目的:采用前瞻性、随机、对照研究，探讨恩替卡韦联合鳖甲煎丸治疗慢性乙型肝炎肝纤维化瘀血内阻证患者的临床疗效及其对中医证候积分的影响。方法:选择慢性乙型肝炎肝纤维化瘀血内阻证患者为研究对象，随机分为治疗组与对照组，分别接受恩替卡韦加鳖甲煎丸或恩替卡韦加鳖甲煎丸模拟剂治疗48周。比较两组患者治疗前后肝组织硬度检测（LSM）值及中医证候积分的变化，分析两者之间的相关性。对组间数据采用 t检验/Wilcoxon秩和检验或 χ2检验进行分析，采用Pearson相关性系数分析中医证候积分和LSM值之间的相关性。 结果:两组患者治疗48周后LSM值较基线均显著降低（ P < 0.001），肝纤维化明显改善，且治疗组LSM值低于对照组[（8.67±4.60）kPa与（10.13±4.43）kPa， t = -2.011， P = 0.049]。两组患者治疗48周后中医证候积分较基线均显著降低（ P < 0.001），临床症状明显缓解；两组中医证候积分改善总有效率分别达74.19%、72.97%，但组间比较差异无统计学意义（ χ2 = 0.013， P = 0.910）。相关性分析显示中医证候积分与LSM值之间无明显的相关趋势；本研究观察期内未发生与研究药物相关的严重不良反应。 结论:在恩替卡韦抗病毒治疗的基础上不管是否联合鳖甲煎丸均能有效降低慢性乙型肝炎肝纤维化瘀血内阻证患者的LSM值，改善肝纤维化，降低中医证候积分，缓解症状。联合鳖甲煎丸较单用恩替卡韦在改善肝纤维化方面更具有优势，且安全性良好，值得推广应用。

目的:研究鳖甲煎丸调节AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)、抑制肝星状细胞(HSC)激活和肝纤维化的作用机制.方法:将24只健康雄性SPF级C57BU6小鼠随机分为对照、肝纤维化模型和鳖甲煎丸治疗组,每组8只.采用高脂高糖饮食联合腹腔注射四氯化碳制备小鼠肝纤维化模型.自第6周始,鳖甲煎丸治疗组给予鳖甲煎丸(1.365 g/kg)灌胃,1次/d,至第12周检测血清三酰甘油(TG)、胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)水平,取肝组织行HE染色、天狼星红染色和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组织化学染色,分别观察肝组织病理学改变、胶原纤维增生和HSC活化状态,并用Western blot检测AMPK蛋白表达和活性.结果:与对照组比较,肝纤维化模型组小鼠血清ALT、AST、ALP和LDL升高,TG、TC及HDL降低(P＜0.05);与肝纤维化模型组比较,鳖甲煎丸治疗组小鼠血清ALT、AST和ALP降低(P＜0.05),而TG、TC、HDL和LDL差异无统计学意义.肝纤维化模型组HE染色可见肝细胞排列紊乱、有严重脂肪变性和部分气球样变,并伴有炎症细胞浸润和点片状坏死灶;天狼星红染色可见明显的纤维组织增生,α-SMA表达阳性;总AMPK和p-AMPK蛋白表达较对照组升高;与肝纤维化模型组比较,鳖甲煎丸治疗组肝病理改变、纤维组织增生和α-SMA阳性表达程度降低,AMPK和p-AMPK蛋白表达均降低(P＜0.05).结论:鳖甲煎丸能抑制HSC激活、减缓肝纤维化进程,其作用机制与抑制AMPK蛋白表达和活性有关.

《温病条辨》中,吴鞠通认为外感燥气、脏腑气闭、邪热入血及元气亏损均可导致血瘀.外感燥气致瘀是以气病为先、血病为后的气血合病,可致燥癥;脏腑气闭致瘀可致胁下疟母,宜用鳖甲煎丸;妇人经期邪热入血可致胞宫瘀热,热甚者予桃仁承气汤加山甲、归尾逐血分瘀热;产后元气亏损致恶露未及时排出,瘀血上冲,根据腹痛是否拒按、脉象是否流利洪滑分虚实.久痢便血者,吴鞠通予断下渗湿汤,重用利水化湿药清湿热,使湿去而血行.在用药方面,吴鞠通处方灵活,内服外用并举,不拘方大药多,善补中焦之气,令气行血行而化瘀,对于现代诊治血瘀病具有指导作用.

目的:观察鳖甲煎丸联合替诺福韦酯治疗乙型肝炎肝硬化失代偿期气滞血瘀证的临床疗效.方法:选择98例乙型肝炎肝硬化失代偿期气滞血瘀证患者,按照随机数字表法分为鳖甲煎丸组、对照组各49例.鳖甲煎丸组剔除6例,对照组剔除7例,最终纳入研究鳖甲煎丸组43例、对照组42例.2组均给予保肝、退黄、降低门静脉压力等对症治疗,对照组在此基础上给予富马酸替诺福韦二吡呋酯片治疗,鳖甲煎丸组在对照组基础上给予鳖甲煎丸治疗.2组均治疗6个月.比较2组临床疗效,肝功能指标、肝纤维化指标水平,趋化因子受体(CCR)阳性表达率及不良反应发生率.结果:治疗后,总有效率鳖甲煎丸组95.35%,高于对照组78.57%,差异有统计学意义(P＜0.05).2组谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBil)水平均较治疗前降低(P＜0.05),鳖甲煎丸组AST、ALT、TBil水平均低于对照组(P＜0.05).2 组透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)水平均较治疗前降低(P＜0.05),鳖甲煎丸组HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C水平均低于对照组(P＜0.05).2组CCR4、CCR6阳性表达率均较治疗前降低(P＜0.05),鳖甲煎丸组CCR4、CCR6阳性表达率均低于对照组(P＜0.05).对照组不良反应发生率7.14%,鳖甲煎丸组不良反应发生率9.30%,2组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:鳖甲煎丸联合替诺福韦酯治疗乙型肝炎肝硬化失代偿期气滞血瘀证临床疗效显著,可有效改善患者的肝功能及肝纤维化指标,其作用机制可能与降低CCR表达有关,且治疗安全性好.

目的 研究miR-140在肝癌干细胞(liver cancer stem cells,LCSCs)中的生物学功能,以及鳖甲煎丸含药血清抑制肝癌干细胞特性的干预效应.方法 以人肝癌细胞株(Huh7)为研究对象,无血清培养基分选法分选LCSCs,用流式细胞仪鉴定富集的LCSCs,并转染miR-140慢病毒.分为Cin组、Control组、BJJP组、miR-140 mimics NC组、miR-140 mimics 组、BJJP+miR-140 inhibitor组.用CCK-8法测定细胞增殖能力,RT-PCR检测miR-140、CD133、CD24、EpCAM、AFP表达,Western blot法检测CD133、CD144、EpCAM、AFP蛋白表达.结果 检测显示Con组与Control组细胞增殖能力、CD133、CD24、EpCAM、AFP的蛋白及RNA表达无统计学意义(P>0.05);与miR-140 mimics NC组相比,miR-140 mimics组的肝癌干细胞的增殖能力、CD133、CD24、EpCAM、AFP的RNA及蛋白表达水平均明显减少(P<0.01),但miR-140表达明显增强(P<0.05);与Control组相比,BJJP组和BJJP+miR-140 inhibitor组的细胞增殖能力、CD133、CD24、EpCAM、AFP的RNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.01),且BJJP组的细胞增殖能力、CD133、CD24、EpCAM、AFP的RNA及蛋白表达水平低于BJJP+miR-140 inhibitor组(均P<0.05).结论 鳖甲煎丸能抑制LCSCs的增殖能力及干性,其机制可能通过上调miR-140的表达发挥作用.

研究鳖甲煎丸对非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)小鼠肝脂质代谢的影响,探讨鳖甲煎丸调控NASH小鼠脂质代谢和炎症反应的作用机制.通过高脂高胆固醇饲料喂养C57BL/6 小鼠建立NASH模型,给予鳖甲煎丸干预,通过血清和肝脏生化指标及肝脏组织病理学检测评价鳖甲煎丸对NASH小鼠的治疗效果,应用UPLC-Q-TOF-MS技术检测肝脏的脂质代谢物,结合偏最小二乘法判别分析、t检验和受试者工作特征曲线分析筛选差异脂质和主要生物标志物;结合生物标志物结果,利用Western blot和qPCR检测脂质代谢及炎性相关分子.结果表明,鳖甲煎丸能显著降低NASH小鼠血清中谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)水平和肝组织中甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)含量,抑制肝脏脂滴堆积、肝细胞气球样变和纤维化病变;脂质代谢组学结果显示,鳖甲煎丸可调控磷脂酰胆碱(phosphatidyl choline,PC)、磷脂酰乙醇胺(phosphatidyl etha-nolamine,PE)、鞘磷脂(sphingomyelin,SM)、神经酰胺(ceramide,Cer)等NASH相关 11 种脂质标志物;Western blot和qPCR结果显示,鳖甲煎丸可调控固醇调节元件结合蛋白1(sterol regulatory element-binding protein 1,SREBP1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARγ)和磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(phospho-AMP-activated pro-tein kinase,p-AMPK)等脂质代谢相关蛋白的表达,及脂肪酸转位酶36(fatty acid translocase 36,Cd36)、Pparγ、心磷脂合酶 1(car-diolipin synthase 1,Crls1)和磷脂酶Cβ2(phospholipase Cβ2,Plcβ2)mRNA水平;抑制磷酸化p38 丝裂原活化蛋白激酶(phospho-p38 mitogen-activated protein kinase,p-p38 MAPK)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶 1/2(phospho-extracellular signal regulated kinase 1/2,p-ERK1/2)和促炎因子 Il-6、Il-1β、Tnf-α mRNA 表达.综上所述,鳖甲煎丸可调节 PC、PE、SM、Cer 等脂类代谢,调控p-AMPK、SREBP1、PPARγ和Cd36、Crls1、Plcβ2 等脂质调控因子表达,改善脂质代谢紊乱,同时还能抑制MAPK信号通路和促炎因子mRNA水平,缓解炎症反应,发挥治疗NASH的作用.

目的:观察鳖甲煎丸联合阿帕替尼对中晚期肝癌肝动脉化疗栓塞术(TACE)术后患者辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡、凋亡分子和血管生成因子的影响.方法:选取2021年1月至2022年12月湖南中医药大学第一附属医院收治的中晚期肝癌患者118例,患者均接受TACE并根据随机数字表法将患者分为对照组(59例,阿帕替尼治疗)和研究组(59例,鳖甲煎丸联合阿帕替尼治疗).对比两组疗效、血清肿瘤标志物[甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)]、外周血Th17/Treg平衡[Th17细胞比例、Treg细胞比例、Th17/Treg比值]、凋亡分子[B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-4(Caspase-4)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-10(Caspase10)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)]和血管生成因子[血管生成素-2(Ang-2)、血管内皮生长因子(VEGF)].结果:研究组的临床总有效率高于对照组(P＜0.05).与对照组相比,研究组治疗后AFP、CEA、AFP-L3、Th17 细胞比例、Th17/Treg 比值、Bcl-2、Ang-2、VEGF 更低,Treg 细胞比例、Bax、Caspase-4、Caspase10 更高(P＜0.05).两组不良反应发生率组间对比未见差异(P＞0.05).结论:鳖甲煎丸联合阿帕替尼治疗中晚期肝癌TACE术后患者,可有效阻止疾病进展,降低血清肿瘤标志物水平,可能与调节Th17/Treg平衡、凋亡分子和血管生成因子水平有关.

目的 探讨鳖甲煎丸通过miR-885-5p对表皮生长因子受体(EGFR)/丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的靶向调控对MHCC-97H肝癌细胞的影响及作用机制.方法 SPF级SD大鼠10只随意分为空白组和鳖甲煎丸(1.1 g/kg)组,制备空白及鳖甲煎丸含药血清.取对数生长期的MHCC-97H细胞,分为模型组、不同质量分数(5％、10％、15％、20％)空白血清梯度组和鳖甲煎丸含药血清梯度组,以及不含细胞的空白组.CCK-8法检测细胞增殖,筛选含药血清最佳干预时间及质量分数.将MHCC-97H细胞分为空白对照组(不做任何处理)、鳖甲煎丸含药血清组(20％鳖甲煎丸含药血清)、miR-885-5p mimics组(转染miR-885-5p mimics)、miR-NC组(转染miR-885-5p阴性对照物)、鳖甲煎丸含药血清+miR-885-5p mimics组(20％鳖甲煎丸含药血清和转染miR-885-5p mimics),各组细胞均培养72 h.采用双荧光素酶报告实验验证miR-885-5p与EGFR的靶向关系.CCK-8法检测细胞增殖,细胞划痕实验及Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力,Annexin V-APC/PI双染色法检测细胞凋亡水平,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-885-5p、EGFR、MAPK的激酶(MEK)、ERK1、ERK2 mRNA表达水平;蛋白质印迹法检测EGFR、磷酸化的EGFR(p-EGFR)、MEK、磷酸化的MEK(p-MEK)、ERK1、ERK2、磷酸化的ERK1(p-ERK1)、磷酸化的ERK2(p-ERK2)、基质金属蛋白酶1(MMP1)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)蛋白表达;通过皮下注射法建立裸鼠MHCC-97H肝癌细胞皮下瘤模型,观察不同剂量鳖甲煎丸(0.55、1.1、2.2g/kg)对裸鼠肝癌皮下瘤的抑制效果.结果 筛选出鳖甲煎丸含药血清最佳干预质量分数及时间为20％、72 h,同时,双荧光素酶报告实验显示,miR-885-5p可以直接靶向结合EGFR;各项实验报告显示空白对照组和miR-NC组比较,差异均无统计学意义(P>0.05).与空白对照组比较,鳖甲煎丸含药血清组、miR-885-5p mimics组和鳖甲煎丸含药血清+miR-885-5p mimics组MHCC-97H肝癌细胞增殖率明显降低(P<0.01),迁移和侵袭能力明显下降(P<0.05,P<0.01),同时,与细胞增殖、侵袭密切相关的蛋白CyclinD1和MMP1的蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01),晚期凋亡率和总凋亡率均明显升高,促进细胞凋亡(P<0.01);鳖甲煎丸含药血清组、miR-885-5p mimics组和鳖甲煎丸含药血清+miR-885-5p mimics组明显上调miR-885-5p mRNA(P<0.01),抑制EGFR、MEK、ERK1、ERK2 mRNA表达(P<0.05,P<0.01),抑制EGFR、MEK、ERK1、ERK2磷酸化激活(P<0.01),其中,鳖甲煎丸含药血清+miR-885-5p mimics组效果最好(P<0.05,P<0.01).裸鼠肝癌皮下瘤模型验证了鳖甲煎丸可抑制裸鼠肝癌皮下瘤生长.结论 鳖甲煎丸可促进MHCC-97H肝癌细胞凋亡,抑制其增殖、侵袭和迁移,其作用机制可能和通过miR-885-5p靶向调控EGFR/MAPK/ERK信号通路有关.

《神农本草经》记载黄芩:"味苦平,主诸热黄疸,肠澼泄痢,逐水,下血闭,恶疮,疽蚀,火疡."以《神农本草经》中黄芩主治作用为线索,分析经方中黄芩的应用.黄芩主治诸热黄疸时,多配伍柴胡、半夏等,以小柴胡汤类方为代表方;治疗肠澼泄痢时,常配伍黄连、芍药等,如葛根黄芩黄连汤、黄芩汤、泻心汤类方等;下血闭时,多配伍芍药、桃仁及虫类药等,如大黄廑虫丸、鳖甲煎丸;治疗恶疮、疽蚀、火疡时,多与王不留行、花椒、芍药、桑白皮等配伍,代表方为王不留行散.张仲景临证又拓展了黄芩主治作用,将黄芩与不同药物配伍发挥不同作用,如黄芩配伍半夏、黄连、干姜等治疗心下痞;配伍阿胶、黄连等治疗心中烦;配伍白术、附子等治疗出血;配伍当归、白术等治疗内热扰胎.

通过梳理《伤寒杂病论》条文发现下瘀法的核心药组为大黄-桃仁或芍药(或为赤芍)-桃仁,并获得下瘀血汤、抵当汤(丸)、桃核承气汤、大黄牡丹汤、大黄?虫丸、鳖甲煎丸、桂枝茯苓丸8首下瘀方;通过概括下瘀方的证候特点,分析各方特色,进而从下瘀角度探讨前列腺癌血瘀证的经方治疗思路.