目的 探讨胆汁制钩吻总碱(胆钩吻总碱)体外抗肿瘤效果,旨在为钩吻减毒后存效的研究提供科学依据.方法 通过CCK-8 检测观察胆钩吻总碱对人结肠HCT-116 细胞、人神经胶质瘤U87 细胞、人肝癌HepG2 细胞、人肺癌A549 细胞的增殖作用,进一步以结肠癌HCT-116 为研究对象,以不同浓度胆钩吻总碱(50、100、200 μg·mL-1)干预HCT-116 细胞,通过流式细胞技术检测其对细胞周期阻滞的影响;Annexin V FITC/PI流式细胞术检测HCT-116 细胞凋亡情况;进一步从蛋白水平检测凋亡相关蛋白表达.结果 在钩吻总生物碱IC50浓度下,胆钩吻总碱对U87、A549、HepG2、HCT-116 肿瘤细胞的增殖抑制率均高于钩吻总生物碱组,并且各组之间的差异具有统计学意义(P<0.01).与空白组相比,不同浓度的胆钩吻总碱处理(50、100、200 μg·mL-1)可有效降低HCT-116细胞的集落形成,并将细胞周期阻滞在G2/M期.胆钩吻总碱还能引发结肠癌HCT-116 细胞的晚期凋亡,并对凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3 起到调控作用.结论 胆钩吻总碱可以通过调控结肠癌HCT-116 细胞周期和凋亡相关蛋白的表达来抑制其增殖.

目的 以人肺腺癌细胞(A549、SPCA1)为研究对象,通过在培养液中加入不同浓度的钩吻总碱(TAG)研究其抗肿瘤作用.方法 采用加热回流、萃取等方法提取TAG,利用薄层色谱法鉴定TAG的提取,通过Incucyte S3活细胞动态分析系统拟合不同浓度的TAG作用A549、SPCA1细胞的细胞融合度并观察A549、SPCA1细胞的形态,采用CCK-8法、集落形成实验检测细胞增殖,Hoechst33258染色、Rhodamine123染色检测细胞凋亡,碘化丙啶单染法检测细胞周期,Western blotting检测凋亡指标蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达.结果 经薄层色谱法鉴定成功提取TAG.Incucyte S3活细胞动态分析系统拟合出TAG作用A549、SPCA1细胞的EC50值分别是99.2、82.0 μg/mL,由此确定TAG作用A549、SPCA1细胞的低、中、高浓度依次为50、100、150 μg/mL,且细胞拍照观察到随着药物浓度增加细胞融合度下降、细胞数目减少.CCK-8法和集落形成实验结果表明TAG抑制A549、SPCA1细胞增殖(P＜0.05).Hoechst 33258细胞核染色实验发现给药组细胞出现核碎裂;流式细胞术检测Rhodamine123探针发现给药组出现荧光信号强度增加,检测细胞周期发现TAG使A549、SPCA1细胞周期阻滞在G2/M期;Western blot结果显示TAG诱导Bcl-2蛋白表达下调,Bax表达上调、Caspase-3蛋白切割活化增加,通过细胞染色实验、流式细胞术及Western blotting表明TAG促进A549、SPCA1细胞凋亡(P＜0.05).结论 TAG抑制肺腺癌细胞增殖,诱导细胞凋亡.

目的 探讨钩吻总碱对慢性粒细胞白血病K562细胞的抑杀作用及其机制,为其抗白血病研究提供科学依据.方法 以不同浓度钩吻总碱(25、50、100、200、400 μg·mL-1)干预K562细胞,MTT法测定其对K562细胞活力的影响;倒置相差显微镜观察其对K562细胞形态的影响;DAPI染色法观察K562细胞核形态变化;Annexin V FITC/PI流式细胞术检测K562细胞凋亡情况;比色法测定caspase-3活性变化;RT-PCR检测Bax和Bcl-2基因的表达水平.结果 钩吻总碱对K562细胞抑制效果呈时间、剂量依赖性,24 h时IC50为122 μg·mL-1;TAG干预K562细胞后细胞形态逐渐不规则、胞质不清、胞核皱缩,最终胞膜的完整性破坏;DAPI染色发现细胞体积变小,整体皱缩,胞核固缩、生成典型的凋亡小体;Annexin V FITC/PI流式细胞测定显示K562细胞凋亡以早凋为主,存在量效关系;不同浓度钩吻总碱作用于K562细胞24 h后caspase-3的活性提高;RT-PCR检测发现TAG干预后会下调Bcl-2基因表达、上调Bax基因表达,二者均表现出量效关系.结论 钩吻总碱可能通过上调Bax基因表达、下调Bcl-2基因表达,活化caspase-3,从而诱导慢性粒细胞白血病K562细胞发生早期凋亡,抑制其细胞活力.

目的:探讨钩吻总生物碱提取物(钩吻总碱)促进人结肠癌HT-29细胞凋亡的机制.方法:钩吻总碱体外干预HT-29细胞24 h后,用噻唑蓝(MTT)比色法评估其对细胞增殖的影响,4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色法及流式细胞术(AnnexinV-FITC/PI)观察HT-29细胞的凋亡情况,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)观察HT-29细胞B型淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax),Bcl-2 mRNA表达情况,利用紫外分光光度法检测含半胱氨酸的天冬氨酸水解酶-3(Caspase-3)表达量的变化.结果:钩吻总碱可抑制HT-29细胞增殖,200 mg·L-1钩吻总碱干预24 h后,对HT-29细胞增殖的平均抑制率达54.17％.DAPI染色及流式细胞术(Annexin V-FITC/PI)观察到钩吻总碱可促进HT-29细胞凋亡.RT-PCR观察到钩吻总碱能降低HT-29细胞Bcl-2 mRNA表达(P＜0.05),对Bax mRNA表达无明显影响,提高了Bax/Bcl-2 mRNA表达(P＜0.05).利用紫外分光光度法检测到随着钩吻总碱浓度的升高,HT-29细胞的Caspase-3表达呈上升趋势(P＜0.05).结论:钩吻总碱能有效地抑制HT-29细胞的增殖,促进HT-29细胞的凋亡,其机制可能与通过Bax/Bcl-2途径诱导细胞凋亡相关.

钩吻Gelsemium elegans,马钱科Loganiaceae钩吻属Gelsemium常绿木质藤本植物,为中国传统药用植物,其味辛、苦,性温,有剧毒,常用来祛风、攻毒、消肿和止痛.该文检索并查阅了近些年来钩吻在化学成分和药理作用方面的文献,并对其进行总结和归纳.目前的研究表明,已从钩吻中分离出生物碱、环烯醚萜、三萜类、酚酸类、甾体类、香豆素、木脂素、四甲基环己烯型单萜苷类化合物、黄酮类等多种成分,其中,钩吻生物碱多为吲哚类生物碱,是其主要的活性成分,能显著抑制中枢神经活动.现代药理学研究表明钩吻生物碱具有多种药理活性,可通过调控细胞周期来达到抗肿瘤的目的;增强巨噬细胞吞噬能力,保护白细胞,促进机体免疫调节;治疗癌性疼痛和长期疼痛;使心肌收缩力减弱,血管舒张以达到降压效果;另外还对焦虑症和皮肤病的治疗起到一定作用.在今后的研究中,仍需对钩吻的化学成分进行深入研究,开发有前景的先导化合物,并进一步明确毒理和药理临床价值,探明作用机制,使其得到更充分合理的利用,为钩吻扩大应用和安全使用奠定基础.

目的 观察钩吻总碱对人舌癌细胞株Tca8113增殖、凋亡的作用,并探讨其对酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)/信号传导及转录激活因子3(STAT3)/Survivin通路的调控作用.方法 取人舌癌细胞株Tca8113,培养至对数期,分装至6孔板中,分为对照组、A组、B组和C组,每组设置5个复孔.A组、B组和C组分别加入25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L浓度的钩吻总碱处理(20μl),对照组加入等量PBS缓冲液.以倒置显微镜观察72 h后各组细胞形态;以MTT法检测24 h、48 h、72 h后细胞增殖抑制率;以流式细胞仪检测72 h后细胞凋亡率;以RT-PCR检测72 h后JAK2、STAT3、Survivin mRNA相对表达量;以WB检测72 h后IL-6蛋白、JAK2、STAT3、Survivin蛋白表达并计算p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、p-Survivin/Survivin.结果 72 h后,倒置显微镜下观察结果显示对照组细胞紧密,轮廓清晰,贴壁生长状态良好;A组细胞有浮起、变圆,B组和C组可见不同程度细胞壁皱缩和细胞碎片,其中C组变化最为明显,B组次之,A组变化最轻;各组24 h、48 h、72 h后增殖抑制率比较差异均有统计学意义(P<0.05),各组增殖抑制率均随时间延长显著增长,且呈时间依赖性和剂量依赖性;各组72 h后细胞凋亡率比较差异有统计学意义(P<0.05),各组凋亡率均随剂量升高显著增高;各组72 h后JAK2、STAT3、Survivin mRNA相对表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05);各组p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、p-Survivin/Survivin比较差异均有统计学意义(P<0.05),每两组间比较也可见差异具有统计学意义(P<0.05),其中对照组均最高,A组均次之,B组均稍低,C组均最低;各组IL-6蛋白表达比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 钩吻总碱能够呈剂量依赖性抑制人舌癌细胞株Tca8113增殖、促进凋亡,推测与直接调控JAK2/STAT3/Survivin通路,抑制JAK2、STAT3、Survivin蛋白磷酸化有关.

目的:探讨钩吻总碱(TAG)抑制人结肠癌细胞增殖及血管新生的作用.方法:体外培养人结肠癌细胞HT-29和人脐静脉内皮细胞(HUVEC),经低、中、高剂量TAG(40、80、120μg/mL)干预后,使用倒置荧光显微镜观察两种细胞的形态,采用CCK-8法检测两种细胞的存活率,采用流式细胞术检测HT-29细胞的周期变化情况,采用划痕试验、Transwell侵袭试验和管腔形成试验检测HUVEC的迁移率、侵袭率和管腔数量.结果:与空白组比较,TAG各剂量组HT-29细胞和HUVEC均有不同程度的减少,并可见死亡细胞,两者存活率均显著降低(P<0.05或P<0.01);TAG各剂量组G2/M期HT-29细胞比例以及中剂量组G0/G1期细胞比例均显著升高,而TAG各剂量组S期细胞比例以及高剂量组G0/G1期细胞比例均显著降低(P<0.05或P<0.01);TAG各剂量组HU-VEC的存活率、迁移率、侵袭率均显著降低,4～24 h各时间点管腔数量均显著减少(P<0.01).结论:TAG可抑制人结肠癌HT-29细胞和HUVEC的增殖,可改变HT-29细胞的周期,并抑制HUVEC的迁移、侵袭及管腔形成.

内镜在诊断和治疗胃癌术后并发症的过程中起到了非常重要的作用,很大程度上避免了二次手术的干预,因此受到广泛重视.胃癌术后早期吻合口出血最为常见,急诊内镜检查及内镜直视下止血技术的发展,为其提供了一种新的处理途径,通过内镜根据具体情况可选择金属夹止血﹑ 电凝止血﹑ 局部注射肾上腺素或硬化剂和局部喷洒止血药物等具体止血方法.吻合口瘘是胃癌术后严重的并发症,除了选择在胃镜直视下放置小肠营养管以尽早开始肠内营养支持治疗外,还可以通过内镜进行治疗,包括支架置入﹑内镜下采用金属夹﹑OTSC吻合夹系统以及over-stitch缝合系统闭合瘘口.对于吻合口梗阻或狭窄,可予以内镜下气囊或探条扩张以及支架置入;胃食管手术后发生食管吻合口难治性狭窄,通过钩刀或IT刀行吻合口狭窄部位的放射状切开术(ERI)是一种新型治疗手段.胆总管损伤引起的胆漏可以通过支架或鼻胆管置入进行治疗;腹腔脓肿可在可利用胃镜直接进入脓肿内部进行干预;黏连性肠梗阻采取胃镜引导下经鼻放置肠梗阻导管进行吸引减压,可使梗阻得以尽快解除;碱性反流性胃炎可通过胃镜检查明确诊断;胃出口梗阻的主要原因为肿瘤复发导致吻合口狭窄,金属支架置入治疗可以迅速缓解梗阻症状,内镜和X线相结合可以增加成功概率.近端胃切除术中损伤迷走神经后可导致幽门功能障碍﹑幽门痉挛,采用内镜下幽门肌切开术(G-POEM)近期疗效显著.内镜下的黏膜剥离术(ESD)可对残胃癌前病变进行完整切除,但必须基于具有丰富的ESD经验.

目的 建立体内、体外钩吻生物碱成分测定方法,并测定抵当汤减毒前后钩吻生物碱成分含量,探讨抵当汤减缓钩吻毒性的可能作用机制.方法 采用UPLC-QDa体外检测钩吻与抵当汤混合前后6种生物碱成分变化,采用UPLC-MS/MS检测抵当汤联合钩吻灌胃对小鼠血浆中钩吻生物碱成分含量的影响.结果 与抵当汤混合后,钩吻中钩吻素子、钩吻素甲、钩吻绿碱、胡蔓藤碱乙含量明显降低(P＜0.01);抵当汤十钩吻组小鼠血清钩吻素子、钩吻素甲、钩吻素己、钩吻绿碱、胡蔓藤碱乙、胡蔓藤碱丙含量均较钩吻组明显降低(P＜0.01).结论 降低钩吻素子、钩吻素甲、钩吻素己、钩吻绿碱及胡蔓藤碱乙含量可能是抵当汤减缓钩吻毒性的作用机制之一.

对葫蔓藤根茎总生物碱进行化学成分及肿瘤细胞毒活性研究.采用硅胶柱色谱、MCI-gel、Sephadex LH-20、HPLC等方法进行分离纯化,从葫蔓藤根茎的总生物碱中分离得到9个吲哚类生物碱,通过核磁共振、质谱等波谱分析技术将它们的结构鉴定为钩吻碱甲(1)、钩吻素子(2)、葫蔓藤碱乙(3)、钩吻氯碱(4)、19-(S)-羟基二氢钩吻氯碱(5)、钩吻碱戊(6)、19-(S)-钩吻醇碱(7)、19-(R)-钩吻醇碱(8)、钩吻素己(9).并对分离得到的化合物通过MTT法进行抗肿瘤活性检测,发现化合物1～3对肝癌细胞HepG2显示了很好的肿瘤细胞毒活性,IC50值分别为10.02±0.16、3.98 ±0.11、9.87±0.18 μM.