目的:探讨动脉粥样硬化患者胱硫醚酶基因多态性及其与临床的关联性。方法:在颈动脉超声检查的高血压患者中，随机抽取114例颈动脉中内膜增厚或斑块阳性的患者作为研究组，检测其身高、体重、血压、血脂、血糖、血尿酸、同型半胱氨酸(homocysteine，HCY)水平，并检测CBS基因G919A和T883C位点碱基，并与155例颈动脉正常的高血压患者作为对照组比较。结果:研究组体重指数、收缩压、总胆固醇、甘油三酯、空腹血糖、血尿酸、HCY水平高于对照组，差异有统计学意义( P<0.05)。研究组舒张压和高密度脂蛋白胆固醇水平与对照组比较差异无统计学意义( P>0.05)。血尿酸，收缩压和CBS基因T883C位点突变是颈动脉粥样硬化的独立危险因素( P<0.05)。其风险关系分别为1.4倍、2.0倍和3.3倍；性别、年龄、体重指数、舒张压、总胆固醇、甘油三酯、血尿酸、HCY和CBS基因G919A位点等观察指标与颈动脉粥样硬化不存在风险关系( P>0.05)。颈动脉粥样硬化的高血压患者CBS基因T883C位点次等位基因突变率高。 结论:颈动脉粥样硬化的高血压患者血压、血脂、血糖、血尿酸、HCY水平高、收缩压、血尿酸和CBS基因T883C位点多态性是颈动脉粥样硬化的独立危险因素，其CBS基因T883C次等位基因突变率高。

目的:探讨一氧化氮（NO）在外源性硫化氢（H 2S）抑制大鼠结肠动力中的作用。 方法:免疫组化检测H 2S合成酶胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）和胱硫醚-β-合成酶（CBS）在成年Wistar大鼠近端结肠的分布；制备近端结肠纵行肌（LM）和环形肌条（CM），通过恒温浴槽实验观察NO相关工具药干预后外源性H 2S供体硫氢化钠（NaHS）对LM和CM收缩活动的影响；通过膜片钳实验检测不同浓度NaHS对平滑肌细胞L型钙通道电流（I Ca，L）的影响。 结果:H 2S合成酶CBS和CSE在近端结肠肌间神经丛、黏膜层及环纵平滑肌细胞均表达。河豚毒素孵育肌条后NaHS以浓度依赖的方式抑制LM和CM自发性收缩活动，LM最大抑制的半数有效浓度（IC 50）为917.6 μmol/L（95% CI：776.3~1 085 μmol/L， n=6），CM的IC 50为730.4 μmol/L（95% CI：592.2~900.8 μmol/L， n=6）。NO供体硝普钠（SNP）预处理肌条后加入NaHS（3×10 -4~6×10 -4mol/L），LM及CM收缩幅度呈现双向变化，其中低浓度NaHS使LM收缩幅度从（0.679±0.181）g增加至（0.840±0.400）g（ n=8， P<0.01），使CM收缩幅度从（0.378±0.140）g增加至（1.176.±0.056）g（ n=8， P<0.01）。sGC抑制剂可溶性鸟苷酸环化酶抑制剂（sGC）ODQ孵育组NaHS的IC 50高于对照组（ P<0.05），而NO合成酶抑制剂L-NNA、NO前体L-精氨酸、环磷酸鸟苷（cGMP）竞争性拮抗剂PET-cGMP预处理肌条前后NaHS的IC 50差异无统计学意义（ P>0.05）。NaHS（100 μmol/L）使L型钙通道峰电流密度增加[（-4.29±0.29）比（-3.77±0.27）pA/pF， P<0.01]；而NaHS（300 μmol/L）使峰电流降低至（-2.96±0.34）pA/pF（ P<0.05），并使电流-电压曲线右移。 结论:外源性H 2S对大鼠结肠动力可能具有双重调节作用，其中对结肠平滑肌的抑制作用不依赖NO；L型钙通道在H 2S对结肠动力的双重调节作用中发挥重要作用。

高同型半胱氨酸血症是青年脑梗死的独立危险因素。同型半胱氨酸代谢过程中关键酶的基因突变是高同型半胱氨酸血症的主要原因，胱硫醚-β-合成酶复合杂合变异致青年脑梗死，同时合并肺栓塞及下肢动脉血栓罕见报道。文中报道1例青年脑梗死患者，合并肺栓塞及下肢动脉血栓，病因筛查发现血同型半胱氨酸水平显著增高，基因检测胱硫醚-β-合成酶833T>C/1082C>T复合杂合变异，予叶酸、甲钴胺、维生素B 6以及抗凝治疗后，患者血同型半胱氨酸水平逐渐下降，随访1年，未见新发血栓事件，复查同型半胱氨酸在正常范围。

目的:探讨Toll样受体4(TLR4)和核因子-κB(NF-κB)调节硫化氢(H 2S)和内源性胱硫醚B合成酶(CBS)蛋白表达的作用以及其参与腰椎间突出症(LDH)中枢痛敏的机制。 方法:利用大鼠(购自苏州大学实验动物中心)构建腰椎间盘突出症模型(LDH)组和假手术(Sham)组；使用膜片钳技术检测脊髓胶质区(SG)神经元兴奋性的产生和传导；蛋白质印迹法(Western blot)实验测定不同组别之间脊髓背角(SC)中TLR4、NF-κB、CBS蛋白表达发生的差异性变化；通过给予大鼠有害的热或机械等异常性疼痛增加的刺激，观察其行为的变化，评估大鼠痛觉过敏是否增强。分析电生理数据时，选取sEPSCs时长4 min，并保证至少包含300个events，并且使用Clampfit 10.3分析软件分析其频率和振幅的大小。结果:造模后与Sham组(－30.86±3.55、4.34±0.64)比较，LDH组(－35.21±1.74、7.46±1.15)大鼠脊髓SG神经元的兴奋性和自发性兴奋性传递显著增强，差异有统计学意义( t＝2.564， P<0.01； t＝2.225， P<0.05)。在大鼠的脊髓背角中LDH组(0.41±0.02、0.40±0.03、4.61±0.33)比sham组(0.21±0.02、0.28±0.04、3.11±0.43)TLR4、NF-κB、CBS蛋白表达量显著上升，差异有统计学意义( t＝7.071、2.400、2.767， P<0.05)。鞘内给予LDH组大鼠TLR4选择性抑制剂CL1095，与NC对照组(0.46±0.12、0.51±0.07)比较，CL1095组(0.21±0.11、0.18±0.11)NF-κB和CBS蛋白表达显著下调( t＝10.07、2.531， P<0.05)，并且与NC对照组(11.88±1.11、9.32±1.48)相比CL1095组(8.23±1.01、6.43±1.55)大鼠脊髓背角SG谷氨酸能神经元sEPSCs峰值振幅和频率缓解动物的病理性疼痛，差异均有统计学意义( t＝4.334、2.437， P<0.05)。 结论:LDH诱导脊髓背角TLR4和NF-κB蛋白水平表达增高，进而激活下游CBS-H2S的表达，最终引发病理性疼痛。

目的:探究肝癌和胱硫醚β-合成酶（cystathionine β-synthase, CBS）基因及胱硫醚γ-裂解酶（cystathionine-γ-lyase,CTH）基因的关系。方法:通过挖掘GEO（gene expression omnibus）与TCGA（the cancer genome atlas）数据库，对肝癌的临床特征与CBS及CTH基因表达进行了相关性分析。并通过对肝癌细胞系进行免疫印迹验证。结果:CBS及CTH在肿瘤中的表达较非肿瘤明显降低（ P < 0.05）。Cox回归结果显示CBS是肝细胞癌不良预后的独立危险因素（ HR = 0.65， P = 0.02）。针对CBS基因对不同肿瘤分期进行单因素 logistics回归分析，发现肝癌TNM分期II期比I期（ P =0.01， OR=0.50）、III期比I期（ P =0.03， OR=0.56）、T分期T2期比T1期（ P <0.01， OR=0.43）、T3期比T1期（ P = 0.02， OR=0.54）CBS基因显著降低。肝癌TNM分期III期比I期（ P = 0.01, OR=0.50）, Edmondson分期II期比I期（ P =0.03， OR=0.48）, III期比I期（ P <0.01， OR=0.30）, IV期比I期（ P = 0.03， OR=0.22）CTH基因表达显著降低。GSEA富集分析结果显示，与肝癌细胞CTH与CBS基因表达相关性最高的信号通路为细胞色素P450（FDR Q < 0.01，FWER P < 0.01）。免疫印迹结果显示，与人肝永生化细胞系HL-7702相比，HLE和Hep3B细胞等肝细胞癌细胞系中CTH下游蛋白CSE表达降低。 结论:肿瘤组织中的CBS及CTH基因表达低于正常组织。CBS基因是肝细胞癌不良预后的独立危险因素。与CBS及CTH基因关系最为密切的是信号通路为细胞色素P450通路。

目的:探讨对比剂诱导的急性肾损伤（contrast-induced acute kidney injury，CIAKI）中内源性硫化氢水平是否发生变化，补充硫化氢是否可下调Nod样受体蛋白3（Nod-like receptor protein 3，NLRP3）炎症复合体从而保护肾小管上皮细胞对抗对比剂所致的肾损伤。方法:24只体重180~220 g清洁级健康雄性Sprague-Dawley大鼠按随机数字表法分为对照组、CIAKI组（碘普罗胺2.9 g/kg）及CIAKI+NaHS组（NaHS 4 mg/kg处理3 d后予碘普罗胺2.9 g/kg）组，每组8只。对肾组织进行全转录组测序及生物信息学分析，HE、PAS染色观察肾组织病理改变，TUNEL法检测肾小管上皮细胞损伤情况，免疫荧光染色检测肾组织炎症复合体NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing a caspase recruitment domain，ASC）、caspase-1的表达。在人肾小管上皮细胞（HK-2细胞）中探讨硫化氢在对比剂（碘普罗胺200 mgI/ml）诱导的细胞损伤中的作用，CCK-8法测定细胞存活率。结果:与对照组相比，CIAKI组大鼠内源性硫化氢合成酶相关基因胱硫醚-β-合成酶（ CBS）、胱硫醚-γ-裂解酶（ CSE）和3-巯基丙酮酸硫转移酶（ 3- MST）水平下降（均 P<0.05）。 CBS、 CSE和 3- MST基因表达水平与肾功能临床生化指标血肌酐、尿素氮和胱抑素C水平呈负相关（均 P<0.05）。与CIAKI组比较，CIAKI+NaHS组大鼠血肌酐、尿素氮及胱抑素C水平较低，肾脏病理改善，肾小管上皮细胞焦亡减少，肾组织炎症复合体NLRP3、ASC、caspase-1的水平较低（均 P<0.05）。在HK-2细胞中，对比剂+NaHS组细胞存活率高于对比剂组；应用CBS抑制剂减少内源性硫化氢水平，对比剂诱导的HK-2细胞存活率进一步降低（ P<0.05）。 结论:内源性硫化氢系统受损是CIAKI发病的关键环节，上调硫化氢水平可改善CIAKI大鼠的肾损伤，其保护机制与调节NLRP3炎症复合体相关。

目的:探讨硫化氢(hydrogen sulfide，H 2S)诱导胃黏膜上皮细胞-1(gastric mucosal epithelial-1，GES-1)的免疫反应机制。 方法:分别设立对照组、炔丙基甘氨酸(propargylglycine, PAG)浓度组(PAG分别为100 μmol/L，PAG 500 μmol/L，PAG 1000 μmol/L)和NaHS(NaHS 400 μmol/L)作用组(NaHS组，NaHS-PAG 100 μmol/L组，NaHS-PAG 500 μmol/L组，NaHS-PAG 1000 μmol/L组)。在不同浓度H 2S合成酶胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase，CSE)抑制剂PAG(100 μmol/L，500 μmol/L，1000 μmol/L)作用下，通过添加400 μmol/L外源性NaHS作用于胃黏膜细胞GES-1进行研究。Calcein/PI细胞活性与细胞毒性实验检测NaHS对GES-1细胞膜渗透性的影响；酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测细胞内的CSE的活性及H 2S、白细胞介素(interleukin，IL)-1β和IL-18含量；DCF(DCFH-DA)/ Hoechst33342双标染色检测细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平。 结果:Calcein/PI细胞活性与细胞毒性实验结果显示，PAG和NaHS不破坏GES-1细胞膜完整性，PAG 500 μmol/L、PAG 1000 μmol/L及NaHS 400 μmol/L抑制细胞增殖，抑制率分别为(48.11±2.29)%、(60.87±2.42)%、(59.83±2.3)%。100 μmol/LPAG阻碍了NaHS的增殖抑制作用，抑制率为(47.80±2.65)%，PAG 500 μmol/L和PAG1000 μmol/L促进了NaHS的增殖抑制作用，抑制率分别为(65.16±1.02)%、(70.90%±1.30)%; ELISA结果显示，NaHS作用GES-1细胞后，与对照组相比，细胞内CSE的活性明显增高[U/mL：(23.33±0.77)比(6.55±1.84)]、H 2S含量[μmol/L：(13.27±0.83)比(1.39±0.29)]，炎性因子IL-1β水平增加[ μg/L：(3.48±0.26)比(0.77±0.11)]，IL-18水平降低[ng/L：(1.15±0.36)比(3.19±0.90)]，差异均有统计学意义( P值分别为0.00，0.00，0.00，0.02)，镜下观察显示ROS含量增加。PAG 100 μmol/L弱化NaHS的作用，差异均具有统计学意义( P值均<0.05)，而PAG 500 μmol/L和PAG 1000 μmol/L增强NaHS的作用，差异均具有统计学意义( P值均<0.05)。此外，IL-18表达与IL-1β的表达呈负相关( r＝－0.49， P<0.05)。 结论:PAG双向调节H 2S诱导胃黏膜细胞GES-1免疫反应。

目的:探讨糖尿病神经痛大鼠发生认知功能损伤与大鼠海马内源性硫化氢(H 2S)的变化间的关系。 方法:清洁级健康雄性SD大鼠24只，体重280～320 g，鼠龄4～6周龄，采用随机数字表法分为两组，糖尿病神经痛组(DNP组)和对照组(C组)( n＝12)，DNP组腹腔注射佐脲链菌素(STZ)60 mg/kg，C组大鼠给予腹腔内注射等量柠檬酸钠缓冲液。分别于制备模型当天(T0)和制备模型后7 d(T1)、14 d(T2)、21 d(T3)、28 d(T4)行Morris水迷宫定位航行实验和空间探索实验，以测定其认知功能变化。28 d后行苏木精-伊红(HE)染色观察海马CA1区锥体细胞病理改变；原位末端标记法(TUNEL)检测海马区细胞凋亡情况；液相色谱法测两组海马组织内源性H 2S含量；采用蛋白质印迹法(Western blot)检测两组大鼠海马胱硫醚-β-合成酶(CBS)蛋白表达水平；实时荧光定量PCR检测两组大鼠海马CBS mRNA表达。两组间比较采用配对 t检验。 结果:DNP组大鼠的逃避潜伏期在T2[(29.50±5.72) s， t＝2.870， P<0.05]、T3[(37.55±7.08) s， t＝4.771， P<0.01]和T4时[(45.40±10.34) s， t＝5.279， P<0.01]明显延长于T0时[(20.47±5.17) s]；DNP组大鼠在成模后T2[(29.50±5.72) s， t＝3.392， P<0.05]、T3[(37.55±7.08) s， t＝6.175， P<0.01]和T4时的逃避潜伏期[(45.40±10.34) s， t＝6.779， P<0.01]均明显延长于C组大鼠[(19.16±4.79)、(17.13±3.93)、(15.70±2.83) s]。DNP组大鼠T2[(3.17±0.98)次， t＝2.936， P<0.05]、T3[(3.00±0.89)次， t＝3.379， P<0.05)]和T4时穿越平台次数[(2.33±1.03)次， t＝4.294， P<0.01]少于T0时[(4.83±0.98)次]；T3[(19.33±4.55) s， t＝3.122， P<0.05]和T4时象限停留时间[(20.16±5.63) s， t＝2.655， P<0.05]少于T0时[(29.67±6.71) s]；DNP组大鼠T3[(3.00±0.89)次， t＝2.500， P<0.05]和T4时穿越平台次数[(2.33±1.03)次， t＝3.926， P<0.01]明显少于C组[(4.67±1.36)、(4.83±1.17)次]；DNP组大鼠T3[(19.33±4.55) s， t＝3.025， P<0.05]和T4时其所在象限停留时间[(20.16±5.63) s， t＝3.926， P<0.05]少于C组[(30.50±7.81)、(31.67±4.13) s]。与C组比较，DNP组海马细胞排列紊乱，锥体细胞排列松散，海马内出现核固缩现象，部分神经细胞缺失；DNP组海马凋亡阳性细胞[(5.33±1.03)分， t＝9.190， P<0.01]明显多于C组[(1.16±0.41)分]；DNP组大鼠海马H2S含量[(419.9±30.9) ng/g蛋白， t＝2.813， P<0.05]明显少于C组[(461.4±18.6) ng/g蛋白]；DNP组大鼠海马内CBS mRNA(0.67±0.02， t＝15.940， P<0.01)和蛋白水平(0.64±0.06， t＝10.410， P<0.01)明显低于C组(1.00±0.01、1.25±0.01)。 结论:糖尿病神经痛大鼠随时间延长逐渐出现认知功能损伤，其严重程度与时间呈正相关。糖尿病神经痛大鼠认知功能损伤与海马神经细胞凋亡及内源性H 2S减少密切相关。

目的:探讨同型半胱氨酸（Hcy）代谢酶基因多态性与汉族多发性骨髓瘤（MM）预后不良的关系。方法:选取河北北方学院附属第一医院2018年2月至2020年3月收治的128例汉族MM患者（疾病组）和同期招募的120例汉族健康志愿者（对照组）为研究对象，两组均检测血浆Hcy水平及Hcy代谢酶基因多态性，包括亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）C677T、MTHFR A1298C、蛋氨酸合成酶还原酶（MTRR）A66G、胱硫醚β合成酶（CBS） 844ins68、蛋氨酸合成酶（MS）A2756G。疾病组采用常规方法治疗，于治疗后跟踪随访1年并统计预后不良的发生情况，采用Logistic多元回归分析Hcy代谢酶基因多态性与疾病组预后不良的关系。结果:疾病组血浆Hcy水平高于对照组[（15.01 ± 2.98）μmol/L比（8.45 ± 1.69）μmol/L]，差异有统计学意义（ P<0.05）。疾病MTHFR C677T位点TT基因型频率和T等位基因频率分别为26.56%、29.30%，高于对照组的6.67%、16.25%，CT基因型频率为5.47%，低于对照组的19.17%，差异均有统计学意义（ P<0.05）。两组其余基因位点基因型分布和等位基因频率比较差异均无统计学意义（ P>0.05）。疾病组预后不良的发生率为49.22%（63/128），年龄、血小板计数和血清β 2微球蛋白、κ轻链、血浆Hcy水平及MTHFR C677T位点TT基因型均是疾病组预后不良的影响因素（ OR=7.286、0.545、6.841、6.284、8.117、8.440， P<0.05）。 结论:汉族MM患者血浆Hcy水平、MTHFR C677T位点TT基因型频率和T等位基因频率均高于健康人群，CT基因型频率低于健康人群，且汉族MM患者预后不良与血浆Hcy水平、MTHFR C677T位点TT基因型有关。

目的 采用成簇的规律性间隔的短回文重复序列(CRISPR)/Cas9系统对斑马鱼胱硫醚-β-合成酶b基因(cbsb)进行编辑,并制备稳定的斑马鱼cbsb敲除品系.方法 使用ClustaIX软件分析斑马鱼cbsb编码蛋白(Cbsb)的保守结构域,利用生物信息学选取向导RNA(gRNA)靶点,体外合成并纯化gRNA和密码子优化的Cas9 mRNA,在刚受精的斑马鱼胚胎(1-cell期)中显微注射混合的gRNA和Cas9mRNA,提取受精后3 d的斑马鱼幼鱼基因组,通过PCR扩增并测序分析靶点的切割效率,通过基因组扩增和测序筛选并获得cbsb敲除的稳定品系.结果 斑马鱼Cbsb与人、小鼠胱硫醚-β-合成酶(CBS)高度同源.在斑马鱼Cbsb保守结构域的编码序列处设计4个靶点,其中4#靶点具有高效的切割效率,利用该靶点制备并筛选获得多个cbsb敲除斑马鱼,选取-3+13 bps和-228 bps移码突变的两种品系,进一步筛选获得稳定的cbsb敲除品系.结论 利用CRISPR/Cas9系统成功制备了两种斑马鱼cbsb敲除的稳定品系,为进一步在斑马鱼活体中研究Cbsb的功能奠定了基础.