缺血性卒中是致死致残的重症疾病之一.缺血性卒中患者预后不理想的重要原因之一是缺血级联反应造成的脑组织损伤.因此,积极的脑细胞保护治疗对改善缺血性卒中的预后至关重要.近年来,国内外大量临床前和临床研究证据层出不穷.基于更多新治疗靶点的涌现以及更多治疗方式的突破,结合最新卒中治疗学术产业圆桌会议的内容,本声明对缩小目前缺血性卒中研究临床转化鸿沟的探索、脑细胞保护的临床研究,以及如何有助于实现更多治疗方式的临床转化做一科学声明,旨在推进缺血性卒中脑细胞保护临床前及临床研究的开展,进一步改善缺血性卒中患者的临床预后.

目的:探讨腺相关病毒介导脑组织特异性高表达沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)蛋白对急性脑梗死大鼠神经保护作用及其机制。方法:45只SD大鼠(购自北京维通利华实验动物有限公司)简单随机分为假手术组、模型组和SIRT1组。模型组和SIRT1组大鼠采用永久性中动脉闭塞建立急性脑梗死模型，假手术组大鼠仅做皮肤和分离血管，不夹闭血管。假手术组和模型组大鼠经脑室注射对照腺相关病毒1×10 9 v．g，SIRT1组经脑室注射SIRT1过表达腺相关病毒1×10 9 v．g，注射6 d后，处死大鼠，收集血清和脑组织。观察3组大鼠的神经功能；采用试剂盒检测外周血中谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶和丙二醛的水平；分离脑组织线粒体，测定线粒体膜电位。采用原位缺口末端标记法(TUNEL)染色分析脑组织的凋亡水平；采用蛋白质印迹法(Western blot)分析过氧化物酶体增殖物受体γ共激活因子1α(PGC-1α)的乙酰化水平。组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD法。 结果:与模型组比较，SIRT1组大鼠不同时间点神经功能评分显著改善，差异有统计学意义( F＝3.561、3.185、3.014、2.901， P值均<0.01)。与假手术组比较，模型组和SIRT1组大鼠外周血中丙二醛(MDA)水平显著上调，抗氧化物酶水平[谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)]显著升高，差异有统计学意义( P<0.05)。与模型组比较，SIRT1组大鼠外周血MDA水平显著下调，抗氧化物酶水平(GSH-Px和SOD)显著升高，差异有统计学意义( P值均<0.01)。与假手术组[(2.39±0.11)和(5.12±1.09)%]比较，模型组和SIRT1组大鼠脑组织线粒体膜电位(1.27±0.08、1.85±0.10)显著下调，细胞凋亡指数[(78.32±12.81)%和(24.71±5.98)%]显著增加，差异有统计学意义( t＝4.013， P<0.05； t＝3.189， P<0.01)。与模型组比较，SIRT1组大鼠脑组织线粒体膜电位显著增加，细胞凋亡指数显著下降，差异有统计学意义( t＝3.114， P<0.05； t＝2.897， P<0.01)。与假手术组和模型组比较，SIRT1组脑组织中PGC-1α蛋白乙酰化水平显著下调，差异有统计学意义( t＝3.107， P<0.05； t＝3.218， P<0.05)。 结论:SIRT1可通过下调急性梗死脑组织中PGC-1α蛋白乙酰化，降低线粒体氧化应激，提高线粒体功能，进而降低脑细胞凋亡，达到保护大鼠神经功能的作用。

阿尔茨海默病（AD）仍然是人类社会面临的重大挑战之一，其发病机制仍存在争议。现有的人类遗传学证据表明大脑中重要的免疫细胞-小胶质细胞能保护其他脑细胞免受侵袭，并能清除大脑中积聚的代谢垃圾，进而延缓神经元的退化，其功能状态与AD密切相关。对散发性晚发性AD的全基因组关联研究发现，髓样细胞触发受体2（Trem2）这一基因在小胶质细胞检测和处理神经变性过程发挥重要作用，Trem2变异是AD最强的遗传风险因素之一，而激活Trem2信号通路可以激活小胶质细胞对Aβ的相应，减少Aβ沉积。因此恢复或增强小胶质细胞内有缺陷的Trem2功能可能是对抗AD神经元损伤和变性的方法。

目的:探讨缺血预处理对脑梗死大鼠脑细胞的保护作用及其机制。方法:120只SD大鼠按随机数字表法分为缺血预处理组(50只)、脑梗死组(50只)、假手术组(10只)、正常组(10只)，前2组大鼠采用改良Longa线栓法制备大脑中动脉闭塞(MCAO)致脑梗死模型(缺血预处理组大鼠在造模前将线栓置入大脑中动脉阻断血流15 min)，假手术组大鼠行假缺血预处理和假阻断大脑中动脉血流，正常组大鼠不做任何处理。分别于正常组和假手术组造模后24 h，缺血预处理组和脑梗死组造模后2 h、6 h、12 h、24 h、48 h，每组取10只大鼠，采用TUNEL染色检测小鼠缺血半暗带区细胞凋亡率，免疫组化染色检测小鼠缺血半暗带区含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)的表达，RT-PCR和Western blotting法分别检测小鼠缺血半暗带区精氨酰-tRNA合成酶( ArgRs)基因和ArgRs蛋白的表达。 结果:与正常组和假手术组比较，脑梗死组大鼠造模后不同时间点缺血半暗带区细胞凋亡率、Caspase-3阳性表达率、 ArgRs基因和ArgRs蛋白的表达均明显升高，差异均有统计学意义( P<0.05)。与脑梗死组比较，缺血预处理组大鼠造模后不同时间点缺血半暗带区细胞凋亡率、Caspase-3阳性表达率、 ArgRs基因和ArgRs蛋白的表达均明显降低，差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:脑缺血预处理可以抑制脑梗死大鼠脑缺血半暗带区 ArgRS基因及ArgRS蛋白、Caspase-3的表达，减少脑细胞的凋亡，从而起到脑保护作用。

目的:探究七氟醚后处理对脑缺血/再灌注（ischemia/reperfusion, I/R）损伤大鼠的脑保护作用及对活性氧（reactive oxygen species, ROS）/硫氧还蛋白结合蛋白（thioredoxin interacting protein, TXNIP）/NOD样受体相关蛋白3（NOD-like receptor associated protein 3, NLRP3）信号通路的影响。方法:60只SD雄性大鼠按随机数字表法分为假手术组（sham组）、I/R组、七氟醚后处理组（SP组），每组20只。采用大脑中动脉线栓法制备脑I/R模型，SP组造模后即刻吸入2.4%七氟醚30 min。对各组大鼠进行神经功能缺损评分；获取大鼠脑组织，H-E染色和2，3，5-氯化三苯基四氮唑（2, 3, 5-triphenyltetrazolium chloride, TTC）染色观察组织病理学变化和脑梗死体积；分析大鼠脑水肿程度及血脑屏障通透性；TUNEL法检测脑组织细胞凋亡率；检测血清炎性因子（IL-1β和IL-18）及脑组织氧化应激指标[ROS、丙二醛（malondialdehyde, MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase, GPx）]的水平；Western blot法检测TXNIP/NLRP3通路相关蛋白[TXNIP、NLRP3、凋亡相关点样蛋白（apotosis-associated speck-like protein containing a CARD, ASC）、半胱氨酸天冬氨酸酶-1（cysteine aspartase, caspase-1）]的表达。结果:与sham组比较，I/R组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死体积明显升高（ P<0.05），脑组织水肿程度及血脑屏障通透性也明显增加，脑细胞凋亡率升高（ P<0.05），血清IL-1β和IL-18含量明显升高（ P<0.05），脑组织中ROS和MDA含量及TXNIP、NLRP3、ASC和caspase-1蛋白表达水平均明显升高（ P<0.05），而GPx和SOD活性降低（ P<0.05）；与I/R组比较，SP组神经功能缺损评分和脑梗死体积降低（ P<0.05），脑水肿程度及血脑屏障通透性下降，脑细胞的凋亡率降低（ P<0.05），血清IL-1β和IL-18含量明显降低（ P<0.05），脑组织中ROS和MDA含量及TXNIP、NLRP3、ASC和caspase-1蛋白水平明显降低（ P<0.05），而GPx和SOD活性升高（ P<0.05）。 结论:七氟醚后处理能够有效减轻大鼠脑I/R损伤，可能与其对ROS/TXNIP/NLRP3信号通路的抑制有关。

目的:通过观察脑细胞程序性坏死和脑组织中90个细胞因子水平的变化，探讨心搏骤停心肺复苏（CPR）后大鼠脑损伤的分子机制。方法:按随机数字表法将SD大鼠分为假手术组（Sham组， n＝10）和心搏骤停组（ n＝10）。采用窒息法诱导大鼠心搏骤停，并于心搏骤停6 min后开始CPR；Sham组仅常规行气管插管等，未诱导心搏骤停。CPR后3 d对大鼠进行神经功能缺损评分（NDS）后取血并处死大鼠，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清S100B水平，用免疫荧光法检测脑组织程序性坏死细胞，用蛋白芯片检测脑组织90个细胞因子表达水平，以两组蛋白的相对比值≥1.5或≤0.5且 P<0.05为差异表达蛋白。 结果:心搏骤停组有8只大鼠成功复苏，死亡2只，为使样本量匹配，Sham组随机选择8只进行实验。与Sham组比较，心搏骤停组大鼠NDS评分明显降低〔分：63.0（62.5，64.3）比80.0（80.0，80.0）， P<0.01〕，血清S100B水平明显升高（ng/L：47.96±10.16比16.56±5.60， P<0.01）。心搏骤停后脑皮质和海马区程序性坏死细胞较Sham组多见 〔原位末端缺刻标记法（TUNEL）阳性且天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）阴性的细胞比例：脑皮质为（15.70±0.32）%比（8.00±0.28）%，海马区为（20.80±1.35）%比（9.00±4.00）%，均 P<0.05〕。蛋白芯片检测显示，与Sham组比较，心搏骤停组脑组织炎性相关细胞因子细胞因子诱导中性粒细胞趋化因子（CINC-2α/β、CINC-3）、γ-干扰素（IFN-γ）和信号蛋白C -端Src激酶（CSK）表达水平明显升高（心搏骤停组与Sham组蛋白表达比值：CINC-2 α/β为2.503±0.428， P＝0.024；CINC-3为2.369±0.142， P＝0.005；IFN-γ为3.149±1.362， P＝0.044；CSK为1.887±0.105， P＝0.001），神经保护因子睫状神经营养因子（CNTF）、胶质细胞源性神经营养因子受体（GFRα-1、GFRα-2）、生长激素（GH）、生长激素受体（GHR）、粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）以及抗炎细胞因子白细胞介素- 10（IL-10）表达水平明显降低 （心搏骤停组与Sham组蛋白表达比值：CNTF为0.341±0.137， P＝0.036；GFRα-1为0.461±0.164， P＝0.044；GFRα-2为0.447±0.017， P＝0.033；GH为0.450±0.136， P＝0.024；GHR为0.508±0.128， P＝0.022；GM-CSF为0.446±0.130， P＝0.035；IL-10为0.502±0.211， P＝0.017）。 结论:程序性坏死参与心搏骤停CPR后大鼠脑损伤，脑损伤分子机制可能与炎症反应、神经再生障碍和神经细胞存活受损有关。

目的:探讨腺相关病毒介导神经生长因子(NGF)对大鼠脑损伤的保护作用及其机制。方法:2018年11月到2019年11月，将购自河南省实验动物中心的45只SD随机分为对照组、模型组和NGF组，每组15只。采用自由落体法建立大脑急性脑损伤大鼠模型，对照组和模型组大鼠建模后经颅内注射携带空载体的腺相关病毒1×10 10 vg，NGF组大鼠建模后经颅内注射携带NGF的腺相关病毒1×10 10 vg，3组在治疗2周后，采用神经行为学评分评价大鼠神经功能症状，采用Morris水迷宫实验评估3组大鼠空间学习记忆能力；采用原位缺口末端标记法(TUNEL)染色分析3组大鼠脑组织凋亡，采用蛋白质印迹法(Western blot)分析3组大鼠脑组织中半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3和B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)蛋白表达水平。组间比较采用单因素方差分析。 结果:与模型组神经损伤程度评分[(11.24±3.99)分]比较，NGF组大鼠神经损伤程度评分[(6.09±4.11)分]显著下降，差异有统计学意义( t＝3.011， P<0.05)。与模型组逃避潜伏期[(29.55±5.94) s]比较，NGF组大鼠逃避潜伏期[(17.19±3.84) s]显著下降，差异有统计学意义( t＝3.415， P<0.05)。与模型组穿台指数(1.54±1.09)比较，NGF组大鼠穿台指数(3.58±2.10)显著下降，差异有统计学意义( t＝3.001， P<0.05)。与模型组大鼠脑细胞凋亡率[(31.58±6.04)%]比较，NGF组大鼠大鼠脑细胞凋亡率[(15.87±4.28)%]显著下降，差异有统计学意义( t＝3.841， P<0.05)。与对照组大鼠脑组织Caspase-3和bax表达水平(0.25±0.09、0.15±0.08)比较，模型组脑组织Caspase-3和bax表达水平显著增加(0.94±0.15、1.18±0.18)，差异有统计学意义( t＝3.491、2.192， P<0.05)。与模型组大鼠脑组织Caspase-3和bax表达水平(0.94±0.15、1.18±0.18)比较，NGF组大鼠脑组织Caspase-3和bax表达水平显著下降(0.39±0.12、0.28±0.14)，差异有统计学意义( t＝3.718、2.004， P<0.05)。 结论:腺相关病毒介导NGF在通过抑制脑组织细胞凋亡，可显著改善脑组织神经功能，提高学习和记忆能力。

目的:探讨高压氧协同靶向水通道蛋白-4(aquaporin 4，AQP-4)的RNA干扰(RNA interference，RNAi)技术对改善脑创伤(trauma brain injury，TBI)大鼠认知功能的作用，并探讨其机制。方法:将112只成年雄性SD大鼠按照随机数字表法分为对照组、AQP-4 RNAi组、高压氧组和联合治疗组，每组28只。采用液压打击法建立大鼠TBI模型，构建靶向AQP-4的RNAi质粒；大鼠按照分组给予相应方式的干预后，于术后7 d、21 d对大鼠进行改良神经功能缺损评分(modified neurological severity scores，mNSS评分)；术后21～25 d进行Morris水迷宫实验，记录大鼠目标象限停留时间百分比和每日逃避潜伏期；Evans蓝法测定血脑屏障通透性，干/湿比重法检测脑组织含水量；术后7 d用Western blot法检测AQP-4、半胱天冬酶-3 (caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2，Bcl-2)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2，MMP-2)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9，MMP-9)蛋白表达水平；RT-PCR法检测脑组织AQP-4的mRNA表达水平；TUNEL法及Annexin V法检测脑细胞凋亡率。采用SPSS 23.0及Graphpad Prism 7.0进行数据分析，组间多样本行单因素方差分析，Morris结果采用重复测量方差分析，两两比较用LSD- t检验。 结果:mNSS评分结果显示，术后7 d，21 d，各组间mNSS评分差异有统计学意义( F＝4.89，7.59，均 P＝0.01)，各治疗组评分均低于对照组，以联合治疗组效果最理想(7 d： t＝3.98，-7.75；21 d： t＝47.82，7.94，均 P<0.05)。Morris水迷宫实验结果显示，大鼠的目标象限停留时间和逃避潜伏期的时间及组别交互作用均不显著( F＝1.83，8.42；均 P>0.05)，术后第24天和第25天，联合治疗组逃避潜伏期及目标象限停留时间百分比均好于其他各组(均 P<0.05)。Evans蓝染色显示，AQP-4 RNAi组、高压氧组、联合治疗组Evans蓝含量均较对照组低(均 P<0.05)，联合治疗组最低( t＝6.19， P<0.05)。干湿比重法结果显示，脑组织含水量以联合治疗组[(68.15±1.52)% ]最低( P<0.05)，AQP-4 RNAi组[(76.71±1.06)% ]低于高压氧组[(80.23±1.43)%]( t＝4.38， P<0.05)。Western blot结果显示，联合治疗组AQP-4、Caspase-3、MMP-2，MMP-9蛋白表达明显低于其他组(均 P<0.05)，而Bcl-2表达增加( P<0.05)。RT-PCR结果(灰度值比)显示，AQP-4 RNAi组(0.61±0.21)、高压氧组(0.83±0.12)及联合治疗组(0.22±0.05)的AQP-4 mRNA水平与对照组(1.31±0.25)比，均差异有统计学意义( F＝175.05， P<0.05)，AQP-4 RNAi组优于高压氧组( t＝5.25， P<0.05)，以联合治疗组降低最明显( t＝58.94， P<0.05)。TUNEL及Annexin V法检测结果显示，各治疗组较对照组均有效抑制神经细胞凋亡，尤以联合治疗组最为明显( P<0.01)。 结论:靶向AQP-4 RNAi技术联合高压氧可有效促进认知功能损害的恢复，其机制可能与保护血脑屏障完整性、减轻TBI后脑水肿并抑制神经细胞凋亡有关。

统计数据表明,由于人们存在高盐高脂饮食、吸烟、嗜酒、缺乏运动、熬夜等不良生活习惯,在此基础上合并如高血压、糖尿病等疾病,脑卒中的发病逐渐趋向于年轻化,并呈逐年上升趋势,严重危害了人民的健康[1].目前认为急性缺血性脑卒中(AIS)的发病有多种机制及通路参与,包括:能量代谢发生障碍、多种自由基生成、大量神经递质释放、钙离子超载、大量炎症因子和致炎蛋白释放等通路[2].多种通路机制可以在相同和(或)不同时期发生,影响患者预后,及时的再灌注治疗和脑细胞保护可明显改善患者的预后.针对上述通路,理论上治疗策略有改善能量代谢、促进脑血管新生、改善脑部血液供应、清除自由基、抑制钙离子内流、抑制炎性因子表达、抑制细胞凋亡等[3].

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是一种以认知功能损害和神经元损失为主要特征的中枢神经系统退行性疾病,在脑部通常伴随着神经纤维缠结、β-淀粉样蛋白沉积、颗粒空泡变性等显著的病理学特征.此外,有大量研究表明AD的发病和进展与脑缺氧密切相关.本文通过梳理大量国内外文献,系统分析运动干预与脑缺氧和AD之间的关系,主要结果如下:1)长期科学规律的运动能够促进血管舒张物质生成、改善脑血流以及脑氧合状态,从而减轻AD患者的脑慢性缺氧的状况.2)急性运动过程中大脑会发生功能性缺氧状态,这种功能性缺氧状态调控低氧诱导因子1的表达,增强脑细胞对缺氧的适应能力,促进脑细胞对缺氧的适应和存活.3)运动干预可降低缺氧所诱导的炎症因子和活性氧的产生,减少脑内神经炎症和氧化应激反应,保护脑细胞免受慢性缺氧引起的损伤.4)运动干预还可改善脑铁代谢并减少凋亡相关蛋白激活,抑制神经元铁死亡和凋亡现象的发生,对促进神经元的活性起到了积极作用.综上所述,运动通过改善脑血流和氧供、抑制炎症和氧化应激反应、调节细胞活性和铁死亡信号通路等多种机制,延缓并改善脑缺氧所诱导的神经损伤的发生,这些研究进展为运动预防和延缓AD提供了新的视角和策略.