目的:探究负载焦亡抑制剂的活性氧响应性自组装纳米胶束对糖尿病大鼠全层皮肤缺损的影响。方法:采用实验研究方法。用纳米胶束聚乙二醇-嵌段-聚丙烯硫醚（PEG-b-PPS）包封核苷酸结合寡聚化结构域（NOD）1/2抑制剂（NOD-IN-1），将所得产物称为PEPS@NOD-IN-1。利用透射电子显微镜和粒度分析仪分别观测PEG-b-PPS与PEPS@NOD-IN-1的形貌和水合粒径，用酶标仪测量并计算PEPS@NOD-IN-1对NOD-IN-1的包封率和载药率以及PEPS@NOD-IN-1在单纯磷酸盐缓冲液（PBS）和含过氧化氢的PBS中40 h内对NOD-IN-1的累积释放率，样本数均为3。取24只6~7周龄雄性SD大鼠，通过注射链脲佐菌素的方法诱导1型糖尿病，在每只大鼠背部制作6个全层皮肤缺损创面，按随机数字表法将致伤大鼠分为进行相应处理的PBS组、NOD-IN-1组、PEG-b-PPS组、PEPS@NOD-IN-1组，每组6只。伤后3、7、12 d观察创面愈合情况并计算创面愈合率；伤后3 d，采用免疫荧光法检测创面组织中活性氧水平；伤后7 d，利用苏木精-伊红染色评估创面肉芽组织厚度，采用实时荧光定量反转录PCR法检测创面组织中NOD1、NOD2的mRNA表达，采用蛋白质印迹法检测创面组织中NOD1、NOD2、GSDMD-N端的蛋白表达。前述指标均各取各组不同鼠的共6个创面检测。另取PBS组和PEPS@NOD-IN-1组大鼠伤后7 d创面组织（各3个样本），利用高通量测序技术平台进行转录组测序，筛选出PEPS@NOD-IN-1组相较于PBS组显著下调的差异表达基因（DEG），进行京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析；制作焦亡相关通路NOD样受体通路DEG热图；通过STRING数据库对热图中的DEG进行蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）分析，筛选PEPS@NOD-IN-1调控NOD样受体通路的关键基因。对数据行重复测量方差分析、单因素方差分析、Tukey检验。结果:PEG-b-PPS与PEPS@NOD-IN-1均为大小较为均一的球形结构，水合粒径分别为（134.2±3.3）、（143.1±2.3）nm。PEPS@NOD-IN-1对NOD-IN-1的包封率为（60±5）%、载药率为（15±3）%。PEPS@NOD-IN-1在单纯PBS中对NOD-IN-1的释放较缓慢，40 h累积释放率仅为（12.4±2.3）%；PEPS@NOD-IN-1在含过氧化氢的PBS中10 h内对NOD-IN-1的释放十分迅速，10 h累积释放率已达（90.1±3.6）%。伤后3、7 d，4组大鼠创面均逐渐愈合，PEPS@NOD-IN-1组愈合情况优于其余3组；伤后12 d，PBS组创面结痂面积较大，NOD-IN-1组、PEG-b-PPS组创面上皮化明显，PEPS@NOD-IN-1组创面接近完全上皮化。与PBS组、NOD-IN-1组及PEG-b-PPS组比较，PEPS@NOD-IN-1组大鼠伤后7、12 d创面愈合率均显著增高（ P<0.05），伤后3 d创面组织中活性氧水平显著下降（ P<0.05），伤后7 d创面肉芽组织厚度显著增厚（ P<0.05），伤后7 d创面组织中NOD1、NOD2的mRNA表达以及NOD1、NOD2、GSDMD-N端的蛋白表达均显著下降（ P<0.05）。KEGG通路分析显示，PEPS@NOD-IN-1组相较于PBS组显著下调的DEG在NOD样受体、缺氧诱导因子、丝裂原活化蛋白激酶和肿瘤坏死因子（TNF）通路方面显著富集。在NOD样受体通路的DEG热图中，可见调控细胞焦亡的基因主要涉及 NOD1、NOD2、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3 、Jun、信号转导及转录激活因子1（ STAT1）、TNF-α诱导蛋白3。PPI结果显示， NOD1、NOD2、STAT1为PEPS@NOD-IN-1调控NOD样受体通路的关键基因。 结论:PEPS@NOD-IN-1能下调创面局部活性氧水平及细胞焦亡关键调节因子NOD1、NOD2、GSDMD-N端的表达，进而促进糖尿病大鼠全层皮肤缺损创面修复；PEPS@NOD-IN-1还可显著下调创面的焦亡、炎症及缺氧相关通路，通过下调关键基因 NOD1、NOD2、STAT1调控NOD样受体通路。

目的:研究广谱抗真菌药物布替萘芬纳米胶束(BTF-NM)兔眼局部点眼后的药代动力学。方法:采用自组装法制备BTF-NM，利用纳米粒度-Zeta电位分析仪测定BTF-NM的粒径、多分散系数(PDI)和Zeta电位；采用高效液相色谱法(HPLC)测定包封率。取健康无眼疾新西兰白兔42只，采用随机数字表法将实验兔分为BTF-NM组和布替萘芬混悬剂(BTF-S)组，2个组均采用相应药物双眼结膜囊内点眼，单次点眼50 μl。分别于点眼后5、15、30、60、120、180和240 min将直径7.5 mm滤纸片置于兔眼结膜囊内，停留1 min后取出，以收集泪液样品，然后经兔耳缘静脉注射质量分数4%戊巴比妥钠溶液处死实验兔，抽取房水，剖取角膜组织，利用HPLC检测各样本组中布替萘芬(BTF)药物浓度。结果:BTF-NM的粒径为(15.65±0.04)nm，PDI为0.11±0.01，Zeta电位为(-0.29±0.36)mV，包封率为(98.38±0.29)%。BTF-NM组单次点眼后泪液和角膜组织中药物达峰时间(T max)均为5 min，药物峰质量分数分别为(485.21±66.29)μg/g和(12.53±2.32)μg/g，分别是BTF-S组的5.6倍和78倍，在观察时间内，BTF-NM组泪液和角膜中各时间点的药物质量分数显著高于对应时间点BTF-S组的药物质量分数，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。BTF-NM组泪液和角膜的药物浓度-时间曲线下面积(AUC) 0-240 min分别为7 488.90(μg/g)·min和829.01(μg/g)·min，分别是BTF-S组的7.2倍和52倍。BTF-NM组和BTF-S组的房水中均未检测到药物。 结论:BTF-NM的制备工艺简单，包封率高，粒径小。与BTF-S相比，BTF-NM制剂可明显提高BTF在兔眼角膜中的生物利用度。

目的 制备鞣花酸自胶束化固体分散体(ellagic acid-loaded self-micelle solid dispersion,EA-SMSD),考察体外释药情况及口服药动学行为.方法 以EA-SMSD自组装形成胶束的包封率、载药量和沉降率为指标,Box-Behnken设计-效应面法优化EA-SMSD处方工艺.透射电子显微镜(TEM)观察自组装胶束的微观形貌,X射线粉末衍射法(XRPD)分析鞣花酸在EA-SMSD粉末中的晶型,透析袋法考察EA-SMSD在水及模拟胃、肠液中释药情况.以鞣花酸原料药为参考,比较EA-SMSD口服药动学行为.结果 EA-SMSD最佳处方:Soluplus与鞣花酸用量比为7.8∶1,制备温度为50℃,制备时间为1.6 h.自组装形成胶束的包封率为(94.62±1.12)%,载药量为(10.57±0.24)%,沉降率为(2.19±0.09)%,粒径为(68.90±6.87)nm,ζ电位为(-13.11±1.02)mV.鞣花酸以无定型形式存在于EA-SMSD粉末中,EA-SMSD在水及模拟胃、肠液中释药行为符合Weibull模型,且储存稳定性高.药动学结果显示,EA-SMSD达峰时间(tmax)延后至(5.15±0.98)h,达峰浓度(Cmax)提高至 4.03 倍,相对口服吸收生物利用度提高至 6.03 倍.结论 EA-SMSD制备工艺简单,可显著增加鞣花酸相对口服吸收生物利用度.

背景:富血小板血浆水凝胶由于生长因子的突发释放与伤口部位蛋白酶的快速清除,导致生长因子在伤口部位的停留时间较短,近年来研究者关注利用水凝胶材料包封富血小板血浆,以改善富血小板血浆水凝胶的不足.目的:制备自组装多肽-富血小板血浆水凝胶,探究其对富血小板血浆生物活性因子释放的影响.方法:采用固相合成法合成自组装多肽,以D-PBS配制成溶液.将不同体积的多肽溶液分别与富血小板血浆、氯化钙/凝血酶溶液混合制备水凝胶,使体系中多肽的最终质量分数分别为0.1%,0.3%,0.5%,观察成水凝胶状态,并体外检测富血小板血浆中生长因子释放情况.将质量分数1%多肽溶液与质量分数1%人血清白蛋白溶液混合激发多肽自组装,使多肽的最终质量分数分别为0.1%,0.3%,0.5%,观察液体流动状态,并检测自组装多肽的流变力学性能.通过扫描电镜与透射电镜观察多肽(质量分数分别为0.1%,0.001%)-人血清白蛋白溶液的微观结构.结果与结论:①不同体积多肽溶液与富血小板血浆均可形成水凝胶,与富血小板血浆水凝胶相比,0.1%,0.3%多肽-富血小板血浆凝胶可缓解表皮生长因子、血管内皮生长因子的突发释放,延长释放时间至48 h.②添加人血清白蛋白后,0.1%多肽组仍呈流动液体,0.3%多肽组呈半液体状态,0.5%多肽组激发自组装形成水凝胶,确定富血小板血浆中人血清白蛋白可激发多肽自组装;随着多肽质量分数的提高,自组装多肽的存储模量越高,越容易成胶.③透射电镜下可见,添加人血清白蛋白前,多肽纳米纤维较短且无序堆积;添加人血清白蛋白后,多肽纳米纤维明显变长,并且相互交联成束,形成致密的纤维网络结构.扫描电镜下可见,添加人血清白蛋白前,多肽呈无序堆积的片状结构;添加人血清白蛋白后,多肽自组装成相互交联且有序密集排列的多孔状结构.④结果显示,新型自组装多肽可由富血小板血浆激发自组装,根据人血清白蛋白与多肽的比例可精准调节自组装效果,且多肽对富血小板血浆生长因子有缓释作用,可作为一种新型的生物材料应用于组织修复.

难溶性中药组分的溶解性差是制约其制剂开发的重要因素,中药天然多糖可作为功能组分增加难溶性组分的溶解度,淫羊藿黄酮低糖苷组分(epimedium flavonoid secondary glycoside components,EFSGC)具有良好的防治骨质疏松作用,然而其存在溶解性差的理化性质缺陷.因此该研究采用了以中药多糖增溶EFSGC的策略,并评价其对EFSGC渗透性和稳定性等性质的影响.基于EFSGC的平衡溶解度实验,发现 10 种中药多糖中三七粗多糖(Panax notoginseng crude polysaccharide,PNCP)对EFSGC的增溶效果最优,其将EFSGC的溶解度由0.8 mg·mL-1提升至13.3 mg·mL-1.需要注意的是,采用制剂技术对组分进行增溶后,也需考虑其对组分渗透性和稳定性的影响,因此该研究继续考察了这 2 种性质.结果显示,PNCP 将EFSGC的 8 h有效透过率由 50.5%提升至 71.1%,可以显著增加EFSGC的渗透性;同时可以提高EFSGC在模拟人工胃液环境中的稳定性.为了阐释PNCP对EGSGC增溶的机制,通过临界胶束浓度、粒径和电位、差示扫描量热法及红外光谱法等分析方法,初步推断该机制为PNCP与EFSGC在水中能以分子间氢键相互作用自组装形成聚集体而增溶.综上,PNCP不仅能够改善EFSGC的溶解性,同时也可以提高EFSGC的渗透性和稳定性.该研究为中药多糖作为一种功能组分对难溶性组分增溶的应用奠定了基础.

目的 设计一种具备酸、谷胱甘肽(GSH)双响应性的叠层胶束,用于靶向共递送阿霉素和姜黄素.方法 利用酰胺化反应将β-环糊精(β-CD)接枝于透明质酸(HA)侧链,作为外层"壳"载药位点(HA-CD),通过疏水作用包载阿霉素(DOX),形成HA-CD@DOX;用二茂铁甲酸(Fc)与十八醇进行酯化反应,氧化处理后自组装得到正电性的内层促释性"核"(Fc+-C18),包载抗肿瘤药物姜黄素(CUR),制得Fc+-C18@CUR.内层促释性"核"与外层"壳"通过静电作用结合,得到具备"壳-核"结构的叠层载药胶束(HA-CD@DOX&Fc+-C18@CUR);通过 1H-NMR对HA-CD、Fc+-C18进行结构表征,采用FT-IR表征HA-CD@DOX;采用芘荧光探针法对Fc+-C18 的临界胶束浓度进行测定;以动态光散射和透射电镜对叠层载药胶束粒径、形态进行表征;以高效液相色谱法(HPLC)和荧光分光光度法测定药物体外释放行为;采用MTT法考察DOX与CUR抗肿瘤的协同作用以及叠层载药胶束对肿瘤细胞(4T1)与正常细胞(LO2)增殖的抑制效果;以激光共聚焦显微镜、流式细胞仪观察体外细胞摄取性.结果 HA-CD@DOX成功制备;Fc+-C18临界胶束浓度为0.02 mg·mL-1,HA-CD@DOX&Fc+-C18@CUR为直径 300 nm左右的球形结构;MTT结果表明DOX与CUR联合使用确实具有协同作用,HA-CD@DOX&Fc+-C18@CUR对 4T1 的细胞增殖抑制效果优于DOX+CUR;细胞摄取实验显示HA-CD@DOX&Fc+-C18@CUR可以主动靶向至肿瘤细胞表面CD44受体,并实现药物的定点快速释放.结论 HA-CD@DOX&Fc+-C18@CUR具有pH和GSH双响应的药物释放行为,能提高药物在肿瘤部位的积累,具有主动靶向性,同时还有协同抗肿瘤作用.

本研究通过pH敏感的腙键共价连接疏水性化疗药物多柔比星(doxorubicin,DOX)和亲水性抗肿瘤转移的低分子量肝素(low molecular weight heparin,LH)合成了低分子量肝素-多柔比星胶束(LH-DOX),并物理包载光热剂吲哚菁绿(indocyanine green,ICG),以透析法制备了具有pH敏感的载吲哚菁绿的低分子量肝素-多柔比星聚合物胶束(LH-DOX/ICG).该胶束粒径为(148.7±2.1)nm,在电镜下呈形态规则的球形,粒径均一,并具有良好的稳定性和生物相容性.体外释放结果显示,DOX的释放具有pH敏感性,ICG有一定的缓释效果.ICG包载于胶束后与游离ICG具有相似的光热效应.一方面,划痕愈合实验显示,在激光照射下LH-DOX/ICG胶束具有良好的抗肿瘤转移能力;另一方面,细胞凋亡及细胞毒性实验表明,在激光照射下该胶束诱导黑色素瘤B16F10细胞凋亡的能力和对细胞毒性作用明显增加.因此,LH-DOX/ICG胶束具有良好的前景,用于光疗-化疗联合治疗黑色素瘤.

目的 合成以三分枝六聚乙二醇为亲水部分、以十二胺为疏水部分的新型两亲性分子三分枝六聚乙二醇接枝十二胺共聚物(PGDA),并对其理化性质进行考察.方法 通过苯磺酰化、取代反应、还原反应、酯化后形成酰胺5步反应合成了PGDA.使用核磁和质谱确定其结构和相对分子质量;芘荧光探针法测量其临界胶束浓度;并考察PGDA在水溶液中的形态、37℃稳定性.结果 两亲性分子PGDA被成功合成.质谱实测相对分子质量与理论相对分子质量1171.69吻合;该两亲性分子在水中很容易自组装成胶束,临界胶束浓度为75 mg/L;PGDA胶束37℃孵育24 h粒径无明显变化、稳定性良好.结论 成功合成了三分枝六聚乙二醇为亲水部分和以十二胺为疏水部分的两亲性分子PGDA,其在水溶液中具有优良的胶束化行为,有望能作为一种药用辅料在难溶性药物的胶束等制剂中得到应用.

目的 以两亲性材料壳聚糖-去氧胆酸聚合物为载体制备积雪草酸(AA)自组装胶束(AA-CS-DCA PMs),并研究胶束在大鼠体内的药动学特点.方法 采用超声分散法构建AA-CS-DCAPMs,采用包封率、载药量、粒径、Zeta电位等指标对胶束进行表征,通过体外释放考察胶束的释药特性.进一步建立清醒大鼠胆汁引流模型,采用柱前衍生化HPLC方法测定胆汁中药物质量浓度,并通过达峰时间(tmax)、峰浓度(Cmax)、药物排泄速率-时间曲线下面积(AUC0～t)评价口服胶束的体内药动学特点.结果 所构建的载药胶束粒径为(70.5±9.8) nm,Zeta电位为(38.4±0.8) mV;药物AA包封率为(77.8±1.2)％,载药量达到(11.7±0.2)％;体外释放试验中,药物没有明显的突释现象,具有缓释特征.载药胶束经胆汁排泄的Cmax (26.05±3.04) μg/h是对照组(原料药)(9.19±1.12) μg/h的2.8倍,tmx显著延长(2hvs 1 h),体内消除明显减慢,其消除半衰期t1/2 (2.68±1.71)h是对照组(1.49±0.38)h的1.8倍.反映药物吸收程度的生物利用度AUC0-t,与对照组相比提高了200％[(99.05±12.83) μgvs (33.56±8.33) μg].结论 AA经自组装胶束包封后,体内药物水平明显提高,作用时间延长,极大提高了AA的口服生物利用度.

目的 制备一种共载基因和化学治疗药的硫辛酸(LA)修饰的以非内吞机制进入细胞的固有无序蛋白-细胞质定位的内化肽6(CL)的纳米复合物(LA-CL),并考察其在人胚肾细胞系HEK293细胞的转染效率、细胞摄取情况及其体外释放规律.方法 以不同比例(2.5%、5%、10%、20%)半胱氨酸作为交联剂,合成4种不同交联度的LA-CLss,分别命名为LA-CLss1~LA-CLss4,并用核磁共振氢谱(1HNMR)和凝胶色谱鉴定.取增强型绿色荧光蛋白质粒(pEGFP)和LA-CLss以不同氮磷比(N/P,2.5、5、10、20、40、80)自组装形成纳米复合物,用激光粒度测定仪测定复合物的粒径和zeta电位,琼脂糖凝胶电泳测定载体LA-CLss对pEGFP的包裹能力和保护能力.用超声乳化法制备载多西他赛(DTX)的载药胶束,并用芘荧光探针光谱法测定LA-CLss3的临界胶束浓度.将LA-CLss/pEGFP纳米复合物与HEK293细胞共同培养,考察不同交联度复合物的细胞转染情况.结果 1HNMR结果确定LA-CLss合成成功.N/P=40时,HEK293细胞对LA-CLss3/pEGFP的转染效率高于LA-CL、LA-CLss1、LA-CLss2、LA-CLss4与pEGFP形成的复合物.超声乳化法制备的载药胶束包封率为(85.25±0.04)%,载药量为(8.81±0.02)%.细胞摄取结果表明,该载体可以有效地将基因递送至细胞内.体外释放实验结果表明,该多肽胶束具有还原性条件敏感释药行为.结论 制备的LA-CLss/DTX/pEGFP纳米复合物有望成为一种高效的共载基因和化学治疗药的载体.