目的:探讨1，25二羟维生素D 3［1，25（OH） 2D 3］对柯萨奇病毒B3（CVB3）诱导小鼠心肌炎症反应的影响及机制。 方法:将雄性野生型（WT）小鼠和1α羟化酶基因敲除［1（OH）ase -/-］小鼠分为WT组、WT+CVB3组、1（OH）ase -/-+CVB3组和1（OH）ase -/-+CVB3+VD 3组，每组8只。实时荧光定量PCR测定促炎症因子白细胞介素（IL）1β、IL-6、干扰素γ（IFN-γ）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）mRNA水平；HE染色观察心肌组织病理学改变；TUNEL染色及流式细胞仪检测心肌细胞凋亡；Fluo-4/AM荧光探针检测心肌细胞内的钙离子含量；Western印迹法检测钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）及内质网应激相关葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）的表达水平。 结果:与WT组相比，WT+CVB3组小鼠心肌中促炎症因子IL-1β（14.88±3.32比1.03±0.02， P=0.009）、IL-6（7.00±1.09比1.81±0.18， P=0.005）、IFN-γ（4.70±1.11比1.34±0.34， P=0.006）、TNF-α（17.20±3.22比1.02±0.12， P<0.001）mRNA水平均升高，炎症细胞浸润增多，心肌细胞凋亡率增加（16.66%±1.09%比7.85%±1.12%， P=0.012），心肌细胞胞质中游离Ca 2+增加（2.98±1.05比0.96±0.10， P=0.006），磷酸化CaMKⅡ（pCaMKⅡ）（1.97±0.34比1.00±0， P<0.001）、GRP78（1.78±0.19比1.00±0， P=0.005）及CHOP（1.62±0.09比1.00±0， P=0.002）蛋白表达增加；上述心肌细胞损伤指标在1，25（OH） 2D 3缺乏的1（OH）ase -/-+ CVB3组更显著；而在给予1，25（OH） 2D 3补充的1（OH）ase -/-+CVB3+VD3组，上述心肌细胞损伤指标均改善（均 P<0.05）；此外，CaMKⅡ特异性抑制剂可同样降低CVB3感染小鼠的心肌损伤和细胞凋亡率。 结论:1，25（OH） 2D 3缺乏可通过CaMKⅡ过度活化加重小鼠心肌炎症反应。

目的:研究钙离子/钙调蛋白依赖性激酶γ(CaMKⅡγ)在破骨细胞分化中的表达规律,以揭示其作用.方法:用50 ng/mL核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导RAW264.7细胞向破骨细胞分化,于诱导后第0,1,3,5天收获细胞,用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色评价破骨细胞生成情况,并用RT-PCR、Western印迹、免疫荧光细胞化学法检测CaMKⅡγ mRNA和蛋白表达.结果:多核破骨细胞在诱导后第3天开始出现,第5天达到最多.分化第0,1,3,5天,CaMKⅡγ mRNA相对表达水平分别为(1.067±0.179),(1.840±0.070),(9.493±0.453)和(30.767±0.573);蛋白相对表达水平分别为(0.454±0.065),(0.613±0.021),(0.858±0.019)和(0.980±0.023);除第1天的蛋白相对水平外,其他时间点CaMKⅡγ mRNA和蛋白表达差异均有统计学意义,且呈时间依赖性增强(P＜0.01).免疫荧光细胞化学法检测也显示CaMKⅡγ蛋白表达在破骨细胞分化过程中逐步增加.结论:CaMKⅡγ表达随破骨细胞分化呈时间依赖性增加,提示其在破骨细胞分化中可能发挥关键调控作用.

氧化苦参碱具有镇静、催眠、降体温、抗癫痫、改善认知功能、保护脑神经和外周神经作用.其作用机制可能是激活大麻素2型受体和上调电压门控钙离子N型通道表达,促进抑制性神经递质(γ-氨基丁酸、甘氨酸)合成与释放,下调γ-氨基丁酸转运体-1表达,使突触间隙γ-氨基丁酸浓度升高以及上调γ-氨基丁酸.A受体表达,从而增强γ-氨基丁酸能神经功能.γ-氨基丁酸能神经功能的增强可抑制兴奋性神经递质谷氨酸过度表达并下调N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体和蛋白激酶Cγ表达,从而下调电压门控钙离子L型通道的表达,抑制钙离子内流,阻滞钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ/c-AMP反应元件结合蛋白通路,抑制炎症反应,产生中枢抑制和神经保护作用.

目的 探究敲减钙离子/钙调蛋白依赖性激酶Ⅳ(CaMKⅣ)基因对炎性培养条件下C2C12细胞免疫分子表达的影响.方法 采用慢病毒基因干扰技术敲减C2C12细胞的CaMKⅣ基因,以2％马血清将C2C12细胞分化成肌管,以干扰素-γ(IFN-γ)刺激C2C12细胞,采用Real-time PCR和Western blotting检测CaMKⅣ的表达,采用Western blotting和免疫荧光检测免疫分子主要组织相容性复合体(MHC) class Ⅰ(H-2Kb)、MHC classⅡ(H2-Ea)、Toll样受体3(TLR3)的表达,采用Real-time检测肌细胞分泌型促炎性细胞因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-1α和单核细胞趋化因子(MCP)-1的基因表达.结果 IFN-γ可诱导成肌干细胞以及分化肌管表达或上调表达免疫分子MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、TLR3,同时上调C2C12细胞促炎性细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α、MIP-1α和MCP-1的基因表达量;敲减CaMKⅣ基因导致上述上调趋势被抑制.结论 敲减CaMKⅣ基因可有效抑制IFN-γ诱导的免疫分子的表达,可能提示CaMKⅣ参与调节肌细胞的免疫学特性.

钙离子(Ca2+)是通过局部信号获得特异性刺激的关键细胞内信使分子.Ca2+结合蛋白,如钙调蛋白(CaM)及其靶蛋白是Ca2+依赖性反应信号传导的关键靶点.钙/钙调蛋白依赖性蛋白酶Ⅱ(CaMKⅡ)是一种多聚体酶,它是哺乳动物前脑总蛋白的重要组成部分,并且是形成突触后致密部的主要成分.近年来国内外研究显示,CaMKⅡ包含α、β、γ和δ 4种亚型,其中α和β主要在神经组织中表达,而γ和δ则在全身多种组织均有表达,它们参与特定的突触可塑性和记忆巩固过程,对神经系统的兴奋性及一些神经系统疾病的发生起重要作用.前期也有研究表明CaMKⅡδ在促进神经元存活中起重要作用.本文就CaMKⅡ的结构及其在神经系统中的作用和与相关神经系统疾病的关系作一综述.

目的 探讨别孕烯醇酮(APα)对帕金森病(PD)小鼠黑质-纹状体多巴胺能系统及行为学的影响及可能的分子机制.方法 90只3月龄体重为20～ 25 g雄性C57BL/6小鼠1侧纹状体被注射6-羟多巴胺(6-OHDA)复制小鼠PD模型,再给予AP 0及γ-氨基丁酸A受体(GABAAR)拮抗剂荷包牡丹碱(Bic).采用ELISA检测血清及大脑皮质APα含量和纹状体多巴胺水平,免疫组织化学法检测黑质多巴胺能神经元及其纹状体纤维投射数量的变化,Western blotting检测中脑胞膜GABAAR、胞质及胞核各蛋白水平的变化,并通过免疫共沉淀验证它们之间的相互作用,观察小鼠行为学的变化.结果 PD小鼠大脑皮质内源性APα水平显著降低,黑质多巴胺能阳性神经元及其纹状体纤维投射含量下降,胞膜、胞质和胞核各蛋白的水平也明显下降,小鼠的运动功能发生障碍.在给予外源性APα处理后,上述情况均有所改善.但在应用Bic后,上述调控GABAAR/钙离子-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱδ3/脑源性神经营养因子信号呈现相反的变化,免疫共沉淀结果显示,蛋白之间存在相互作用.结论 外源性的APα通过增加其内源性水平调控GABAAR/钙离子-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱδ3/脑源性神经营养因子信号通路促进PD模型小鼠黑质-纹状体多巴胺能神经系统和小鼠行为学的改善.

钙离子(Ca2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)是钙信号最重要的传感器和调节剂,在多种恶性肿瘤中高表达.当细胞内Ca2+水平周期性上升时,Ca2+通过结合钙调蛋白(CaM)激活CaMKⅡ,从而激活多条相关信号通路影响结直肠癌(CRC)的发生发展.其中,CaMKⅡγ可以介导NF-κB信号通路的激活从而促进CRC细胞在体内外的增殖;CaMKⅡγ通过介导STAT3信号通路的失调与结肠炎相关性结肠癌(CAC)进展密切相关;CaMKⅡ可通过ERK1/2和p38依赖性途径介导结肠癌细胞的增殖和迁移;CaMKⅡ通过调控下游靶标MAPK途径可以导致多种肿瘤细胞增殖、侵袭;Wnt/CaMKⅡ信号的激活可能是驱动CAC发生的重要信号途径之一.以上信号通路在CRC发生发展中可能相互影响.

目的 明确别孕烯醇酮(APα)对6-羟多巴胺(6-OHDA)损伤的SH-SY5Y细胞系的保护作用,并阐明可能的分子机制.方法 向体外培养的SH-SY5Y细胞系中分别加入6-OHDA、APα、γ-氨基丁酸A受体(GABAAR)拮抗剂荷包牡丹碱(Bic)和电压门控L型Ca2+通道拮抗剂硝苯地平(nifedipine),采用免疫荧光细胞化学染色方法观察不同组别酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞的变化,Western blotting检测胞质钙调蛋白(CaM)、钙离子-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ δ3(CaMKⅡδ3),胞核CaMKⅡδ3、脑源性神经营养因子(BDNF)和细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK1)表达的变化,采用蛋白质免疫共沉淀验证CaMKⅡ δ3与CDK1/BDNF的相互作用.结果 APo作用后,6-OHDA损伤的SH-SY5Y细胞TH和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)阳性细胞数目均明显增加,而TH/BrdU双阳性细胞数目无显著变化;同时Western blotting结果表明,SH-SY5Y细胞胞质和胞核上述蛋白的表达与单纯6-OHDA组相比也明显上升,经Bic处理后各蛋白增加更为明显.免疫共沉淀结果表明,CaMKⅡδ3与CDK1/BDNF存在相互作用.结论 APα对6-OHDA损伤的SH-SY5Y细胞的保护中,GABAAR发挥负性调控作用,通过稳定细胞的内环境达到增加TH阳性神经元数量的目的,其中Ca2+-CaM-CaMKⅡδ3信号通路和BDNF与CDK1发挥了关键作用.

目的:研究温胆汤对精神分裂症模型大鼠额叶组织miRNA-219,N-甲基-D-天冬氨酸受体2B(NR2B),精神分裂症断裂基因1(DISC1),钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱγ(CaMKⅡy)表达的影响.方法:将60只大鼠随机分为6组,正常组、模型组、温胆汤高、中、低剂量组、氯氮平组,每组10只.温胆汤高、中、低剂量组分别灌胃温胆汤溶液40,20,10 g·kg-1,氯氮平组灌胃氯氮平0.02 g·kg-1,正常组和模型组灌胃等体积生理盐水,1次/d.给药21 d后,除正常组外,其余各组均进行左腹腔注射地卓西平马来酸盐(MK-801)0.6mg·kg-1,建立急性精神分裂症模型.依照SAMS和HOFFMAN标准对大鼠的刻板行为和共济失调评分;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠前额叶皮层病理形态变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测额叶组织NR2B,DISC1,CaMKⅡγ蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测额叶组织miRNA-219,NR2B,DISC1,CaMKⅡγmRNA表达.结果:与正常组比较,模型组大鼠刻板行为和共济失调评分显著升高(P＜0.01);模型组前额叶皮层大部分神经元细胞核固缩或溶解;模型组额叶组织NR2B,D1SC1,CaMKⅡγ蛋白表达水平显著降低(P＜0.01);miRNA-219,NR2B,DISC1,CaMKⅡγmRNA表达水平显著降低(P＜0.01);与模型组比较,温胆汤各组大鼠在50,60 min时的刻板行为和共济失调评分明显降低(P＜0.05,P＜0.01);温胆汤高、中剂量组前额叶皮层神经元细胞排列较为紧密,核固缩和溶解有不同程度减轻;温胆汤高、中剂量组额叶组织NR2B蛋白表达水平均显著升高(P＜0.01),温胆汤中、低剂量组DISC1的蛋白表达水平均明显升高(P＜0.05,P＜0.0l),温胆汤各组CaMKⅡγ蛋白表达水平明显升高(P＜0.05);温胆汤各组额叶组织miRNA-219,NR2B,DISC1,CaMKⅡγmRNA表达水平明显升高(P＜0.05,P＜0.01).结论:温胆汤可以通过改善精神分裂症模型大鼠的刻板行为和共济失调表现,减轻前额叶皮层神经元细胞核固缩和溶解程度,升高miRNA-219,NR2B,DISC1,CaMKⅡγ表达水平,从而达到改善精神分裂样症状和防治精神分裂症的目的.