目的 通过噬菌体展示技术,从免疫骆驼的外周淋巴血液中获得与RSPO1结合的纳米抗体,纯化后构建RSPO1噬菌体展示文库,并进行免疫淘选.方法 将RSPO1基因与pCMV-Fc载体连接后,构建质粒RSPO1-pCMV-Fc,瞬时转染 HEK-293F 细胞,表达 RSPO1 蛋白;经 Protein A 凝胶柱、HiLoadTM 16/600 SuperdexTM 200pg 柱、Super-dexTM 24 Increase10/300GL柱依次纯化RSPO 1蛋白后,免疫骆驼,收集外周血并分离淋巴细胞;提取细胞RNA,反转录合成cDNA,通过2步巢式PCR扩增VHH片段,克隆至pMECS噬菌粒载体中,构建噬菌体展示文库,经2轮淘选使与RSPO1结合的噬菌体得到聚集后,进行ELISA鉴定并测序.结果 质粒RSPO1-pCMV-Fc经PCR及测序鉴定证明构建正确.表达的RSPO1蛋白相对分子质量约172 000,纯度约为70％;RSPO1噬菌体展示文库库容为1.2× 108cfu,经2轮淘选使噬菌体富集度达到12;共获得19个纳米抗体序列.结论 获得了多样性良好的纳米抗体序列,为了解与RSPO1相关的Wnt信号通路提供了可能.

目的:探讨三酰甘油葡萄糖(TyG)指数和Toll样受体4(Toll-like receptor 4, TLR4)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3, NLRP3)基因单核苷酸多态性对痛风的危险性以及基因与TyG指数交互作用对痛风易感性的影响。方法:选取男性痛风患者315例和同期健康男性体检者499名，通过问卷调查收集研究对象的一般信息，并采集其外周静脉血检测血液生化指标；采用多重连接酶检测反应对NLRP3、TLR4的3个单核苷酸多态性(SNP)位点进行检测，应用 logistic回归分析比较NLRP3、TLR4等位基因与痛风风险之间的相关性；采用广义多因素降维法(GMDR)模型和 logistic回归分型分析SNP与TyG指数与痛风的交互作用。 结果:对吸烟、饮酒等因素进行校正后TyG指数每增加1个标准差痛风的风险增加61.1%。rs10754558、rs10759932和rs7525979的CC基因型为汉族痛风高危险基因型。GMDR结果显示，rs10754558-TyG指数、rs7525979-TyG指数和rs10759932-TyG指数的交互作用模型在对照组和痛风组间的差异均存在统计学意义( P<0.05)，提示所选取的3个SNP基因型与TyG指数之间可能存在交互作用。对所选取的3个SNP基因型与TyG指数进行分层分析，发现在校正年龄、吸烟等因素后，rs10754558位点携带C/C或C/G基因型的高TyG指数者相对携带GG基因型和低TyG指数者痛风风险增加( OR＝2.127, P<0.05)。 结论:rs10754558、rs10759932和rs7525979的CC基因型为汉族痛风高危险基因型，rs10754558与TyG指数之间的相互作用可能增加痛风的发病风险。

目的:通过评估高脂饮食（high-fat diet，HFD）诱导的肥胖相关肾病C57BL/6J小鼠肾周脂肪组织炎症，进一步探讨其可能机制。方法:将12只8~10周龄雄性C57BL/6J小鼠，采用简单随机抽样方法分为正常饲料饮食组（ND组， n=6）和高脂饲料饮食组（HFD组， n=6），喂养14周后，采集血液，剥离双肾，HE、PAS、Masson染色观察肾脏及肾周脂肪的病理改变；实时荧光定量PCR法检测肾周脂肪肿瘤坏死因子α（TNF-α）、M1型巨噬细胞标志物CD11c、白细胞介素（IL）-1β、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、IL-10、转化生长因子-β1、M2型巨噬细胞标志物CD206、纤维连接蛋白1 mRNA的表达量；免疫组化法检测肾脏及肾周脂肪巨噬细胞标志物F4/80、CD68及白细胞共同抗原（leukocyte common antigen，LCA）的表达。 结果:喂养14周后，HFD组体重明显高于ND组[（35.83±1.19）g比（24.06±0.37）g， P<0.05]。HFD组小鼠肾周脂肪细胞增生肥大，并伴有肾小球增生肥大、系膜基质增生扩张及肾间质纤维化等病理学改变（均 P<0.05），随机血糖、血脂、血肌酐及尿素氮水平明显高于ND组（均 P<0.05）。肾周脂肪组织M1型巨噬细胞相关TNF-α、CD11c、IL-1β、MCP-1的mRNA相对表达量明显高于ND组（均 P<0.05），且免疫组化显示HFD组肾周脂肪组织F4/80、CD68及LCA的表达亦显著高于ND组（均 P<0.05），表明HFD组肾周脂肪巨噬细胞和炎细胞显著多于ND组。Pearson相关分析结果显示，肾周脂肪平均面积与肾周脂肪组织内巨噬细胞数量、肾小球截面积等多个形态学指标以及尿素氮等肾功能指标呈正相关（均 P<0.05）。 结论:高脂饮食诱导的肥胖相关肾病C57BL/6J小鼠模型建模成功，且肾周脂肪组织确实存在明显的炎性反应，巨噬细胞发生明显极化，主要向M1型巨噬细胞促炎方向极化。

目的:基因诊断1例β基因簇大片段纯合缺失病例并分析其临床特征，为临床遗传咨询提供依据。方法:应用毛细管电泳和常规地中海贫血基因检测技术检测广东惠州地区71 001份外周血样本，针对可疑β基因簇大片段缺失样本加用裂缝聚合酶链反应(Gap polymerase chain reaction，Gap-PCR)技术和多重连接探针扩增技术分析其基因分型，用统计学R软件比较分析血液学特征。结果:检出89例β基因簇中国型 Gγ( Aγδβ) 0缺失基因分型(检出率为0.13%)，其中中国型 Gγ( Aγδβ) 0缺失杂合子70例，中国型 Gγ( Aγδβ) 0杂合缺失复合α地中海贫血18例， Gγ( Aγδβ) 0缺失纯合子1例。建立13 683例正常对照组，与杂合子携带者的6组血液学参数相比较，箱线图显示差异均具有统计学意义( P<0.05)。诊断出的1例 Gγ( Aγδβ) 0缺失纯合子临床表型为轻度贫血，血红蛋白电泳结果显示HbF值100%。 结论:惠州地区人群β基因簇大片段缺失基因型的携带率高，血液学HbF值明显升高，应重视筛查，选择性行罕见型检测，防止漏诊或误诊，指导临床遗传咨询和产前诊断。

目的:探讨瘦素预处理对机械通气肺损伤(VILI)大鼠NLRC4炎症小体表达的影响。方法:健康雄性SD大鼠36只，体质量200～250 g，6～8周龄，采用随机数字表法分为3组：对照组、VILI模型组和瘦素组，每组12只。对照组麻醉后气管插管并保留自主呼吸；VILI模型组连接小动物呼吸机行机械通气，潮气量40 ml/kg，容量控制通气4 h；瘦素组气管插管后腹腔注射外源性重组瘦素50 μg/kg，应用40 ml/kg潮气量行呼吸机机械通气4 h。机械通气结束时采集股动脉血样，进行动脉血气分析，并记录PaO 2。处死大鼠，收集剩余血液和支气管肺泡灌洗液(BALF)，离心后用酶联免疫吸附试验检测炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)和IL-18的浓度。取右肺上叶组织行苏木素-伊红染色，光镜下观察病理学结果，并行病理损伤评分；取右肺中叶组织计算湿/干重比值；取右肺下叶组织采用蛋白质印迹法检测caspase-1、NLRC4的表达水平。 结果:与对照组相比，VILI模型组和瘦素组肺损伤评分、湿/干重比值、血清中IL-18和IL-1β、BALF中IL-18和IL-1β、肺组织中caspase-1和NLRC4表达明显升高( P值均<0.01)，PaO 2明显下降( P<0.01)；与VILI模型组比较，瘦素组肺损伤评分、湿/干重比值、血清中IL-18和IL-1β、BALF中IL-18和IL-1β、肺组织中caspase-1和NLRC4蛋白表达量降低( P值均<0.05)，PaO 2升高( P<0.05)。 结论:外源性瘦素预处理可明显减轻大鼠VILI，其机制可能与抑制NLRC4炎症小体活化、减轻肺组织炎症反应有关。

目的:探讨氟暴露对大鼠肾脏损伤及沉默信息调节因子3（SIRT3）-叉头蛋白O3a（FOXO3a）-张力蛋白同源物诱导的假定激酶1（PINK1）/E3泛素连接酶（PARKIN）通路的影响。方法:选取4周龄SD大鼠（清洁级，体质量100 ~ 150 g）24只，按随机数字表法分为3组：对照组、低氟组、高氟组，每组8只（雌雄各半）。对照组自由饮用自来水（氟离子浓度< 0.5 mg/L），低、高氟组分别自由饮用自来水和氟化钠配制的溶液（氟离子浓度分别为5.0、50.0 mg/L），周期为180 d。实验结束后，观察并记录大鼠氟斑牙形成情况，采集大鼠股骨、尿液、血液，检测骨氟、尿氟、血氟含量，并检测肾脏功能相关指标（血清尿酸、肌酐、尿素氮含量）；光镜下观察苏木素-伊红（HE）染色肾组织形态学变化；实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法和蛋白质印迹法分别检测肾脏SIRT3、FOXO3a、PINK1、PARKIN、微管相关蛋白1轻链3（LC3）、自噬受体蛋白（P62）mRNA和蛋白表达水平。结果:低、高氟组大鼠分别有7、1只检出Ⅰ度氟斑牙，0、7只检出Ⅱ度氟斑牙。与对照组比较，低、高氟组大鼠骨氟（μg/g：1.18 ± 0.06、2.16 ± 0.07比0.52 ± 0.05）、尿氟（mg/L：4.43 ± 0.11、7.46 ± 0.09比2.58 ± 0.14）、血氟含量（μg/ml：0.77 ± 0.06、1.68 ± 0.10比0.52 ± 0.08），血清尿酸（μg/ml：61.01 ± 4.17、103.92 ± 5.43比28.68 ± 2.91）、肌酐（μg/ml：74.82 ± 9.61、132.05 ± 5.35比22.38 ± 4.11）、尿素氮含量（μg/ml：13.36 ± 1.27、14.55 ± 0.34比0.29 ± 0.07）均较高（均 P < 0.05）。光镜下，对照组肾组织表现为肾小管和肾小球细胞排列紧密且整齐，细胞形态规则，轮廓完整清晰；低氟组与对照组相似，未见明显异常；高氟组可见肾小球结构异常，出现萎缩现象，部分区域肾小管表现为上皮细胞水肿和细胞间界限不清。qRT-PCR检测结果显示，与对照组比较，低、高氟组SIRT3（0.82 ± 0.03、0.58 ± 0.02比1.00 ± 0.08）和P62 mRNA表达水平（0.75 ± 0.07、0.28 ± 0.09比1.00 ± 0.07）均较低（均 P < 0.05）；FOXO3a（1.35 ± 0.04、3.01 ± 0.23比1.00 ± 0.08），PINK1（1.58 ± 0.09、3.28 ± 0.09比1.00 ± 0.07），PARKIN（1.51 ± 0.04、1.67 ± 0.10比1.00 ± 0.05）和LC3 mRNA表达水平（1.74 ± 0.07、2.38 ± 0.18比1.00 ± 0.08）均较高（均 P < 0.05）。蛋白质印迹法检测结果显示，与对照组比较，低、高氟组SIRT3（0.91 ± 0.01、0.55 ± 0.03比1.00 ± 0.01）和P62蛋白表达水平（0.94 ± 0.27、0.66 ± 0.38比1.00 ± 0.19）均较低（均 P < 0.05）；FOXO3a（1.14 ± 0.03、1.22 ± 0.05比1.00 ± 0.02），PINK1（1.46 ± 0.03、1.56 ± 0.03比1.00 ± 0.05），PARKIN（1.98 ± 0.02、2.33 ± 0.11比1.00 ± 0.06）和LC3蛋白表达水平（4.10 ± 0.58、4.93 ± 0.33比1.00 ± 0.13）均较高（均 P < 0.05）。 结论:氟暴露可致大鼠肾组织损伤，SIRT3、P62表达水平下调，FOXO3a、PINK1、PARKIN及LC3表达水平上调。

患者男性，57岁，主因"间断喘憋2日，加重1 h"由家属轮椅送至急诊，家属代诉患者2日前无明显诱因出现喘憋、胸闷，伴咳嗽、咯痰，痰色白，大汗出，无发热恶寒，无心慌胸闷，持续2 h后自行缓解，故未至医院就诊及详查。就诊本院急诊当天晨起再次出现喘憋、胸闷，1 h前症状明显加重，喘憋、呼吸困难、大汗出，胸闷，面色发绀，遂就诊于本院急诊科。就诊时症见：患者喘憋明显，呼吸困难，喘促，气短，胸闷，伴咳嗽、咯痰，痰色白，大汗出，无发热恶寒，无心慌胸闷。心电监护示BP 118/89 mmHg，HR 147次/min，R 32~36次/min，SPO 2 70%（鼻导管吸氧状态下）；查体：神志清，精神差，营养中等，端坐呼吸，面色及口唇发绀，双肺满布湿啰音，未闻及明显干鸣音，心律齐，各瓣膜听诊区未闻及明显病理性杂音。腹软，全腹无压痛及反跳痛，麦氏点阴性，墨菲征阴性。四肢肌张力正常，肌力检查不配合。双下肢无水肿。既往高血压病、高脂血症、糖尿病病史，否认家族遗传病史，否认药敏史。急诊接诊后给予紧急处置：立即给予储氧面罩吸氧、心电监护，急查血气分析、心电图、血常规、生化、血凝、心肌损伤标志物等检查，完善床边胸片检查等。辅助检查结果回报：血气分析示pH 6.999、PaCO 2 108.1 mmHg、PaO 2 129 mmHg、Lac 3.7 mmol/L、BE -9.7mmol/L、HCO 3- 26.0 mmol/L；血常规示WBC 14.06×10 9/L、HB 168 g/L、PLT 299×10 9/L、NE% 61.9%、CRP 1.69 mg/L；生化GLU 23.15 mmol/L、K 3.40 mmol/L、Na 137.6 mmol/L、Cl 104.98 mmol/L、UREA 6.33 mmol/L、CREA 102.0 umol/L、ALT 41.2 U/L、AST 41.0 U/L、ALB 40.4 g/L、TBIL 8.2 umol/L、DBIL 1.6 μmol/L；血凝示PT 9.8 s、APTT 26.4 s、TT 14.6 S、D-D 285 μg/L、INR 0.89、FIB 3.46 g/L、FDP 1.88 mg/L；心肌损伤标志物示cTnI <0.01 ng/mL、Myo <56.5 ng/mL、CK-MB <11.75 ng/mL；心衰示NT-proBNP 359.0 pg/mL；床边胸片示两肺间质性改变并感染可能、主动脉硬化、心影增大；心电图示室性心动过速；尿常规：潜血+，蛋白质3+，葡萄糖3+。患者仍觉喘憋、呼吸困难，面色发绀，持续低氧状态，给予储氧面罩15 L/min吸氧仍未见明显改善，改为无创呼吸机辅助通气（FiO 2 100%），患者SpO 2始终未改善，波动于70%左右，患者病情迅速加重转为昏迷，紧急给予气管插管术连接"840"有创呼吸机辅助通气，气管插管过程顺利，术中吸出大量痰液，夹有淡红色血液，患者SPO 2上升至100%，心率为96次/min，自行恢复窦性心律。结合患者症状、体征及辅助检查，排除急性心肌梗死、急性肺栓塞、重症肺炎等可能。同时请示上级医师。

目的:总结危重症患者采用自制体外膜肺氧合（ECMO）系统辅助治疗的策略与方法。方法:采用观察性研究方法，选择2020年12月至2021年12月在阜外华中心血管病医院进行ECMO辅助支持的56例心血管危重症患者作为研究对象，根据患者临床情况并结合家属意愿选择使用常规ECMO套包（常规组）或自制ECMO套包（自制组）。常规组采用一次性使用ECMO套包进行装机、预充排气等操作；自制组采用心脏手术体外循环中常规使用的一次性耗材（包括离心泵头、膜肺、管道、连接头等）自制ECMO系统，针对患者情况进行个体化的管路型号选择和长短控制。记录两组ECMO系统装机准备时间、辅助时间、辅助方式、总体预充量、ECMO运转2 h后游离血红蛋白（FHb）水平和上机费用，以及置入ECMO后48 h内血流动力学、动脉血气分析和血液指标的变化；同时观察两组患者ECMO辅助治疗过程中ECMO系统相关不良事件发生情况。结果:56例患者均纳入最终分析，常规组与自制组各28例，均成功完成ECMO辅助治疗。常规组与自制组ECMO系统装机准备时间、辅助时间、辅助方式、ECMO运转2 h后FHb水平差异均无统计学意义〔装机准备时间（min）：13±4比15±5，辅助时间（h）：287±34比276±42，静脉-动脉ECMO（例）：22比24，静脉-静脉ECMO（例）：6比4，ECMO运转2 h后FHb（mg/L）：226±67比253±78，均 P>0.05〕；但自制组总体预充量和上机费用明显少于常规组〔总体预充量（mL）：420±25比650±10，上机费用（万元）：3.8±0.4比6.7±0.3，均 P<0.01〕。两组患者上机后48 h内血流动力学、动脉血气分析和血液指标均处于相对稳定状态，且两组间大部分指标差异无统计学意义；自制组上机后12、24、48 h血红蛋白（Hb）水平明显高于常规组（g/L：12 h为128.5±23.7比117.5±24.3，24 h为121.3±31.3比109.6±33.2，48 h为118.5±20.1比105.2±25.7，均 P<0.05）。两组患者在ECMO辅助治疗过程中均未出现膜肺渗漏、接头脱落、大量溶血等ECMO系统相关不良事件。 结论:临床针对危重症患者实施ECMO时，可以利用心脏手术体外循环中常规使用的一次性耗材自制ECMO系统进行心肺功能辅助支持，从而节省患者的医疗费用，缓解临床上对一次性ECMO套包的依赖。

目的:明确宣白承气汤对脓毒症小鼠肺和肠道损伤以及肠道功能的作用，分析其对脓毒症小鼠肠道菌群的影响。方法:健康清洁级C57雄性小鼠36只，随机（随机数字法）分为三组，每组12只，分别为对照组、模型组和宣白承气汤治疗组。通过腹腔注射细菌脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）5 mg/kg制备脓毒症模型，造模前24 h、造模后0.5 h及造模后12 h宣白承气汤灌胃给药，造模后24 h采集肺脏、肠道以及血液标本。采用实时荧光定量PCR测定肺部和肠道组织炎症因子白介素1β（interleukin-1β, IL-1β）、IL-6、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）和单核细胞趋化蛋白1（monocyte chemoattractant protein-1, MCP-1）含量，通过组织学染色评估肺部和肠道结构损伤和改变，通过特殊染色评价肠道黏蛋白表达，分别采用免疫组化和Western Blot分析肠道上皮紧密连接蛋白的表达，最后使用鲎试剂盒检测各组小鼠血浆中内毒素含量，并提取小鼠粪便DNA，通过菌群16S rDNA荧光定量PCR方法检测脓毒症小鼠肠道菌群变化。三组间的计量资料比较，采用单因素方差分析。结果:（1）宣白承气汤能够降低脓毒症小鼠肺部炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α和MCP-1的表达（均 P<0.05），减轻肺部炎症损伤；（2）与模型组相比，宣白承气汤治疗组小鼠肠道炎性损伤有所缓解，肠道炎症因子表达明显下调（均 P<0.05），肠道黏蛋白和上皮紧密连接蛋白表达增加，肠道屏障功能改善；（3）宣白承气汤减轻脓毒症小鼠循环血液中内毒素的含量（ P<0.05），并促进脓毒症小鼠肠道中有益菌阿克曼菌的生长，减少肠球菌属的表达（均 P<0.05）。 结论:宣白承气汤可显著改善脓毒症小鼠肺部和肠道炎症损伤，调节肠道上皮屏障和肠道菌群，改善肠道功能。

[目的]探究健肝消脂方(Jian'gan Xiaozhi Decoction,JGXZ)对非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)模型小鼠的药效作用,并从人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因诱导的激酶1(PTEN induced putative kinase 1,PINK 1)/E3泛素-蛋白连接酶(Parkin)信号通路介导的线粒体自噬角度探究其作用机制.[方法]60只C57BL/6J小鼠适应性喂养1周后,随机分为6组,包括正常组(Control),模型组(NAFLD),多烯磷脂酰胆碱胶囊组(polyene phosphatidyl choline,PPC)和JGXZ低、中、高剂量组.除正常组外,另外5组均给予高脂饮食.治疗过程持续8周,每周统计小鼠体质量,8周后采集小鼠血液,分离血清,测定丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)水平;小鼠肝脏称重后固定,取同一部位进行苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)与油红O染色,观察肝组织病理学变化;采用试剂盒检测肝组织中的甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、白细胞介素-1 β(interleukin-1 β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平,以及谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,以评估JGXZ对NAFLD小鼠炎症反应及氧化应激的影响;免疫印迹法检测电压依赖性阴离子通道蛋白1(voltage dependent anion channel 1,VDAC1)、线粒体外膜转位酶20(translocase of outer mitochondrial membrane 20,TOM20)、细胞色素 C 氧化酶Ⅳ亚型(cytochrome c oxidase subunit Ⅳ,COXⅣ)、PINK 1、Parkin、苄氯素1(Beclin1)、微管相关蛋白轻链3(light chain3,LC3)以及选择性自噬接头蛋白P62(prostacyclin 62,P62)蛋白表达,以评估JGXZ对NAFLD模型小鼠线粒体自噬的影响.[结果]与模型组比较,JGXZ干预明显提升NAFLD模型小鼠体质量,降低肝指数,缓解NAFLD模型小鼠肝组织病变,降低TC、TG、ALT、AST水平,降低IL-1β、IL-6、TNF-α及MDA的水平,提高了 GSH-Px、SOD活性,下调 VDAC1、TOM20、COXⅣ 以及P62蛋白表达,上调 PINK 1、Parkin、Beclin1、LC3 蛋白表达.[结论]JGXZ 可以通过促进PINK1/Parkin信号通路,介导线粒体自噬激活,缓解NAFLD小鼠肝损伤.