脂毒性与甲状腺功能减退(甲减)有着密切联系，脂毒性诱导甲减的机制尚处于探索阶段。目前的研究发现，炎性因子可下调甲状腺滤泡上皮细胞碘摄取及激素合成；组织中脱碘酶的表达和活性变化可影响T 4的转化；氧化应激过度激活可损伤甲状腺滤泡上皮细胞特异性蛋白表达。此外，赖氨酸琥珀酰化修饰异常及内质网应激(ERS)激活在脂毒性诱导甲状腺功能损伤中的作用成为研究热点。对脂毒性诱导甲减的机制进行深入研究将为脂毒性致全身损伤提供理论依据。

随着质谱技术、组学技术、抗体技术等鉴定技术的不断发展,翻译后修饰(PTM)在医学领域的研究潜力日益凸显.PTM作为一种新型的化学修饰方式,为科研人员提供了研究疾病的新视角,其中琥珀酰化修饰作为一种备受关注的新型修饰方式,已经引起了越来越多研究者的兴趣.目前,针对琥珀酰化修饰的研究主要集中在一种名为沉默信息调节蛋白5的去琥珀酰化酶上,这种酶在修饰领域中具有重要的作用,且已经对其在心血管领域的作用进行了初步探索.本文将归纳整理琥珀酰化修饰的影响因素、调控作用以及与其他PTM之间的联系,并总结目前在心血管疾病的研究成果,以期深入认识这种修饰的重要作用,为心血管疾病的研究带来新的思考和启示.

目的 应用 6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯(AQC)柱前衍生化技术,建立康复新液中游离氨基酸和总肽的高效液相色谱(HPLC)含量测定方法,并以总肽含量为指标对市售样品进行检测.方法 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Kromasil 100-5 C18 色谱柱);60%乙腈(A)-0.14 mol·L-1 三水合乙酸钠溶液,用磷酸调节pH值至 5.0(B)为流动相,梯度洗脱;柱温:39℃;流速:1.0 mL·min-1,检测波长:248 nm.结果 14 种氨基酸均能达到良好的分离效果;门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、组氨酸、甘氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸和苯丙氨酸分别在 2.0～99.7、3.4～168.5、2.8～139.6、4.0～201.4、4.8～238.1、6.7～336.9、3.3～167.5、9.7～487.3、4.1～202.5、4.4～221.6、5.4～270.5、3.3～166.8、4.8～240.8、4.7～236.6 μg·mL-1 范围内呈现良好的线性关系(r=0.999 5～1.000 0);游离氨基酸的平均加样回收率(n=6)为 86.8%～108.1%,RSD为 2.8%～4.4%,总肽酸水解氨基酸的平均加样回收率(n=6)为 83.2%～102.7%,RSD为 0.1%～3.1%;仪器精密度、重复性、稳定性实验的RSD均小于 5.0%.结论 该方法与现行质量标准的紫外分光光度法比较,二者测定的总氨基酸含量结果基本一致,但前者的专属性、重现性更优;以具有生物活性的总肽为质控指标,针对性更强,可为康复新液的质量评价提供更科学、合理的方法.

目的:本课题组前期发现凋亡诱导因子(apoptosis-inducing factor,AIF)蛋白在非吸烟女性肺腺癌患者中存在第89位赖氨酸残基琥珀酰化修饰水平增高.本课题组拟制备识别AIF第89位赖氨酸残基琥珀酰化修饰的抗体,用于检测AIF在该位点琥珀酰化修饰.方法:利用在线数据库对AIF蛋白的理化性质、跨膜结构、信号肽、蛋白结构及琥珀酰化位点进行生物信息分析.根据AIF氨基酸序列合成包括89位赖氨酸残基(K89)位点的三条多肽,其中两条含AIF K89的多肽赖氨酸残基进行了琥珀酰化修饰.用三条合成的多肽偶联KLH,然后分别免疫家兔,制备特异识别AIF K89位琥珀酰化修饰的抗体.用ELISA、Dot blot、Western blotting和免疫组化对抗体效价和特异性进行检测.结合胶内酶解和高分辨生物质谱技术分析与AIF相互结合的蛋白.结果:生物信息学分析结果显示,AIF K89琥珀酰化修饰促使AIF 79～99氨基酸残基形成的α-螺旋结构发生变化:由一个较长的α-螺旋变成两个间隔短的较短的α-螺旋.合成的两条琥珀酰化修饰多肽和一条非琥珀酰化的多肽免疫家兔均成功获得相应的抗体;ELISA检测免疫血清抗体效价,分别是1∶486 k、1∶162 k和1∶18 k.制备的识别AIF K89琥珀酰化修饰的抗体识别AIF K89琥珀酰化修饰性多肽的效价是识别非琥珀酰化多肽的效价的27倍;抗体Dot blot检测,该抗体识别AIF K89琥珀酰化修饰性多肽的杂交信号强度是识别非琥珀酰化多肽的效价的20倍;Western bloting结果显示AIF琥珀酰化抗体能特异性识别AIF K89琥珀酰化修饰位点.质谱鉴定与AIF结合的蛋白有XIAP/BIRC4、EIF3G和PRELID1等.结论:生物信息分析提示AIF K89琥珀酰化修饰影响AIF蛋白的结构.制备的AIF K89琥珀酰化抗体能特异性识别AIF K89琥珀酰化修饰,为进一步研究AIF琥珀酰化的机制提供了基础.

目的 构建并制备具有固有抗菌黏附性的聚乙二醇(PEG)-聚赖氨酸(PLL)注射型水凝胶,探究其各项性能及在牙周炎治疗中的效果.方法 ε-聚赖氨酸通过酰胺化反应与四臂聚乙二醇琥珀酰亚胺戊二酸酯交联获得水凝胶.通过傅里叶变换红外光谱、扫描电子显微镜等对材料进行表征分析,考察不同配比材料的抗菌性能、生物相容性、凝胶化时间、溶胀性和力学性能,确定最佳配比;评估其黏附强度;体内构建大鼠牙周炎模型,验证PEG-PLL水凝胶在牙周炎中的疗效.结果 成功构建了 PEG-PLL水凝胶,其中当PLL浓度为20 mg/mL时水凝胶具有良好的抗菌性能、力学性能、凝胶化时间及较低的溶胀率,且无明显的细胞毒性,产生约15 kPa的黏附力.动物体内实验证实该水凝胶可有效阻止牙周炎骨缺损的进一步发展,促进骨缺损修复.结论 PEG-PLL水凝胶具有良好的固有抗菌、生物相容性,并有一定的组织黏附性,可促进牙周炎骨缺损的修复.

蛋白质的翻译后修饰是细胞生命活动的基本形式之一,对蛋白质生物功能的发挥具有极为重要的影响,包括细胞的生长、分化、代谢等生命过程.赖氨酸酰化修饰是重要研究内容之一,其广泛参与细胞分化、细胞代谢等重要生理活动,成为生命科学领域研究热点.随着生物质谱的扫描速度、灵敏度、分辨率的不断提高,近几年来许多新的赖氨酸酰化修饰被研究者鉴定.该文总结了琥珀酰化、巴豆酰化、丙二酰化、戊二酰化、2-羟基异丁酰化、β-羟基丁酰化等新型赖氨酸酰化修饰的发现确证、修饰调控酶、底物鉴定和生理病理功能等方面的最新研究进展.

蛋白质的琥珀酰化修饰是一种普遍存在于真核生物和原核生物中的翻译后修饰.修饰的蛋白质遍及细胞膜、细胞质基质、各种细胞器及细胞核等细胞的各个部分,它们参与了细胞内包括糖代谢、三羧酸循环和脂肪酸代谢等各种代谢反应,与生命体的活动息息相关.本文综述了琥珀酰化蛋白质活性变化、修饰位点周围氨基酸的特异性及空间结构的分析、亚细胞分布情况、琥珀酰化与乙酰化之间的相互作用及碳源和生长阶段对蛋白质琥珀酰化水平的影响等内容,以期为后续蛋白质的琥珀酰化科研提供一定的参考.

目的:建立并验证慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠模型,运用代谢组学的方法研究CAG大鼠模型代谢组学特征及生物标志物,探讨胃经穴位与胃之间是否存在一定的相对特异性联系.方法:将32只SD大鼠随机分为空白组和模型组,通过MNNG联合乙醇灌胃、饥饱失常法复制CAG大鼠模型.HE染色观察大鼠胃组织病理学变化,采用1H-NMR检测足三里穴区及胃组织代谢物并分析所得数据.结果:造模结束后,模型组大鼠胃黏膜色苍白,黏膜层变薄,弹性减少,皱襞变平,黏液减少,有散在出血点,HE染色结果可见大量炎性细胞浸润,大量主细胞坏死空泡样变化,大量纤维组织充填,并有诸多集中出血点,腺体结构紊乱减少,固有腺体出现萎缩.与空白组对比,模型组大鼠胃组织共有17个差异性代谢物,其中,乳酸、谷氨酰胺、谷胱甘肽、N-乙酰天门冬氨酸、尿苷二磷酸葡萄糖、肌糖、腺嘌呤核糖核苷酸7个代谢物浓度显著升高,而亮氨酸、牛磺酸、N,N-二甲基甘氨酸、甜菜碱、丝氨酸、磷酸胆碱、乙酰磷酸胆碱、尿嘧啶、尿苷、苯丙氨酸10个代谢物浓度显著降低.模型组大鼠足三里穴区组织中谷氨酰胺、琥珀酸、赖氨酸、富马酸、次黄嘌呤、一磷酸腺苷显著降低,而N-乙酰天门冬氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、磷酸胆碱/甘磷酸胆碱、酪氨酸、苯丙氨酸、黄嘌呤、肌苷显著升高.结论:代谢组学得出CAG模型大鼠足三里穴区与胃组织之间在病理上相互关联,可初步表明胃经穴位与胃之间存在一定的相对特异性联系.

Arthrobacter aurescens TC1和Pseudomonas sp.ADP是目前莠去津降解菌的模式菌株,筛选出Microbacterium sp.HBT4,旨在挖掘这3株不同种属细菌基因组间生物学信息的异同,并预测重要基因.通过Illumina Hiseq 4000测序平台采用DNA小文库制备和测序技术,进行了泛基因组测序,使用相关软件进行基因组组分分析、基因功能注释、基因间变异检测和比较基因组学分析,将分离得到的微杆菌HBT4与模式菌株进行核苷酸组成、共线性及菌株间变异差异分析.得到该菌株基因组大小约为3.53 Mb,预测到菌株HBT4编码基因3397个、重复序列含量为1.33％、非编码RNA 63个,通用数据库基因功能注释共3324个,专用数据库基因功能注释共1149个,通过菌株间差异变异分析发现SNP、Small InDel和水平转移基因,未发现结构变异基因,获得该菌株特有基因中GO注释到的基因在细胞组分、分子功能和生物学进程中的数量和比例,从KEGG代谢通路富集图中发现特有基因编码的二氢硫基赖氨酸残基琥珀酰转移酶位于三羧酸循环中 α-酮戊二酸和琥珀酰辅酶A的代谢通路之间.获得3个菌株核心基因组与非必需基因组比例分布、系统进化树和共线性关系,发现三者之间共有基因家族986个、菌株HBT4特有基因家族1171个.得到的菌株HBT4与两株模式菌株相比,其基因家族之间既有相同之处,又有较大差异.

琥珀酰化修饰是一种重要的蛋白翻译后修饰(post-translational modification,PTM),可通过调控蛋白酶活性和基因表达,参与糖代谢、氨基酸代谢、脂肪酸代谢、酮体合成及活性氧清除等多种生命活动.琥珀酰化修饰水平主要受琥珀酰基供体和琥珀酰基转移酶/去琥珀酰化酶的调控,其异常与包括肿瘤、心脏代谢疾病、肝脏代谢疾病、神经系统疾病等在内的多种疾病的发生发展密切相关.本文拟针对琥珀酰化的基本特点和功能、调控因素及其与疾病的关系作一综述.