目的:探讨母系表达基因3(MEG3)对膀胱癌细胞增殖凋亡的影响及其机制。方法:膀胱癌T24细胞分为对照组(转染空质粒pcDNA3.1)、实验组(转染pcDNA3.1-MEG3)和空白组(生理盐水)。细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞增殖；Hoechst33528核染色检测细胞凋亡；实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测转染后细胞中p53、鼠双微体基因(MDM2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、MEG3的mRNA表达；蛋白质印迹法(Western blot)检测p53、MDM2、bcl-2蛋白表达。双荧光素酶报告系统检测MEG3靶基因p53的转录活性。组间比较采用方差分析及 t检验。 结果:培养24、48、72 h时，实验组细胞的吸光度( A)值为0.26±0.02、0.60±0.03、0.88±0.02；空白组的细胞 A值为0.49±0.07、0.81±0.04、1.71±0.07；对照组的细胞 A值为0.35±0.02、0.71±0.05、1.30±0.09；实验组 A值均明显低于空白组及对照组( F＝6.431、6.470、36.340， P<0.05)。Hoechst33528核染色实验显示，实验组出现明显的凋亡细胞，实验组的细胞凋亡率为(26.72±4.07)%，明显高于空白组和对照组( F＝26.100， P<0.05)。转染48 h后，实验组p53、MEG3的mRNA相对表达为7.24±0.90、30.72±2.15，均明显高于空白组和对照组( F＝51.020、188.900， P<0.05)，而实验组MDM2、bcl-2的mRNA相对表达为0.15±0.04、0.45±0.04，均明显低于空白组和对照组( F＝12.660、19.270， P<0.05)。Western blot结果显示，转染48 h后实验组p53的蛋白相对表达为0.80±0.02，明显高于空白组和对照组( F＝555.400， P<0.05)，实验组MDM2及bcl-2的蛋白相对表达为0.05±0.01、0.06±0.01，低于空白组和对照组( F＝41.730、2.098， P<0.05)。双荧光素酶报告系统检测结果显示，共转染p53启动子和MEG3过表达质粒组比p53启动子和空质粒组荧光素酶活性明显增强，前者为后者的139.99%，两者差异有统计学意义( t＝10.880， P<0.05)。 结论:MEG3过表达可显著抑制膀胱癌细胞增殖，诱导其凋亡，其机制可能与激活p53启动子的转录并调节p53、MDM2及bcl-2的表达有关。

目的:探讨胃癌(GC)患者血清中长链非编码RNA(lncRNA)H19、lncRNA母系表达基因3(MEG3)的表达及临床意义。方法:选取宿迁市第一人民医院2017年7月至2018年8月收治的87例GC患者为GC组，51例良性肿瘤患者为良性肿瘤组，40名体检健康者为健康对照组，测定各组血清lncRNA H19、lncRNA MEG3表达水平，分析其与GC患者临床病理特征和预后的关系及对GC的诊断价值。结果:健康对照组、良性肿瘤组、GC组血清lncRNA H19水平依次递增，lncRNA MEG3水平依次降低( P<0.05)；GC组血清lncRNA H19水平与肿瘤浸润深度、TNM分期、淋巴结转移有关，lncRNA MEG3水平与分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关( P<0.05)；随访13～32(23.54±4.18)个月，87例GC患者存活63例，Kaplan-Meier生存曲线显示，高血清lncRNA H19水平组和低血清lncRNA MEG3水平组总生存率明显低于低血清lncRNA H19水平组和高血清lncRNA MEG3水平组( P<0.05)；多因素Cox回归分析显示，lncRNA H19( HR＝3.442，95% CI：0.089～23.421)为GC患者预后独立危险因素，lncRNA MEG3( HR＝4.386，95% CI：0.934～20.596)为保护因素( P<0.05)；受试者工作特征(ROC)曲线显示，血清lncRNA H19＋lncRNA MEG3(AUC＝0.922，95% CI：0.861～0.962)诊断GC的灵敏度、特异度、准确度均高于血清lncRNA H19(AUC＝0.840，95% CI：0.771～0.904)、lncRNA MEG3(AUC＝0.830，95% CI：0.753～0.890)单独诊断。 结论:GC患者血清lncRNA H19水平明显升高，lncRNA MEG3水平明显降低，与肿瘤发生和发展及预后密切相关，联合检测可提升GC的诊断价值。

目的:探索2，3，7，8-四氯二苯并二 英（2，3，7，8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin，TCDD）诱发小鼠腭裂的作用及机制。 方法:将84只孕鼠根据体质量按随机数字表随机分为TCDD组和对照组（每组42只），在孕期第10天（gestation day 10，GD10）上午8时分别给予64 μg/kg TCDD和等量玉米油灌胃。HE染色观察GD13~GD15胎鼠腭发育的形态学变化，5-溴脱氧尿嘧啶核苷（5-bromo-2-deoxyuridine，BrdU）免疫荧光观察TCDD对GD13~GD15胎鼠腭突间充质细胞增殖的影响，原位杂交和实时定量PCR（real-time PCR，RT-PCR）检测母系印记基因3（maternally expressed gene3，MEG3）在胎鼠腭突间充质细胞中的定位和表达，蛋白质印迹法检测胎鼠腭突间充质细胞内Smad2、磷酸化Smad2（phospho-Smad2，p-Smad2）、Smad4、Smad7的蛋白表达，RNA 结合蛋白免疫沉淀实验（RNA binding protein immunoprecipitation，RIP）验证MEG3与转化生长因子β受体Ⅰ（transforming growth factor-β receptor Ⅰ，TGF-βRⅠ）的相互作用。结果:与对照组相比，TCDD组GD13（ t=6.66， P=0.003）和GD14（ t=6.56， P=0.003）胎鼠腭突间充质细胞中BrdU阳性细胞率显著减少，但在GD15时BrdU阳性细胞率显著增加（ t=-5.98， P=0.004）。原位杂交显示MEG3主要表达于间充质细胞的细胞核。RT-PCR结果显示，TCDD组腭突间充质细胞内的MEG3相对表达量显著高于对照组（GD13： t=39.28， P=0.012；GD14： t=18.75， P=0.042；GD15： t=28.36， P=0.045）。在GD14，TCDD组胎鼠腭突间充质细胞内p-Smad2、Smad4蛋白表达均显著低于对照组（p-Smad2： t=9.48， P=0.001；Smad4： t=63.10， P=0.001），Smad7蛋白表达量显著高于对照组（ t=30.77， P<0.001）。RIP实验结果显示，TCDD组GD14胎鼠腭突间充质细胞中TGF-βRⅠ结合MEG3的表达量（23.940±1.301）显著高于对照组（8.537±1.523）（ t=24.55， P<0.001）。 结论:TCDD可能通过促进MEG3与TGF-βRⅠ的靶向结合影响TGF-β/Smad信号途径的激活，从而抑制腭突间充质细胞的增殖，由此导致腭裂的发生。

目的:探讨LncRNA-MEG3及Rac1/Cdc42/PAK1信号通路在先天性巨结肠(Hirschsprung disease，HSCR)发病机制中的作用及机制。方法:收集2016年1月至2018年12月在遵义医科大学附属医院病理确诊HSCR并手术治疗的患儿结肠组织标本30例为实验组(HSCR组)，其中男23例，女7例；年龄为(18.86±1.78)个月；体重为(4.56±0.19)kg。收集非先天性消化道畸形、非肠神经相关疾病手术切除肠管患儿14例组织标本为对照组(Normal组)，包括坏死性小肠结肠炎、嵌顿疝和肠套叠造瘘患儿在闭瘘手术时吻合处正常肠管，其中男10例，女4例；年龄为(16.73±1.03)个月，体重为(5.01±0.20)kg。采用qRT-PCR和Western blot检测HSCR组与Normal组中MEG3和Rac1/Cdc42/PAK1信号通路各蛋白的表达水平。在SH-SY5Y细胞中通过转染MEG3过表达质粒以及加入通路抑制剂AZA1构建细胞模型，并分为4组：①空白对照组(Control组)，仅有SH-SY5Y细胞；②空载体组(pcDNA3.1组)，SH-SY5Y细胞+pcDNA3.1质粒；③MEG3过表达组(MEG3组)，SH-SY5Y细胞+pcDNA3.1-MEG3质粒；④抑制剂组(MEG3+AZA1组)，SH-SY5Y细胞+pcDNA3.1-MEG3+AZA1抑制剂。采用Western blot、CCK-8和Transwell方法检测各组细胞中Rac1、Cdc42、PAK1及P-PAK1蛋白表达量以及细胞增殖和迁移能力。两组间数据在进行方差同质性检验后采用两独立样本 t检验比较，多组数据之间的比较采用单因素方差分析。若总体方差不齐，采用修正的界限值或Tamhane's T2检验；非正态分布的计量资料，采用多独立样本比较的秩和检验。 结果:HSCR患儿狭窄段肠管组织中MEG3、Rac1、Cdc42、PAK1和P-PAK1蛋白表达量均较Normal组低(Rac1：0.20±0.05比0.78±0.05， t＝8.37；Cdc42：0.38±0.08比1.03±0.08， t＝5.68；PAK1：0.27±0.02比1.10±0.06， t＝13.52；P-PAK1：0.24±0.03比1.07±0.06， t＝12.99； P均<0.01)；在细胞模型中，MEG3组细胞中Rac1、Cdc42、PAK1和P-PAK1蛋白相对表达量均高于Control组和MEG3+AZA1组(Rac1：0.96±0.05比0.36±0.11比0.75±0.20， F＝3.46， P<0.05；Cdc42：1.12±0.08比0.53±0.19比0.68±0.10， F＝5.37， P<0.01；PAK1：1.02±0.09比0.55±0.14比0.47±0.14， F＝5.60， P<0.05；P-PAK1：0.97±0.07比0.66±0.08比0.47±0.03， F＝15.66， P<0.05)，MEG3组细胞中MEG3表达量明显高于Control组和pcDNA3.1组(1.00±0.20比0.14±0.04比0.02±0.01， F＝20.56， P<0.01)，Control组和pcDNA3.1组中MEG3相对表达量差异无统计学意义( P>0.05)。MEG3组细胞增殖能力高于Control组及MEG3+AZA1组(12 h：0.19±0.00比0.19±0.00比0.18±0.00， P>0.05；24 h：0.21±0.00比0.19±0.01比0.17±0.00， F＝12.00， P<0.01；48 h：0.30±0.02比0.26±0.00比0.22±0.01， F＝9.60， P<0.05)。MEG3组细胞迁徙数量明显高于Control组(141.67±11.93比96.33±8.02， t＝3.15， P<0.05)，MEG3+AZA1组细胞迁徙数量低于MEG3组和Control组(71.00±7.00比141.67±11.93比96.33±8.02， F＝15.04， P<0.01)。 结论:低表达的MEG3可能通过调控Rac1/Cdc42/PAK1信号通路抑制神经嵴细胞增殖和迁移能力，可能与HSCR发生有关。

目的:探究膀胱尿路上皮癌中长链非编码RNA(lncRNA)母系表达基因3(MEG3)的表达情况以及MEG3调控膀胱尿路上皮癌细胞增殖活性的分子机制。方法:通过实时荧光定量PCR检测膀胱尿路上皮癌组织及癌旁正常组织中lncRNA MEG3的表达水平；通过Western blot检测过表达lncRNA MEG3后T24细胞内第10号染色体同源丢失性磷酸酶一张力蛋白基因(PTEN)蛋白水平；CCK8试剂盒检测细胞活性。结果:MEG3的RNA水平在膀胱尿路上皮癌组织中表达显著下调( P<0.01)，PTEN的表达水平也明显降低( P<0.01)。T24中过表达MEG3后，PTEN水平上调，细胞活性降低( P<0.01)；而过表达MEG3并给予PTEN抑制剂时细胞活性则上升。 结论:过表达lncRNA MEG3可通过上调PTEN抑制人膀胱尿路上皮癌T24细胞的细胞增殖活性，有可能成为临床治疗的潜在靶点。

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)母系表达基因8(MEG8)通过微小RNA-495-3p(miR-495-3p)调控急性髓性白血病细胞(AML)高迁移率族蛋白A1(HMGA1)表达及对细胞增殖、凋亡的机制.方法:选取50例经确诊为AML患者的骨髓活检标本与52例健康骨髓捐赠者骨髓标本,常规培养人AML细胞株HL-60,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法骨髓单个核细胞中lncRNA MEG8 mRNA表达.将HL-60细胞分为六组,即HL-60组(HL-60 细胞)、si-NC 组(转染 si-NC)、si-lncRNA MEG8 组(转染 si-lncRNA MEG8)、mimic-NC 组(转染 mimic-NC)、miR-495-3p mimic 组(转染 miR-495-3p mimic)、si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic 组(转染 si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic),CCK-8法检测培养24、48、72 h各组细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,West-ern blot法检测细胞中HMGA1表达,双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA MEG8、miR-495-3p、HMGA1之间的关系.结果:与对照组相比,观察组lncRNA MEG8 mRNA表达升高(P＜0.05).与miR NC+MEG8 WT组比较,miR-495-3p mimic+MEG8 WT 组荧光素酶活性下降(P＜0.05),与 miR NC+HMGA1 WT 组比较,miR-495-3p mimic+HMGA1 WT 组荧光素酶活性下降(P＜0.05).与 HL-60 组、si-NC 组、mimic-NC 组比较,si-lncRNA MEG8组、miR-495-3p mimic 组和 si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic组 24、48 h 细胞增殖能力均显著下降,si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic 组细胞增殖率最低(P＜0.05).与 HL-60 组、si-NC 组和 mimic-NC 组比较,si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic 组 HL-60 细胞凋亡率高于 si-lncRNA MEG8 组和 miR-495-3p mimic 组(均 P＜0.05).与 HL-60 组、si-NC 组和 mimic-NC 组比较,si-lncRNA MEG8+miR-495-3p mimic 组 HMGA1 蛋白表达低于 si-lncRNA MEG8组和miR-495-3p mimic组(均P＜0.05).结论:沉默lncRNA MEG8可能通过上调miR-495-3p来下调HMGB1,来抑制HL-60细胞的恶性生物学行为,可为探索AML潜在治疗靶点提供了新思路.

目的:观察清脑滴丸对大鼠脑微血管内皮细胞(rat brain microvascular endothelial cells,RBMECs)氧糖剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)损伤模型的影响,探讨其调节长链非编码 RNA母系表达基因 3(long non-coding RNA maternally expressed gene 3,LncRNA MEG3)表达及对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligome-rization domain-like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体活化的作用.方法:将20 只SD大鼠随机分为空白血清组和清脑滴丸含药血清组(150 mg·kg-1),每组10 只,连续灌胃7d,每日2 次,从而制备血清样品.取对数生长期的RBMECs,随机分为对照组、模型组、清脑滴丸组、MEG3 过表达组、MEG3 过表达+清脑滴丸组.除对照组外,其余各组细胞均进行OGD/R造模.观察细胞血管形成情况,采用CCK-8 法检测细胞存活率,qRT-PCR法检测细胞LncRNA MEG3 mRNA表达水平,Western blot法检测细胞 NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a caspase recruitment domain,ASC)、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase-1,c-Caspase-1)、肿瘤抑制蛋白p53(tumor suppressor protein p53,p53)、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 3(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase-3,c-Caspase-3)表达水平.结果:与对照组比较,模型组细胞存活率降低、RBMECs形成的血管总长度缩短(P<0.01);与模型组比较,清脑滴丸组、MEG3 过表达+清脑滴丸组细胞存活率升高、RBMECs形成的血管总长度增加(P<0.05).与对照组比较,模型组LncRNA MEG3 mRNA水平升高(P<0.05);与模型组比较,清脑滴丸组LncRNA MEG3 mRNA水平降低(P<0.01),MEG3 过表达+清脑滴丸组、MEG3 过表达组LncRNA MEG3 mRNA水平升高(P<0.01);与清脑滴丸组比较,MEG3 过表达+清脑滴丸组细胞LncRNA MEG3 mRNA水平升高(P<0.01).与对照组比较,模型组细胞NLRP3、ASC、c-Caspase-1、p53、c-Caspase-3 蛋白表达水平升高(P<0.01);与模型组比较,清脑滴丸组、MEG3 过表达+清脑滴丸组细胞 NLRP3、ASC、c-Caspase-1、p53、c-Caspase-3 蛋白表达水平降低(P<0.05);与清脑滴丸组比较,MEG3 过表达+清脑滴丸组细胞NLRP3、ASC、c-Caspase-1、p53 蛋白表达水平升高(P<0.05).结论:清脑滴丸可能通过下调LncRNA MEG3 表达和抑制NLRP3 炎症小体活化,提高细胞存活率和血管形成能力,从而发挥对RBMECs的保护作用.

目的:探究长链非编码RNA母系表达基因8(LncRNA MEG8)通过靶向miR-15a-5p调控MHCⅠ类相关蛋白A/B(MICA/B)介导的结直肠癌(CRC)细胞免疫逃逸机制.方法:RT-qPCR、Western blot检测CRC组织和细胞系MEG8、miR-15a-5p、MICA、MICB、NKG2D蛋白水平;双荧光素酶实验验证MEG8对miR-15a-5p的调控关系;采用脂质体转染法将NC、MEG8、miR-NC、miR-15a-5p分别或共转染至SW480、SW620细胞,记为NC组、MEG8组、MEG8+miR-NC组、MEG8+miR-15a-5p组;将NK细胞分别与SW480、SW620细胞共培养;ELISA检测共培养液中TNF-α、IFN-γ水平;CCK-8、EdU染色、Transwell实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力;RT-qPCR、Western blot检测细胞MEG8、miR-15a-5p、MICA、MICB、NKG2D蛋白水平.结果:与癌旁组织或正常结肠上皮细胞相比,CRC组织和细胞系中MEG8、MICA、MICB、NKG2D mRNA和蛋白水平降低,miR-15a-5p水平升高(P<0.05).MEG8靶向调控miR-15a-5p.共培养体系中,与NC组相比,MEG8组细胞MICA、MICB、NKG2D蛋白水平、共培养上清液中TNF-α、IFN-γ水平明显升高,培养1 d、2 d、3 d后,OD值、EdU阳性率、迁移和侵袭细胞数明显降低(P<0.05);过表达miR-15a-5p能部分逆转过表达MEG8对细胞MICA、MICB、NKG2D、TNF-α、IFN-γ水平和增殖、侵袭转移能力的影响(P<0.05).结论:MEG8通过靶向miR-15a-5p调控MICA、MICB表达,促进NK细胞活性,抑制CRC细胞免疫逃逸.

目的:研究长链非编码RNA母系表达基因3(LncRNAs-MEG3)对鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其可能机制.方法:体外培养鼻咽癌细胞系TW03、CNE-2,转染MEG3后分为空白对照组(NC)、阴性转染组(阴性对照质粒转染)和实验组(MEG3 mimis质粒转染).采用实时定量PCR检测鼻咽癌细胞中LncRNAs-MEG3含量,CCK-8检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果:与正常鼻咽上皮细胞系NP69相比,鼻咽癌细胞中MEG3的表达明显降低(0.62 ±0.04)(P＜0.05).与空白对照组、阴性转染组相比,实验组中MEG3 mRNA的表达升高(5.31±0.12)(F=441.062,P＜0.01),同时检测到鼻咽癌细胞的增殖、迁移和侵袭均减少(F=10.832,P＜0.05;F=1 534.134,P＜0.05;F=1 430.212,P＜0.05),凋亡增多(F=798.066,P＜0.05),差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论:MEG3在鼻咽癌中的表达降低,提高MEG3表达则能够抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力,并促进细胞的凋亡,机制可能与抑制上皮-间质转化有关.

目的:通过检测高血压病人血清中长链非编码 RNA母系表达基因 3(lncRNA MEG3)和微小RNA-142-3p(miR-142-3p)的表达水平,分析两者与高血压相关内皮功能的相关性.方法:入选 2018 年 8 月—2020 年 10 月我院门诊部收治的 145 例高血压病人为观察组,另入选同期在我院体检的 145名健康体检者为对照组.所有研究对象空腹采集 5mL静脉血,采用反转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测血清 lncRNA MEG3和 miR-142-3p的 mRNA的相对表达水平,酶联免疫吸附技术检测血清一氧化氮(NO)、血管内皮素(ET-1)、血管性血友病因子(vWF)表达水平,比较观察组和对照组各项指标表达水平.根据疾病分级标准将观察组高血压病人分为轻度组(45例)、中度组(60 例)和重度组(40 例),比较不同组别之间各项指标表达水平,使用 Pearson 法分析观察组血清lncRNA MEG3和 miR-142-3p表达水平与 NO、ET-1和 vWF水平之间的相关性及 lncRNA MEG3 与 miR-142-3p表达水平之间的相关性.结果:与对照组比较,观察组血清 lncRNA MEG3和 NO的表达水平下降(P<0.001),血清 miR-142-3p、ET-1 和 vWF的表达水平升高(P<0.001);血清 lncRNA MEG3和 NO在轻度组、中度组和重度组高血压病人中的表达水平依次降低,血清 miR-142-3p、ET-1和 vWF的表达水平则依次增高(P<0.001);观察组血清 lncRNA MEG3表达水平与 NO水平呈正相关(r =0.682,P<0.001),与ET-1和vWF水平呈负相关(r =-0.500,P<0.001;r =-0.637,P<0.001);血清miR-142-3p表达水平与NO水平呈负相关(r =-0.683,P<0.001),与 ET-1和 vWF水平呈正相关(r =0.458,P<0.001;r =0.678,P<0.001);观察组血清 lncRNA MEG3与 miR-142-3p表达水平呈负相关(r =-0.607,P<0.001);多因素 Logistic回归分析结果显示,lncRNA MEG3、NO水平降低及 miR-142-3p、ET-1、vWF水平升高均是高血压的危险因素(P<0.05).结论:高血压病人血清中 lncRNA MEG3 表达水平降低,miR-142-3p表达水平升高,可能在高血压的进展中具有调节作用,其表达水平能够反映高血压病人内皮功能受损的程度.