目的:研究不同剂量N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)溶液对小鼠视网膜神经节细胞(RGCs)的损伤作用，并检测新型长链非编码RNA(lncRNA)Tsix在小鼠视网膜兴奋性毒性模型中的表达水平及其对视网膜和RGCs的保护作用。方法:选取7～8周龄C57B6/J小鼠105只，采用随机数表法将小鼠随机分为正常对照组、2 mmol/L NMDA组、10 mmol/L NMDA组、20 mmol/L NMDA组和40 mmol/L NMDA组，每组21只。正常对照组小鼠右眼玻璃体腔内注入1 μl氯化钠溶液，不同剂量NMDA组分别注射相应剂量的NMDA溶液各1 μl。1周后，分别采用光相干断层扫描(OCT)、苏木精-伊红染色、视网膜铺片和免疫荧光染色法分析不同剂量NMDA组视网膜各层厚度、神经节细胞层(GCL)细胞数量和RGCs数量。采用RNAscope原位杂交技术检测不同剂量NMDA组GCL中lncRNA Tsix的表达。采用实时荧光定量PCR技术检测不同剂量NMDA组 Tsix基因的转录本水平。 结果:OCT结果显示，2、10、20和40 mmol/L NMDA组视网膜全层厚度分别为(255.00±6.63)、(252.40±6.41)、(248.67±6.20)和(229.11±10.37)μm，较正常对照组的(269.60±20.01)μm明显变薄，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。苏木精-伊红染色结果显示，正常对照组小鼠GCL细胞排列均匀、紧密，呈单层，细胞核大而圆，NMDA注射后细胞出现体积不均和空泡，有核固缩现象。各剂量NMDA组GCL细胞数量随NMDA剂量的增加而显著降低，与正常对照组相比差异均有统计学意义(均 P<0.05)。当NMDA浓度增至20 mmol/L时，GCL的细胞数量减少至正常对照组的一半。视网膜铺片结果提示，β3-微管蛋白阳性RGCs细胞数量随NMDA剂量的增加显著降低，与正常对照组比较差异均有统计学意义(均 P<0.05)；10 mmol/L NMDA组RGCs数量减少至正常对照组的一半。RNAscope结果显示，lncRNA Tsix主要在GCL细胞的细胞质中表达，且随着NMDA剂量的增加，表达lncRNA Tsix的阳性细胞率显著降低，各组总体比较差异有统计学意义( F＝13.670， P<0.01)。实时荧光定量PCR结果验证Tsix随NMDA剂量的增加表达趋势与RNAscope结果一致。 结论:NMDA对视网膜厚度和RGCs的损伤呈剂量依赖性，小鼠视网膜lncRNA Tsix的表达主要集中在GCL细胞的细胞质，且转录本水平随着NMDA剂量的增加而降低，对RGCs发挥保护作用。

视网膜缺血再灌注损伤（RIRI）是糖尿病视网膜病变、青光眼、视网膜中央动静脉阻塞等多种缺血性视网膜疾病的重要病理生理基础。目前关于RIRI的发病机制研究主要有氧化应激、细胞凋亡、细胞坏死性凋亡、血管损伤、炎症反应等几种学说。针对上述RIRI发病机制，国内外学者研究提出很多治疗RIRI的方法，包括抗自由基损伤、抗谷氨酸兴奋性毒性、抗凋亡、抗坏死性凋亡、保护紧密连接、保护内皮细胞、抗炎症反应等。尽管目前有很多针对RIRI的药物研究，但对于RIRI的药物干预时机尚不明确，确定最为有效的治疗时间窗可能起到事半功倍的效果，也将对眼科相关疾病的临床治疗起到至关重要的指导作用。

目的:分析和验证N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）诱导的视网膜兴奋性毒性大鼠模型中经5-甲基胞嘧啶（m5C）甲基化修饰的转录本的差异性表达。方法:7~ 8周龄雄性Sprague Dawley大鼠65只，随机分为正常对照组、NMDA组。NMDA组大鼠右眼（模型眼）玻璃体腔注射浓度为50.0 mmol/L的NMDA 3 μl，正常对照组大鼠右眼玻璃体腔注射等体积生理盐水。建模后7 d，采用视觉诱发电位检测大鼠视神经传导功能；苏木精-伊红染色观察大鼠视网膜整体结构，检测视网膜各层厚度以及视网膜神经节细胞层的细胞数量；视网膜铺片免疫荧光染色检测β3微管蛋白免疫荧光染色阳性细胞个数。收集正常对照组、NMDA组大鼠视网膜，提取总RNA，进行高通量m5C修饰RNA测序，并进行生物信息学分析；实时定量聚合酶链反应检测视网膜中 SLFN3、 PLXNB3、 CD36、 HIC2 mRNA相对表达量。组间比较行非配对 t检验。 结果:正常对照组、NMDA组P1波潜伏期分别为（117.86±6.48）、（148.46±3.78） ms，振幅分别为（42.57±2.41）、（8.68±0.63）μV；与正常对照组比较，NMDA组潜伏期延长，振幅显著下降，差异均有统计学意义（ P<0.001）。正常对照组大鼠视网膜神经节细胞（RGC）排列均匀，细胞核大而圆；NMDA组大鼠视网膜RGC体积萎缩，数量减少，细胞核固缩。正常对照组、NMDA组视网膜总厚度分别为（207.51±12.76）、（187.51±12.54）μm；β3微管蛋白阳性细胞数分别为（79.86±6.56）、（29.36±2.16）个。与正常对照组比较，NMDA组视网膜总厚度、β3微管蛋白阳性细胞数均降低，差异有统计学意义（ P<0.01）。与正常对照组比较，NMDA组筛选出差异表达m5C mRNA 576个，其中上调、下调基因分别为230、346个。生物信息分析结果显示，与正常对照组比较，NMDA组表达上调的m5C mRNA主要参与感知力、细胞-细胞黏附等生物过程，主要富集于细胞因子-细胞因子受体的相互作用、神经活性配体-受体相互作用通路中；表达下调的m5C mRNA参与的生物过程主要包括G蛋白偶联受体信号传导途径、细胞通信等，主要富集于原发性免疫缺陷通路、神经活性配体-受体相互作用等通路中。实时定量聚合酶链反应检测结果显示，相对于正常对照组，NMDA组大鼠视网膜中 SLFN3、 PLXNB3 mRNA相对表达量明显升高， CD36、 HIC2 mRNA相对表达量明显降低，差异均有统计学意义（ P<0.05）。 结论:NMDA诱导的视网膜兴奋性毒性大鼠模型中，经m5C修饰的视网膜转录组存在异常表达。

目的:观察不同浓度氯喹对N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）损伤模型小鼠RGC的保护作用及可能调控机制。方法:健康雄性C57/BL6小鼠54只，随机分为氯喹低浓度组、氯喹高浓度组、PBS对照组，每组均为18只。氯喹低浓度组、氯喹高浓度组小鼠分别按体重10、100 mg/kg剂量腹腔注射氯喹；PBS组小鼠腹腔注射等体积PBS。腹腔注射1次/d，连续2d后，氯喹低浓度组、氯喹高浓度组小鼠左眼玻璃体腔注射5 nmol/L NMDA，对侧眼注射等体积PBS。建模后7d，视网膜铺片RGC染色，计数RGC存活数目；建模后9、10d，分别行视动反应和ERG检查；建模后11 d，行视网膜免疫荧光染色检测各组小鼠视网膜胶质纤维酸性蛋白（GFAP）荧光表达和实时荧光定量PCR （RT-PCR）检测各组小鼠视网膜GFAP、TNF-α、IL-6 mRNA表达。各组间RGC密度、视敏度、光负性反应（PhNR）波振幅比较采用单因素方差分析。结果:建模后7d，与PBS对照组小鼠RGC密度比较，氯喹低浓度组显著升高，差异有统计学意义（ F=54.41， P<0.01）；氯喹高浓度组降低，但差异无统计学意义（ F=1.18， P>0.05）。氯喹低浓度组小鼠视敏度、PhNR波振幅均高于PBS对照组，差异有统计学意义（ F=9.10、17.60， P<0.05、<0.01 ）。氯喹低浓度组小鼠视网膜GFAP绿色荧光表达明显少于PBS对照组、氯喹高浓度组，差异有统计学意义（ F=23.66， P<0.05 ）。低浓度氯喹组小鼠视网膜GFAP （ F=110.20）、IL-6 （ F=167.60）、TNF-α （ F=17.78）mRNA表达较高浓度氯喹组、PBS对照组显著下降，差异有统计学意义（ P<0.010、<0.001、<0.010）。 结论:低浓度氯喹对NMDA损伤所致RGC丢失有保护作用，其作用机制可能与抑制胶质细胞活化与炎症反应有关；高浓度氯喹会加重RGC凋亡。

目的:探究大鼠视网膜中对N-甲基-D天冬氨酸(NMDA)敏感的无长突细胞(AC)亚型.方法:H-E染色观察NMDA损伤后视网膜组织病理变化,免疫荧光染色观察大鼠视网膜中神经节细胞标志物(Brn3a)、AC标志物(syntaxin)阳性细胞数量变化;在NMDA致AC损伤的剂量-效应变化关系和时间-效应变化关系的研究中用免疫荧光染色检测大鼠视网膜中GABA能AC标志物(GAD65/67)、甘氨酸能AC标志物(GlyT1)、胆碱能AC标志物(ChAT)、多巴胺能AC标志物(TH)、AⅡ AC标志物(PV)阳性细胞的形态和数目变化;利用碘化丙啶(PI)和cleaved casapse-3 染色确定死亡的AC亚型.结果:NMDA可损伤视网膜节细胞层(GCL)中的神经节细胞和移位的AC以及内核层(INL)中的AC.在NMDA致AC损伤的剂量-效应关系变化中,所有AC均随着NMDA剂量的增加而显著减少,且在 100 nmol NMDA中未见胞体位于INL中的胆碱能AC和多巴胺能AC(DAC)的胞体;在NMDA致AC损伤的时间-效应关系变化中,INL中的GAD65/67+、GlyT1+、ChAT+、TH+细胞的数量均在损伤后6 h开始减少,GCL中的GAD65/67+细胞、视网膜中GAD65/67+细胞总数以及PV+细胞均在损伤后12 h开始减少,且均随着NMDA损伤时间的推移而减少.结论:视网膜GABA能AC和甘氨酸能AC均在NMDA作用下出现损伤,其中以INL中的胆碱能AC和DAC对NMDA损伤敏感.

目的:研究转基因小鼠Thy1-YFP在视神经钳夹(ONC)模型和谷氨酸兴奋性毒性(NMDA)模型中YFP阳性视网膜神经节细胞(YFP+RGCs)的存活率与总体RGCs(RBPMS+RGCs)的存活率差异,以期为Thy1-YFP小鼠在视神经退行性病变中的进一步研究提供实验数据支持.方法:8周龄Thy1-YFP小鼠(雌雄不限)共20只,采用随机数字表法将小鼠随机分为正常组、ONC模型组和NMDA模型组.正常组小鼠进行左右眼对照;模型组小鼠均采用单眼造模,对侧眼为对照眼.其中,ONC小鼠于钳夹后7 d取材,NMDA小鼠于NMDA玻璃体腔注射后24 h取材.取材后,通过全视网膜铺片荧光染色和激光共聚焦拍照的方式获取RGCs信息,利用Image J计数YFP+RGCs和总体RBPMS+RGCs.统计分析ONC模型和NMDA模型中YFP+RGCs的存活率与总体RBPMS+RGCs的存活率差异,存活率差异以实验眼与对照眼的YFP+RGCs(或RBPMS+RGCs)的密度比值计算.结果:Thy1-YFP转基因小鼠视网膜上YFP+RGCs和RBPMS+RGCs的平均密度左右眼一致,具有可比性,其中YFP+RGCs约占总RGCs的0.19％.在ONC模型中,与对照眼相比,ONC眼的YFP+RGCs与RBPMS+RGCs的密度都出现了大幅度下降.YFP+RGCs的平均存活率为(59.4±8.2)％,而RBPMS+RGCs为(33.0±1.7)％,差异达26.4％(P＜0.001).在NMDA模型中,与对照眼相比,NMDA注射眼的YFP+RGCs与RBPMS+RGCs的密度亦都出现了大幅度下降.YFP+RGCs的存活率为(46.1±6.0)％,而RBPMS+RGCs为(32.4±3.5)％,差异达13.7％(P＜0.01).结论:转基因小鼠ONC模型与NMDA模型表明YFP+RGCs存活率并不能良好地反映总RGCs的存活率,说明Thy1-YFP小鼠的RGCs并不能代表总体RGCs,存在一定的RGCs亚类特异性.本研究结果为Thy1-YFP小鼠在视神经退行性病变中的研究提供了数据支持,进一步加深了研究者对于Thy1-YFP转基因小鼠的认识,为将来的研究提供了方向和借鉴.

糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是全球职业活跃个体实质性视力损害的主要原因,已经成为导致工作人群不可逆性视力损害的最常见眼病之一.DR早期病变的准确识别及精准干预,对阻断或延缓其病程发展具有重要意义.近年的研究表明,DR神经损伤要先于视网膜微血管病变发生,具有暗适应延迟、对比敏感度及色调辨别力下降等一系列特征性临床表现,是DR早期的关键事件,与细胞凋亡、胶质细胞增生、氧化应激、炎症、谷氨酸兴奋性毒性及神经营养因子失衡等因素密切相关.本文对DR神经损伤及其相关因素的研究进展作一综述,以期为DR防治的研究提供新思路.

目的:探讨红景天苷(Sal)对视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡的抑制作用.方法:实验研究.36只C57BL6J小鼠随机分为空白组、模型对照组、不同浓度Sal实验组,每组6只,均以右眼为实验眼.空白组仅注射0.9％PBS溶液,模型对照组和实验组玻璃体腔注射N-甲基-D-天(门)冬氨酸(NMDA)1.5μl建立RGCs损伤模型;建模前48 h,模型对照组注射1.5μl 0.9％ PBS溶液,实验组玻璃体腔注射不同浓度Sal(0.1、0.4、2、8 mmol/L,1.5μl).建模5d后制备视网膜标本,观察视网膜RGCs存活及凋亡情况,Western Blot法检测视网膜中Caspase-3、Caspase-8蛋白的表达.数据采用单因素方差分析.结果:HE染色显示空白组视网膜RGCs无变化,模型对照组RGCs显著减少,不同浓度Sal实验组RGCs细胞核染色数目较模型对照组逐渐增加,并呈浓度依赖性;经视网膜平铺片测定RGCs存活情况,发现空白组RGCs正常存活,模型对照组仅少量RGCs存活,不同浓度Sal组RGCs存活率较模型对照组提高,各组小鼠RGCs阳性细胞数比较差异有统计学意义(F=212.0,P＜ 0.001).同时,8 mmol/L浓度的Sal实验组Caspase-3、Caspase-8蛋白表达明显低于模型对照组,差异有统计学意义(F=168.3,P＜0.001).结论:Sal可以抑制NMDA介导的RGCs凋亡,对RGCs损伤有保护作用.

目的 研究黄芪甲苷对人视网膜神经节细胞RGC-5增殖、凋亡的影响及其机制.方法 将黄芪甲苷(0、25、50、100μmol/L)与50 mmol/L葡萄糖共处理RGC-5细胞,标记为高糖组、高糖+黄芪甲苷1组、高糖+黄芪甲苷2组、高糖+黄芪甲苷3组;运用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞活力;流式细胞术检测各组细胞凋亡;Western印迹检测各组细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3、磷酸化(p)-氨基端激酶(JNK)、JNK的蛋白表达.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷氨酸(Glu)含量.结果 与正常组相比,高糖组RGC-5细胞增殖显著降低,细胞凋亡显著升高,Caspase-3蛋白表达显著升高,氧化水平显著升高,兴奋性毒性显著升高,p-JNK蛋白表达显著升高(P<0.05);与高糖组相比,高糖+黄芪甲苷1、2、3组细胞凋亡显著降低,Caspase-3蛋白表达显著降低,氧化水平显著降低,兴奋性毒性显著降低,p-JNK蛋白表达显著降低(P<0.05);与高糖+黄芪甲苷1组相比,高糖+黄芪甲苷2、3组细胞凋亡显著降低,Caspase-3蛋白表达显著降低,氧化水平显著降低,兴奋性毒性显著降低,p-JNK蛋白表达显著降低(P<0.05).结论 黄芪甲苷可通过对高糖诱导RGC-5细胞的增殖促进、凋亡抑制、抗氧化能力增强、兴奋性毒性减弱的作用,保护人视网膜神经节细胞免受损伤,其机制可能与黄芪甲苷失活JNK信号通路有关.

大量研究表明枸杞对视网膜血管病变具有保护作用.枸杞中含有多种活性成分,其中的主要物质枸杞多糖具有抗氧化、抗炎、抗兴奋性毒性和抗凋亡的活性.该文主要综述了枸杞多糖对视网膜血管病变的保护作用和机制,为进一步研究和扩展枸杞对视网膜血管疾病的治疗提供了理论基础.最后对枸杞作用于视网膜血管疾病在将来的研究方向进行了展望.