目的 探讨熊果酸(UA)对人结直肠癌SW620细胞生长、侵袭、凋亡和转移的影响,并研究其可能的分子机制.方法 以SW620细胞为对象,以CCK-8法检测不同浓度(0、5、10、15、20、25、30 μmol/L)UA作用不同时间(24、48、72h)对细胞增殖的影响;以克隆形成实验检测不同浓度(0、10、15、20 μmol/L)UA作用于SW620细胞10 d对细胞克隆形成的影响;以不同浓度(0、10、15、20 μmol/L)UA作用于SW620细胞24 h后,分别以流式细胞术、Transwell侵袭实验、Western blot实验检测细胞的凋亡、侵袭情况和细胞中B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、裂解型多腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved-PARP)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)、p38MAPK、上皮钙黏素(E-cadherin)、神经钙黏素(N-cadherin)、锌指转录因子Snail蛋白的表达情况.考察p38 MAPK抑制剂SB203580与UA联用对细胞中p-p38 MAPK、Bcl-2、N-cadherin蛋白表达的影响.结果 与0 μmol/LUA比较,5～30 μmol/L UA作用24、48、72 h均可显著降低细胞的存活率(P＜0.05);15、20 μmol/L UA作用10 d均可显著降低细胞的克隆形成率(P＜0.05);经15、20 μmol/L UA作用后,细胞的凋亡率和cleaved-PARP、E-cadherin蛋白的表达量以及p38 MAPK蛋白的磷酸化水平均升高,穿膜细胞数和Bcl-2、Snail、N-cadherin蛋白的表达量均减少或降低,大部分指标差异有统计学意义(P＜0.05),部分指标变化有浓度依赖性(P＜0.05).SB203580可显著抑制UA对p38 MAPK蛋白表达的上调作用,逆转UA对Bcl-2、N-cadherin蛋白表达的抑制作用(P＜0.05).结论 UA可抑制SW620细胞的生长、侵袭和转移并诱导其凋亡,上述作用可能与激活p38 MAPK信号通路相关.

目的:评价核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)在小鼠脓毒症相关性脑病中的作用及其与小胶质细胞焦亡的关系。方法:SPF级健康雄性C57BL/6J小鼠24只，6~8周龄，体质量18~22 g，采用随机数字表法分为3组( n＝6)：假手术组(Sham组)、脓毒症相关性脑病组(SAE组)和脓毒症相关性脑病+NLRP3抑制剂MCC950组(SAE+MCC950组)。采用盲肠结扎穿孔法制备小鼠脓毒症相关性脑病模型。SAE+MCC950组小鼠造模后1 h时腹腔注射MCC950 20 mg/kg，余组注射等容量生理盐水。造模后1 d时行旷场实验，记录站立次数和中央区停留时间；造模后2~3 d行新物体识别实验，记录探索指数。造模后3 d行为学实验结束后，处死小鼠取脑海马组织，采用Western blot法检测NLRP3的表达，采用免疫荧光技术计数NLRP3与小胶质细胞特异性离子钙结合衔接分子1(Iba-1)共表达细胞，采用ELISA法检测caspase-1活性、IL-1β和IL-18含量。 结果:与Sham组比较，SAE组和SAE+MCC950组站立次数减少，中央区停留时间缩短，探索指数降低，海马NLRP3表达上调，NLRP3 +-Iba-1 +细胞计数增加，caspase-1活性、IL-1β和IL-18含量升高( P<0.05)；与SAE组比较，SAE+MCC950组站立次数增多，中央区停留时间延长，探索指数升高，NLRP3表达下调，NLRP3 +-Iba-1 +细胞计数减少，caspase-1活性、IL-1β和IL-18含量降低( P<0.05)。 结论:NLRP3参与了小鼠脓毒症相关性脑病的发生，与其介导小胶质细胞焦亡有关。

目的 研究钙释放激活钙通道调节分子1(calcium release-activated calcium modulator 1,Orai1)蛋白过表达激活钙调神经磷酸酶(Calcineurin,CaN)/转录因子EB(transcription factor EB,TFEB)通路对帕金森病(Parkinson disease,PD)细胞模型自噬水平与细胞活性的影响.方法 将培养的SH-SY5Y细胞给予1-甲基-4-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenyl-pyridinium,MPP+)处理建立PD细胞模型,并分为对照组、MPP+组、MPP++oe-NC 组、MPP++oe-Orai1 组与 MPP++oe-Orai1+FK506(CaN 抑制剂)组.采用 CCK-8 检测各组SH-SY5Y细胞的存活率;采用细胞可渗透钙离子荧光探针检测各组细胞胞内钙离子水平;采用ELISA法检测各组细胞CaN含量;采用RT-qPCR检测各组细胞Orai1、微管关联蛋白1A/1B轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、P62 mRNA相对表达水平;采用Western blot检测各组细胞Orai1、基质相互作用分子 1(stromal interaction molecule 1,STIM1)、CaN、TFEB、LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ、P62 以及酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)蛋白表达水平.结果 (1)与MPP++oe-NC组比较,MPP++oe-Orai1组胞内钙离子水平、LC3 mRNA表达水平升高(P＜0.01或P＜0.05),LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ蛋白比值增高(P＜0.05),P62蛋白表达水平减少(P＜0.01),而CaN抑制剂FK506干预可抑制Orai1过表达对细胞LC3 mRNA表达水平、LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ蛋白比值及P62蛋白表达水平的影响(P＜0.01或P＜0.05)o(2)与MPP++oe-NC组比较,MPP++oe-Orai1组细胞CaN表达水平增加,TFEB核移位增加(均P＜0.05),而MPP++oe-Orai1+FK506组细胞TFEB核移位较 MPP++oe-Orai1 组减少(P＜0.01).(3)与 MPP++oe-NC 组比较,MPP++oe-Orai1 组细胞 TH 表达水平和细胞活性增加(均P＜0.01),而MPP++oe-Orai1+FK506组细胞TH表达水平和细胞活性较MPP++oe-Orai1组降低(均P＜0.01).结论 Orai1蛋白过表达可增强PD模型细胞自噬水平与细胞活性,其机制与Orai1蛋白过表达激活CaN/TFEB通路有关.

目的:探讨6-姜烯酚（6-SH）是否通过促进微小RNA-26a-5p（miR-26a-5p）表达并抑制死亡相关蛋白激酶1（DAPK1），减轻氧糖剥夺/复氧（OGD/R）神经细胞自噬及神经细胞钙超载，并探究其潜在机制。方法:取体外培养的对数生长期小鼠海马神经元HT22细胞，用细胞增殖与毒性检测试剂盒（CCK-8）检测细胞活性，寻找Na 2S 2O 4的最佳制模浓度。将HT22细胞分为空白对照组（NC组）、OGD/R组（无糖培养基+10 mmol/L Na 2S 2O 4处理1.5 h后换正常培养基培养4 h）、6-SH干预组（OGD后用10 μmol/L 6-SH培养4 h）、阴性对照抑制剂预处理组（阴性对照抑制剂转染48 h后行OGD，再用6-SH培养4 h）、miR-26a-5p抑制剂预处理组（miR-26a-5p抑制剂转染48 h后行OGD，再用6-SH培养4 h）。采用CCK-8法检测各组细胞活性；透射电镜下观察细胞超微结构；实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测DAPK1、miR-26a-5p基因表达；分子对接验证6-SH与miR-26a-5p的相互作用；双荧光素酶验证DAPK1与miR-26a-5p的靶向关系；流式细胞仪测定细胞内Ca 2+水平；蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测磷酸化谷氨酸受体2B（p-NMDAR2B）Ser1303、DAPK1、自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白1轻链3（LC3）、p-DAPK1 Ser308蛋白表达；免疫荧光法检测LC3和Beclin1的表达。 结果:CCK-8法检测结果显示，6-SH干预组细胞活性较OGD/R组明显升高，miR-26a-5p抑制剂预处理组细胞活性较6-SH干预组明显降低。透射电镜下显示，6-SH干预组自噬小体较OGD/R组明显减少，miR-26a-5p抑制剂预处理组自噬小体较6-SH干预组明显增多。RT-qPCR检测结果显示，与OGD/R组比较，6-SH干预组miR-26a-5p表达明显上调，DAPK1 mRNA表达明显下调；与6-SH干预组比较，miR-26a-5p抑制剂预处理组miR-26a-5p表达明显下调，DAPK1 mRNA表达明显上调。分子对接验证6-SH与miR-26a-5p可互相作用。双荧光素酶报告基因检测显示，与阴性对照组比较，mmu-miR-26a-5p显著下调m-DAPK1-3UTR-WT的荧光素酶表达，说明两者之间存在结合作用。流式细胞仪检测结果显示，与OGD/R组比较，6-SH干预组细胞内Ca 2+水平明显降低；与6-SH干预组比较，miR-26a-5p抑制剂预处理组Ca 2+水平明显升高。Western blotting检测结果显示，与OGD/R组比较，6-SH干预组p-NMDAR2B Ser1303、DAPK1、Beclin1、LC3蛋白表达均明显降低（p-NMDAR2B Ser1303/β-actin：2.34±0.27比4.78±0.39，DAPK1/β-actin：1.40±0.13比2.37±0.21，Beclin1/β-actin：2.61±0.32比4.32±0.29，LC3/β-actin：2.52±0.45比5.09±0.18，均 P<0.05），p-DAPK1 Ser308蛋白表达明显升高（p-DAPK1 Ser308/β-actin：0.66±0.09比0.40±0.02， P<0.05）；与6-SH干预组比较，miR-26a-5p抑制剂预处理组p-NMDAR2B Ser1303、DAPK1、Beclin1、LC3蛋白表达明显升高（p-NMDAR2B Ser1303/β-actin：4.08±0.14比2.34±0.27，DAPK1/β-actin：1.96±0.15比1.40±0.13，Beclin1/β-actin：3.92±0.31比2.61±0.32，LC3/β-actin：4.33±0.33比2.52±0.45，均 P<0.05），p-DAPK1 Ser308蛋白表达明显降低（p-DAPK1 Ser308/β-actin：0.33±0.12比0.66±0.09， P<0.05）；免疫荧光法检测显示，与OGD/R组比较，6-SH干预组LC3、Beclin1荧光强度明显降低；与6-SH干预组比较，miR-26a-5p抑制剂预处理组LC3、Beclin1荧光强度明显升高。 结论:6-SH可通过调控miR-26a-5p/DAPK1减轻细胞自噬及钙超载，从而减轻神经细胞损伤。

目的:了解诺卡菌感染患者的临床特征及预后。方法:回顾性分析2013年1月至2019年7月于上海复旦大学附属华山医院感染科诊治的44例诺卡菌感染患者的临床资料，包括一般临床表现、基础疾病、使用糖皮质激素情况、实验室检查指标(包括血常规、降钙素原、C反应蛋白、淋巴细胞亚群等)、影像学改变、菌种鉴定、治疗与转归。根据感染类型分为单纯肺部感染组、肺外单个器官感染组和播散性感染组。两组间比较采用曼-惠特尼 U检验，多组间比较采用Kruskal-Wallis H检验。 结果:44例诺卡菌感染患者中，14例为单纯肺部感染，17例为肺外单个器官感染(其中中枢神经系统感染9例，皮肤软组织感染6例，腹腔脓肿1例，尿路感染1例)，13例为播散性感染(其中血流感染4例，中枢神经系统合并肺部或皮肤软组织感染6例，肺部合并皮肤软组织感染3例)。34例患者合并基础疾病，27例患者正在使用糖皮质激素或免疫抑制剂。11例单纯肺部感染患者的主要表现为咳嗽、咳痰；肺外单个器官感染和播散性感染患者的主要表现为发热。诺卡菌菌种以巴西、星形、鼻疽诺卡菌为主。白细胞计数和中性粒细胞比例正常或轻度升高42例，血小板计数正常或轻度下降41例，红细胞沉降率升高19例，降钙素原升高21例，C反应蛋白升高34例，铁蛋白升高18例。34例患者检测了淋巴细胞亚群，其中15例CD4 ＋T淋巴细胞下降，14例CD8 ＋T淋巴细胞升高，7例B淋巴细胞升高，7例B淋巴细胞下降，8例自然杀伤细胞下降。单纯肺部诺卡菌感染患者血红蛋白高于肺外单个器官感染患者，差异有统计学意义( U＝0.095， P＝0.025)。影像学表现以脓肿、炎症渗出为主。治愈或好转40例，1例仍在治疗，死亡3例。 结论:累及各部位的诺卡菌病的临床表现无特异性，经过规范治疗可降低诺卡菌病的病死率。

目的:探讨Hedgehog信号通路和上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)在胆道闭锁(biliary atresia, BA)肝纤维化进展中的作用，为BA肝纤维化发生机制提供实验依据。方法:选取2019年1月至2020年1月天津市儿童医院普外科12例BA患儿肝组织和4例先天性胆管扩张症(congenital biliary dilatation，CBD)患儿肝组织，通过免疫组织化学观察Hedgehog信号通路配体SHH、效应转录因子GLI2蛋白表达分布情况，并通过蛋白质印迹法、实时荧光定量聚合酶链反应检测其蛋白及mRNA表达情况；通过免疫荧光染色观察EMT标记物神经钙粘蛋白(N-cadherin)及CK19表达分布情况。培养人肝内胆管上皮细胞，使用人重组SHH蛋白(r-SHH)和Hedgehog信号通路抑制剂环巴胺(Cyclopamine)进行外源性干预后，检测Hedgehog信号通路激活水平、EMT标记物E钙黏素(E-cadherin)、N-cadherin蛋白及mRNA表达水平。结果:免疫组织化学实验结果显示，SHH表达于BA胆管上皮细胞胞质中，GLI2表达于BA胆管上皮细胞胞核中。蛋白印迹法实验结果显示，BA组SHH、GLI2蛋白相对表达量分别为2.09±0.43、1.94±0.17，CBD组SHH、GLI2蛋白相对表达量为1.00±0.05、1.00±0.37，组间比较，差异均有统计学意义( P均<0.05)。实时荧光定量聚合酶链反实验结果显示，BA组SHH、GLI2 mRNA的相对表达量分别为2.89±0.96、2.35±0.78，CBD组SHH、GLI2 mRNA的相对表达量分别为1.00±0.34、1.00±0.22，组间比较，差异均有统计学意义( P均<0.05)。免疫荧光染色结果显示，EMT标记物N-cadherin与CK19共表达于BA胆管上皮细胞。使用r-SHH处理激活Hedgehog信号通路效应转录因子GLI2后，促进了EMT(抑制了E-cadherin，增强了N-cadherin)，阻断该通路后，EMT被阻断。 结论:Hedgehog信号通路在BA中高表达，是促进肝内胆管上皮细胞发生EMT的重要诱导通路，其在BA肝纤维化进程中起重要作用，为BA肝纤维化发生机制提供实验依据。

目的:评价利妥昔单抗(RTX)在难治性肾病综合征患儿中维持缓解的有效性。方法:回顾性研究。将2018年11月至2020年11月华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院肾内科诊断为难治性肾病综合征的22例患儿纳入研究，予RTX治疗。外周血中CD 19＋B淋巴细胞≥1%总淋巴细胞者追加1剂RTX(375 mg/m 2)，每例患儿使用3~4剂，早期停用钙调神经磷酸酶抑制剂(CNI)，后续使用霉酚酸酯治疗。采用Kaplan-Meier法对RTX治疗后患儿的蛋白尿无复发率和无频复发肾病综合征或激素依赖肾病综合征发生率进行分析，采用 Wilcoxon秩和检验对使用RTX前后的复发次数进行分析。采用秩和检验对RTX治疗前后患儿的体质量指数(BMI)及身高进行比较。 结果:22例患儿中，20例患儿完成治疗方案，1年和2年的蛋白尿无复发生存率分别为85%和40%，CNI停用后复发频率降低。所有患儿BMI及身高在使用RTX治疗前与使用RTX 1年后、2年后比较，差异均有统计学意义(均 P<0.05)，使用RTX后1、2年比较，差异均无统计学意义(均 P>0.05)。 结论:使用RTX在停用激素和其他免疫抑制剂情况下也可有效降低难治性肾病综合征的复发率，同时可使患儿BMI及身高得到明显改善。RTX治疗难治性肾病综合征患儿安全有效。

目的:评价钙离子-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ-环腺苷酸反应元件结合蛋白(Ca 2＋-CaMKⅡ-CREB)信号通路在U50488H减轻CPB致大鼠围术期神经认知障碍(PND)中的作用。 方法:清洁级健康成年雄性SD大鼠40只，体重350～400 g，采用随机数字表法分为4组( n＝10)：对照组(S组)、CPB组(C组)、CPB＋κ受体激动剂U50488H组(U组)和CPB＋CaMKⅡ特异性抑制剂KN93＋U50488H组(K组)。S组仅进行动静脉穿刺置管，其余各组建立无血预充心脏不停跳CPB模型。U组CPB前30 min时静脉注射U50488H 1.5 mg/kg；K组CPB前60 min时侧脑室注射10 μmol/L KN93 5 μl，CPB前30 min时静脉注射U50488H 1.5 mg/kg。术后第3天采用Morris水迷宫实验测试大鼠认知功能。然后处死大鼠取海马组织，采用Western blot法检测磷酸化CaMKⅡ(p-CaMKⅡ)、磷酸化CREB (p-CREB)和脑源性神经营养因子(BDNF)的表达水平，采用RT-PCR法检测CaMKⅡ、CREB、BDNF的mRNA表达水平。 结果:与S组比较，C组、U组和K组逃避潜伏期延长，穿越原平台次数减少，海马p-CaMKⅡ、p-CREB、CaMKⅡmRNA、CREB mRNA、BDNF及其mRNA表达下调( P<0.05)；与C组比较，U组逃避潜伏期缩短，穿越原平台次数增加，海马p-CaMKⅡ、p-CREB、CaMKⅡmRNA、CREB mRNA、BDNF及其mRNA表达上调( P<0.05)，K组上述指标差异无统计学意义( P>0.05)；与U组比较，K组逃避潜伏期延长，穿越原平台次数减少，海马p-CaMKⅡ、p-CREB、CaMKⅡmRNA、CREB mRNA、BDNF及其mRNA表达下调( P<0.05)。 结论:U50488H减轻CPB致大鼠PND的机制与激活Ca 2＋-CaMKⅡ-CREB信号通路有关。

目的:探讨分析西罗莫司对预防肝癌肝移植术后肿瘤复发的疗效。方法:回顾性分析2016年1月1日至2018年12月31日在华中科技大学同济医学院附属同济医院因原发性肝细胞癌行肝移植的114例受者资料，根据免疫抑制方案中是否应用西罗莫司分为西罗莫司组(63例)和他克莫司组(51例)。应用单因素和多因素回归分析肝癌复发的危险因素，Cox回归分析评估西罗莫司对受者无瘤生存时间的影响。结果:45例发生了肿瘤的复发和(或)转移。单因素和多因素回归分析表明，使用西罗莫司是预防肿瘤复发的独立保护因素[ P＝0.005，HR＝0.38，95%置信区间(CI)：0.193~0.748]。他克莫司组受者无瘤生存时间为5个月(4~19个月)，而西罗莫司组的受者的无瘤生存时间为23个月(13~31个月)。两组发生感染及排斥反应概率的差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:肝癌肝移植术后免疫抑制方案以雷帕霉素靶蛋白(mTOR)抑制剂西罗莫司为主的受者可能比钙调神经磷酸酶抑制剂(CNI)他克莫司为主的受者肿瘤复发率更低，无瘤生存时间更长。

目的:观察自噬抑制剂氯喹(CQ)对5-氟尿嘧啶(5-Fu)化疗的结肠癌细胞株SW480的凋亡以及转移和侵袭能力的影响。方法:培养结肠癌细胞株SW480，分成对照组、5-Fu组、氯喹(CQ)组和5-Fu+CQ组。应用蛋白质印迹法(Western blot)检测各组自噬及上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白的表达。应用流式细胞技术检测各组细胞凋亡情况，应用划痕实验检测各组细胞的迁移能力，应用Transwell实验检测各组细胞的侵袭能力。两个样本均数之间的比较采用独立样本 t检验。 结果:5-Fu组LC3-Ⅱ表达、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值和Beclin 1表达高于对照组(1.217±0.042、12.470±0.411、0.793±0.008比0.221±0.006、9.366±0.469、0.444±0.008， t＝23.300、4.978、30.140， P<0.01)，5-Fu+CQ组LC3-Ⅱ表达、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值和Beclin 1表达低于5-Fu组(1.072±0.029、8.526±0.524、0.657±0.010比1.217±0.042、12.470±0.411、0.793±0.008， t＝2.844、5.924、10.260， P<0.05)。5-Fu组的细胞凋亡率高于对照组[(10.600±0.468)%比(5.808±0.432)%， t＝7.524， P<0.01]；5-Fu+CQ组的细胞凋亡率高于5-Fu组[(20.730±0.897)%比(10.600±0.468)%， t＝10.01， P<0.01]。5-Fu组细胞相对迁移率和细胞侵袭数高于对照组(0.660±0.010、245.400±8.491比0.448±0.011、147.300±5.793， t＝7.595、9.544， P<0.01)，5-Fu+CQ组的细胞相对迁移率和细胞侵袭数低于5-Fu组(0.515±0.019、189.700±4.833比0.660±0.010、245.400±8.491， t＝6.625、5.701， P<0.01)。5-Fu组的上皮钙黏附蛋白(E-cadherin)表达低于对照组(0.014±0.000比0.057±0.001， t＝39.980， P<0.01)，而5-Fu+CQ组的E-cadherin表达高于5-Fu组(0.053±0.002比0.014±0.000， t＝22.910， P<0.01)。5-Fu组的神经型钙黏附蛋白(N-cadherin)、转录因子(Snail)蛋白和转化生长因子-β(TGF-β)的表达高于对照组(0.265±0.003、0.277±0.006、0.154±0.002比0.126±0.004、0.195±0.003、0.067±0.002， t＝27.790、12.050、30.950， P<0.01)，而5-Fu+CQ组的N-cadherin、Snail和TGF-β的表达低于5-Fu组(0.184±0.003、0.219±0.011、0.106±0.003比0.265±0.003、0.277±0.006、0.154±0.002， t＝18.610、4.743、12.520， P<0.01)。 结论:CQ可以降低5-Fu化疗引起的结肠癌细胞自噬，并促进其凋亡，同时可能通过EMT途径降低其侵袭迁移能力。