73组(腹腔注射CCl 4+CDKI-73灌胃)。另取15只5周龄雌性C57小鼠，体重(18.06±0.34)g，分成3组，每组5只：假手术(Sham)组、胆管结扎组(打开腹腔寻找到胆总管并结扎+ CDKI-73空载体灌胃)和胆管结扎+CDKI-73组(打开腹腔寻找到胆总管结扎+CDKI-73灌胃)。蛋白质印迹法检测CDKI-73对LX2细胞以及小鼠肝脏中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)或纤维粘连蛋白(FN)的表达差异；Masson及天狼星红检测CDKI-73处理组及对照组小鼠肝纤维化的不同程度；免疫组化检测不同处理组小鼠肝脏α-SMA的表达差异。 结果:CCl 4组小鼠天狼星红、Masson染色的胶原生成和免疫组化α-SMA表达相较于对照组均增加( q＝38.47、24.99、36.79)，而CCl 4+CDKI-73组天狼星红、Masson染色的胶原生成和免疫组化α-SMA表达相较于CCl 4组的各指标均下降( q＝24.72、14.87、27.50)，差异均具有统计学意义(均 P<0.001)。胆管结扎组天狼星红、Masson染色胶原生成和免疫组化α-SMA表达相较于Sham组均增加( q＝28.23、41.01、44.16)，而胆管结扎+CDKI-73组天狼星红、Masson染色胶原生成和免疫组化α-SMA表达相较于胆管结扎组的各指标均下降( q＝22.88、34.31和33.97)，差异有统计学意义(均 P<0.001)。TGF-β组α-SMA和FN蛋白相对表达量均高于TGF-β+CDKI-73组(α-SMA：3.71±0.34比1.28±0.31；FN：3.21±0.39比0.83±0.06)，差异具有统计学意义(均 P<0.001)。TGF-β组α-SMA和FN mRNA相对表达量均高于TGF-β+CDKI-73组的各对应值，差异均具有统计学意义(均 P<0.001)。CDKI-73组TGF-β受体Ⅱ蛋白相对表达量高于阴性对照组(4.68±0.63比1.00±0.22)，差异有统计学意义( P＝0.004)。TGF-β+CDKI-73组磷酸化SMAD2的相对表达量低于TGF-β组(1.67±0.24比3.99±0.44)，差异有统计学意义( P<0.001)。Transwell实验结果表明，0.5 μmol/L CDKI-73即可抑制LX2细胞的迁移能力，且随着CDKI-73浓度的增加，抑制能力也越强。 结论:CDKI-73在体内和体外均可通过抑制依赖Rab11的TGF-β信号通路，从而抑制肝星状细胞的活化以及肝纤维化的形成。

目的:探讨胆总管囊肿(CC)合并肝外胆管变异术前磁共振胆胰管造影(MRCP)的诊断价值及腹腔镜手术处理策略。方法:收集2010年1月至2018年9月在广州市妇女儿童医疗中心连续330例腹腔镜下CC根治术患者临床资料，对其中合并肝外胆管变异的23例患者资料进行回顾性研究，其中男性4例，女性19例，平均年龄3.2岁，年龄范围0.3～9.0岁。根据肝外胆管变异情况是否经术前MRCP诊断，将患者分为术前MRCP诊断组和术前MRCP未诊断组。评估MRCP诊断对变异胆管损伤、手术操作时间以及住院时间等指标的影响。同时分析肝外胆管变异的类型及腹腔镜处理结局。结果:23例CC合并肝外胆管变异患者均经手术证实，发生率为6.97%(23/330)，其中Ⅱ型副肝管(AHD)11例，Ⅲ型AHD 7例，Ⅳ型AHD 1例，交通管(CABD)4例。术前MRCP诊断组纳入14例，MRCP未诊断组纳入9例(含2例未行MRCP患者)，MRCP对肝外胆管变异的术前诊断率为66.7%(14/21)。与术前MRCP诊断组相比，术前MRCP未诊断组变异胆管损伤机会更大[7.1%(1/14)比55.6%(5/9)]，手术操作时间更长[(232.6±10.0)min比(278.9±22.5)min]，差异均具有统计学意义( P<0.05)。23例CC合并肝外胆管变异患者，除1例Ⅱ型AHD中转开腹外，其余22例均在腹腔镜下顺利完成手术。其中11例Ⅱ型AHD及1例Ⅳ型AHD患者行变异胆管重建，7例Ⅲ型AHD患者术中注意保护变异胆管，4例CABD患者单纯结扎CABD。术后1例Ⅱ型AHD患者出现乳糜腹，经保守治疗痊愈，其余均恢复顺利。中位随访2(1～5)年，随访期内所有患者均无肝内胆管扩张及肝萎缩等并发症发生。 结论:MRCP检查是术前诊断CC合并肝外胆管变异的有效方法，能够避免术中变异胆管损伤，可对部分肝外变异胆管进行分型，制定相应的手术策略。绝大数患者可在腹腔镜下完成手术，术后效果良好。

目的:观察胆总管结扎诱导的梗阻性黄疸大鼠成纤维细胞活化的影响。方法:雄性无特定病原体(SPF)级大鼠(第二军医大学实验动物中心提供)24只随机分为假手术组与实验组，每组大鼠各12只。所有大鼠均进行胆总管结扎。实验组大鼠用3-0丝线双重结扎且于结间切断胆总管。两组大鼠分别于术后2 d和7 d取材。采用酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测人转化生长因子-β1(TGF-β1)含量；采用免疫组织化学法检测TGF-β1蛋白表达；采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测TGF-β1 mRNA表达；采用蛋白质印迹法(Western blot)检测TGF-β1蛋白表达。应用SPSS 22.0统计软件分析，计量资料采用 t检验。 结果:假手术组大鼠肝小叶结构清晰，肝索排列整齐；实验组大鼠肝小叶结构紊乱不清，并且肝索解离。实验组血清TGF-β1水平术后2 d[(689.42±58.13) ng/L]和术后7 d[(867.53±45.62) ng/L]高于假手术组[(519.92±32.41) ng/L和(536.52±41.29) ng/L， t＝8.822、18.635， P<0.05]，差异有统计学意义。实验组肝组织中TGF-β1蛋白表达术后2 d[(6.53±1.29)%]和术后7 d[(8.97±1.85)%]高于假手术组[(1.17±0.24)%和(1.54±0.39)%， t＝14.151、13.613， P<0.05]，差异有统计学意义。实验组肝组织中TGF-β1 mRNA表达术后2 d[(0.89±0.14)%]和术后7 d[(0.95±0.19)%]高于假手术组[(0.52±1.32)%和(0.31±1.76)%， t＝14.693、18.316， P<0.05]，差异有统计学意义。实验组肝组织中TGF-β1蛋白表达灰度值术后2 d(0.62±0.13)和术后7 d(0.78±0.10)高于假手术组(0.21±0.05和0.23±0.06， t＝10.197、16.337， P<0.05)，差异有统计学意义。 结论:胆总管结扎诱导的梗阻性黄疸大鼠TGF-β1表达明显上调，胆管上皮细胞增殖诱导成纤维细胞活化。

目的:探索腹腔镜手术治疗肝总管细小型及合并副肝管变异的先天性胆管扩张症(congenital biliary dilatation，CBD)的安全性和有效性。方法:以2012年1月至2019年8月期间在浙江大学医学院附属儿童医院接受手术治疗的11例肝总管细小型及合并副肝管变异的CBD患者为研究对象，包括胆总管远端囊性扩张而近端及肝总管细小4例，合并副肝管变异7例。根据术前影像和术中情况选择不同手术方式治疗，随访术后恢复情况。结果:11例手术过程顺利，平均手术时间158 min，范围120~210 min；术中出血均<10 mL，无一例中转开腹手术。术后7~14 d顺利出院，住院期间无胆瘘及胆道感染、狭窄等并发症发生，术后随访2个月至3年。均无胆红素升高、转氨酶异常、胆道狭窄或扩张及胆管炎等并发症发生。结论:肝总管细小型和合并副肝管变异的CBD的诊断主要依靠影像学检查，但大部分副肝管无法通过术前影像学检查发现。术中遇到肝总管直径<5 mm的患者时，在肝总管前壁纵向向上剖开少许前壁后，在悬吊线辅助下行胆肠间断吻合，可降低术后吻合口狭窄的发生率。术中发现合并副肝管畸形、副肝管直径<1 mm、无法行吻合者，可单独结扎处理；对于副肝管直径≥2 mm者，建议重建胆肠吻合。对于副肝管与肝总管距离较近者，可无张力合并后行纺锤形吻合，降低手术难度，减少吻合口狭窄的发生。

目的:研究脾动脉结扎在肝门胆管癌（HCCA）患者行大范围肝切除中的安全性及减少术后严重并发症的价值。方法:选取蚌埠医学院第一附属医院2021年7月至2023年6月行大范围肝切除的22例HCCA患者为对照组，行大范围肝切除联合脾动脉结扎的12例患者为试验组，统计分析两组术前及术后白细胞计数、血小板计数、转氨酶、总胆红素、白蛋白、国际标准化比值等临床资料，以及术后相关并发症资料。结果:试验组术前白细胞计数及血小板计数与出院时相比差异无统计学意义，脾动脉结扎后并不会影响脾脏功能，在术后第5天总胆红素水平、国际标准化比值、腹腔引流量以及术后Clavien-Dindo Ⅲ~Ⅴ级并发症发生率、术后住院天数、总费用上均优于对照组（P<0.05）。结论:HCCA患者行大范围肝切除时联合脾动脉结扎安全有效，对于减少术后严重并发症、缩短患者术后恢复周期有重要意义。

肝胆管结石病首选手术治疗，解剖性肝切除仍是最有效的治疗方法。术中因结石存留于病变胆管，整个Glisson鞘变得粗大且伴随炎症粘连，不利于Glisson鞘外解剖显露，目前的主流操作是采用鞘内解剖的方式游离血管和胆管，殊不知因鞘内炎症胆管与血管粘连紧密，增加了分离过程中出血及管道误伤的风险，近年来有学者采用Laennec膜间隙循Glisson蒂鞘外分离入路实施区域阻断，安全性和有效性均得到临床证实。本视频病例结石主要位于肝脏第3、4段，合并肝萎缩纤维化，第2段未见结石且肝脏质地良好，如行左半肝切除则必须切除健康的第2段，术前通过三维重建流域分析，目标肝段3、4段有数支肝蒂，分别游离，逐一结扎操作繁琐，且容易遗漏，因此我们尝试将3、4肝段肝蒂一并处理。首先沿Laennec膜间隙将左肝蒂鞘外解剖套出，然后沿脐裂左侧套取单独的2段肝蒂加以保护，"减法"得到3、4段肝蒂，将众多的目标肝蒂一并集束，弹性阻断之后出现缺血分界线，超声刀小口钳夹处理肝实质，左侧循肝左静脉途径，右侧循肝中静脉途径，两侧肝断面会师，完整游离标本，最后离断目标肝蒂，缝合血管，探查胆管取石，胆道一期缝合，切除病肝的同时，保留了健康的2段肝组织。术后加速康复管理，随访1年恢复良好。（本手术指导：姚本能）