目的:探讨层粘连蛋白α3（LAMA3）DNA甲基化对卵巢上皮性癌（卵巢癌）铂耐药及预后的影响及可能的机制。方法:（1）通过数据库中生物信息学数据分析LAMA3 DNA甲基化水平与卵巢癌铂耐药的关系。（2）选取2000年1月至2012年12月在广西医科大学附属肿瘤医院诊治的卵巢癌患者共67例（包括铂耐药组35例和铂敏感组32例），采用焦磷酸测序技术检测两组卵巢癌组织中LAMA3 DNA甲基化水平，探讨其对卵巢癌患者铂耐药及预后的诊断效能，并进一步分析其对卵巢癌铂耐药患者化疗效果及预后的影响。结果:（1）从基因互作检索平台（STRING）数据库中筛选出与LAMA3高度互作的10个蛋白，包括层粘连蛋白β（LAMB）3、层粘连蛋白γ（LAMC）3、整合素α（ITGA）6、整联蛋白β4（ITGB4）、ITGA3、LAMC1、LAMB2、肌营养不良蛋白关联糖蛋白1（DAG1）、LAMB1、17型胶原蛋白α1链（COL17A1）蛋白；京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析显示，LAMA3及其相关互作蛋白通过细胞凋亡、细胞周期、DNA损伤反应、上皮间质转化（EMT）、雄激素受体（AR）、雌激素受体（ER）、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）、大鼠肉瘤癌基因（RAS）/有丝分裂原活化蛋白激酶（MAPK）、受体酪氨酸激酶（RTK）、结节性硬化症蛋白复合体（TSC）/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）等信号通路，参与恶性肿瘤发生、发展过程的调控，其表达水平与卵巢癌顺铂等化疗药物的敏感性相关。（2）本院临床数据分析发现，铂耐药组、铂敏感组卵巢癌组织中LAMA3 DNA甲基化水平分别为71%（25/35）、69%（22/32），两组比较，差异无统计学意义（ χ2=0.057， P=0.811）；LAMA3 DNA甲基化水平判断卵巢癌铂耐药的曲线下面积（AUC）为0.601，预测患者预后的AUC值为0.686。LAMA3 DNA高甲基化铂耐药卵巢癌患者（24例）的化疗效果较低甲基化铂敏感患者（15例）更差［有效率分别为50%（12/24）和15/15； χ2=10.833， P=0.001］，且LAMA3 DNA甲基化水平对卵巢癌患者的无进展生存时间和总生存时间均有显著影响（ P均<0.05）。 结论:LAMA3 DNA甲基化水平对卵巢癌患者的铂耐药及预后具有一定的诊断和预测价值，可能与卵巢癌的调控机制、铂耐药及预后存在密切联系。

毒蕈碱型乙酰胆碱受体(muscarinic acetylcholine receptor，M-AChR)是胆碱能受体的一种，近年来关于各类M-AChR在抑郁症中的机制研究很多，本次主要对M-AChR在抑郁症发病和治疗中的相关机制进行阐述和总结，并且对相关药物的研究进行总结和展望。M1-AChR、M2-AChR在抗抑郁方面发挥重要作用，其可能机制涉及海马和前额叶皮质(prefrontal cortex，PFC)等脑区雷帕霉素靶蛋白复合体1(mammalian target of rapamycin complex 1，mTORC1)信号通路的激活、兴奋性神经递质和脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor，BDNF)等因子的释放等，同时蛋白激酶A(protein kinase A，PKA)-α-氨基羟甲基恶唑丙酸(α-amino-3-hydroxy-5-methylisoxazole-4-propionieacid，AMPA)通路的激活在M2-AChR介导的抗抑郁效应中起重要调节作用，但是具体机制以及各类M-AChR间的相互作用仍有待于探究，这也可能成为接下来的研究重点。目前，相关药物的临床试验主要集中在东莨菪碱，随着临床试验的进展，该药物的量效曲线和副作用耐受性等会更加明确，相信更多患者能够从中受益。

UNC-51样激酶1(ULK1)是参与调节自噬启动的重要因子,ULK1通过自噬和线粒体氧化应激调节炎症细胞因子,参与了多种疾病的病理过程.ULK1及其复合体受雷帕霉素(mTOR)和AMP活化蛋白激酶(AMPK)调节启动自噬,从而对多种炎症性疾病产生不同影响.而在炎症性疾病中,线粒体氧化应激可使ULK1入核加速细胞凋亡.因此,ULK1在炎症性疾病中发挥不同的重要作用.例如,ULK1在哮喘中启动气道上皮细胞线粒体的自噬,在急性肝衰竭中参与线粒体氧化应激,在动脉粥样硬化中影响相关炎症因子,在糖尿病中调节自噬.本文从ULK1的生物学功能、在炎症性疾病中的影响和靶向药物的研究进展进行综述.

目的 研究抑制了慢性排斥反应的大鼠模型中,T淋巴细胞中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白-丝/苏氨酸蛋白激酶(mTOR)通路的各成分是否发生改变,探讨mTOR信号通路在抑制慢性排斥反应中的作用.方法 受体August-Copenhagen-Irish(ACI)大鼠与供体Wistar-Furth (WF)大鼠接受腹腔内异位心脏移植术.实验组大鼠给予慢性排斥反应消除处理,即术前给予经改造的Ⅰ类主要组织相容性复合物(MHC Ⅰ),并给予亚治疗量环孢素(CsA)(10 mg/kg,3d),治疗对照组于术后给予亚治疗量CsA(10 mg/kg,3 d),空白对照组不进行处理.将每组大鼠分为在术后1、3、7d处死的3个亚组,每个亚组大鼠数量为5只.分别在亚组对应天数处死大鼠,获取脾脏样本进行T细胞提取与蛋白免疫印迹(Western blot)分析.结果 蛋白免疫印迹结果表明,在消除了慢性排斥反应的移植心脏中(实验组),对雷帕霉素敏感的复合体1 (mTOR C1)的mTOR与mTOR调节相关蛋白(Raptor)下调,对雷帕霉素不敏感的复合体2(mTOR C2)的伴侣分子(Rictor)与哺乳动物应激活化蛋白激酶相互作用蛋白1 (Sin1)下调,mTOR调节因子(Deptor)与mTOR通路下游目标分子(Rac1)也受到抑制.结论 在消除了慢性排斥反应的大鼠心脏移植模型中,mTORC1和C2通路均受到影响,同时影响了细胞增殖调节(mTOR C1)和细胞运动调节(mTOR C2).因此,选择性地对T细胞肌动蛋白细胞骨架通路进行抑制,可成为新的免疫抑制剂发展方向.

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)常被用于研究免疫抑制剂药物雷帕霉素的功能和作用机制.作为丝氨酸/苏氨酸激酶,mTOR有两种功能明显不同的复合体——mTORC1和mTORC2,控制诸如蛋白质合成,能量代谢,细胞大小,脂质代谢,自噬,线粒体功能和溶酶体形成等细胞的基本功能.此外,mTOR控制的信号通路还参与调节神经系统的许多生理功能,包括神经系统的发育,突触可塑性,记忆储存和认知功能.因此,mTOR信号通路失调可能与许多神经和精神疾病的发生有关.前期研究表明,抑制mTORC1对癫痫、认知障碍和脑部肿瘤等疾病的治疗有利,而直接或间接刺激mTORC1一方面可促进脑细胞轴突再生和骨髓鞘形成,另一方面该通路可成为治疗抑郁症的靶点之一.

艾司氯胺酮是一种新型抗抑郁药,经鼻给药,主要的作用机制是可持续阻断N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体,阻断真核细胞的延伸因子2(eEF2)激酶,增加脑源性神经营养性因子(BDNF)的释放及原肌球蛋白受体激酶B (TrkB)的表达,诱导雷帕霉素靶蛋白复合体1(mTORC1)信号通路及细胞外调节蛋白激酶(ERK)激活,改善神经可塑性和突触的形成.相关临床研究结果均表明艾司氯胺酮治疗难治性抑郁症起效快速,能迅速消除患者的自杀意图,低剂量维持治疗有助于患者病情稳定,不良反应较少.

结节性硬化症(tuberous sclerosis complex, TSC)是一种由于TSC1或TSC2基因种系突变导致蛋白功能失活而引起的常染色体显性遗传性疾病,几乎累及所有器官及系统,以脑、肾脏、皮肤、心脏和肺表现突出[1-2].其中肾脏病变、癫痫及新生儿心脏横纹肌瘤是TSC患者常见的死因.TSC的新生儿发病率为1/10000～1/6000,目前国内尚缺乏相关的流行病学数据,推测有超过10万的TSC患者[1].TSC1或TSC2基因突变引起TSC1/TSC2复合体功能异常,对雷帕霉素靶蛋白复合体1(mechanistic target of rapamycin complex 1,mTORC1)解除抑制作用,通过促进细胞生长并抑制细胞自噬导致TSC的发生[1].TSC患者的肾脏病变包括肾血管平滑肌脂肪瘤(renal angiomyolipoma,RAML)、肾脏囊性疾病和肾细胞癌,其中RAML可见于80％以上的TSC患者,成年患者中约80％的死亡是由于RAML破裂出血或肾脏相关并发症所致[3-5].2017年5月中华医学会泌尿外科分会发表了国内首部《结节性硬化症相关肾血管平滑肌脂肪瘤诊治专家共识》,显著提高了国内临床医师对结节性硬化症相关肾血管平滑肌脂肪瘤(renal angiomyolipoma associated with tuberous sclerosis complex, TSC-RAML)的认识水平[6].但是,在TSC-RAML诊疗和管理过程中发现了一些亟待规范化和优化的关键临床问题,为此特制定本专家共识.

背景与目的:柚皮素(NAR)是天然的黄酮类化合物,能够抑制宫颈癌、胃癌、舌鳞癌及肝癌细胞的生长,但其对甲状腺癌细胞的作用尚不明确.本实验探讨NAR对甲状腺细胞的影响,并初步研究其作用机制,以期为甲状腺癌的药物研发提供理论基础.方法:不同浓度的NAR处理甲状腺癌ACT-1细胞不同时间后,用MTT法检测细胞存活率,以观察NAR对ACT-1细胞的时间、浓度效应并计算IC50值.在以上实验基础上,选择适合的浓度的NAR与适合的时间处理ACT-1细胞,然后分别采用Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡;绿色荧光蛋白(GFP)标记质粒转染检测自噬小体变化;Western blot法检测自噬相关蛋白(LC3 Ⅰ、LC3 Ⅱ、p62)以及AMPK/mTORC1通路相关蛋白表达的变化,以及AMPK抑制剂对NAR作用的影响.结果:NAR能明显抑制ACT-1细胞的存活,呈时间与浓度依赖性(均P＜0.05),其12、24和48 h的IC50值分别为85.65、50.12、38.94 μg/mL.选用25、50、100 μg/mL的NAR处理ACT-1细胞24 h后,细胞凋亡率、自噬小体数量、LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ和p-AMPK/AMPK蛋白表达明显升高,p62和p-mTORC1/mTORC1蛋白表达明显降低,均呈浓度依赖性(均P＜0.05).用100 μg/mL NAR同时加入25 μmol/L AMPK抑制剂后处理ACT-1细胞后,NAR的以上作用以及升高凋亡效应蛋白caspase-3的作用被明显抑制(均P＜0.05).结论:NAR能够抑制甲状腺癌ACT-1细胞增殖,诱导凋亡,这可能与其调控AMPK/mTORC1信号通路,增强自噬相关.

目的:探讨雷帕霉素对哮喘调节性T细胞体外分化的作用及机制.方法:采用卵蛋白致敏、激发制备哮喘模型.采用超高速流式细胞分选仪收集哮喘小鼠和正常小鼠的脾CD4+CD25-T细胞,进一步分为三组,其中模型对照组予转化生长因子β(TGF-β)、白介素(IL)-2,雷帕霉素组予TGF-β、IL-2的同时用雷帕霉素(终浓度为500 nmol/L)干预.采用流式细胞仪检测调节性T细胞水平和CD4+CD25 T细胞增殖情况;采用蛋白质印迹法测定哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合体(mTORC) 1/2通路相关蛋白S6、Akt磷酸化水平.结果:与模型对照组比较,雷帕霉素组调节性T细胞比例增加,CD4+CD25 T细胞增殖水平降低,mTORC 1/2信号通路下游S6、Akt磷酸化水平降低(均P＜0.05).结论:雷帕霉素可促进调节性T细胞的分化及功能,其在一定程度上与抑制mTORC1/2信号通路相关.

磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinases,PI3K)及其下游的蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)组成的PI3K/Akt/mTOR信号通路在调控肿瘤细胞的生长、凋亡和迁移中发挥重要的作用.中医药领域以PI3K/Akt/mTOR信号通路为切入点,进行了中药单体及有效成分、中药复方干预胃癌中PI3K/Akt/mTOR信号通路的临床研究取得了一定突破,并将中医药的作用机制归纳为4类:(1)调节抗凋亡Bcl-2蛋白及促凋亡Bax蛋白之间的平衡、上调Caspase-3、9相关基因蛋白及线粒体通路诱导细胞凋亡;(2)增加自噬溶酶体数量及自噬体囊泡,促使自噬相关基因Atg复合体的产生,提升LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ自噬比值水平及相关蛋白Beclin-1、p62诱导胃癌细胞自噬;(3)促进缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)高表达和缺氧诱导因子的释放进而激活血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)促进血管形成;(4)调节特定miRNA中miR-21及miR-10a表达抑制肿瘤细胞生长.