目的:基于HPLC-Q-TOF-MS/MS技术和网络药理学方法,分析预测瓜蒌祛痰止咳的质量标志物(Q-Marker).方法:采用HPLC-Q-TOF-MS/MS技术鉴定瓜蒌水提液的入血原型成分,利用Swiss Target Prediction、SEA平台预测成分的作用靶点,并与CooLGeN数据库中止咳化痰药物靶点比对筛选,获得瓜蒌祛痰止咳的作用靶点.利用String数据库获得各蛋白之间的相互关系.使用DAVID数据库对瓜蒌祛痰止咳的作用靶点进行GO和KEGG通路富集分析.利用Cytoscape 3.6.0软件构建成分-靶点、蛋白-蛋白相互作用、成分-靶点-通路网络.结果:该研究共从大鼠血浆中鉴定出17个入血原型成分.经网络药理学分析,筛选得到15个与瓜蒌祛痰止咳相关的活性成分,涉及61个潜在作用靶点和23条作用通路.初步预测葫芦素D、葫芦素R、栝楼酯碱3个成分可作为瓜蒌潜在的Q-Marker.结论:该研究为瓜蒌质量标志物的筛选提供参考,同时也为瓜蒌祛痰止咳药效物质基础和作用机制研究提供参考.

目的 基于高效液相色谱四极杆飞行时间质谱(high performance liquid chromatography coupled with quadrupole time-of-flight mass spectrometry,HPLC-Q-TOF-MS)联用技术结合化学计量学建立姜半夏和姜水半夏的鉴定方法.方法 采用 Agilent Poroshell 120 SB-C18(2.1×150mm,2.7μm)色谱柱,以甲醇-5 mmol/L乙酸铵溶液为流动相,0.3 mL/min流速梯度洗脱.电喷雾离子化源、QTOF作为检测器,正离子模式检测.Profinder软件进行特征化合物提取.将Profinder软件导出的数据以PFA格式导入安捷伦代谢组学统计分析软件(mass profiler professional,MPP).通过MPP软件的主成分分析,查找姜半夏和姜水半夏之间有显著性变化的化合物,以偏最小二乘法建立姜半夏真伪鉴别预测模型,预测样品的掺伪.结果 筛选得到姜水半夏特有化合物 237个,姜半夏特有化合物 242 个.建立了姜半夏真伪鉴别模型,在掺入一定比例姜水半夏时,模型能预测样品偏离,具有一定的预测性.结论 该方法可为判别姜半夏的掺伪提供参考依据.

目的 阐明荔枝草抗炎质量标志物,并对其含量进行测定,为荔枝草药材质量控制提供参考.方法 采用高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱法(UPLC-Q-TOF-MS/MS)表征荔枝草的主要成分,根据二级质谱裂解碎片信息,并结合文献数据,进行分析鉴定.进一步通过SwissADME平台,从鉴定获得的化学成分中筛选出口服生物利用度(Oral bioavailability,OB)高且符合类药五原则的活性成分;运用SwissTargetPrediction数据库查找和预测荔枝草的成分靶点;通过在线人类孟德尔遗传数据库(Online Mendelian Inheritance in Man,OMIM)、GeneCards数据库等筛选疾病靶点.采用String11.5 数据库和Cytoscape3.7.2软件构建PPI网络,并筛选核心靶点.利用DAVID6.8进行基因本体(Gene ontology,GO)注释和KEGG通路富集分析,对富集得到的通路进行实验验证,以阐明其作用机制.对关键通路采用反向溯源分析潜在的药效物质基础进行实验验证,并建立高效液相含量测定方法.结果 从荔枝草中共鉴定出36个主要成分,包括黄酮类、萜类化合物等;进一步筛选出活性成分与疾病交集靶点190个;通过网络拓扑筛选获得核心靶点18个;富集分析发现荔枝草抗炎作用主要涉及的通路为NF-κB信号通路、PI3K-Akt信号通路、TNF信号通路.对NF-κB信号通路进行反向溯源得到高车前苷、高车前素、木犀草素和异鼠李素4个相关成分,分子对接发现其与PTGS2的活性位点的结合能分别为-9.5、-9.7、-9.4和-9.4 kcal·mol-1,均具有良好的对接活性.根据质量标志物的可测性,确定高车前苷和高车前素可作为荔枝草的抗炎质量标志物.Western blot实验结果表明高车前苷和高车前素能显著降低COX-2和NF-κB p-p65的表达(P<0.05,P<0.01).结论 荔枝草抗炎质量标志物为高车前苷和高车前素,可通过NF-κB通路发挥抗炎作用.

目的:使用高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱(HPLC-Q-TOF/MS)技术,分离鉴定黄芩总苷元提取物中的黄酮类成分,并总结其裂解规律.方法:采用岛津LX-20210330-01 C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以0.1％甲酸为流动相A,甲醇-乙腈(50∶50)为流动相B进行梯度洗脱,对黄芩总苷元提取物中的黄酮类成分进行分离,利用电喷雾离子化-四极杆-飞行时间串联质谱高分辨测定各成分母离子及其子离子的准确质量,结合电喷雾离子源正、负离子模式下的质谱信息和色谱保留时间进行结构鉴定.结果及结论:除了黄芩素和汉黄芩素两个已知成分外,从黄芩总苷元提取物中共鉴定出31种黄酮类成分,包括12种苷类与19种苷元,其中有3个化合物为本研究首次鉴定,并分析归纳了黄酮类成分在电喷雾离子源正、负离子模式下的质谱碎片裂解规律.

目的 建立加味二妙颗粒指纹图谱以及多成分含量测定方法,为其质量控制提供参考.方法 采用HPLC-Q-TOF/MS分析加味二妙颗粒中的化学成分.色谱柱为Wondasil C18 Superb(250 mm×4.6 mm,5 μm)柱,流动相为乙腈-体积分数0.1%甲酸溶液,梯度洗脱,对10 批加味二妙颗粒进行指纹图谱和4 种指标性成分含量测定.结果 HPLC-Q-TOF/MS技术共鉴定出加味二妙颗粒中144 个化合物,指纹图谱中标定了15 个共有峰,并通过对照品比对指认出(R,S)-告依春、去乙酰车叶草苷酸甲酯、盐酸黄柏碱、橙皮苷等9 个峰,加味二妙颗粒指纹图谱的相似度均>0.95;测定(R,S)-告依春、落新妇苷、橙皮苷和小檗碱 4 个指标性成分含量,质量分数分别为 0.021 1～0.056 8 mg·g-1、0.200 9～0.552 3 mg·g-1、0.274 1～0.719 1 mg·g-1、0.237 1～0.704 9 mg·g-1.结论 建立的加味二妙颗粒指纹图谱和多成分含量测定方法能够全面反映加味二妙颗粒的质量特征,亦为建立其制剂质量标准提供了依据.

目的 指认疏肝和胃汤(Shugan Hewei Decoction,SHD)主要化学成分,建立其HPLC指纹图谱,并结合化学模式识别评价其质量,同时确定9种成分含量测定方法.方法 通过UPLC-Q-TOF-MS/MS对SHD中化学成分进行分析;HPLC建立SHD指纹图谱及含量测定方法;采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2012年版),结合层次聚类分析(hierarchical cluster analysis,CA)、主成分分析(principal component analysis,PC A)与正交偏最小二乘法-判别分析(orthogonal partial least squares-discriminant analysis,OPLS-DA),寻找影响SHD质量的主要化学成分.结果 从SHD中共鉴定出88个成分,包括26个黄酮类成分、27个萜类成分、18个生物碱类成分、6个香豆素类成分、6个有机酸类成分、2个苯丙素类化合物、3个其他类成分;建立了SHD的HPLC指纹图谱,确定了20个共有峰,10批样品相似度0.972～1.000.3种化学模式识别均将样品分为2类,造成主要差异的质量差异物来源于槲皮苷.建立的多成分含量测定方法耐用性良好.结论 UPLC-Q-TOF-MS/MS 定性鉴别结合HPLC指纹图谱,可以体现SHD组分的整体特征,为其质量控制研究奠定基础.

目的 采用HPLC-Q-TOF-MS/MS技术对济川煎体内外化学成分进行定性分析,明确其物质基础及入血成分,结合网络药理学探究其治疗功能性便秘的作用机制.方法 分析采用中谱科技Symbolic Ultro? TR-AQ色谱柱(4.6 mm×100 mm,3.5μm);流动相乙腈-0.1%甲酸;电喷雾离子源;正负离子模式扫描.选取指标性成分,构建交集靶点蛋白与蛋白互作(PPI)的网络,获取核心靶点.结果 共鉴定出 89 种化学成分,体内共鉴别出 9 种原型成分,分别为松果菊苷、毛蕊花糖苷、柚皮苷、新橙皮苷、异毛蕊花糖苷、gluroside、6-去氧梓醇、升麻内酯A、iso-meranzin.根据PPI网络信息,共筛选出 10 个核心靶点.结论 本研究结果可为济川煎药效物质基础和质量控制研究提供参考.

目的 基于辣木Moringa oleifera叶的特征图谱并结合网络药理学,筛选辣木叶的质量标志物(quality markers,Q-Marker),建立其定量分析方法,为辣木叶的质量评价提供科学依据.方法 采用HPLC法建立辣木叶的特征图谱,条件如下:Phenomenex Luna C18(2)100A色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相乙腈(A)-0.5％甲酸水溶液(B)梯度洗脱,检测波长254nm,体积流量0.8mL/min,柱温35 ℃,进样量5μL.应用化学计量学方法筛选不同产地的辣木叶差异标志物,基于网络药理学获取辣木叶特征成分的关键靶点及关键通路,绘制出"特征成分-关键靶点-关键通路"网络,以预测辣木叶的调血脂Q-Marker.再以15批辣木叶药材为研究对象,对质量标志物进行含量测定.以五原则为核心确定出最终的Q-Marker.结果 建立了 15批辣木叶药材的特征图谱,结合高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱法(high performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight tandem mass spectrometry,HPLC-Q-TOF-MS/MS)确认了 8 个共有峰,通过对照品指认出其中 6 个色谱峰,分别为新绿原酸、L-色氨酸、隐绿原酸、维采宁2、异槲皮素、紫云英苷;经化学计量学分析,初步确认新绿原酸、L-色氨酸、隐绿原酸、异槲皮素、维采宁-2为不同产地的差异性标志物.经网络药理学确认新绿原酸、L-色氨酸、隐绿原酸、异槲皮素、维采宁-2为活性成分,可作用于白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloprotein 9,MMP9)等5个核心靶点,影响3条关键通路[细胞因子-细胞因子受体相互作用、产生免疫球蛋白A(immunoglobulin A,IgA)的肠道免疫网络、磷脂酰肌醇 3-激酶/蛋白激酶 B(phosphoinositide3 kinase-protein kinase B,PI3K-Akt)信号通路]发挥调血脂作用.结合"五原则"初步预测新绿原酸、L-色氨酸、隐绿原酸、异槲皮素、维采宁-2为辣木叶调血脂的潜在的Q-Marker,质量分数分别为5.81、1.91、2.23、6.59、0.94mg/g.结论 建立的质量评价方法准确可靠,在此基础上结合网络药理学所筛选出的质量标志物可为辣木叶的质量控制提供参考,为阐明其药效物质基础的作用机制奠定基础.

目的 从代谢组学层面上观察脾阴虚(Spleen-Yin deficiency,SD)糖尿病认知功能障碍(Diabetes-associated Cognitive Decline,DACD)大鼠的代谢产物变化,探究脾阴虚糖尿病认知功能障碍潜在标志物及其意义.方法 建立SD、DACD及SD-DACD大鼠模型.采用高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用技术(High performance liquid chroma-tography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry,HPLC-Q-TOF/MS)对大鼠血清样品的代谢产物进行分析.结果 各组大鼠血清代谢存在显著差异.研究建立的代谢物分析方法可以区分SD组、DACD组、SD-DACD组与空白对照(blank control,BC)组,SD组与SD-DACD组,DACD组与SD-DACD组.其中,与BC组大鼠相比,吡哆胺(pyridoxa-mine)在SD组和SD-DACD组中分别上调约24倍和25倍,在DACD组中则下调约21倍,可将SD组与DACD组、SD-DACD组与DACD组大鼠相区别.吡哆胺可作为一个潜在的生物标志物用于诊断脾阴虚DACD.涉及的苯丙氨酸代谢通路的紊乱主要发生在SD组和SD-DACD组大鼠的差异代谢产物之间.结论 吡哆胺和苯丙氨酸代谢途径参与脾阴虚糖尿病认知功能障碍的发病机制,并且可能是脾阴虚和糖尿病认知功能障碍之间相关性的基础.研究结果可为基于代谢组学的SD-DACD筛查及病因研究提供参考资料.

目的 对天王补心丸质量分析中发现的异常成分进行研究,建立薄层色谱(TLC)、超高效液相色谱—三重四极杆质谱(UPLC-QQQ-MS)同时测定天王补心丸中盐酸小檗碱、表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀等4种外源性污染成分的分析方法.方法 采用TLC法,通过优化展开系统,对158批样品进行定性鉴别;针对异常斑点,采用HPLC-Q/TOF-MS进行成分鉴定确认;采用UPLC-QQQ-MS进行定量分析.结果 158批天王补心丸样品中有9批检出盐酸小檗碱、表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀等4种外源性污染成分,分别在0.97～483.34、0.98～98.49、1.00～100.50、0.88～87.75 ng·mL-1内呈线性,回收率为99.30％～103.99％,平均标准偏差(RSD)为0.90％～2.62％(n=6),9批样品中上述4种成分的含量分别为20.3～104.1、1.0～17.6、0.4～30.6、3.2～24.8μg·g-1.结论 该方法简便、准确、专属性强,可为天王补心丸的质量控制提供参考.