目的:探讨沉默三磷酸腺苷酶家族蛋白3A（ATAD3A）对黑素瘤A375细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法:2019年8-12月在重庆市渝北区人民医院收集经病理确诊的3例黑素瘤患者的黑素瘤组织及癌旁组织，应用Western印迹检测ATAD3A在上述组织中的表达。分别采用沉默ATAD3A慢病毒和空载慢病毒感染黑素瘤A375细胞系，构建沉默ATAD3A（shATAD3A）实验组和空载对照（shCtrl）组，经实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）和Western印迹验证干扰效率。采用CCK-8实验、克隆形成实验比较两组细胞的增殖能力和克隆形成能力，采用Transwell细胞侵袭实验、划痕实验比较两组细胞的侵袭、迁移能力，采用Western印迹检测两组细胞自我更新相关蛋白（NANOG、SOX2、OCT4）和侵袭、迁移相关蛋白[基质金属蛋白酶2（MMP2）、波形蛋白、SLUG]的表达水平。两组间各指标的比较采用独立样本 t检验。 结果:Western印迹显示，相对于癌旁组织，ATAD3A在3例黑素瘤组织中高表达（ t = 10.825， P < 0.001）。qRT-PCR和Western印迹显示，shATAD3A组A375细胞ATAD3A mRNA为0.230 ± 0.073，shCtrl组为1.000 ± 0.244，两组比较， t = 9.461， P < 0.001，蛋白表达水平分别为0.279 ± 0.267和0.867 ± 0.115， t = 8.595， P = 0.002，表明成功构建沉默ATAD3A的黑素瘤A375细胞系。克隆形成实验和CCK-8实验显示，shATAD3A组克隆形成率低于shCtrl组（22.667% ± 2.510%比43.667% ± 5.030%， t = 6.464， P = 0.003），且细胞增殖活性自第2天开始直至第4天均显著低于shCtrl组。划痕实验及Transwell细胞侵袭实验显示，与shCtrl组相比，shATAD3A组划痕愈合减慢，划痕愈合率自第12 h开始（32.920% ± 4.642%比49.302% ± 1.448%， t = 5.835， P = 0.004）至24 h明显降低，通过Transwell小室下室的侵袭细胞数减少（68.330 ± 13.050比234.330 ± 19.139， t = 12.411， P < 0.001）。Western印迹显示，shATAD3A组细胞NANOG、SOX2、OCT4、MMP2、波形蛋白、SLUG的表达水平均显著下降（ P < 0.05或0.001）。 结论:ATAD3A在黑素瘤组织中高表达，沉默ATAD3A能抑制黑素瘤A375细胞的增殖、侵袭和迁移能力。

目的:评价Z-DNA结合蛋白1(ZBP1)/受体相互作用蛋白激酶1(RIPK1)信号通路在脂多糖(LPS)-三磷酸腺苷(ATP)致小鼠巨噬细胞焦亡中的作用。方法:常规培养小鼠RAW264.7巨噬细胞，采用随机数字表法分为6组( n＝9)：空白对照组(C组)、LPS-ATP组、LPS-ATP＋转染阴性对照scRNA组(LPS-ATP＋scRNA组)、LPS-ATP＋ZBP1小干扰RNA组(LPS-ATP＋siRNA组)、LPS-ATP＋二甲基亚砜组(LPS-ATP＋DMSO组)和LPS-ATP＋RIPK1抑制剂nec-1组(LPS-ATP＋nec-1组)。LPS-ATP＋siRNA组使用siRNA技术抑制ZBP1的表达，LPS-ATP＋nec-1组给予nec-1抑制RIPK1的表达；C组常规培养，余5组给予10 μg/ml LPS孵育24 h，然后加入5 mmol/L ATP孵育30 min构建细胞焦亡模型。采用CCK-8法检测细胞存活情况；ELISA法检测细胞上清液IL-1β、IL-6、IL-18和TNF-α浓度；碘化丙啶荧光染色法测定细胞焦亡情况；Western blot法检测ZBP1、RIPK1、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1)和消皮素D(GSDMD)表达。 结果:与C组比较，LPS-ATP组细胞存活率降低，细胞焦亡率升高，上清液IL-1β、IL-6、IL-18及TNF-α浓度升高，细胞ZBP1、RIPK1、caspase-1和GSDMD表达上调( P<0.05)；与LPS-ATP组比较，LPS-ATP＋scRNA组和LPS-ATP＋DSMO组上述各指标差异无统计学意义( P>0.05)；与LPS-ATP＋scRNA组比较，LPS-ATP＋siRNA组细胞存活率升高，细胞焦亡率降低，上清液IL-1β、IL-6、IL-18及TNF-α浓度降低，细胞ZBP1、RIPK1、caspase-1和GSDMD表达下调( P<0.05)；与LPS-ATP＋DSMO组比较，LPS-ATP＋nec-1组细胞存活率升高，细胞焦亡率降低，上清液IL-1β、IL-6、IL-18及TNF-α浓度降低，RIPK1、caspase-1和GSDMD表达下调( P<0.05)，ZBP1表达差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:ZBP1/RIPK1信号通路激活参与了LPS-ATP致小鼠巨噬细胞焦亡的过程。

目的:评价腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)-沉默信息调节因子1(SIRT1)-核因子-κB(NF-κB)信号通路在三七总皂苷(PNS)减轻机械通气大鼠脑损伤中的作用。方法:SPF级雄性SD大鼠72只，10周龄，体质量357～377 g，采用随机数字表法将大鼠分为6组( n＝12)：假手术组、模型组、PNS低剂量组、PNS中剂量组、PNS高剂量组和PNS高剂量＋compound C组。PNS低剂量组、PNS中剂量组和PNS高剂量组分别腹腔注射PNS 12.5、25.0和50.0 mg/kg；PNS高剂量＋compound C组在腹腔注射PNS 50 mg/kg后10 min时，尾静脉注射compound C 0.2 mg/kg；假手术组和模型组腹腔注射10 ml/kg生理盐水。各组于机械通气前30 min注射药物或生理盐水。机械通气模型：模型组通气频率40次/min，潮气量40 ml/kg，机械通气6 h；假手术组机械通气6 h，潮气量10 ml/kg。采用Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆功能，采用ELISA法检测血清IL-1β、IL-6、TNF-α及多巴胺(DA)浓度，尼氏染色进行海马CA1区神经元计数，采用Western blot法检测海马CA1区P2Y1嘌呤受体(P2Y1R)、(肌)营养不良短小蛋白结合蛋白1(dysbindin-1)、AMPK的表达、磷酸化SIRT1(p-SIRT1)/SIRT1比值和磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)/NF-κB比值。 结果:与假手术组比较，模型组逃避潜伏期延长，穿越原平台位置次数减少，目标象限停留时间缩短，血清IL-1β、IL-6和TNF-α浓度升高，血清DA浓度降低，海马CA1区神经元计数降低，P2Y1R、dysbindin-1表达上调，AMPK表达下调，p-SIRT1/SIRT1比值降低，p-NF-κB p65/NF-κB p65比值升高( P<0.05)；与模型组比较，PNS低剂量组、PNS中剂量组和PNS高剂量组逃避潜伏期缩短，穿越原平台位置次数增多，目标象限停留时间延长，血清IL-1β、IL-6和TNF-α浓度降低，血清DA浓度升高，海马CA1区神经元计数升高，P2Y1R、dysbindin-1表达下调，AMPK表达上调，p-SIRT1/SIRT1比值升高，p-NF-κB p65/NF-κB p65比值降低( P<0.05)；与PNS高剂量组比较，PNS高剂量＋compound C组逃避潜伏期延长，穿越原平台位置次数减少，目标象限停留时间缩短，血清IL-1β、IL-6和TNF-α浓度升高，血清DA浓度降低，海马CA1区神经元计数降低，P2Y1R、dysbindin-1表达上调，AMPK表达下调，p-SIRT1/SIRT1比值降低，p-NF-κB p65/NF-κB p65比值升高( P<0.05)。 结论:PNS减轻机械通气大鼠脑损伤的机制可能与激活AMPK-SIRT1-NF-κB信号通路有关。

目的:分析胃癌组织中三磷酸腺苷酶家族蛋白3A（ATAD3A）表达水平与化疗敏感性及预后的关系。方法:选取山东省第二康复医院2020年6月至2021年7月收治的进展期胃癌患者86例，取患者胃癌组织和癌旁组织标本，采用免疫组化SP法检测胃癌组织中ATAD3A表达水平。比较胃癌组织与癌旁组织ATAD3A的表达情况，不同ATAD3A表达水平与临床病理参数的关系，分析胃癌组织中ATAD3A表达水平与化疗敏感性及预后的关系。结果:胃癌组织中ATAD3A阳性表达率为75.58%（65/86），高于癌旁组织的43.02%（37/86），差异有统计学意义（χ 2=18.89， P < 0.001）。胃癌组织中ATAD3A表达水平与患者性别、年龄、肿瘤长径、临床分期、淋巴结转移均无关（均 P > 0.05）；胃癌组织中ATAD3A阳性表达患者低分化、远处转移占比均高于ATAD3A阴性表达患者（χ 2=5.71、6.17，均 P < 0.05）。ATAD3A阳性表达化疗总有效率为60.00%（39/65），低于ATAD3A阴性表达的85.71%（18/21）（χ 2=4.55， P=0.033）。86例患者紫杉醇药物敏感59例，卡培他滨药物敏感56例；其中ATAD3A阳性表达组紫杉醇和卡培他滨药物敏感均低于空白对照组（χ 2=6.17、5.19，均 P < 0.05）。ATAD3A阳性表达患者1年累积生存率为43.08%（28/65），低于ATAD3A阴性表达者的71.43%（15/21），差异有统计学意义（χ 2=5.24， P < 0.05）；ATAD3A阳性表达患者生存期为（8.47±2.13）个月，短于ATAD3A阴性表达者的（13.62±1.49）个月（ t=6.29， P < 0.05）。Cox多因素回归分析结果显示，低分化（ HR=6.22，95% CI：1.537～25.240）、远处转移（ HR=2.57，95% CI：1.396～4.742）、ATAD3A阳性表达（ HR=10.60，95% CI：2.631～42.715）是影响胃癌化疗后预后生存的独立危险因素（ P < 0.05）。 结论:胃癌组织中ATAD3A呈阳性表达，且表达水平与化疗敏感性及预后密切相关，对评估化疗效果及预后具有重要参考价值。

目的 神经胶质瘤是最常见的一种颅内原发恶性肿瘤,但目前发病机制尚不清楚.ruvB-like2是腺苷三磷酸酶类(AAA+)家族的成员,被认为可能在调控急性单核细胞性白血病细胞和肝癌细胞生长方面发挥重要作用.该研究首次探究ruvB-like2是否也是调控神经胶质瘤细胞生长的关键因子.方法 通过RNAi技术下调ruvB-like2在大鼠C6脑胶质瘤细胞中的表达,检测细胞增殖和凋亡情况,进一步通过流式细胞术和RT-PCR技术探究细胞凋亡的机制.结果 下调表达ruvB-like2后,C6脑胶质瘤细胞生长速度显著减慢(P＜0.05),细胞发生强烈凋亡.进一步探究发现,细胞凋亡的机制涉及,将细胞周期阻滞在G2/M期以及诱导促凋亡蛋白的上调表达.结论 该研究证明ruvB-like2是调控脑胶质瘤细胞生长的关键分子.研究结果为阐明脑胶质瘤细胞的发病机制,以及以ruvB-like2开发新型治疗药物提供依据.

目的 研究远端缺血预处理(RIPC)对全胸腔镜下心脏瓣膜置换术患者Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶的影响.方法 将120例全胸腔镜下心脏手术患者分为全胸腔镜体外循环对照组(C组)和RIPC+全胸腔镜体外循环组(RIPC组).观察RIPC组处理前后动脉血酸碱度的变化情况;检测比较不同时段心肌酶谱、肌钙蛋白Ⅰ及氧化指标[超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)];以及两组术前、术中以及术后Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶的水平.结果 与C组比较,RIPC后动脉血酸碱度较低(P＜0.05);RIPC组肌酸激酶同工酶(CK-MB)和肌钙蛋白Ⅰ在术后6h和24 h低于C组(P＜0.05);SOD活力高于C组而MDA水平低于C组(P＜0.05);术后Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶的水平也不同程度高于C组(P＜0.05).结论 RIPC可减轻全胸腔镜下心脏手术患者心肌损伤,这种保护作用可能与其激活相应ATP酶有关.

线粒体是细胞内氧化磷酸化和形成三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)的主要场所,有细胞“动力工厂”(power plant)之称.线粒体由两层膜包被,外膜平滑,内膜向内折叠形成嵴,两层膜之间有腔,线粒体中央是基质.基质内含有三羧酸循环所需的全部酶类,内膜上具有呼吸链酶系及ATP酶复合体.解耦联蛋白2(uncoupling protein-2,UCP2)是线粒体内膜上解耦联蛋白家族(uncoupling proteins,UCPs)成员之一,能通过“质子漏”作用,使线粒体内膜外的质子直接进入线粒体基质,降低线粒体内外膜两侧的质子电化学梯度,使氧化过程与二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)磷酸化过程解耦联,从而使ATP合成减少,能量以热能的形式释放.UCP2可使活性氧生成减少,一方面是由于线粒体膜两侧质子电化学梯度降低,呼吸链上的电子回漏减少,另一方面是其可被过氧化物激活,机制可能和游离脂肪酸有关[1].因此,UCP2在线粒体抗氧化应激能力和能量代谢方面发挥着极其重要的作用.本文对其在心脑血管病中的作用作一阐述.

3,5-环磷酸腺苷(cAMP)是心血管系统中细胞对于外界刺激反应的关键信号分子.它控制很多生物效应,如细胞增殖、变异和凋亡等.cAMP是ATP通过跨膜腺苷酸环化酶激活的G蛋白偶联受体[1].细胞内cAMP不仅由腺苷酸环化酶产生,而且由cAMP的磷酸二酯酶调控其降解,催化cAMP水解成5-AMP.磷酸二酯酶是限制cAMP合成的关键因素,并且是各种特定反应动态微小区域的关键组成部分[2].研究显示,细胞内cAMP效应与蛋白激酶A(PKA)及环核苷酸-门控离子通道相关联.1998年,一种新的cAMP受体蛋白被发现,即环腺苷酸结合蛋白(EPAC).EPAC家族由作为小分子G蛋白Rap的特异性鸟嘌呤核苷酸交换因子(GEF)的EPAC1和EPAC2组成,其功能与PKA平行.EPAC可促使二磷酸鸟苷(GDP)转变为三磷酸鸟苷(GTP),从而激活小分子G蛋白Rap[3]相反,Rap-GTPase激活蛋白提高了内在GTP水解活性,使Rap转化为无活性的GTPase.Rap在有活性和无活性状态的转换形成其与效应蛋白结合的主要机制.EPAC的发现打破了关于cAMP与PKA的传统观点,并揭示cAMP信号在心血管系统中新的作用.这些cAMP敏感的GEF在不同亚细胞器及细胞内环境中的功能将逐步阐明,诸多研究表明,EPAC与cAMP的多种生理反应相关联,例如心肌肥大和血管炎症等[4].我们将对EPAC在心脏中的功能及相关心脏疾病中的作用进行综述,并探讨EPAC配体在相关心脏疾病中的治疗潜力.

多种急性与慢性神经退行性疾病如脑卒中[1]、阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)[2]、帕金森病(Parkinsondisease,PD) [3]、亨廷顿病(Huntington disease,HD)[4]与能量衰竭密切相关.能量衰竭是指细胞不能产生足够的三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)以维持其功能[5],ATP主要由细胞呼吸产生,现已发现某些线粒体呼吸链复合物中的酶类如乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)的表达在多种神经退行性疾病中发生改变.

目的 探讨赤霉素对精子运动力和细胞凋亡的影响及其机制.方法 采用Percoll梯度离心法提取有正常生理功能的人精子作为正常精子模型,提取的优质精子培养于含不同浓度赤霉素的G-IVF PLUS培养液中,采用精子质量分析仪检测精子运动力;流式细胞分析仪检测精子细胞活性氧(ROS)水平及凋亡情况;免疫荧光技术检测氧化应激、凋亡相关蛋白表达量;ATP酶检测试剂盒检测Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性.结果 精子运动力随赤霉素浓度的增加、时间的延长逐渐降低;处理组精子细胞ROS水平明显高于对照组(F=21.40,P＜0.05),过氧化物歧化酶(SOD)蛋白水平较对照组明显降低(F=28.13,P＜0.05);凋亡蛋白P53、BAX表达水平较对照组明显升高(F=104.54、59.29,P＜0.05);Na+-K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性较对照组明显降低(F=24.48、18.81,P＜0.05).结论 赤霉素可通过氧化应激反应降低精子运动力,促进精子细胞凋亡.