目的:探究浙贝母-金银花药对治疗糖尿病足的作用机制。方法:通过TCMSP筛选浙贝母-金银花药对的药物成分，使用Swiss Target Prediction预测药物成分的作用靶点，运用GeneCards获取糖尿病足的疾病靶点，利用Venny 2.1获取交集靶点。使用STRING进行蛋白质间作用网络（PPI）分析并使用Cytoscape构建网络图，利用Metascape进行基因本体（GO）及京都基因和基因组百科全书（KEGG）分析。使用Cytoscape软件构建"药物-靶点-通路"网络图。建立糖尿病足大鼠模型并用浙贝母-金银花药对局部外敷治疗患处，观察治疗效果及检测血清筛选靶点表达。结果:浙贝母-金银花药对中的38个有效成分通过多条通路直接作用于339个疾病靶点治疗糖尿病足，其中木犀草素（Luteolin）、苦叶草素（Picropodophyllin）、天竺葵素（Pelargonidin）、紫鄂贝碱（Ziebeimine）、浙贝乙素（Peiminine）、腺苷（Adenosine）等是核心成分，TP53、EP300、HSP90AA1、CTNNB1、Akt1是至关重要的靶点。基因功能注释分析结果显示，交集基因最可能相关的生物过程主要涉及细胞转录因子结合、细胞对氮化合物反应、激素反应等，细胞组分主要涉及膜筏、质膜筏、小窝等，分子功能主要涉及蛋白激酶活性、磷酸激酶活性、激酶活性等。通路富集分析结果提示浙贝母-金银花药对主要参与PI3K/AKT、HIF-1、EGFR、MAPK等信号通路。浙贝母-金银花药对修复糖尿病足鼠模型的病变部位的效果明显，且血清TP53、EP300、HSP90AA1、CTNNB1、Akt1蛋白表达明显增加。结论:浙贝母-金银花药对治疗糖尿病足的机制是通过调节PI3K/AKT、HIF-1、EGFR、MAPK等信号通路的TP53、EP300、HSP90AA1、CTNNB1、Akt1等疾病靶点，进而调节酶类活性、抗炎等生物过程。

目的 探讨贝母素乙调节Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关的卷曲螺旋激酶(ROCK)信号通路对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)大鼠软骨损伤的影响.方法 以碘乙酸钠(MIA)法制备KOA大鼠模型,随机分为模型组、贝母素乙(3.5 mg/kg)组、贝母素乙(3.5 mg/kg)+LPA(RhoA激活剂,1 mg/kg)组,每组 10 只,另选 10 只大鼠为对照组.机械刺激法和热辐射法检测大鼠膝关节疼痛症状;检测大鼠关节肿胀度、膝关节宽度并以步态评分评测其关节功能;透射电镜检测大鼠膝关节软骨细胞超微结构;TUNEL染色检测大鼠关节软骨细胞凋亡比;酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠血清和关节液促炎因子白细胞介素(IL)-18、单核细胞趋化蛋白 1(MCP-1)水平;免疫印迹检测各组大鼠关节软骨组织凋亡(Cleaved caspase-3、Bax)和RhoA/ROCK通路相关蛋白表达.结果 贝母素乙可降低KOA大鼠关节肿胀度、膝关节宽度、步态评分、软骨细胞凋亡比、血清及关节液IL-18、MCP-1水平、软骨组织Cleaved caspase-3、Bax、RhoA、ROCK1、ROCK1 蛋白表达,升高机械痛阈值、热痛阈值(P<0.05);LPA可减弱贝母素乙对KOA大鼠关节软骨损伤的改善作用.结论 贝母素乙可通过抑制RhoA/ROCK信号激活而抑制KOA大鼠关节炎症反应和关节软骨细胞凋亡,减轻软骨损伤.

目的 研究蒙药藜芦(Veratrum nigrum L.)的化学成分及其细胞毒活性,为阐明蒙药藜芦的药效物质基础提供依据.方法 采用硅胶柱色谱、反相制备高效液相等方法,对蒙药藜芦的醇提取物进行分离纯化,根据其理化性质及波谱技术(1D、2D-NMR、HRMS)对分离的化合物进行结构鉴定;采用CCK-8法测定单体化合物对3种癌细胞系,包括人乳腺癌细胞系(MCF-7)、人肺癌细胞系(A549)、人结直肠腺癌细胞系(HCT-15)的细胞毒活性.结果 从藜芦的三氯甲烷及乙酸乙酯萃取层分离得到7种化合物,分别为:藜芦定(1)、1α,3β-dihydroxy-5α-jervanin-12-en-11-one(2)、贝母素甲(3)、贝母素乙(4)、西贝碱(5)、2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(6)、异东莨菪素(7).细胞毒活性检测结果表明化合物2对HCT-15细胞系有显著的细胞毒活性,化合物4对MCF-7细胞系有中等的细胞毒活性.结论 化合物1首次从内蒙古产藜芦中分离得到,化合物3～6为藜芦属内首次分离得到,化合物2和化合物7首次从该种植物中分离得到;化合物2、4对MCF-7、HCT-15两种细胞系分别具有不同程度的细胞毒活性.

浙贝母是传统"浙八味"药材之一,位列"浙八味"药材之首,可以清热化痰止咳、解毒散结消痈.研究发现浙贝母主要含有生物碱类、黄酮类、萜类及皂苷类、糖类等化学成分,并含挥发性成分,具有镇咳祛痰、平喘、抗炎、抗菌、镇痛、抗氧化、抗癌、抗肿瘤等药理作用.本文在对浙贝母化学成分和药理作用研究总结的基础上,依据质量标志物(quality marker,Q-marker)相关概念,在植物亲缘学及化学成分特有性、化学成分可测性、传统药性、传统药效、不同配方配伍、不同干燥方法、不同产区、入血成分等方面,对浙贝母Q-marker进行预测分析,初步预测贝母素甲、贝母素乙等生物碱类成分,皂苷类,挥发性成分,黄酮类,萜类等成分可作为浙贝母的主要Q-marker.

目的:探究贝母素乙(peiminine)对人结肠腺癌细胞(SW480)活力、迁移和侵袭的抑制作用并探讨其抑制SW480增殖的作用机制.方法:用不同剂量的贝母素乙处理人结肠腺癌细胞SW480和人正常结肠上皮细胞CCD-841CoN,通过CCK-8实验确定贝母素乙抑制SW480活力的最适剂量和最佳作用时间;划痕和Transwell实验检测贝母素乙对SW480迁移与侵袭能力的影响;流式细胞术和Western blot检测贝母素乙对SW480细胞周期及细胞周期相关蛋白表达的影响;构建SW480移植瘤裸鼠模型,在体内分析贝母素乙对SW480活力及细胞周期相关蛋白表达的影响.结果:与对照组相比,当贝母素乙作用浓度为110 mg/L时能够显著抑制SW480细胞活力、迁移和侵袭能力(P<0.01),并诱导SW480细胞周期G1期阻滞,周期相关蛋白细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、CDK4、CDK6、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、p-Rb/Rb、E2F1、E2F3和E2F4的表达水平受到显著抑制(P<0.05);在体内,贝母素乙抑制SW480移植瘤的活力、延长荷瘤裸鼠的生存周期,影响肿瘤组织中CDK2、CDK4、CDK6和cyclin D1的表达.结论:贝母素乙通过下调CDK2、CDK4、CDK6和cyclin D1的表达,引起SW480细胞的G1期阻滞,进而抑制人结肠腺癌细胞SW480增殖.

目的:建立同时测定桔贝合剂中苦杏仁苷、甘草苷、贝母素甲、桔梗皂苷D、黄芩苷和麦冬皂苷D 6个成分含量的一测多评方法.方法:采用Waters T3 C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱;流动相为乙腈-1％乙酸溶液,梯度洗脱;流速为1.0 mL/min;柱温为30℃;蒸发光检散射检测器(ELSD).以甘草苷为内参物,分别建立其他5个成分的相对校正因子,并计算其含量.结果:苦杏仁苷、甘草苷、贝母素甲、桔梗皂苷D、黄芩苷、麦冬皂苷D在各自浓度范围内线性关系良好,10批桔贝合剂中6个成分的一测多评法与外标法的实测值之间无显著性差异,含量分别为 0.116～0.245 mg/mL、0.035～0.048 mg/mL、0.012～0.055 mg/mL、0.086～0.125 mg/mL、0.177～0.432 mg/mL、0.011～0.032 mg/mL.结论:该方法结果准确、重复性好,可用于桔贝合剂的质量控制.

目的 建立软坚散结颗粒制备工艺及其质量标准.方法 优化挥发油包合工艺和颗粒成型工艺,确定颗粒制备工艺.TLC法定性鉴别玄参、浙贝母、莪术、麸炒白术,HPLC法测定哈巴苷、哈巴俄苷、贝母素甲、贝母素乙的含量.结果 最佳包合工艺为挥发油与β-环糊精比例 1∶10,包合时间 120 min,包合温度 45℃;最优成型工艺为按药辅比1∶0.8 混入可溶性淀粉,90%乙醇润湿,制粒.TLC斑点清晰,阴性无干扰.哈巴苷、哈巴俄苷、贝母素甲、贝母素乙在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 4),平均加样回收率 105.63%～110.87%,RSD 2.9%～5.6%.结论 软坚散结颗粒制备工艺稳定可行,并且该制剂质量标准专属性强,重复性好,可用于其质量控制.

目的 探讨贝母素甲(PME)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)小鼠的作用和相关机制.方法 将 80 只小鼠随机分为 4 组(每组 20 只):对照组、PME组、COPD组和治疗组.使用脂多糖联合烟雾诱导小鼠COPD动物模型.通过组织病理学、超微结构、小鼠肺组织湿/干重比值分析 PME 对 COPD 模型鼠结构的影响;ELISA和Western blotting分析PME对肺组织中炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6 和IL-1β表达的影响;二氢乙锭(DHE)染色和 Western blotting分析 PME对肺组织中氧化应激反应的影响;Western blotting分析PME对核因子κB(NF-κB)通路以及核因子 2 相关因子 2(Nrf2)通路相关蛋白表达的影响.结果 与COPD组相比,PME治疗可明显减轻小鼠肺组织的损伤和减少炎症细胞数量,降低肺组织湿/干重比.与对照组相比,COPD组小鼠的肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6 及IL-1β水平明显增加,经PME治疗后小鼠肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6及IL-1β水平明显降低.另外,与对照组相比,COPD组小鼠肺组织中TNF-α和IL-1β水平显著升高,经PME治疗后小鼠肺组织中TNF-α和IL-1β蛋白水平明显下降.免疫组织化学和Western blotting实验显示,与对照组相比,COPD组SOD2 水平明显降低,而PME治疗后能够提高超氧化物歧化酶(SOD)蛋白水平.对肺组织丙二醛(MDA)含量分析发现,与 COPD 组比较,PME 治疗后明显抑制 COPD 小鼠肺组织中 MDA 的产生.Western blotting结果显示,PME治疗后能够阻止肺组织中的NF-κB抑制蛋白(IκBα)磷酸化以及NF-κB p65 向细胞核转移,PME处理后的小鼠肺组织中Nrf2 及其主要下游靶点血红素加氧酶 1(HO-1)的表达明显升高.结论 PME能够抑制COPD小鼠体内的炎症和氧化应激反应,改善脂多糖联合烟雾诱导肺组织损伤,其机制可能与激活Nrf2 通路和抑制NF-κB通路相关.

目的 分析浙贝母提取液在大鼠尿液、粪便中的原型成分及代谢产物.方法 UPLC-Q-TOF-MS 分析采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm);流动相 0.1%甲酸-乙腈,梯度洗脱;体积流量0.4 mL/min;柱温 30℃;电喷雾离子源;正负离子扫描.结果 在大鼠尿液中共检测出化学成分 28 种,其中原型成分 19 种,代谢产物9 种;在大鼠粪便中共检测出化学成分53 种,其中原型成分37 种,代谢产物16 种,去除重复后,共检测出化学成分 66 种,其中原型成分 45 种,代谢产物 21 种;粪便、尿液中共有原型成分 24 种,粪便中独有成分15 种,尿液中独有成分 6 种;粪便、尿液中共有代谢成分 6 种,粪便中独有成分 11 种,尿液中独有成分 4 种.浙贝母主要活性成分贝母素甲、贝母素乙代谢途径包括Ι相代谢(羟基化、氧化脱氢、还原加氢)、Ⅱ相代谢(硫酸化).结论 该方法快速准确,简单可行,可用于解析浙贝母体内过程,阐明其药效物质基础.

目的 利用水提醇沉法优选太白贝母多糖的提取工艺,并研究其抗氧化活性.方法 以提取温度、提取时间、料液比、醇沉浓度和浓缩程度为单因素,以多糖提取率为指标,采用正交试验优选太白贝母多糖的提取工艺,并用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)法测定其抗氧化作用.结果 当料液比为1∶15(g/mL)、温度60 ℃、提取时间30 min、醇沉浓度80％,提取液浓缩至1∶1.5(g/mL)时,太白贝母多糖的得率为9.039‰;贝母多糖对DPPH、ABTS自由基有清除作用.结论 优化后的方法可用于太白贝母多糖的提取;贝母多糖具有一定的抗氧化性.