目的:建立白术发酵样品中总黄酮和总多糖的含量测定方法，考察白术发酵前后总黄酮和总多糖的含量变化，为白术发酵的深入研究开发提供科学依据。方法:利用酵母菌、双歧杆菌、乳酸菌对白术进行发酵。采用紫外分光光度法在波长500 nm处，测定发酵白术中总黄酮含量。以苯酚-硫酸法显色，在490 nm处测定发酵白术中总多糖含量。结果:白术经酵母菌、双歧杆菌、乳酸菌发酵后，总黄酮含量分别提高了2.29、1.81、1.87倍，酵母菌发酵后总多糖含量降低47.89%，双歧杆菌发酵后总多糖含量提高36.41%，乳酸菌发酵后总多糖含量提高14.73%。结论:白术经酵母菌、双歧杆菌、乳酸发酵后，其总黄酮、总多糖含量变化显著，可提高有效成分相对含量。

目的:阐明鲜冬虫夏草冷水提取物对香烟提取物(CSE)单一刺激以及复合流感病毒感染的体外抗炎作用。方法:用紫外高效液相色谱法分析鲜冬虫夏草冷水提取物核苷类成分，硫酸-苯酚法检测样品总糖含量，超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒检测样品SOD活力。细胞活力检测试剂盒检测CSE和鲜冬虫夏草冷水提取物对人支气管上皮细胞(16HBE)和人急性单核细胞白血病细胞(THP-1)的细胞毒性；以CSE刺激16HBE细胞48 h和THP-1细胞8 h建立炎症模型，加入不同浓度(1 000、500、250 mg/L)鲜冬虫夏草冷水提取物，用定量聚合酶链反应方法检测炎症因子mRNA的表达水平。在此基础上，构建CSE刺激48 h后感染甲型流感病毒24 h的16HBE细胞模型，以相同的方法评价药物对炎症因子mRNA表达的影响。最后，利用免疫荧光技术观察鲜冬虫夏草冷水提取物对CSE刺激16HBE致黏液蛋白5AC(MUC5AC)高分泌的抑制作用。结果:(1)鲜冬虫夏草冷水提取物总核苷含量为0.423%，总糖含量为18.69%，SOD活力为14 736.5 U/ml。(2)高、中浓度鲜冬虫夏草冷水提取物对CSE刺激16HBE细胞的白细胞介素6(IL-6)mRNA表达有明显抑制活性( t值分别为6.514、5.156， P值均<0.05)，高浓度可显著抑制MUC5AC的mRNA表达( t＝8.922， P<0.05)。(3)高、中、低浓度鲜冬虫夏草冷水提取物对CSE刺激THP-1细胞的肿瘤坏死因子α的mRNA表达均有明显抑制作用( t值分别为9.549、9.616、8.573， P值均<0.05)，对IL-6的mRNA的表达也均有抑制作用( t值分别为4.458、5.399、4.151， P值均<0.05)。(4)高浓度药物干预后，MUC5AC荧光在16HBE细胞胞浆的表达明显减少。 结论:鲜冬虫夏草冷水提取物在16HBE和THP-1细胞的炎症模型中显示出较好的抗炎活性，并且可抑制16HBE气道上皮细胞MUC5AC高分泌。本研究揭示了冬虫夏草兼具潜在治疗慢性阻塞性肺疾病炎症和黏液高分泌两大病理生理特征的药用特色。

目的 分析山茱萸炭与山茱萸中有效成分的含量变化及山茱萸炭对止血作用的影响,为阐明山茱萸炭作用机制奠定基础.方法 通过采用高效液相测定生品和炒炭后山茱萸的马钱苷、莫诺苷、熊果酸含量变化,采用苯酚-硫酸法和干酪素-磷钼钨酸法测定山茱萸多糖和没食子酸的含量,测定不同剂量的山茱萸炭对小鼠凝血时间、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)和纤维蛋白原含量(FIB).结果 山茱萸炭中莫诺苷含量显著减少,马钱苷、熊果酸含量略有增加,没食子酸含量显著增加,山茱萸多糖含量基本不变.另外,中、低剂量组的山茱萸炭可以显著降低小鼠的凝血时间,可以显著降低小鼠的TT.结论 山茱萸炭可以在一定程度上促进小鼠的凝血,表现出一定炒炭止血的特点.本研究有效拓展了山茱萸的炮制方法和功效范围、发展了中药炭药的种类,具有重要的应用和理论价值.

目的:探究去除玄参芦头对净制玄参药材是否具有必要性.方法:通过对比不同批次玄参药材根和芦头净制后得率、含水量以及浸出物,采用高效液相色谱法比较哈巴苷、哈巴俄苷、安格洛苷C、麦角甾苷、肉桂酸5个主要活性成分含量,并采用苯酚-硫酸法测定玄参多糖,且对上述成分进行主成分分析(PCA),采用脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞(BV-2细胞)建立炎症模型,通过测定细胞上清液中一氧化氮(NO)的释放量,考察玄参根和芦头的抗炎活性,综合评价去除芦头的必要性.结果:玄参中芦头占药材重量的10％～20％,玄参根中浸出物高于芦头;PCA结果显示将玄参根和芦头区分为2大类,哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸以及多糖类活性成分以玄参根中含量高,但芦头中也有较大的贡献,而玄参芦头以安格洛苷C、麦角甾苷含量较多;玄参根和芦头的抗炎活性比较,差异无统计学意义.结论:按照传统习惯,玄参净制去芦具有一定的科学道理,但玄参芦头具有一定的药用价值,在提取物制备等方面进一步挖掘利用.

目的 分析多花黄精水提物成分,并对其体内外抗肿瘤活性进行评价,为进一步开发利用多花黄精提供理论基础.方法 (1)通过水提法制备多花黄精水提物,利用UPLC-Q-TOF/MS、苯酚硫酸法等方法分析多花黄精水提物化学成分,并通过CCK-8 法检测多花黄精水提物对多种肿瘤细胞增殖抑制活性,采用流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况,用Western Blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2 和Bax的表达情况,利用多花黄精水提物含药血清检测入血成分对细胞增殖抑制活性.(2)构建荷瘤小鼠模型,随机分为模型组(予以生理盐水)、阳性药环磷酰胺组(50 mg·kg-1)以及多花黄精水提物低、中、高剂量组(55.9、111.8、223.6 mg·kg-1),灌胃治疗 7 d.治疗期间,观察小鼠体质量及肿瘤体积变化情况.治疗结束后处死小鼠,采用苏木素-伊红(HE)染色观察心、肝、脾、肺、肾以及肿瘤组织病理学变化;免疫组化(IHC)检测肿瘤组织Bcl-2 及Bax蛋白表达情况.结果 多花黄精水提物多糖含量达到(10.07±1.3)%,黄酮含量为(0.044±0.004)%,并且通过UPLC-Q-TOF/MS检测出39 种成分,包含黄酮类的黄芩素、槲皮素、木犀草素、芦丁,有机酸类的阿魏酸及多酚类的没食子酸等抗肿瘤成分.多花黄精水提物对Hela、A549、4T1、B16、MFC和HepG2 细胞均有抑制作用(P＜0.001),其中对B16 细胞抑制作用最为明显,且多花黄精水提物可诱导B16 细胞周期阻滞于G0/G1 期(P＜0.001).流式双染和Western Blot结果显示多花黄精水提物明显促进B16 细胞凋亡,降低Bcl-2 的表达,且促进Bax的表达(P＜0.01,P＜0.001).多花黄精水提物入血成分对B16 细胞也具有抑制作用(P＜0.001).此外,多花黄精水提物体内活性实验结果显示,与模型组比较,不同剂量的多花黄精水提物能够抑制肿瘤生长,诱导肿瘤细胞坏死,降低Bcl-2 表达,提高Bax的表达.结论 多花黄精水提物成分丰富,含有多种抗肿瘤活性成分,能抑制肿瘤生长,诱导肿瘤细胞凋亡,显示较强的抗肿瘤作用,值得深入研究.

目的 对白果仁止咳有效部位35％乙醇-水洗脱部位中多糖及多肽的含量进行测定,为白果仁的综合开发和质量控制提供科学依据.方法 采用苯酚-硫酸法、双缩脲法,建立标准曲线,并进行精密度、稳定性、重复性、加样回收率的考察.结果 白果仁35％乙醇-水洗脱部位中多糖和多肽均在浓度范围内有良好的线性关系,方法学验证RSD值均小于2％,加样回收率分别为97.96％、97.94％,多糖含量为13.99％,多肽含量为31.41％.结论 本研究建立的白果仁35％乙醇-水洗脱部位多糖和多肽含量测定方法简单可行,稳定性和重现性好.

[目的]蒙古黄芪是黄芪药材的重要基原植物,其主要种植地内蒙古、山西、甘肃等地均属于干旱、半干旱地区,不定期间歇式降雨造成了植物干旱复水循环.研究蒙古黄芪在干旱及复水过程中代谢产物的变化特征对于了解其响应自然间歇降雨的干旱胁迫机制非常关键.[方法]试验以1年生蒙古黄芪种苗为材料,进行反复干旱胁迫及复水处理后,测定盆栽土壤养分及其根长、根粗,用基于NMR的代谢组学技术分析蒙古黄芪的初生差异代谢物,并进行差异代谢物筛选及代谢通路分析;用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠法、香草醛-冰醋酸比色法和苯酚-硫酸比色法测定反复干旱胁迫处理下蒙古黄芪根中总黄酮、总皂苷及多糖物质含量.[结果](1)蒙古黄芪在干旱胁迫时会呈现根粗减小,根长和须根密度增加的趋势.(2)干旱及复水处理下,代谢组共检测到42种代谢产物,主要是氨基酸及其衍生物、有机酸、胺类及氨类化合物和糖类等;代谢通路分析表明,植株在反复干旱胁迫过程中主要影响体内的氨基酸代谢途径,通过增加天冬氨酸、丙氨酸、谷氨酸、脯氨酸及精氨酸的含量,降低天冬酰胺、色氨酸和4-氨基丁酸的含量来增强自身抗旱性,具体表现为丙氨酸、谷氨酸、脯氨酸等代谢物增加1～3倍,色氨酸和4-氨基丁酸等代谢物下降1～2倍.(3)在第1轮干旱胁迫下蒙古黄芪总皂苷积累,而第2轮干旱胁迫后黄芪皂苷、总黄酮类、多糖3种活性物质的生成量减少,均呈下降趋势.[结论]氨基酸及其衍生物类与蒙古黄芪响应水分胁迫的机制密切相关,同时植株也会调节自身的次生代谢产物以响应环境变化.

目的:建立消渴平合剂中多糖和蔗糖、葡萄糖、果糖的含量测定方法.方法:采用苯酚-硫酸法测定消渴平合剂中多糖的含量;采用HPLC-ELSD法测定消渴平合剂中蔗糖、葡萄糖、果糖的含量,色谱柱为agilent Carbohydrate(4.6×250mm,5μm),流动相为乙腈-水(75∶25),流速1.0mL/min,柱温25℃,蒸发光放射检测器(ELSD):氮气流速1.6L/min,蒸发管温度80℃,漂移管温度60℃.结果:苯酚-硫酸法测定多糖经方法学考察,葡萄糖在2.61～36.54μg/mL浓度范围内与吸光度呈良好的线性关系,平均回收率为100.66%;HPLC-ELSD法测定果糖、葡萄糖、蔗糖经方法学考察,蔗糖、葡萄糖、果糖分别在1.45～9.68μg、1.61～10.75μg、3.01～20.05μg的范围内呈良好的对数线性关系,蔗糖、葡萄糖、果糖的回收率分别为96.52%、97.38%、97.17%.结论:苯酚-硫酸法结合紫外分光光度法可以较为准确地测定该合剂中多糖含量;HPLC-ELSD法可同时快速准确地测定该合剂中蔗糖、葡萄糖、果糖的含量.

目的 设计正交试验提取二至丸中的多糖类成分并测定多糖含量,将提取物制成颗粒剂.方法 2022年9-12月采用传统的水提醇沉法提取二至丸中的多糖类成分,进行L(34)正交实验设计,探究料液比、提取温度、提取时间、提取次数对多糖9提取率的影响,优选多糖提取物的最佳提取工艺;以葡萄糖为标准,采用苯酚-硫酸法进行样品多糖含量测定;并将提取的多糖提取物进行湿法制粒.结果 探究的四个因素对多糖提取率的影响程度为:提取次数＞提取时间＞提取温度＞料液比;最佳提取工艺为:料液比1∶10(g/mL),提取温度95℃,提取时间3 h,提取次数3次;所制多糖颗粒剂质量评价结果均符合2020版《中国药典》标准.结论 该研究优化了二至丸中多糖类成分的提取工艺,为二至丸的进一步开发利用提供科学依据.

目的 探究巴西苏木素(brazilin,BN)抑制耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)生物膜形成的机制,为开展中医药防治MRSA感染提供新思路.方法 建立MRSAATCC43300菌株生物膜模型,试验分为BN8、16和32 μg/mL组及对照组;通过结晶紫法测定BN对MRSA生物膜的抑制作用;刚果红平板法、硫酸-苯酚法检测BN对细胞间多糖黏附素(polysaccharide intercellular adhesion,PIA)合成的影响;使用real-time PCR(qRT-PCR)方法验证胞间黏附素操纵子icaA和icaD转录水平;分析高通量转录组测序可能存在的生物膜抑制基因;通过qRT-PCR、Western blot方法对相关基因及蛋白加以验证;通过皮下埋植静脉导管建立MRSA生物膜感染小鼠模型进一步验证BN疗效.结果 与对照组相比,不同浓度的BN组均能显著减少MRSA生物膜及PIA生成,其中在最低剂量8 μg/mLBN作用下,MRSA生物膜形成量下降40.17％(P＜0.01)、PIA减少55.56％(P＜0.01);通过qRT-PCR验证不同浓度的BN组均能显著抑制icaA和icaD基因的表达,其中在8 μg/mL浓度下,icaA和icaD基因的表达量分别比对照组降低了59.03％(P＜0.01)、48.33％(P＜0.05);高通量测序显示sarA下调-1.458 log2;qRT-PCR、Western blot结果显示,BN能显著抑制sarA转录及其蛋白表达;通过体内实验显示,BN能有效抑制小鼠体内MRSA生物膜的形成.结论 BN通过抑制SarA的表达,减少PIA的合成,进而干预生物膜的形成.