目的:探讨面部皮肤微针注射重组Ⅲ型人源化胶原蛋白对皮肤年轻化的效果。方法:2021年7—12月，四川大学华西口腔医院医疗美容科招募志愿者25例，男1例、女24例；年龄30~58(38±9)岁，体质指数(22.23±1.36)kg/m 2。面部微针注射重组Ⅲ型人源化胶原蛋白，分别在治疗前及结束治疗后1、2、3个月采集图像，用VISIA图像分析系统进行对比分析，对受试者满意度进行评估，对治疗后并发症发生情况进行记录。 结果:VISIA图像分析治疗前及治疗后1个月各维度分值，斑点(32.06±6.92)比(27.59±7.69)分、红色区(32.79±11.80)比(27.74±9.49)分、毛孔(17.66±9.79)比(14.60±7.07)分、棕色斑(43.61±11.93)比(37.59±16.22)分，疗程结束后均低于治疗前，差异均有统计学意义( F＝3.44、4.21、7.47、7.11，均 P<0.05)；疗程结束后1个月，患者满意21例，占84%；结束后3个月，患者满意20例，占80%；无严重不良反应。 结论:面部注射重组Ⅲ型人源化胶原蛋白对皮肤年轻化有较好效果，受试者满意度较高、安全性较高，值得临床应用。

目的 探究脂肪源性间充质干细胞外泌体(hADSC-Exo)在大鼠全层皮肤缺损创面愈合中的作用机制.方法 分离并鉴定hADSC与hADSC-Exo.将人真皮微血管内皮细胞(hMECs)分为对照组、200μg/L重组人表皮生长因子处理的阳性对照组与100μg/mL hADSC-Exo处理的hADSC-Exo组,通过CCK-8、划痕实验、血管形成实验,检测hMECs增殖、迁移与血管形成能力.60只大鼠随机分为对照组、阳性对照组、hADSC组与hADSC-Exo组,每组15只.所有大鼠于背部制备全层皮肤缺损创面,每组分别于大鼠尾静脉注射200μL 1×PBS、100μg/kg重组人表皮生长因子、200μL约含1×106个hADSC的1×PBS、200μL含200μg hADSC-Exo的1×PBS.每组随机保留3只大鼠,分别于0、3、7、10、12 d拍摄创面图像并计算创面面积.每组其余大鼠随机分为4组,每组3只,分别于3、7、10、12 d采集未愈合创面组织并制成石蜡切片,HE、Masson染色观察创面愈合情况,免疫组化检测炎症与创面愈合相关蛋白表达情况.结果 细胞实验结果显示,与对照组相比,阳性对照组、hADSC-Exo组细胞增殖活性、细胞迁移率升高(P<0.05),管腔长度与分支点数量增加(P<0.05);与阳性对照组相比,hADSC-Exo组细胞增殖活性、细胞迁移率进一步升高(P<0.05),管腔长度与分支点数量进一步增加(P<0.05).动物试验结果显示,与对照组相比,阳性对照组、hADSC组与hADSC-Exo组皮肤创面愈合率、CD206、Ⅰ型胶原蛋白(Collagen Ⅰ)、Collagen Ⅲ、水通道蛋白3(AQP3)表达水平升高(P<0.05),肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、CD68、角蛋白1(KRT1)表达水平与Collagen Ⅰ/Collagen Ⅲ比例下降(P<0.05),新生表皮组织更为完整,厚度增加,表皮下可见成纤维细胞增殖,创面新生胶原沉积明显增加;与阳性对照组相比,hADSC组与hADSC-Exo组CD206、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、AQP3表达水平进一步升高(P<0.05),TNF-α、IL-6、CD68、KRT1表达水平进一步下降(P<0.05).结论 hADSC-Exo能够增强hMECs增殖、迁移、血管生成能力,降低创面炎症反应水平,促进创面细胞增殖、胶原重塑,加速创面愈合,具有成为皮肤创伤治疗药物的潜力.

[背景]胶原蛋白广泛应用于日用化工及生物医药中,相比传统方法,基因工程方法制备胶原蛋白具有避免病毒隐患、产量高等优点,逐步受到广泛关注.[目的]获得Ⅲ型类人胶原蛋白基因,实现大肠杆菌中的异源表达.[方法]以人Ⅲ胶原蛋白al链为模板,(Gly-X-Y)为最小研究单位,优选亲水性氨基酸,设计目标基因kit,构建重组大肠杆菌(Escherichia coli)pET-28a(+)-kit/BL21(DE3),并对其结构进行表征.[结果]类人胶原蛋白基因kit成功在大肠杆菌体系中表达,表达量约为0.53 g/L,7L发酵罐上补料发酵后其最大表达量提高至3.02 g/L,亲和层析纯化类人胶原蛋白纯度约为91％,对其进行N端测序、氨基酸分析、质谱分析及圆二色谱分析,确定类人胶原蛋白成功表达.[结论]类人胶原蛋白的成功表达为未来规模化制备及其在日用化工及生物医药行业的应用奠定了基础.

目的:探讨硫氧还蛋白-互作蛋白(TXNIP)在心肌纤维化发生过程中的表达变化及其潜在调节机制.方法:通过皮下泵入血管紧张素(Ang)Ⅱ建立心肌纤维化小鼠模型,Western blot检测TXNIP在心肌纤维化小鼠和假手术组小鼠心肌组织中的表达差异.分离和培养新生大鼠的心肌成纤维细胞(CFs),外源性使用人重组AngⅡ和(或)losartan处理CFs,用Westernblot和细胞免疫荧光检测TXNIP表达的变化.构建TXNIP的小干扰RNA(siRNA),利用细胞划痕实验、结晶紫染色、Western blot以及细胞活性氧簇探针等多种方法检测TXNIP对AngⅡ刺激状态下CFs迁移、纤维激活相关蛋白[I型胶原蛋白(ColⅠ)、Ⅲ型胶原蛋白(ColⅢ)、波形蛋白(vimentin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)]表达、氧化应激及MAPK信号通路的影响.结果:TXNIP在心肌纤维化小鼠的心肌组织中表达上调.AngⅡ可浓度和时间依赖性地促进CFs中TXNIP表达上调,这种效应可以被losartan完全抵消.敲减TXNIP可以显著抑制AngⅡ诱导的CFs迁移及ColⅠ、ColⅢ、vimentin和α-SMA表达升高.此外,敲减TXNIP可以抑制AngⅡ诱导的细胞氧化应激和MAPK信号通路激活.结论:TXNIP可能通过MAPK信号通路诱导CFs发生氧化应激,进而促进心肌纤维化的发生;TXNIP可能成为治疗心肌纤维化的新靶点.

目的:探讨铒激光与E光联合重组人源Ⅲ型胶原蛋白治疗面部痤疮凹陷性瘢痕的疗效及对痤疮瘢痕权重评分(Echelle d'Evaluation Clinique des Cicatrices d'acne,ECCA)、p38丝裂原活化蛋白激酶(P38 mitogen activated protein kinase,p38MAPK)通路蛋白的影响.方法:选取笔者医院2018年1月-2019年12月面部痤疮凹陷性瘢痕患者195例,按照随机数字法分为3组,各65例.对照1组给予E光联合重组人源Ⅲ型胶原蛋白,对照2组给予铒激光联合重组人源Ⅲ型胶原蛋白,研究组给予铒激光与E光联合重组人源Ⅲ型胶原蛋白.比较三组治疗效果、治疗前后温哥华瘢痕量表(Vancouver scar scale,VSS)变化情况、ECCA评分、视觉模拟评分(Visual analogue scale,VAS)、血清p38MAPK通路蛋白(ERK1、ERK2、MEK1、MEK2)、炎性因子[肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)]及患者满意度.结果:研究组总有效率(95.38％)高于对照1组(81.54％)、对照2组(84.62％),差异有统计学意义(P<0.05).治疗结束后三组瘢痕厚度、血管分布、色泽、柔软度评分、ECCA、VAS评分低于治疗前,研究组低于对照1组、对照2组,差异有统计学意义(P<0.05).治疗结束后三组血清MEK1、MEK2、ERK1、ERK2、TNF-α、IL-6、CRP低于治疗前,研究组低于对照1组、对照2组,差异有统计学意义(P<0.05).研究组患者满意度(93.85％)高于对照1组(80.00％)、对照2组(80.00％),差异有统计学意义(P<0.05).结论:联合采取铒激光、E光、重组人源Ⅲ型胶原蛋白治疗面部痤疮凹陷性瘢痕效果显著,且患者满意度较高.

目的 探讨重组人源胶原蛋白局部应用对绝经后阴道壁组织病理学的影响.方法 选取绝经后盆腔脏器脱垂需行手术治疗的患者50例,随机分为对照组25例和实验组25例.对照组术前不使用激素类药物和非激素类润滑剂或保湿剂;实验组于术前阴道内给予重组人源胶原蛋白均匀涂抹,隔天1次,每次2 g,术前至少使用10次.术中留取阴道前壁组织标本.用HE染色法观察阴道壁上皮厚度,Masson染色法观察阴道壁肌肉和胶原纤维的分布排列情况,用免疫组化法检测阴道壁组织中Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原蛋白(CollagenⅢ)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和白细胞介素-6(IL-6)蛋白表达,用扫描电子显微镜观察阴道壁组织学形态和超微结构.结果 HE染色法显示实验组阴道上皮厚度大于对照组(P<0.05);Masson染色法显示实验组比对照组阴道壁平滑肌组织排列更为整齐,胶原基质更加紧密;实验组阴道壁组织中CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白阳性表达率高于对照组,MMP-1、IL-6蛋白阳性表达率低于对照组(P均<0.05);扫描电子显微镜下实验组阴道壁组织表面膜折叠和微绒毛结构较对照组更为明显.结论 局部应用重组人源胶原蛋白能够有效改善绝经后阴道壁组织学特征,增加阴道壁组织中胶原蛋白含量,并且一定程度上减轻阴道炎症反应.

以O/W型软膏基质作为载体,制备Rhc-Ⅲ(Recombinant human collagen Ⅲ,简称Rhc-Ⅲ)乳膏剂并对其质量和促创伤愈合作用进行评价.采用乳化法制备Rhc-Ⅲ乳膏剂,BCA法测定其总胶原蛋白的含量,并对其外观性状、pH、黏度、重金属和微生物等进行质量检查;采用切除全层皮肤法建立大鼠伤口模型,以伤口的愈合率和伤口组织切片的HE染色、Masson染色结果为评价指标,对Rhc-Ⅲ乳膏剂促进伤口愈合作用进行药效学评价.乳化法制备的Rhc-Ⅲ乳膏剂外观为乳白色、黏稠、无异味且易于涂布的半固体,其pH为(6.66±0.03),黏度为(48 136±595)mPa·s,总胶原蛋白的含量为(1.38±0.15)mg/g,重金属和微生物限度符合要求;耐寒耐热试验后稳定性良好;模型大鼠给药后在3,7和14 d,Rhc-Ⅲ乳膏剂组的伤口愈合率均大于模型组和空白乳膏组;HE染色和Masson染色结果显示,Rhc-Ⅲ乳膏剂组肉芽组织出现早,成熟快,胶原纤维沉积量多,伤口愈合效果好.Rhc-Ⅲ乳膏剂制备方法简便、质量可控且稳定,具有促进伤口愈合的作用.

目的 探讨重组Ⅲ型人源化胶原蛋白阴道凝胶治疗阴道干涩的临床疗效和安全性.方法 将2014年1月至5月重庆医科大学附属第二医院和山西医科大学附属第一医院收治的80例阴道干涩患者随机分为两组,分别给予重组Ⅲ型人源化胶原蛋白阴道凝胶(研究组,2g/次)和透明质酸衍生物阴道凝胶(对照组,3g/次)治疗,隔日1次,共10次.比较治疗前后及两组之间阴道干燥指数、阴道pH值、外阴阴道刺痛、性交疼痛、症状缓解时间以及总体疗效.结果 符合研究方案且完成研究者,研究组38例,对照组38例.治疗后研究组干燥指数增加3分、增加了 33.3％,有效率为63.2％;对照组增加2分、增加了 27.3％、有效率为39.5％,两组间差异有统计学意义(P＜0.05).两组治疗对pH值均无影响.治疗后外阴阴道干涩刺痛、性交疼痛症状均有改善,两组间差异无统计学意义(P＞0.05).研究组对疗效满意度的主观评价中,满意及非常满意的比例为63.1％,对照组为24.7％,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 重组Ⅲ型人源化胶原蛋白阴道凝胶可安全、有效地缓解阴道干涩症状,尤其适用于不宜使用激素治疗的患者.

目的 对实时荧光定量PCR(qPCR)法检测重组Ⅲ型人源化胶原蛋白冻干纤维中的外源性DNA残留量进行探究和分析,确定该方法用于DNA质量控制的可行性.方法 采用宿主细胞残留DNA样本前处理试剂盒(磁珠法)提取DNA,利用E.coli残留DNA检测试剂盒(PCR-荧光探针法)进行扩增反应,绘制标准曲线,建立重组Ⅲ型人源化胶原蛋白冻干纤维中外源性DNA残留量的qPCR检测方法.结果 对8批重组Ⅲ型人源化胶原蛋白冻干纤维进行测定,外源性DNA残留量在0.03～300 pg/μl内,重复性良好,均远低于每剂10 ng,线性良好(R2>0.99),回收率均在50％～150％之间.结论 该方法可用于重组Ⅲ型人源化胶原蛋白冻干纤维中外源性DNA残留量的定量测定.