目的:探讨母系表达基因3(MEG3)对膀胱癌细胞增殖凋亡的影响及其机制。方法:膀胱癌T24细胞分为对照组(转染空质粒pcDNA3.1)、实验组(转染pcDNA3.1-MEG3)和空白组(生理盐水)。细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞增殖；Hoechst33528核染色检测细胞凋亡；实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测转染后细胞中p53、鼠双微体基因(MDM2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、MEG3的mRNA表达；蛋白质印迹法(Western blot)检测p53、MDM2、bcl-2蛋白表达。双荧光素酶报告系统检测MEG3靶基因p53的转录活性。组间比较采用方差分析及 t检验。 结果:培养24、48、72 h时，实验组细胞的吸光度( A)值为0.26±0.02、0.60±0.03、0.88±0.02；空白组的细胞 A值为0.49±0.07、0.81±0.04、1.71±0.07；对照组的细胞 A值为0.35±0.02、0.71±0.05、1.30±0.09；实验组 A值均明显低于空白组及对照组( F＝6.431、6.470、36.340， P<0.05)。Hoechst33528核染色实验显示，实验组出现明显的凋亡细胞，实验组的细胞凋亡率为(26.72±4.07)%，明显高于空白组和对照组( F＝26.100， P<0.05)。转染48 h后，实验组p53、MEG3的mRNA相对表达为7.24±0.90、30.72±2.15，均明显高于空白组和对照组( F＝51.020、188.900， P<0.05)，而实验组MDM2、bcl-2的mRNA相对表达为0.15±0.04、0.45±0.04，均明显低于空白组和对照组( F＝12.660、19.270， P<0.05)。Western blot结果显示，转染48 h后实验组p53的蛋白相对表达为0.80±0.02，明显高于空白组和对照组( F＝555.400， P<0.05)，实验组MDM2及bcl-2的蛋白相对表达为0.05±0.01、0.06±0.01，低于空白组和对照组( F＝41.730、2.098， P<0.05)。双荧光素酶报告系统检测结果显示，共转染p53启动子和MEG3过表达质粒组比p53启动子和空质粒组荧光素酶活性明显增强，前者为后者的139.99%，两者差异有统计学意义( t＝10.880， P<0.05)。 结论:MEG3过表达可显著抑制膀胱癌细胞增殖，诱导其凋亡，其机制可能与激活p53启动子的转录并调节p53、MDM2及bcl-2的表达有关。

目的:探讨胃癌(GC)患者血清中长链非编码RNA(lncRNA)H19、lncRNA母系表达基因3(MEG3)的表达及临床意义。方法:选取宿迁市第一人民医院2017年7月至2018年8月收治的87例GC患者为GC组，51例良性肿瘤患者为良性肿瘤组，40名体检健康者为健康对照组，测定各组血清lncRNA H19、lncRNA MEG3表达水平，分析其与GC患者临床病理特征和预后的关系及对GC的诊断价值。结果:健康对照组、良性肿瘤组、GC组血清lncRNA H19水平依次递增，lncRNA MEG3水平依次降低( P<0.05)；GC组血清lncRNA H19水平与肿瘤浸润深度、TNM分期、淋巴结转移有关，lncRNA MEG3水平与分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关( P<0.05)；随访13～32(23.54±4.18)个月，87例GC患者存活63例，Kaplan-Meier生存曲线显示，高血清lncRNA H19水平组和低血清lncRNA MEG3水平组总生存率明显低于低血清lncRNA H19水平组和高血清lncRNA MEG3水平组( P<0.05)；多因素Cox回归分析显示，lncRNA H19( HR＝3.442，95% CI：0.089～23.421)为GC患者预后独立危险因素，lncRNA MEG3( HR＝4.386，95% CI：0.934～20.596)为保护因素( P<0.05)；受试者工作特征(ROC)曲线显示，血清lncRNA H19＋lncRNA MEG3(AUC＝0.922，95% CI：0.861～0.962)诊断GC的灵敏度、特异度、准确度均高于血清lncRNA H19(AUC＝0.840，95% CI：0.771～0.904)、lncRNA MEG3(AUC＝0.830，95% CI：0.753～0.890)单独诊断。 结论:GC患者血清lncRNA H19水平明显升高，lncRNA MEG3水平明显降低，与肿瘤发生和发展及预后密切相关，联合检测可提升GC的诊断价值。

目的:探究膀胱尿路上皮癌中长链非编码RNA(lncRNA)母系表达基因3(MEG3)的表达情况以及MEG3调控膀胱尿路上皮癌细胞增殖活性的分子机制。方法:通过实时荧光定量PCR检测膀胱尿路上皮癌组织及癌旁正常组织中lncRNA MEG3的表达水平；通过Western blot检测过表达lncRNA MEG3后T24细胞内第10号染色体同源丢失性磷酸酶一张力蛋白基因(PTEN)蛋白水平；CCK8试剂盒检测细胞活性。结果:MEG3的RNA水平在膀胱尿路上皮癌组织中表达显著下调( P<0.01)，PTEN的表达水平也明显降低( P<0.01)。T24中过表达MEG3后，PTEN水平上调，细胞活性降低( P<0.01)；而过表达MEG3并给予PTEN抑制剂时细胞活性则上升。 结论:过表达lncRNA MEG3可通过上调PTEN抑制人膀胱尿路上皮癌T24细胞的细胞增殖活性，有可能成为临床治疗的潜在靶点。

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)母系表达基因8(MEG8)通过微小RNA-495-3p(miR-495-3p)调控急性髓性白血病细胞(AML)高迁移率族蛋白A1(HMGA1)表达及对细胞增殖、凋亡的机制.方法:选取50例经确诊为AML患者的骨髓活检标本与52例健康骨髓捐赠者骨髓标本,常规培养人AML细胞株HL-60,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法骨髓单个核细胞中lncRNA MEG8 mRNA表达.将HL-60细胞分为六组,即HL-60组(HL-60 细胞)、si-NC 组(转染 si-NC)、si-lncRNA MEG8 组(转染 si-lncRNA MEG8)、mimic-NC 组(转染 mimic-NC)、miR-495-3p mimic 组(转染 miR-495-3p mimic)、si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic 组(转染 si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic),CCK-8法检测培养24、48、72 h各组细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,West-ern blot法检测细胞中HMGA1表达,双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA MEG8、miR-495-3p、HMGA1之间的关系.结果:与对照组相比,观察组lncRNA MEG8 mRNA表达升高(P＜0.05).与miR NC+MEG8 WT组比较,miR-495-3p mimic+MEG8 WT 组荧光素酶活性下降(P＜0.05),与 miR NC+HMGA1 WT 组比较,miR-495-3p mimic+HMGA1 WT 组荧光素酶活性下降(P＜0.05).与 HL-60 组、si-NC 组、mimic-NC 组比较,si-lncRNA MEG8组、miR-495-3p mimic 组和 si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组 24、48 h 细胞增殖能力均显著下降,si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic 组细胞增殖率最低(P＜0.05).与 HL-60 组、si-NC 组和 mimic-NC 组比较,si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic 组 HL-60 细胞凋亡率高于 si-lncRNA MEG8 组和 miR-495-3p mimic 组(均 P＜0.05).与 HL-60 组、si-NC 组和 mimic-NC 组比较,si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic 组 HMGA1 蛋白表达低于 si-lncRNA MEG8组和miR-495-3p mimic组(均P＜0.05).结论:沉默lncRNA MEG8可能通过上调miR-495-3p来下调HMGB1,来抑制HL-60细胞的恶性生物学行为,可为探索AML潜在治疗靶点提供了新思路.

目的:探究长链非编码RNA母系表达基因8(LncRNA MEG8)通过靶向miR-15a-5p调控MHCⅠ类相关蛋白A/B(MICA/B)介导的结直肠癌(CRC)细胞免疫逃逸机制.方法:RT-qPCR、Western blot检测CRC组织和细胞系MEG8、miR-15a-5p、MICA、MICB、NKG2D蛋白水平;双荧光素酶实验验证MEG8对miR-15a-5p的调控关系;采用脂质体转染法将NC、MEG8、miR-NC、miR-15a-5p分别或共转染至SW480、SW620细胞,记为NC组、MEG8组、MEG8+miR-NC组、MEG8+miR-15a-5p组;将NK细胞分别与SW480、SW620细胞共培养;ELISA检测共培养液中TNF-α、IFN-γ水平;CCK-8、EdU染色、Transwell实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力;RT-qPCR、Western blot检测细胞MEG8、miR-15a-5p、MICA、MICB、NKG2D蛋白水平.结果:与癌旁组织或正常结肠上皮细胞相比,CRC组织和细胞系中MEG8、MICA、MICB、NKG2D mRNA和蛋白水平降低,miR-15a-5p水平升高(P<0.05).MEG8靶向调控miR-15a-5p.共培养体系中,与NC组相比,MEG8组细胞MICA、MICB、NKG2D蛋白水平、共培养上清液中TNF-α、IFN-γ水平明显升高,培养1 d、2 d、3 d后,OD值、EdU阳性率、迁移和侵袭细胞数明显降低(P<0.05);过表达miR-15a-5p能部分逆转过表达MEG8对细胞MICA、MICB、NKG2D、TNF-α、IFN-γ水平和增殖、侵袭转移能力的影响(P<0.05).结论:MEG8通过靶向miR-15a-5p调控MICA、MICB表达,促进NK细胞活性,抑制CRC细胞免疫逃逸.

目的:研究长链非编码RNA母系表达基因3(LncRNAs-MEG3)对鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其可能机制.方法:体外培养鼻咽癌细胞系TW03、CNE-2,转染MEG3后分为空白对照组(NC)、阴性转染组(阴性对照质粒转染)和实验组(MEG3 mimis质粒转染).采用实时定量PCR检测鼻咽癌细胞中LncRNAs-MEG3含量,CCK-8检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果:与正常鼻咽上皮细胞系NP69相比,鼻咽癌细胞中MEG3的表达明显降低(0.62 ±0.04)(P＜0.05).与空白对照组、阴性转染组相比,实验组中MEG3 mRNA的表达升高(5.31±0.12)(F=441.062,P＜0.01),同时检测到鼻咽癌细胞的增殖、迁移和侵袭均减少(F=10.832,P＜0.05;F=1 534.134,P＜0.05;F=1 430.212,P＜0.05),凋亡增多(F=798.066,P＜0.05),差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论:MEG3在鼻咽癌中的表达降低,提高MEG3表达则能够抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力,并促进细胞的凋亡,机制可能与抑制上皮-间质转化有关.

目的:通过检测高血压病人血清中长链非编码 RNA母系表达基因 3(lncRNA MEG3)和微小RNA-142-3p(miR-142-3p)的表达水平,分析两者与高血压相关内皮功能的相关性.方法:入选 2018 年 8 月—2020 年 10 月我院门诊部收治的 145 例高血压病人为观察组,另入选同期在我院体检的 145名健康体检者为对照组.所有研究对象空腹采集 5mL静脉血,采用反转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测血清 lncRNA MEG3和 miR-142-3p的 mRNA的相对表达水平,酶联免疫吸附技术检测血清一氧化氮(NO)、血管内皮素(ET-1)、血管性血友病因子(vWF)表达水平,比较观察组和对照组各项指标表达水平.根据疾病分级标准将观察组高血压病人分为轻度组(45例)、中度组(60 例)和重度组(40 例),比较不同组别之间各项指标表达水平,使用 Pearson 法分析观察组血清lncRNA MEG3和 miR-142-3p表达水平与 NO、ET-1和 vWF水平之间的相关性及 lncRNA MEG3 与 miR-142-3p表达水平之间的相关性.结果:与对照组比较,观察组血清 lncRNA MEG3和 NO的表达水平下降(P<0.001),血清 miR-142-3p、ET-1 和 vWF的表达水平升高(P<0.001);血清 lncRNA MEG3和 NO在轻度组、中度组和重度组高血压病人中的表达水平依次降低,血清 miR-142-3p、ET-1和 vWF的表达水平则依次增高(P<0.001);观察组血清 lncRNA MEG3表达水平与 NO水平呈正相关(r =0.682,P<0.001),与ET-1和vWF水平呈负相关(r =-0.500,P<0.001;r =-0.637,P<0.001);血清miR-142-3p表达水平与NO水平呈负相关(r =-0.683,P<0.001),与 ET-1和 vWF水平呈正相关(r =0.458,P<0.001;r =0.678,P<0.001);观察组血清 lncRNA MEG3与 miR-142-3p表达水平呈负相关(r =-0.607,P<0.001);多因素 Logistic回归分析结果显示,lncRNA MEG3、NO水平降低及 miR-142-3p、ET-1、vWF水平升高均是高血压的危险因素(P<0.05).结论:高血压病人血清中 lncRNA MEG3 表达水平降低,miR-142-3p表达水平升高,可能在高血压的进展中具有调节作用,其表达水平能够反映高血压病人内皮功能受损的程度.

目的 探讨熟地黄多糖(RGP)调控长链非编码RNA(lncRNA)母系表达基因 3(MEG3)对碘乙酸钠(MIA)诱导的骨关节炎(OA)软骨细胞凋亡的影响.方法 培养大鼠软骨细胞,不同浓度MIA(0、1、2、4、8 μmol/L)诱导建立软骨细胞损伤模型,并给予不同浓度RGP(50、100、200、400、800 mg/mL)处理筛选合适的实验浓度.实验分为正常组、MIA组、RGP 组、RGP+si-NC 组、RGP+si-MEG3 组,Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测细胞活力;Hoechst 33258 染色及流式细胞术检测细胞凋亡情况;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中MEG3、金属蛋白酶 13(MMP-13)、Ⅱ型胶原α1(COL2A1)和蛋白聚糖(ACAN)mRNA水平;蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞中磷脂酰肌醇 3 激酶(PI3K)、p-PI3K、丝/苏氨酸激酶(AKT)、p-AKT、BAX、BCL-2、caspase3 蛋白表达水平.结果 MIA以剂量依赖性方式降低软骨细胞活力,诱导细胞凋亡,并降低MEG3 和COL2A1 mRNA、ACAN mRNA水平,升高MMP-13 mRNA水平(P<0.05).100、200、400、800 mg/mL RGP可升高软骨细胞活力及MEG3 水平(P<0.05).与正常组相比,MIA组细胞活力、MEG3、COL2A1 mRNA、ACAN mRNA和p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、BCL-2蛋白水平降低,细胞凋亡率、MMP-13 mRNA和BAX、caspase3 蛋白水平升高(P<0.05);与MIA组相比,RGP 组细胞活力、MEG3、COL2A1 mRNA、ACAN mRNA 和 p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、BCL-2 蛋白水平升高,细胞凋亡率、MMP-13 mRNA和BAX、caspase3 蛋白水平降低(P<0.05);敲低MEG3 可减弱RGP 对MIA诱导的软骨细胞损伤的保护作用.结论 RGP可促进软骨细胞ECM合成,并抑制细胞凋亡,减轻MIA诱导的软骨细胞损伤,其作用机制可能与上调MEG3 表达,诱导PI3K/AKT通路活化有关.

目的 探讨缺血性脑卒中患者血清中长链非编码RNA(long-chain non-coding RNA,LncRNA)母系表达基因8(maternal expressed gene 8,MEG8)的表达及其临床价值.方法 选取2021年1月～2022年4月在海南省老年病医院接受治疗的 80 例缺血性脑卒中患者为观察组,及同期 85 例健康体检志愿者为对照组.参照美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分将患者分为轻度患者组(n=25,NIHSS<5 分)、中度患者组(n=29,5≤NIHSS≤20 分)和重度患者组(n=26,NIHSS>20 分).采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法对受试者血清中LncRNA MEG8 的水平进行测定并对不同程度组患者血清LncRNA MEG8 水平进行比较.患者血清中LncRNA MEG8 与C-反应蛋白(CRP)水平的相关性进行Pearson分析;Spearman法对患者LncRNA MEG8 与NIHSS评分的关系进行分析;Logistic分析影响缺血性脑卒中发生的因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析LncRNA MEG8 水平诊断缺血性脑卒中的价值.结果 与对照组相比,观察组血清中LncRNA MEG8 显著升高(1.55±0.31 vs 1.01±0.15),差异有统计学意义(t=14.373,P=0.000);与轻度患者组(1.26±0.18)相比,中度与重度患者组LncRNA MEG8表达水平随着病情的加重依次显著升高(1.54±0.27,1.84±0.48),差异有统计学意义(F=19.262,P=0.000);缺血性脑卒中患者血清中LncRNA MEG8与CRP水平、NIHSS评分呈正相关(r=0.412,0.488;P=0.000 5,0.000 3);高血压(OR=3.314,95%CI 1.045～10.513)、高脂血症(OR=4.340,95%CI 1.008～18.692)、糖尿病(OR=7.891,95%CI 1.024～60.828),高LncRNA MEG8(OR=7.021,95%CI 4.316～37.440)和高CRP(OR=2.415,95%CI 1.207～4.833)是发生缺血性脑卒中的危险因素(P=0.042,0.048,0.047,0.022,0.013);LncRNA MEG8水平诊断缺血性脑卒中的ROC曲线下面积为0.923(95%CI:0.880～0.966),截断值为 1.14,敏感度和特异度分别为 81.3%,94.1%.结论 缺血性脑卒中患者LncRNA MEG8 表达升高,与患者病情严重程度相关,可较好地诊断缺血性脑卒中.

母系表达基因3 (maternally expressed gene 3,MEG3)是小鼠母体印记基因Gt12的人类同系物,定位于染色体14q32.3,属于长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)[1].近年来研究发现lncRNA是调控基因表达、染色质重塑、转录、转录后加工等过程的重要分子[2-3],与多种肿瘤的发生密切相关.MEG3在多种正常组织中表达,但在多种肿瘤细胞中表达缺失[4-7].本课题组前期研究发现,人胰腺癌SW1990细胞中MEG3基因表达缺失,而上调MEG3表达后能显著抑制肿瘤细胞的增殖,并促进肿瘤细胞的凋亡[8].本研究进一步观察MEG3对SW1990细胞侵袭及运动能力的影响.