目的 对贵阳市某学校由产气荚膜梭菌引起发的食源性疾病暴发事件开展流行病学调查和病因食品和病原的溯源分析,探讨全基因组测序新技术在食源性疾病暴发溯源中的应用.方法 采用现场流行病学分析,采集可疑生物样本,食品样本和外环境样本进行常规的实验室病原分离及沙门菌、致泻大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽胞杆菌和产气荚膜梭菌的病原鉴定.对分离的病原菌进行毒素基因检测和全基因组测序溯源分析.结果 22名病例症状以腹痛(95.45％,21/22)、腹泻(95.45％,21/22)为主;流行曲线为点源暴露模式,潜伏期为6-15 h.在5份肛拭子样本、3份粪便样本和1份留样早餐肉末食品样本中分离出产气荚膜梭菌,且均检出肠毒素cpe基因,所有样本均未检出沙门菌、致泻大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和蜡样芽胞杆菌.其中早餐肉末食品样品中经全基因组测序分析对比发现产气荚膜梭菌为3.5×105 CFU/g,经全基因组测序分析比对发现,来源于早餐肉末食品和肛拭子样本的产气荚膜梭菌,其分子分型为ST 139型,菌株均携带cpe毒力基因.结论 通过现场调查和溯源分析,判定产气荚膜梭菌污染早餐肉末是导致此次食源性疾病暴发的原因.全基因组测序新技术在食源性疾病暴发中可起到精准溯源作用.

目的 分析北京市部分零售预包装冷藏膳食微生物污染情况以及细菌群落特征.方法 2022年7月,从北京市零售环节采集65件预包装冷藏膳食,采用食品微生物检验国家标准方法分别对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、蜡样芽孢杆菌进行计数,对沙门菌、单核细胞增生李斯特菌和致泻大肠埃希菌进行分离培养,使用宏基因组测序技术对食品中细菌群落进行注释.结果 2件样品大肠埃希菌计数＞10 CFU/g,7件样品蜡样芽孢杆菌计数＞103 CFU/g,所有样品金黄色葡萄球菌计数均＜10 CFU/g.5件样品中分离出单核细胞增生李斯特菌,所有样品中均未分离出沙门菌和致泻大肠埃希菌.使用宏基因组测序注释124个门,621个科,2 315个属,11 631个物种,发现两类预包装冷藏膳食中大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特菌和蜡样芽孢杆菌的相对丰度分别排在物种层面的第3、23、7、121位和第8、5、13和287位.结论 北京市零售预包装冷藏膳食存在致病菌污染,单核细胞增生李斯特菌是微生物控制的重点,传统的培养方法可能低估致病菌的污染状况,结合宏基因组测序技术可以更全面的评估微生物污染状况.

目的 分析被生食蔬菜模拟污染的米饭样本中蜡样芽胞杆菌(Be)和呕吐毒素基因(ces)的分布状况,为Be食物中毒科学防控提供基础数据.方法 采集生食蔬菜样本50件,每件样本用0.85％生理盐水盥洗后污染"新煮熟米饭",置于30 ℃、70％RH培养箱中放置24h.对生食蔬菜和"污染米饭"进行Be的定量计数、荧光PCR检测和数字PCR检测.对基于不同采集地点、不同蔬菜类型分组的生食蔬菜样本和及被其污染的"污染米饭"的各项检出率指标进行统计学分析.结果 生食蔬菜样本中Be检出率为80.00％(40/50),ces基因和Bac16s RNA基因检出率分别为0(0/50)和10.00％(5/50);"污染米饭"样本Be检出率为94.00％(47/50),ces基因和Bacl 6s RNA基因检出率分别为14.00％(7/50)和90.00％(45/50).采集自农贸市场和农户土地的2组生食蔬菜中Be检出率差异有统计学意义(x2=11.063,P=0.000 88校正),被上述2组生食蔬菜类污染的"污染米饭"Bacl6s RNA基因检出率和ces基因检出率差异均有统计学意义(x2=3.926,P=0.047 5校正;x2=5.444,P=0.019 6校正).7件"污染米饭"基于荧光PCR检测 ces基因阳性,Ct值介于24.12～37.73,数字PCR结果介于6.8 copes/μL～6.2×106 copes/μL.结论 被生食蔬菜模拟污染的米饭样本可具有导致Be食物中毒风险的病原学特征.

为发挥微生物资源在地理标志特色农产品品牌维护中的作用,采用高通量测序技术分析天津市西青区沙窝萝卜根际细菌多样性和群落结构,通过纯培养根际土壤细菌对樱桃萝卜果实质量与黄酮、多酚、维生素C、可溶性糖含量的影响评估根际微生物与沙窝萝卜品质的关系.结果表明沙窝萝卜根际土壤样本中的细菌主要来自5门9属,其中假单胞菌属(Pseudomonas)、芽胞杆菌属(Bacillus)、糖单胞分泌菌属(Saccharimonad-ales)为核心细菌群落.通过纯培养共获得39株可培养细菌菌株.经过筛选,获得7株具有固氮、解磷或产生长素综合水平较高且具有促生功能的菌株,包括菌株J3、J5、H11、X3、X6、X10、X13.根据16S rRNA基因序列鉴定这些菌株为奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)、嗜虫假单胞菌(Pseudomonas entomophila)、巨大芽胞杆菌(Bacillus megaterium)、蜡状芽胞杆菌(B.cereus)、惠州芽胞杆菌(B.huizhouensis)、地形变形杆菌(P.terrae)和粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens).盆栽试验结果表明,施用7株菌株可以促进樱桃萝卜生长或改善果实品质.其中,菌株H11、J5、X13可分别提高樱桃萝卜果实重量47％、45％和42％;菌株H11和J5可提高樱桃萝卜黄酮含量47％和40％,菌株J5和X6可提高樱桃萝卜多酚含量70％和67％;菌株X6对果实中维生素C含量影响较大,较对照组提高了近3倍,达(24.60±5.07)mg/100 g,菌株H11处理后果实中可溶性糖含量较对照组提高了2.7倍.研究结果表明,挖掘沙窝萝卜根际土壤微生物资源有助于利用细菌群落制定有效和可持续的作物田间管理策略.

目的 了解淮安市婴幼儿食品中蜡样芽胞杆菌污染现状及其对药物敏感、主要毒力基因携带情况.方法 2022～2023年抽取淮安市七个县区的婴幼儿奶粉及婴幼儿辅助食品共218批,根据GB4789.14-2014《食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验》蜡样芽胞杆菌平板计数法(第一法)进行检测,并进行药物敏感性试验,采用荧光定量PCR对检出的蜡样芽胞杆菌进行溶血性(hblC)基因、非溶血性基因(nheB)、呕吐毒素基因(ces)检测.结果 218批婴幼儿食品中蜡样芽胞杆菌检出39批次,检出率达17.89％.在23种药物敏感性试验中,蜡样芽胞杆菌对庆大霉素、阿米卡星、替考拉宁、万古霉素、氯霉素、利奈唑胺、呋喃妥因、利福平、左氧氟沙星、莫西沙星、诺氟沙星敏感率100％,对环丙沙星、米诺环素、四环素、红霉素、克林霉素、莫匹罗星高浓度、复方新诺明、苯唑西林敏感率分别为97.44％、92.31％、89.74％、82.05％、38.46％、23.08％、20.51％、5.13％,对达托霉素非敏感,对头孢洛林、氨苄西林、青霉素全部耐药.溶血性hblC基因携带率高达100％,非溶血性基因nheB携带率为58.97％,本次试验未检出呕吐毒素基因ces.结论 婴幼儿食品蜡样芽孢杆菌检出率较高且检出菌中携带至少一种毒力基因的概率高达100％.对头孢洛林、氨苄西林、青霉素全部耐药,对达托霉素、苯唑西林等药物敏感性差,可为临床用药方案提供指导.

目的 了解辽宁省2021-2022年食品中蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)污染状况、携带的毒力因子及药物敏感性的特征.方法 对辽宁省2021-2022年分离自15个监测点4大样品种类共620份样品,应用GB4789.14-2014进行分离鉴定蜡样芽胞杆菌,并用PCR方法进行菌群特异性基因groEL和gyrB及11种毒力基因检测;采用微量肉汤稀释法检测菌株对抗生素的敏感性.结果 79株蜡样芽胞杆菌都检出了蜡样芽胞杆菌毒力基因,占比较大的分别是非溶血性的肠毒素nheC、nheA和nheB,检出率分别是100.0％(79/79)、93.3％(74/79)和83.5％(66/79),肠毒素entFM基因检出率98.7％(78/79).79株餐饮食品中蜡样芽胞杆菌携带19种毒力基因模式,基因模式中Ⅸ和ⅩⅦ比例最多占到16.5％(13/79).79株蜡样芽胞杆菌对氨苄西林、青霉素耐药率均为100.0％,对氯霉素、庆大霉素耐药率均为0;对其他6种抗菌药物的耐药率分别为:复方磺胺甲恶唑65.8％(52/79)、亚胺培南10.1％(8/79)、红霉素73.4％(58/79)、克林霉素60.8％(48/79)、环丙沙星75.9％(60/79)、四环素耐药率70.9％(56/79).结论 辽宁省餐饮食品存在蜡样芽胞杆菌污染,分离株至少携带4种以上毒力基因,约100％的菌株对氨苄西林、青霉素具有耐药性,对氯霉素、庆大霉素抗菌药物敏感性高,应加强主动监测,及时针对性的防控干预,为日后的溯源研究提供理论依据.

目的 早产儿蜡样芽孢杆菌败血症病例报告,为临床提供参考.方法 分析枣庄市妇幼保健院2019年7月11日(病例1)、2022年6月17日(病例2)收治的2例发生蜡样芽孢杆菌败血症的早产儿,其中病例1发生经外周静脉穿刺中心静脉置管(PICC)相关的血流感染、败血症、休克、化脓性脑膜炎,病例2为败血症;分析对比两个病例的置管、临床表现、感染后实验室检查[包括血常规、C-反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、脑脊液常规、血培养等].结果 与病例2相比,病例1感染蔓延迅速、病情变化快、全身症状重,其血常规、CRP、PCT、脑脊液、血气均迅速提示异常.结论 中心静脉置管引起的早产儿蜡样芽孢杆菌败血症,感染进展更迅速,全身症状显著,有效抗菌药物治疗也难挽回死亡结局.

目的 了解重庆市高层建筑二次供水微生物污染状况、优势菌株及致病菌耐药状况、毒力基因及亲缘关系分析.方法 2020-2021年采集重庆市152栋楼层超过18层、楼龄在5年以上的二次供水样本152份,进行细菌分离鉴定、药敏实验及全基因组测序以及病毒核酸检测.结果 152份水样中56份无细菌生长,67份1种细菌生长,23份2种细菌生长,5份3种细菌生长,共分离获得菌株128株.检出率居于前3位的微生物是芽孢杆菌属(25.0％,32/128)、假单胞菌属(18.0％,23/128)、不动杆菌属(7.8％,10/128).分离率较高的致病菌/条件致病菌有:蜡样芽孢杆菌10株,苏云金芽孢杆菌6株,琼氏不动杆菌6株,产碱假单胞菌6株,溶血葡萄球菌4株,藤黄微球菌、偶发分枝杆菌、铜绿假单胞菌各3株,少动鞘氨醇单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌等均有检出.铜绿假单胞菌对8种抗生素耐药、蜡样/苏云金芽孢杆菌对p-内酰胺类抗生素均耐药;诺如病毒、轮状病毒、新型冠状病毒3种病毒核酸检测均为阴性;全基因测序构建系统进化树显示,2株分离自二次供水的苏云金芽胞杆菌进化亲缘关系与致病株97-27等更接近.结论 重庆市高层建筑二次供水存在芽孢杆菌属、假单胞菌属、不动杆菌属等致病菌污染,影响高层建筑居民健康.

目的 了解广东省广州市白云区网络外卖食品安全风险,为完善广州市外卖食品安全保障体系提供科学依据.方法 2018-2021年在广州市白云区采集174份网络外卖食品,依据《食品安全国家标准食品微生物学检验》(GB 4789)对样品中菌落总数、大肠埃希菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特菌、蜡样芽胞杆菌、副溶血性弧菌进行培养和鉴定.结果 2018-2021年监测样品总体不合格率为20.1％(35/174),其中菌落总数和大肠埃希菌不合格率较高,不同年度的不合格率及不同类别食品的不合格率差异具有统计学意义(P＜0.05).单因素分析发现不同室外湿度、不同食品中心温度样品的合格率组间差异具有统计学意义(P＜0.05).多因素Logistic回归分析发现,食物中心温度越高(OR=0.917,95％CI:0.876～0.960),食品不合格率越低;对不同品种的外卖食品进行组间比较发现,以米饭加菜类为参照组,凉拌菜类(OR=0.010,95％CI:0.001～0.159)、寿司手卷类(OR=0.041,95％CI:0.002～0.771)的不合格率更低(P＜0.05).结论 广州市白云区的网络外卖食品存在一定程度的细菌污染,建议市场监管部门加强对网络外卖食品的监督管理,规范餐饮行业的操作流程,提高管理水平.

目的 了解广元市食品中食源性致病菌污染状况,确定危害因素的分布和可能来源,为开展食品安全风险评估预警及食源性疾病防控提供依据.方法 根据《四川省食品安全风险监测工作手册》,2013-2021年在广元市范围内随机采集食品样品,并进行常见食源性致病菌检测.使用SPSS 24.0软件进行数据分析,率的比较采用x2检验或Fisher确切概率法,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果2013-2021年广元市共监测18大类1 470份食品样品,其中11类117份样品检出致病菌,总检出率7.96％;各类食品中以粮食制品检出率最高(47.50％),其次为豆制品(19.05％)和桶装饮用水(14.00％);共检出8种125株致病菌,以铜绿假单胞菌(14.00％)检出率最高,其次为蜡样芽胞杆菌(10.24％)和克罗诺杆菌属(9.68％).结论 广元市市售食品中存在一定程度的食源性致病菌污染,应加强监测和监管力度,以减少食源性疾病的发生.