目的:探讨基于甲基丙烯酸酐化明胶（GelMA）仿生微环境与悬滴法三维培养小鼠毛乳头细胞（DPC）制备仿生毛乳头球的生物活性及其在裸鼠中的毛发诱导功能。方法:采用实验研究方法。采用酶消化法获取雄性5~6周龄C57BL/6J小鼠触须毛的DPC以及1 d龄C57BL/6J小鼠皮肤角质形成细胞（KC），经免疫荧光法鉴定前者第3代细胞稳定表达DPC标志物神经细胞黏附分子、碱性磷酸酶（ALP）、β连环蛋白及α平滑肌肌动蛋白，后者原代细胞稳定表达KC标志物角蛋白15。取第8代DPC，用GelMA重新悬浮并接种至Transwell孔板插件底面，光交联后倒置培养，于光学显微镜下观察培养0（即刻）、3 d GelMA悬滴中DPC聚集情况（聚集成球即仿生毛乳头球），采用活/死染色试剂盒检测培养3 d仿生毛乳头球中细胞活性。将传统二维培养的原代DPC、第8代DPC以及按前述方法制备的仿生毛乳头球分别设为原代DPC组、第8代DPC组、仿生毛乳头球组，利用高通量测序技术平台对每组培养3 d的3个样本中DPC进行转录组测序，利用基迪奥生物信息云工具平台（OmicShare Tools）对转录组数据进行主成分分析、Pearson相似性分析、差异表达基因筛选，利用时间序列趋势分析软件对差异表达基因进行表达模式聚类分析，利用基迪奥生物信息云工具平台对具有特定表达模式的差异表达基因进行京都基因与基因组百科全书（KEGG）和基因本体论（GO）富集分析。同前进行细胞分组，采用随机数字表法从差异表达基因中抽取性别决定区Y框蛋白8（ SOX8）、基质金属蛋白酶9（ MMP- 9）、26型胶原纤维α1（ COL26A1）、无翅型MMTV整合位点家族成员6（ Wnt6），采用实时荧光定量反转录PCR（RT-PCR）法验证差异表达基因mRNA表达情况与测序结果的一致性（样本数为9）；采用实时荧光定量RT-PCR法检测DPC生物功能标志物成纤维细胞生长因子7（FGF7）、Wnt10a、淋巴样增强因子1（LEF1）、ALP、β连环蛋白、多功能蛋白聚糖、SOX2的mRNA表达情况（样本数为9）。取3只5~6周龄雄性BALB/c裸鼠，分别设为原代DPC组、第8代DPC组、仿生毛乳头球组，将原代DPC、第8代DPC、仿生毛乳头球分别与原代KC以2∶1细胞数比例混合后分别注射至相应组别裸鼠皮下，每只注射6个区域。注射后2周，取注射区域全厚皮，计数再生毛发，行苏木精-伊红染色后观察再生毛囊情况。对数据行单因素方差分析、Tukey检验并进行Bonferroni校正。 结果:培养3 d，DPC在GelMA悬滴中由培养0 d的分散状态聚集成仿生毛乳头球，制备的仿生毛乳头球中细胞活性良好。培养3 d，主成分分析显示，相比于第8代DPC组，原代DPC组、仿生毛乳头球组组内样本间变异程度较低，仿生毛乳头球组与原代DPC组组间样本变异程度最低，3组DPC样本超过90%的基因谱数据变异可由第1个和第2个主要成分来解释；Pearson相似性分析显示，组内样本重复性好，原代DPC组和仿生毛乳头球组样本间的相关系数为0.84~0.95，原代DPC组和第8代DPC组样本间的相关系数为0.72~0.87；3组DPC间差异表达基因分析筛选出642个组间交集差异表达基因，对其进行表达模式聚类显示有2种基因表达模式有显著趋势（ P<0.05），分别为第8代DPC组基因表达显著低于原代DPC组/仿生毛乳头球组、第8代DPC组基因表达显著高于原代DPC组/仿生毛乳头球组，共包含411个差异表达基因；KEGG富集分析显示这411个差异表达基因在Wnt信号通路以及磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B信号通路显著富集（ P<0.05），GO富集分析表明细胞外基质、经典Wnt信号通路、细胞分化等GO术语被显著富集（ P<0.05）。与原代DPC组、仿生毛乳头球组比较，第8代DPC组细胞基因 SOX8、MMP- 9、COL26A1、Wnt6 mRNA表达量均明显下降（ q=15.950、8.854、11.890、11.050，9.851、5.884、7.418、4.870， P<0.01），与测序数据一致。与原代DPC组、仿生毛乳头球组比较，第8代DPC组细胞生物功能标志物FGF7、Wnt10a、LEF1、ALP、β连环蛋白、多功能蛋白聚糖、SOX2 mRNA表达量均明显下降（ q=11.470、9.795、4.165、9.242、10.970、10.570、8.005，7.472、4.976、3.651、4.784、5.236、6.825、5.214， P<0.05或 P<0.01）。注射后2周，第8代DPC组裸鼠无毛发再生，仿生毛乳头球组与原代DPC组裸鼠再生毛发数量相近（ q=1.852， P>0.05）且均显著高于第8代DPC组（ q=18.980、17.130， P<0.01）；第8代DPC组裸鼠注射区域皮肤仅形成了坏死灶，而仿生毛乳头球组与原代DPC组裸鼠注射区域皮肤均观察到再生毛囊且毛囊横断切面有黑色素沉着。 结论:基于GelMA仿生微环境与悬滴法三维培养小鼠DPC制备仿生毛乳头球的培养模型可一定程度上恢复高传代DPC在裸鼠中的毛发诱导能力，且其生物特性更加类似于原代DPC，可实现DPC的扩增后特性恢复。

目的:观察电针"夹脊"穴对软骨终板 Modic 改变(MC)模型兔软骨细胞外基质(ECM)和炎性反应的影响,探讨电针治疗软骨终板MC的作用机制.方法:将18只雄性新西兰白兔随机分为假手术组、模型组和电针组,每组 6 只.模型组和电针组实验兔基于自身免疫学说采用自体髓核填充法制备MC模型.造模成功后电针组实验兔予电针双侧L5、L6"夹脊"穴干预,疏密波,频率2 Hz/15 Hz,电流强度1 mA,每次20 min,每天1次,连续干预6 d后休息1 d,共干预4周.于造模前后及干预前后观察各组实验兔综合反应评分;于造模后和干预后采用磁共振成像(MRI)观察实验兔椎间盘及软骨终板信号强度;干预后,采用 HE 染色观察实验兔软骨终板的软骨细胞形态,免疫组化法检测实验兔软骨终板血小板反应蛋白解整合素金属肽酶5(ADAMTS5)和聚集蛋白聚糖(Aggrecan)阳性表达,ELISA 法检测实验兔软骨终板炎性因子[白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]含量,Western blot法检测实验兔软骨终板ADAMTS5、Aggrecan、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、IL-1β和TNF-α蛋白表达.结果:与假手术组比较,模型组实验兔综合反应评分降低(P＜0.01);L5/L6 椎间盘及软骨终板下椎体松质骨出现低信号,分界不清;软骨终板的软骨细胞明显增多,细胞肿大而肥厚,细胞核皱缩、坏死,聚集排列;软骨终板ADAMTS5阳性表达及IL-1β、TNF-α含量升高(P＜0.01),Aggrecan阳性表达降低(P＜0.01);软骨终板 ADAMTS5、MMP-13、IL-1β和 TNF-α蛋白表达升高(P＜0.01),Aggrecan 蛋白表达降低(P＜0.01).与模型组比较,电针组实验兔综合反应评分升高(P＜0.01);L5/L6 椎间盘及软骨终板下椎体松质骨信号增强;软骨终板的软骨细胞减少,细胞核轻度皱缩,散在分布;软骨终板ADAMTS5阳性表达及IL-1β和TNF-α含量降低(P＜0.05,P＜0.01),Aggrecan阳性表达升高(P＜0.01);软骨终板ADAMTS5、MMP-13、IL-1β和TNF-α蛋白表达降低(P＜0.05,P＜0.01),Aggrecan蛋白表达升高(P＜0.05).结论:电针"夹脊"穴能延缓软骨终板MC,其机制可能与抑制软骨细胞ECM降解和炎性因子分泌、修复变性的软骨终板有关.

目的 探讨降气平喘汤对哮喘大鼠气道重塑,解整合素金属蛋白酶 33(a disintegrin and metalloprotease 33,ADAM33)、E26转录因子-1(E26 transformation-specific,ETS-1)表达的影响及干预机制.方法 60 只雄性SD大鼠中随机选取 15 只为正常组.余下大鼠造模,造模成功大鼠随机分为模型组、西药组、中药组,每组15只.除正常组外,其余组大鼠用卵蛋白(ovalbumin,OVA)致敏和激发构建哮喘大鼠模型.实验第54天灌胃干预各组大鼠,中药组予降气平喘汤(生药量8.06 g/kg),西药组予孟鲁司特钠(2.6 mg/kg),正常组和模型组予生理盐水,给药剂量均为 10 mL/kg.HE染色观察肺组织病理变化,ELISA检测肺组织白细胞介素-1β(interleukin 1 beta,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)、转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)水平,Western blot检测肺组织ADAM33、ETS-1 蛋白表达水平,real-time PCR检测肺组织ADAM33 mRNA的表达水平.结果 与正常组比较,模型组出现哮喘典型的气道重塑病理变化,肺组织中IL-1β、IL-6、TGF-β1、ADAM33 蛋白、ETS-1 蛋白、ADAM33 mRNA表达水平明显升高(P＜0.05);与模型组比较,中药组、西药组肺组织病理变化明显改善,肺组织中IL-1β、IL-6、TGF-β1、ADAM33 蛋白、ETS-1 蛋白、ADAM33 mRNA表达水平明显降低(P＜0.05).结论 降气平喘汤可通过降低IL-1β、IL-6、TGF-β1 炎症因子分泌、降低ADAM33、ETS-1 的表达,改善哮喘大鼠的气道重塑,实现对哮喘的干预作用.

目的 探讨西红花苷对椎间盘退变的治疗效果和作用机制.方法 将收集的人类髓核组织Pfirrmann II级样本分成两部分,一部分提取髓核细胞并培养,根据培养基的成分,将髓核细胞分为4 组,包括空白对照组、肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激组、西红花苷低浓度治疗组(10 μg/mL)以及西红花苷高浓度治疗组(40 μg/mL).培养24h后,采用实时定量PCR检测4 组髓核细胞中炎症因子和代谢标志物的mRNA表达水平.培养0、15、30 min和48h后,采用Western blotting 检测 4 组髓核细胞中炎症因子、代谢标志物、凋亡标志物以及核因子活化B细胞κ轻链增强子(NF-κB)信号通路关键蛋白 p-P65 的蛋白表达水平.采用双荧光素酶报告基因检测西红花苷对NF-κB信号通路的作用效果.另一部分髓核组织进行离体培养,根据培养基不同,分为空白对照组、TNF-α刺激组以及西红花苷治疗组(40 μg/mL).使用免疫组化检测各组髓核组织中炎症因子以及细胞代谢标物的蛋白表达水平.结果 实时定量 PCR检测与Western blotting 检测结果显示,与空白对照组相比,TNF-α刺激组髓核细胞的炎症反应及细胞外基质降解加剧,促炎因子诱导型一氧化氮合酶、环氧化酶-2、去整合素和金属蛋白酶-5及基质金属蛋白酶 13 的基因转录与蛋白表达水平明显升高(P<0.05),而软骨可聚蛋白多糖与II型胶原蛋白的基因转录与蛋白表达水平明显下降(P<0.05).同时Western blotting 检测结果也显示,与空白对照组相比,TNF-α刺激组髓核细胞的抗凋亡因子B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)的蛋白表达水平明显下降(P<0.001),而促凋亡因子中的Bcl-2相关X蛋白(P=0.004)和活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶的蛋白表达水平明显升高(P= 0.005).而在10 μg/mL和 40 μg/mL的西红花苷治疗组中上述由 TNF-α 所诱导的变化均被明显抑制(P<0.05).此外,在NF-κB信号通路的实验中,与空白对照组相比,TNF-α刺激组中p-P65 的蛋白表达水平明显升高(P<0.05),而在10 μg/mL和 40 μg/mL的西红花苷治疗组中p-P65 的蛋白表达水平均明显下降(P<0.05),并且在治疗时长 15、30 min的西红花苷组中p-P65 的蛋白表达水平均明显下降(P<0.05).同时在双荧光素酶报告基因检测中,相较于空白组,TNF-α 刺激组的荧光强度增加(P<0.001),而经过西红花苷治疗后,荧光强度明显下降(P= 0.006).结论 西红花苷可抑制髓核细胞的炎症反应、细胞外基质降解及细胞凋亡,NF-κB信号通路在西红花苷抑制椎间盘退变中发挥重要作用.

目的 探讨血清解整合素金属蛋白酶 15(disintegrin and metalloproteinase 15,ADAM15)和基质金属蛋白酶 2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)表达水平与急性肺栓塞患者疾病严重程度的关系及其诊断价值.方法 收集重庆市开州区人民医院 2020 年 1 月～2021 年 11 月期间入院的 116 例急性肺栓塞患者,根据疾病严重程度将其分为中高危组(n=62)、低危组(n=54),同期选取体检健康者 64 例为对照组.检测血清ADAM15,MMP-2,C反应蛋白和D-二聚体水平;Pearson法分析ADAM15,MMP-2 与C反应蛋白和D-二聚体的相关性;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清ADAM15和MMP-2水平对急性肺栓塞危险分层的价值;多因素Logistic回归分析影响急性肺栓塞患者疾病严重程度的因素.结果 中高危组血清ADAM15(718.75±146.43 pg/ml),MMP-2(3.62±1.04 μg/L),C反应蛋白(36.45±7.04 mg/L)和D-二聚体(5.18±1.34 mg/L)高于低危组(543.72±110.95 pg/ml,2.04±0.62 μg/L,9.97±3.04 mg/L,2.06±0.47 mg/L)和对照组(412.54±85.14 pg/ml,1.10±0.36 μg/L,1.68±0.44 mg/L,0.32±0.08 mg/L),差异均有统计学意义(F=108.644～1 029.59,均P＜0.05).ADAM15 和MMP-2 及二者联合诊断低危急性肺栓塞的曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.797,0.753和0.859.ADAM15 和MMP-2及二者联合诊断中高危急性肺栓塞的AUC分别为0.851,0.756和0.878.急性肺栓塞患者血清ADAM15与MMP-2呈正相关(r=0.520,P＜0.05),二者与C反应蛋白、D-二聚体均呈正相关(r=0.482,0.474;0.479,0.486,均P＜0.05).ADAM15(OR=2.335,P=0.002),MMP-2(OR=2.249,P=0.006)是急性肺栓塞患者疾病发展为中高危的独立危险因素.结论 血清ADAM15 和MMP-2 可有效诊断不同疾病严重程度急性肺栓塞,可作为急性肺栓塞危险分层的辅助指标.

目的 评估B超检查胎儿颈部半透明层厚度(NT)联合血清胎盘生长因子(PIGF)、游离-β亚基-促绒毛膜性腺激素(free β-hCG)及解整合素-金属蛋白酶12(ADAM12)对唐氏综合征(DS)的预测价值.方法 选取2014年4月-2016年4月到榆林市第一医院接受孕前筛查的1 600例孕妇为研究对象,于孕11～14周时B超监测NT,于孕15 ～21周时进行血清PIGF、free β-hCG及ADAM12的检测,分析单项检测和联合检测对唐氏综合征的预测效能.结果 单独的NT筛查和血清DS筛查对DS的预测差异没有统计学意义(P＞0.05),系列联合检测的灵敏度显著低于平行联合检测(x2=11.579,P＜0.05),特异度和阴性预测值显著高于平行联合检测(x2 =5.987,7.858,P＜0.05).联合检测的ROC曲线下面积显著高于单项检测(P＜0.05).结论 孕早期采用超声检测NT,联合孕中期血清检测进行DS筛查,与单项筛查相比,灵敏度高,阳性预测值高,可在临床推广应用.

目的:研究宫腔粘连(IUAs)组织中Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)通路功能改变与细胞因子分泌、胶原代谢特征的相关性.方法:选择在我院就诊的IUAs患者作为IUAs组,同期因不孕行宫腔镜检查且经病理证实子宫内膜正常的患者作为对照组.测定IUAs组粘连组织及对照组正常子宫内膜组织中TLR4/NF-κB通路分子、胶原代谢基因的表达水平及细胞因子、胶原代谢标志分子的含量.结果:IUAs粘连组织中TLR4、NF-κB、解整合素金属蛋白酶15(ADAM15)、ADAM17、基质金属蛋白酶9(MMP9)、纤溶酶原激活剂抑制剂-1(PAI-1)的mRNA表达量以及转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad2/3、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、IGF-1受体(IGF-1R)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、骨膜蛋白成骨细胞特异性因子2(Postn)、I型胶原(Col-I)、肌动蛋白-α(α-SMA)的含量明显高于对照组,尿激酶纤溶酶原激活剂(uPA)的mRNA表达量明显低于对照组;TLR4、NF-κB的mRNA表达量与TGF-β1、Smad2/3、IGF-1、IGF-1R、bFGF、Postn、Col-I、α-SMA、ADAM15、ADAM17、MMP9、PAI-1呈正相关,与uPA呈负相关.结论:IUAs组织TLR4/NF-κB通路的过度激活与细胞因子分泌及胶原代谢异常有关.

目的:观察含凝血酶敏感蛋白序列的解整合素-金属蛋白酶-1 (ADAMTS-1) 在酒精性心肌病 (ACM) 大鼠心室肌中的表达变化及其与心室重构的关系.方法:将50只健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组 (n=20) 和ACM组 (n=30).ACM组大鼠第1周每天给予10％酒精随意饮用, 60％酒精灌胃1次 (5 mL/kg);第2周每天给予10％酒精随意饮用, 60％酒精灌胃2次 (10 mL/kg);第3周16周每天给予20％酒精随意饮用, 60％酒精灌胃2次 (15 mL/kg), 第17周6个月每天给予30％酒精随意饮用, 60％酒精灌胃2次 (15 mL/kg).对照组大鼠采用普通水随意饮用, 以同样方式给予普通水灌胃.实验开始前及6个月时超声心动图检测左心室射血分数 (LVEF) 、左心室舒张末期直径 (LVEDD) 和短轴缩短率 (FS).6个月后处死动物, 光镜下观察心肌病理组织学改变;Masson染色检测心肌胶原分布及胶原容积分数 (CVF);TUNEL法检测心肌细胞凋亡.免疫组化法测定心室肌中ADAMTS-1及其底物多配体蛋白聚糖-4 (Syndecan-4) 的蛋白含量.结果:与对照组相比, ACM组大鼠LVEF (P＜0.01) 及FS (P＜0.05) 明显降低, 而LVEDD显著增加 (P＜0.05);心肌细胞肥大, 排列紊乱, 部分心肌细胞脂肪变性;心肌纤维断裂、溶解;心肌间质血管扩张充血, 胞外间隙明显增宽, 纤维组织增生, 炎性细胞浸润;CVF及凋亡指数显著增加 (P＜0.01);ADAMTS-1及Syndecan-4蛋白表达显著上调 (P＜0.05).结论:ADAMTS-1在ACM心肌中表达明显增多, 可能通过水解释放Syndecan-4, 促进ECM重塑、心肌纤维化及细胞凋亡, 参与ACM心室重构过程.

目的:分析胎儿颈部半透明层厚度(NT)超声联合血浆相关蛋白A(PAPP-A)、解整合素-金属蛋白酶12(ADAM12)检测在唐氏综合征(DS)产前筛查的临床价值.方法:选取323名接受早期孕检的孕妇作为研究对象,所有产妇于孕11～14周行B超检查NT,并在孕15～21周行血清PAPP-A、ADAM12检测,比较NT、PAPP-A、ADAM12单项检测及联合检测DS的结果.结果:NT检测结果显示高危孕妇15例,血清PAPP-A检测高危孕妇19例,血清ADAM12检测高危孕妇20例,NT联合血清PAPP-A及ADAM12检测高危孕妇6例,其中NT检测漏诊2例,PAPP-A检测漏诊2例,血清ADAM12检测漏诊1例.NT联合PAPP-A及ADAM12诊断的敏感度、准确度、特异度、阴性预测值、阳性预测值显著高于NT、血清PAPP-A、ADAM12单独检测(P<0.05).NT、血清PAPP-A及ADAM12单独检测及联合检测的ROC曲线下面积分别为0.802、0.729、0.762、0.905,联合检测的ROC曲线面积高于NT、血清PAPP-A及ADAM12单独检测(P<0.05).结论:采用NT联合血清PAPP-A、ADAM12检测产前筛查DS可明显提升其检出率,具有很好的临床应用价值.

去整合素-金属蛋白酶15(ADAM15)是由1号染色体q21.3编码的细胞膜上的Ⅰ型跨膜蛋白.ADAM15参与了多种炎症疾病的发生、发展过程,调控细胞的信号转导及细胞外基质的降解等多种重要的生理活动,在多种肿瘤中呈高表达,且在肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭过程中也发挥重要作用,已成为实体瘤的诊断、预测预后和潜在治疗的新靶点.因其独特的结构和生理功能,ADAM15成为近年来研究的热点,该文就ADAM15在多种肿瘤及相关疾病中的功能和作用机制进行综述,以期为临床研究和治疗提供参考.