目的:分析淮南市2016年2—4月外环境标本中H9N2亚型禽流感病毒基因组特征。方法:选取H9N2亚型荧光PCR检测核酸阳性标本(Ct值≤30)，经鸡胚分离培养提取RNA，扩增8个基因节段进行全基因序列测定，分析淮南株各基因节段分子特征，构建进化树进化分析。结果:淮南市外环境2株H9N2禽流感毒株血凝素(hemagglutinin, HA)基因和神经氨酸酶(neuraminidase, NA)基因与A/Anhui-Lujiang/39/2018/H9N2人源株核苷酸同源性分别为98.2%～98.3%/97.2%～94.9%，氨基酸序列同源性为98.9%～98.8%/99.2%～98.6%，其余6个内源基因与A/Anhui/1/2013/H7N9、A/Anhui/33163/2016/H5N6高度同源；基因进化分析显示，2016年淮南市2株H9N2亚型禽流感毒株为G57基因型，淮南市2株H7N9分离株、安徽人感染A/Anhui/1/2013/H7N9和A/Anhui/33163/2016/H5N6内源基因均为G57-like基因型；HA蛋白受体结合域氨基酸S132D、K138T、T189D、V/A190T、Q226L变异，NA茎区缺失了"TEI"序列，H274Y、R292K、N294S耐药位点未发生变异，PA基因I550L，PB1基因I368V，PB2基因I504V，NS1基因P42S，M1基因N30D、T215A，M2基因耐药S31N位点均发生突变。结论:淮南市活禽市场H9N2病毒与人感染H9N2安徽株A/Anhui-Lujiang/39/2018/H9N2高度同源，处于同一进化分支，均为G57基因型，可提供内源基因与人感染H7N9、H5N6亚型禽流感病毒重组；HA受体结合域氨基酸位点、NA茎区缺失序列、聚合酶活性增加，均加强病毒感染人类的能力，M2离子通道抑制剂(金刚烷烃类)耐药，NA抑制剂(磷酸奥司他韦)仍为敏感药物。

目的:开展2016—2018年长沙市人群感染和活禽市场(live poultry markets, LPMs)环境污染H5N6亚型禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)监测，为防控人感染H5N6亚型AIV提供实验室数据。方法:采集2016—2018年长沙市流感样病例和不明原因肺炎病例咽拭子6 909份及LPMs环境样品1 719份，利用实时RT-PCR进行A型、H5、H7、H9和N6亚型AIV核酸扩增，并对82份AIV核酸阳性样品进行高通量核苷酸测序，然后对测序结果进行BLAST比对和氨基酸(amino acids, aa)关键位点分析。结果:从6 909份病例的咽拭子样品中检出H5N6亚型AIV核酸阳性1份，从1 719份LPMs环境样品中检出A型AIV核酸阳性927份(53.93%)，H5N6亚型AIV核酸阳性193份(11.23%)。高通量核苷酸测序获得14株H5N6亚型AIV的基因组序列，aa关键位点分析显示病毒血凝素(hemagglutinin, HA)蛋白连接肽第338～347位出现6个碱性aa，对禽表现为高致病性的分子特征，受体结合位点(receptor binding site, RBS)第238～240位aa(对应H3型流感病毒第226～228位编码aa)为QSG或QRG，受体特征为禽源。神经氨酸酶(neuraminidase, NA)蛋白第290位耐药基因位点aa未出现R290K突变现象，对NA抑制剂(达菲/磷酸奥司他韦)敏感；病毒PB2蛋白发生E627K和D701N(I)突变，表明病毒致病力强。结论:长沙市人群感染H5N6亚型AIV为偶发，LPMs环境H5N6亚型AIV污染较重，需要进一步加强LPMs环境AIV监测。

本研究旨在探究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)I226R 蛋白(I226R protein,pI226R)抑制 cGAS-STING信号通路的作用机制.利用双荧光素酶报告系统和实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)证明pI226R显著抑制cGAS-STING通路介导的I型干扰素及干扰素刺激相关基因的产生.免疫共沉淀及激光共聚焦显微镜试验发现pI226R与cGAS蛋白相互作用.免疫印迹分析证明 pI226R 通过自噬-溶酶体途径促进 cGAS 蛋白的降解.同时,pI226R阻碍了cGAS与E3 泛素连接酶三基序蛋白 56(tripartite motif protein 56,TRIM56)的结合,导致cGAS的单泛素化减弱,从而抑制了cGAS的活化和cGAS-STING通路的激活.总之,本研究证明ASFV pI226R通过拮抗cGAS进而抑制宿主的抗病毒天然免疫反应,进一步增加了对研究ASFV免疫逃逸机制的理解,为疫苗的研发提供了理论基础.

目的 了解贵州省人感染H7N9禽流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)基因的分子特征、溯源和疾病风险,为高致病性禽流感H7N9病毒的预防和控制提供依据.方法 采用实时PCR对5株高致病性禽流感H7N9毒株标本(1株人感染鼻咽拭子标本,4株活禽市场环境标本)进行核酸的提取、HA基因的扩增和测序,运用生物信息学软件对H7N9禽流感病毒HA基因的同源性、遗传进化、受体结合关键位点、致病相关位点和糖基化位点变异情况进行分析.结果 贵州省威宁县人感染H7N9禽流感病毒HA基因与当地活禽市场环境中H7N9禽流感病毒核苷酸和氨基酸同源性分别为99.8%和99.6%,而4株活禽市场环境中的H7N9禽流感病毒核苷酸和氨基酸同源性分别为100.0%和100.0%.与2017年广西人感染的A/Guangxi/5/2017毒株同源性最高,分别为99.7%~99.9%和99.4%~99.8%;与2016年底广东环境中分离的毒株A/Environment/Guangdong/C16283222/2016同源性为99.0%~99.2%和98.9%~99.2%,而与WHO推荐的A/Shanghai/2/2013和A/Anhui/1/2013候选疫苗株的同源性为96.8%~97.0%和95.8%~96.2%.与广西毒株A/Guangxi/5/2017遗传进化距离最近.5株毒株HA蛋白裂解位点突变为PEVPKRKRTAR↓GLF,为高致病性禽流感突变株;受体结合关键位点均发生了G186V的突变,均未发生Q226L突变,5株毒株均发生的新突变为A363S,仅感染人的毒株发生的突变是R56K和I297V;5个潜在糖基化位点中仅421NWT和493NNT发生位置后移的变异.结论 贵州省威宁县5株H7N9禽流感病毒均为高致病性禽流感突变株,候选疫苗株匹配保护效果可能已经降低,HA蛋白裂解位点、G186V和新的突变位点的变异可能增强了H7N9禽流感病毒对人体的易感性和致病性.

目的 通过全基因组序列分析南宁市1株人感染高致病H7N9禽流感病毒的分子遗传特性. 方法 不明原因肺炎患者1例,采集其下呼吸道痰液,经荧光RT-PCR检测H7N9核酸阳性后送中国疾病预防控制中心分离病毒并应用illumina平台深度测序,用MEGA5.1进行同源性和重要氨基酸位点分析,采用Neighbor-Joining法构建进化树.结果 分离毒株命名为A/Nanning/01/2017 (H7N9),测序分析该毒株的8个基因与A/chicken/Heinan/ZZ01/2017(H7N9)和A/Guangdong/HP001/2017(H7N9)高度同源.其中,HA蛋白裂解位点由PEIPKGR↓GLF突变为PEVPKRKRTAR↓GLF,具有高致病性的分子特征;受体结合位点G186V发生变异,毒力相关位点D225G发生突变,糖基化位点保守,飞沫传播关键氨基酸158D/224K/226L、110Y/160A/226L/228S和196R/226L/228S任一组合未发生突变.NA蛋白茎杆区丢失5个氨基酸,糖基化位点和耐药性位点保守.M2蛋白耐药性位点V27G和S31N发生突变.PB1蛋白I368V位点,PA蛋白K356R位点,M1蛋白N30D位点和T215A位点及NS1蛋白P42S位点均发生突变.PB2蛋白关键氨基酸位点E627K和D701N未突变. 结论 生物信息学分析A/Nanning/01/2017 (H7N9)毒株可能来源于珠三角地区禽类的感染,具有高致病性禽流感病毒的分子特征,但未发现二代传播,人传人的可能性不大.该毒株对神经氨酸酶抑制剂药类敏感,对M2离子通道抑制剂可能产生耐药性.

目的 对H9N2禽流感病毒分离株进行全基因进化特征分析,为禽流感的防控提供研究数据.方法 对24株2017-2019年广州市禽类市场H9N2禽流感毒株进行测序,通过生物信息学软件,分析全基因组遗传进化特点.结果 24株H9N2病毒核苷酸同源性为86.20％～100.00％,核苷酸进化距离为0.00～1.54,其中HA基因的核苷酸和氨基酸进化距离变化最大,其次为PB2基因.遗传进化分析显示,所有毒株各基因在系统发生树上聚为一簇,属于G57基因型.分子特征分析显示,所有毒株属于低致病性禽流感病毒,在HA蛋白受体结合位点均发生Q226L突变,提示H9N2更容易识别人源受体.在HA-N166D、PB2-L89V/292V、PB1-I368V、L473V、PA-K356R、S409N、M1-N30D、T215A、NS1-P42S等致病性相关位点上,大部分毒株发生致病性增强突变.耐药性上,所有毒株对神经氨酸酶抑制剂敏感,对烷胺类药物耐药.结论 2017-2019年期间广州市禽类市场H9N2禽流感病毒为G57基因型,该基因型病毒普遍发生与人受体结合能力增强的稳定变异,且大部分毒株发生致病性增强的突变,需加强监测.

目的 应用RIP-Seq测序技术检测小鼠MCAO/R模型中心肌素相关转录因子A(MRTF-A)结合RNA的表达差异,探讨MRTF-A潜在的作用机制.方法 将C57BL/6小鼠随机分成假手术组及I/R组,线栓法构建MCAO模型,再灌注24 h后,提取脑组织总蛋白,利用MRTF-A抗体免疫共沉淀后,进行RNA高通量测序,获得MRTF-A结合RNA的表达谱,继而对差异RNA进行GO、KEGG分析.结果 与假手术组相比,I/R组有429个RNA发生差异表达(上调203,下调226),并且在功能元件和染色体分布上均具有显著差异.GO分子功能分析显示,差异表达RNA主要富集RNA结合、Poly(A)RNA结合等注释.KEGG通路分析显示10条通路被显著富集,其中雌激素信号通路富集最显著.结论 在脑I/R损伤时MRTF-A结合RNA表达谱发生差异改变,为深入探讨MRTF-A的分子机制提供理论依据.

目的 探究血清心型脂肪酸结合蛋白(heart type fatty acid binding protein,H-FABP)、心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)浓度结合全球急性冠状动脉事件注册(global registry of acute coronary events,GRACE)危险评分对急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)患者预后评估的价值.方法 采用回顾性分析,连续入选2016年10月至2019年2月日照市中医医院收治的AMI患者318例,依据随访12个月患者预后结局分为良好组(n=226)和不良组(n=92).收集所有受试者性别、年龄、体质量指数(body mass index,BMI)、吸烟史、糖尿病、原发性高血压(高血压)、心率、动脉二氧化碳分压(arterial partial pressure of carbon dioxide,PaCO2)、动脉血氧分压(arterial partial pressure of oxygen,PaO2)、肺动脉收缩压(pulmonary artery systolic pressure,PASP)等一般资料及血清标本.记录患者GRACE评分及血清cTnI浓度,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清H-FABP浓度.采用Spearman法分析血清H-FABP浓度、cTnI浓度与GRACE评分的相关性,采用Logistic回归分析分析影响AMI患者不良预后的危险因素,绘制受试者工作特性(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析三者对AMI患者不良预后的预测价值.结果 与良好组比较,不良组AMI患者心率、血清H-FABP浓度、cTnI浓度及GRACE评分均显著增加,差异有统计学意义(P<0.05).Spearman分析结果显示,不良预后AMI患者血清H-FABP浓度、cTnI浓度与GRACE评分均呈正相关(r=0.813、0.787,P<0.05).血清H-FABP浓度、cTnI浓度与GRACE评分高均是影响患者不良预后的独立危险因素(P<0.05).ROC曲线分析结果显示,三者单独检测预测AMI患者不良预后的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.604、0.724、0.849,截断值分别为123.540 pg/mL、1.628μg/L、143.55分,灵敏度分别为52.60％、47.80％、71.70％,特异度分别为100％、100％、95.60％;三者联合检测的AUC为0.915,灵敏度为87.10％,特异度为94.70％,灵敏度显著提高,优于单独检测.结论 血清H-FABP浓度、cTnI浓度及GRACE危险评分是AMI患者预后不良的独立危险因素,联合检测可提高对AMI患者不良预后的预测价值,可能对临床应用有一定参考意义.

[背景]20世纪90年代以来,H9N2禽流感病毒成为危害我国养禽业及人类健康和公共卫生的重要病原.[目的]了解苏中地区2019-2020年活禽市场H9N2禽流感病毒的分子进化特征.[方法]通过荧光定量PCR法对标本进行流感病毒分型检测,原始标本用SPF鸡胚进行病毒分离,用特异性引物对病毒分离物进行全基因组测序,利用BLAST、ClustalX和MEGA 6等软件进行序列比对和系统发育分析.[结果]2019-2020年间从苏中地区某农贸市场采集到231份环境和禽类标本,共检出34份甲型流感病毒,其中33份为H9N2亚型.阳性标本接种SPF鸡胚,分离到20株H9N2病毒.对其中11株病毒进行全基因组测序,系统发育分析表明11株病毒的HA和NA都属于H9N2禽流感Y280-like系的G57基因型.根据HA和NA的进化特征,11株病毒可分为5个基因组合(A、B、C、D和E),其中A(n=5)是优势流行基因组合.11株H9N2分离病毒的HA蛋白HA1和HA2亚单位的裂解位点是一个碱性氨基酸R,具有低致病性禽流感病毒的特征.HA蛋白的受体结合部位有4个氨基酸位点(I155T、H183N、A190T/V和Q226L)发生突变,推测这些病毒可能增强了对人SAα2-6Gal受体的结合力.[结论]苏中地区活禽市场H9N2禽流感病毒进化活跃,存在外溢传播人的风险,应该加强对活禽市场禽流感病毒的监测和跨种传播的研究.